从对叶大戟中制备山奈酚3OΒD葡萄糖醛酸苷的方法.pdf

《从对叶大戟中制备山奈酚3OΒD葡萄糖醛酸苷的方法.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《从对叶大戟中制备山奈酚3OΒD葡萄糖醛酸苷的方法.pdf（9页完整版）》请在专利查询网上搜索。

1、(10)申请公布号 CN 103113439 A (43)申请公布日 2013.05.22 CN 103113439 A *CN103113439A* (21)申请号 201310061615.0 (22)申请日 2013.02.27 C07H 17/07(2006.01) C07H 1/08(2006.01) (71)申请人 新疆大学 地址 830046 新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市 胜利路 14 号 (72)发明人 阿布拉江克依木 阿瓦罕苏来曼 外塔尼古丽卡米力 (54) 发明名称 从对叶大戟中制备山奈酚 -3-O-D- 葡萄 糖醛酸苷的方法 (57) 摘要 从对叶大戟中制备山奈酚 -3-O。

2、-D- 葡萄 糖醛酸苷的方法采用常用的提取方法和柱层析分 离技术对对叶大戟的化学成份进行了研究， 得到 了一种化合物， 并经 1HNMR、13CNMR、 ESI-MS 等波谱 技术确定该化学成分为山奈酚 -3-O-D- 葡萄 糖醛酸苷。本发明原料利用率高， 制备过程安全， 成本低， 周期短， 操作简单， 设备要求低， 制的产品 纯度高等优点。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 4 页 附图 3 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书4页 附图3页 (10)申请公布号 CN 103113439 A CN 103113439 A *。

3、CN103113439A* 1/1 页 2 1. 一种从对叶大戟中制备山奈酚 -3-O-D- 葡萄糖醛酸苷的方法， 其提取步骤如下 ： a. 将 10 kg 对叶大戟地上部分粉碎后经 95 % 乙醇超声波提取三次， 过滤， 合并滤液， 回收乙醇得 95 % 乙醇浸膏物， 其残渣用 70 % 乙醇超声波再次提取三次， 过滤， 合并滤液， 提取溶液浓缩回收得水提浸膏物， 将 95 % 乙醇浸膏物与水提浸膏合并 ； b. 加水混悬后依次用石油醚、 氯仿、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取 ； c. 将正丁醇萃取物经填充吸附材料的吸附柱， 用乙醇洗脱， 分别收集下柱夜并用旋转 蒸发仪旋干 ； d. 洗脱前， 用。

4、体积分数为 95 % 乙醇将层析柱浸泡 24 小时， 然后用蒸馏水淋洗吸附柱 至流出液为无乙醇味 ； e. 将上述浓缩物上葡萄糖凝胶吸附， 用甲醇洗脱， 浓缩 ； f. 将上述浓缩物经重结晶得黄酮单体。 2. 根据权利要求1所述的一种从对叶大戟中制备山奈酚-3-O-D-葡萄糖醛酸苷的 方法， 其特征在于所述的对叶大戟是一种全草入药和果实入药的一年生草本植物。 3. 根据权利要求1所述的一种从对叶大戟中制备山奈酚-3-O-D-葡萄糖醛酸苷的 方法， 其特征在于所述步骤 c 中的吸附材料先选用大孔树脂 AB-8， 后用硅胶吸附树脂。 4. 根据权利要求1所述的一种从对叶大戟中制备山奈酚-3-O-D。

5、-葡萄糖醛酸苷的 方法， 其特征在于所述步骤 c 中的乙醇浓度为 20 % 80 % 。 5. 根据权利要求1所述的一种从对叶大戟中制备山奈酚-3-O-D-葡萄糖醛酸苷的 方法， 其特征在于所述步骤 e 中的甲醇浓度为 20 % 。 6. 根据权利要求1所述的一种从对叶大戟中制备山奈酚-3-O-D-葡萄糖醛酸苷的 方法， 其特征在于所述步骤 f 中可以用甲醇和二氯甲烷作为溶剂。 权 利 要 求 书 CN 103113439 A 2 1/4 页 3 从对叶大戟中制备山奈酚 -3-O-D- 葡萄糖醛酸苷的方 法 技术领域 0001 本发明涉及天然产物分离领域， 具体涉及采用常用的提取方法和柱层析分。

6、离技 术从对叶大戟中山奈酚 -3-O-D- 葡萄糖醛酸苷的提取与分离， 利用 1H NMR、 13C NMR、 ESI-MS 等波谱技术确定了所分离化学成分的结构。 背景技术 0002 对叶大戟 (Euphorbia sororia A.) 为大戟科大戟属植物， 以全草入药和果实入 药， 是一年生草本， 维吾尔名为 “苏孜阿甫” 。主要分布于中亚和我国新疆和田等地区。功能 主治为利水消肿、 降压清脑、 泻下杂虫， 用于大便秘结、 尿频、 高血压头痛、 肝硬化、 水肿以及 疥疮肿痛。 0003 据文献报道， 对叶大戟中含有萜类、 黄酮类、 生物碱类、 脂肪油、 甾醇类、 酯类等多 种生物活性的成。

7、分。 0004 本发明中， 我们采用常用的提取方法和柱层析分离技术对 “对叶大戟” 化学成分进 行了提取与分离， 利用 1H NMR、13C NMR、 ESI-MS 等波谱技术确定了所分离化学成分的结构。 该成分为山奈酚 -3-O-D- 葡萄糖醛酸苷。 0005 对叶大戟中黄酮类化合物的生理活性作用主要体现在具有生物抗氧化性、 抗衰 老、 治疗心脑血管疾病、 降血脂、 降血压、 降低血糖作用、 抗肿瘤作用等。新疆具有丰富的药 用植物资源， 为了有效、 合理地利用药用植物资源， 对天然药物有效成分的提取分离及分析 研究十分必要。 发明内容 0006 本发明的目的是提供一种从对叶大戟中山奈酚 -3。

8、-O-D- 葡萄糖醛酸苷的提取 与分离方法。 0007 本发明的目的是通过下述方案实现 ： 一种从对叶大戟中山奈酚 -3-O-D- 葡萄 糖醛酸苷的提取与分离方法， 其特征在于包含以下步骤 ： 1、 提取与分离 将10 kg对叶大戟地上部分粉碎后经95 % 乙醇超声波提取三次 （每次2h） ， 过滤， 合 并滤液， 回收乙醇得95 % 乙醇浸膏物。 其残渣用70 % 乙醇超声波再次提取三次 （每次2h） ， 过滤， 合并滤液， 提取溶液浓缩回收得水提浸膏物， 将 95 % 乙醇浸膏物与水提浸膏合并， 加 水混悬后依次用石油醚、 氯仿、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取， 对萃取物进行减压浓缩， 得到四个。

9、部 分的浸膏物。 0008 用大孔树脂分离 ： 将正丁醇萃取部分加入至大孔树脂中吸附， 先用少量水洗， 然 后依次用 20 % 、 50 % 、 80 % 乙醇进行洗脱， 分别收集下柱洗脱液， 浓缩， 薄层色谱检测， 合 并相同部分， 在流动相为 50 % 的流分中得到了粗提取物。 说 明 书 CN 103113439 A 3 2/4 页 4 0009 用硅胶吸附树脂分离 ： 将上述粗提取物以适量硅胶拌样， 上硅胶柱， 进行硅胶色 谱层析分离， 分别用氯仿甲醇 ( 20:1, 10:1, 6:1, 2:1, ) 为流动相进行梯度洗脱， 薄 层色谱检测， 合并相同部分， 在流动相氯仿甲醇为 2:。

10、1 的流分中得到了粗提取物。 0010 用葡萄糖凝胶 （Sephadex HL-20） 纯化 ： 将上述粗提取物上凝胶柱， 进行凝胶色 谱层析分离， 用氯仿甲醇 2:1 为流动体系进行梯度洗脱， 薄层色谱检测， 合并相同部分， 流分中得到了纯度很高的黄酮类成分， 即山奈酚 -3-O-D- 葡萄糖醛酸苷。 附图说明 0011 图 1 为山奈酚 -3-O-D- 葡萄糖醛酸苷的 1H- NMR 谱图。 0012 图 2 为山奈酚 -3-O-D- 葡萄糖醛酸苷的 13C-NMR 谱图。 0013 图 3 为山奈酚 -3-O-D- 葡萄糖醛酸苷的 MS 谱图。 具体实施方式 0014 实施方式 1 将 。

11、10 kg 对叶大戟地上部分粉碎后经 95 % 乙醇超声波提取三次 （每次 2h） ， 过滤， 合并滤液， 回收乙醇得 95 % 乙醇浸膏物。其残渣用 70 % 乙醇超声波再次提取三次 （每 次 2h） ， 过滤， 合并滤液， 提取溶液浓缩回收得水提浸膏物， 将 95 % 乙醇浸膏物与水提浸 膏合并， 加水混悬后依次用石油醚、 氯仿、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取。采用大孔吸附树脂柱层 析、 硅胶柱层析、 葡萄糖凝胶柱层析等分离方法对正丁醇萃取部分进行分离， 得到山奈 酚 -3-O-D- 葡萄糖醛酸苷 , 测定其含量为 98.5%。 0015 实施方式 2: 将10 kg 对叶大戟地上部分粉碎后经9。

12、5 % 乙醇超声波提取三次 （每次2h） ， 过滤， 合并 滤液， 回收乙醇得 95 % 乙醇浸膏物。 其残渣用 70 % 乙醇超声波再次提取三次 （每次2h） ， 过滤， 合并滤液， 提取溶液浓缩回收得水提浸膏物。 提取物用乙酸乙酯萃取， 将其水层用5 % NaHCO3 处理后用正丁醇萃取， 将其水层过滤后加 HCl 至 pH 6 7， 抽滤， ， ， ， ， 得到的黄色 固体重新溶解于 10 倍量热水中， 采用大孔吸附树脂柱层析进一步纯化， 依次用 水、 30% 乙 醇和 50% 乙醇洗脱。50% 乙醇洗脱下来的部分为浓缩后得到纯度为 97% 以上的产物山 奈酚 -3-O-D- 葡萄糖醛酸。

13、苷， 测定其含量为 96% 。 0016 实施方式 3: 将粉碎的1 kg 对叶大戟地上部分投入 8 倍量沸水中， 煮沸30 分钟后， 经棉花过滤得 到滤液。用 6 倍量水同法提取 2 次， 过滤。滤液用乙酸乙酯萃取三次后， 向水层中加浓盐酸 调 pH 2。冷却后抽滤， 用水洗 2 次。该粗产物悬浮于 8 倍量水中， 用 10 % NaHCO3 溶液 pH 6 7， 加入样品量 2% 活性炭， 45 保温 30 分钟。过滤， 滤液再用浓盐酸调 pH 2。冷却 后过滤， 少量 95% 乙醇洗涤， 抽干， 干燥得到纯度为 60% 以上的产物。产物重新溶解于 10 倍量热水中， 采用大孔吸附树脂柱层。

14、析进一步纯化， 依次用 水、 30% 乙醇和 50% 乙醇洗脱。 50%洗脱下来的部分为浓缩后得到纯度为98 % 以上的产物山奈酚-3-O-D-葡萄糖醛 酸苷。 0017 2、 结构鉴定 综合分析上述化合物的 1H NMR、13C NMR、 ESI-MS 等波谱数据， 鉴定该化合物为山奈 说 明 书 CN 103113439 A 4 3/4 页 5 酚 -3-O-D- 葡萄糖醛酸苷。 0018 上述技术方案可以看出， 由于本发明实施例采用常用的提取方法和柱层析分离技 术对 “对叶大戟” 的化学成分进行了提取与分离， 利用 1H NMR、13C NMR、 ESI-MS 等波谱技术 确定了所分离化。

15、学成分的结构。 因此得到单体化合物 ： 山奈酚-3-O-D-葡萄糖醛酸苷。 0019 所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例， 而不是全部的实施例。基于本发明 中的实施例， 本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施 例， 都属于本发明保护的范围。 0020 山奈酚 -3-O-D 葡萄糖醛酸苷的化学结构式为 ： 本发明提供一种从对叶大戟中山奈酚 -3-O-D- 葡萄糖醛酸苷的提取与分离方法 ， 包括以下步骤。 0021 提取与分离 ： 将 10 kg 对叶大戟地上部分粉碎后经 95 % 乙醇超声波提取三次 （每 次 2h） ， 过滤， 合并滤液， 回收乙醇得 95 % 乙。

16、醇浸膏物。其残渣用 70 % 乙醇超声波再次提 取三次 （每次2h） ， 过滤， 合并滤液， 提取溶液浓缩回收得水提浸膏物， 将95 % 乙醇浸膏物与 水提浸膏合并， 加水混悬后依次用石油醚、 氯仿、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取。 采用大孔吸附树脂 柱层析、 硅胶柱层析、 葡萄糖凝胶 （Sephadex HL-20） 柱层析等分离方法对正丁醇萃取部分 进行分离， 并经 1H NMR、13C NMR、 ESI-MS 等波谱技术确定该化学成分的结构。 该化合物为山 奈酚 -3-O-D- 葡萄糖醛酸苷。 0022 结构与鉴定 ： 化合物为黄色晶体 , m.p186 189， 可溶于甲醇、 水， TLC 。

17、展开， 紫 外 （254nm） 下显暗黑色， 喷 5 % AlCl3溶液显为黄色， 初步确定该化合物是黄酮类成分 ； 1H- NMR 谱中表现出经典的黄酮苷类的氢谱特征， ppm ： 8.01(2H, d , J = 8.8 Hz, H-2 , 6 ), 6.85 (2H, d , J = 2.0, 8.8 Hz, H-3 ,5 ), 说明 B 环上位 4 位 被取代 ； 10.92 (1H, s, H-5), 10.2 (1H, s, H-7,4 ), 6.34 (1H, d , J = 1.4 Hz, H-8), 6.15 (1H, d , J = 1.4 Hz, H-6), 说明A环5,。

18、7位被羟基取代 ； 5.46(1H , d , J = 7.2 Hz, H-1 )， 12.53(1H, s, H-6 ), 说明羧基上的质子信号， 根据偶合情况可以确 定苷元为山奈酚， 糖部分为葡萄糖醛酸 ； 13C-NMR 谱中观察到结构中有 21 个碳， 从 71.9 ppm 至 98.5 ppm 左右的碳信号均为 葡萄糖分子中与氧原子连接的 6 个碳信号， 其中 98.5ppm 处出现的信号为端基碳的信号 ； 177.3ppm 处出现的信号为黄酮苷元上的羰基， 172.2ppm 出现的信号为葡萄糖分子中的羰 基。 0023 质谱图中观察到 (-)ESI-MS , m/z:461.0789(M-H)- ， HMRS 给出该化合物的分子 说 明 书 CN 103113439 A 5 4/4 页 6 式为 C21H18O12。 0024 综合分析以上数据， 确认该化合物为山奈酚 -3-O-D- 葡萄糖醛酸苷。 说 明 书 CN 103113439 A 6 1/3 页 7 图 1 说 明 书 附 图 CN 103113439 A 7 2/3 页 8 图 2 说 明 书 附 图 CN 103113439 A 8 3/3 页 9 图 3 说 明 书 附 图 CN 103113439 A 9 。