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1、(10)申请公布号 CN 103130550 A (43)申请公布日 2013.06.05 CN 103130550 A *CN103130550A* (21)申请号 201310090783.2 (22)申请日 2013.03.20 C05G 1/00(2006.01) (71)申请人 上海市农业科学院 地址 201403 上海市奉贤区金齐路 1000 号 (72)发明人 杨焱 邵倩 唐传红 张忠 张劲松 唐庆九 刘艳芳 汪雯翰 (74)专利代理机构 上海申新律师事务所 31272 代理人 刘懿 (54) 发明名称 一种桑黄菌丝体的培养基及培养方法 (57) 摘要 本发明提供了一种桑黄菌丝体。
2、的培养基及其 制备方法， 以及用该培养基培养桑黄菌丝体的方 法， 该培养基包括大米和培养液。 本发明的培养基 采用大米作为原料不仅材料易取， 而且非常经济， 操作简单， 且效果良好。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 4 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书4页 (10)申请公布号 CN 103130550 A CN 103130550 A *CN103130550A* 1/1 页 2 1. 一种桑黄菌丝体的培养基， 其特征在于该培养基包括如下组分 ： 大米和培养液， 其中大米的重量 （g） 与培养液的体积 （ml） 比为 x。
3、 ： (x+（0-30） ， 其中 x 10 ； 其中培养液含 ： 2.5% 葡萄糖、 0.3%KH2PO3和 0.15%MgSO47H2O。 2. 一种制备权利要求 1 所述培养基的方法， 其特征在于该方法为 ： 配置培养液， 将大米置于培养液中， 高压灭菌。 3. 一种利用权利要求 1 所述培养基培养桑黄菌丝体的方法， 该方法为 ： 将桑黄母种接种于培养基上， 置于 26生化培养箱中培养， 生长周期 25-30 天 ； 将培养好的菌丝体连同培养基至于 30鼓风烘箱中烘干。 权 利 要 求 书 CN 103130550 A 2 1/4 页 3 一种桑黄菌丝体的培养基及培养方法 技术领域 00。
4、01 本发明涉及食用菌培养领域， 具体的说涉及一种桑黄菌丝体的培养基及培养方 法。 背景技术 0002 鲍姆木层孔菌 (Phellinus baumii)， 俗称桑黄菇、 桑耳， 是近年来开发的一种多年 生药用真菌， 最早收载于李时珍 本草纲目 中。 传统中医认为桑黄性甘、 平， 味苦、 辛， 归肝、 膀胱经， 用于治疗血崩、 血淋、 脱肛泻血、 带下、 闭经、 脾虚泄泻等。众多的实验研究表明， 桑 黄中的多糖和黄酮类化合物有重要的生物活性， 在治疗癌症、 保肝护肝、 增强免疫、 神经修 复方面有重要作用。 0003 自由基是人体新陈代谢的产物， 一般情况下， 人体有能力清除自身所产生的自由 。
5、基， 但是随着人体的衰老， 清除自由基的能力减弱。如果产生的自由基不能被及时清除， 就 会加速机体衰老， 甚至使人体发生病变等。 现有研究表明 ： 药用真菌桑黄中的多糖和黄酮类 物质具有很好的抗氧化作用 ； 不过现在的研究多集中在桑黄子实体提取物及液体发酵的研 究方面， 而对固体发酵桑黄菌丝体及其抗氧化作用的研究较少。野生的子实体主要分布于 黑龙江、 陕西等林区， 资源蕴藏量稀少， 由于产量低导致价格昂贵。目前桑黄子实体主要靠 人工栽培获得， 但是人工栽培周期长， 需要较大的人力财力投入。相比之下， 发酵技术具有 周期短、 可控性好、 实验环境简单等优点， 是获得桑黄次生代谢产物的良好途径。而。
6、液体发 酵在培养的过程中易污染， 在一定培养时间内不能达到预期的生物量， 培养过程中不好人 为地控制。 发明内容 0004 本发明的目的之一在于提供一种桑黄菌丝体的培养基， 该培养基包括如下组分 ： 0005 大米和培养液， 其中大米的重量 （g） 与培养液的体积 （ml） 比为 x ： (x+（0-30） ， 其 中 x 10 ； 0006 其中培养液含 ： 2.5% 葡萄糖、 0.3%KH2PO3和 0.15%MgSO47H2O。 0007 上述培养基是通过如下方法配制的 ： 0008 配置培养液 （2.5% 葡萄糖， 0.3%KH2PO3， 0.15%MgSO47H2O） ， 将大米置于。
7、培养液中， 高压灭菌。 0009 本发明还提供了一种利用上述培养基培养桑黄菌丝体的方法， 该方法包括如下步 骤 ： 0010 将桑黄母种接种于上述培养基上， 置于 26生化培养箱中培养， 生长周期 25-30 天 ； 0011 将培养好的菌丝体连同培养基至于 30鼓风烘箱中烘干。 0012 经上述米饭培养基发酵后的桑黄菌丝体具有抗氧化的生物活性作用， 可作为食品 添加剂应用， 提高食品的营养价值。 说 明 书 CN 103130550 A 3 2/4 页 4 0013 本发明的创新之处 ： 0014 1、 使用本发明的培养基进行培养， 相对液体培养具有方便易行、 节约能源、 不易污 染的优点。。
8、 0015 2、 本发明的培养基， 采用大米作为原料不仅材料易取， 而且非常经济， 效果良好。 在液体培养中动力能源消耗很大， 而本发明培养菌种只需在一定的温度下静置培养， 节省 能源， 并且生长状态也优于液体培养。 同时通过抗氧化实验发现， 培养的菌丝体有较强的抗 氧化效果。 如今食品添加剂受到广泛关注， 大米作为一种营养安全的食品， 培养的菌丝体可 作为添加剂来提高食品的营养价值。 具体实施方式 0016 桑黄菌种 （Phellinus baummii Pilat， 来自中国微生物菌种保藏中心上海食用菌 分中心， 编号为 ： Phellinus baumii Pilat3249） 。 00。
9、17 实施例 1-4 配制培养基 0018 配置 2.5% 葡萄糖， 0.3%KH2PO3， 0.15%MgSO47H2O 的培养液， 分别取 60ml 于 250ml 培养瓶中， 然后分别称取 30、 40、 50、 60g 的大米置于培养液中， 浸泡 6 小时左右， 121高压 灭菌 30min。大米 （润庄香粳） 由上海润庄农业科技有限公司提供。 0019 表 1 大米装量对生物量的影响 0020 0021 注 ： 生物量的回收率是指最终烘干后的菌丝体与大米装量的比值。 0022 实施例 5 用实施例 3 的培养基进行培养 0023 将桑黄菌种长于 PDA 斜面上， 生长周期为一周。 0。
10、024 取上述桑黄菌种接种于实施例 1 的培养基上， 置于 26生化培养箱中培养， 生长 周期 25-30 天。 0025 取出桑黄菌丝体， 至于 30的鼓风烘箱中烘干。 0026 实施例 6 菌丝体醇提物中黄酮含量的测定 0027 将烘干的菌丝体加入 10 倍体积的 80% 乙醇， 浸泡 24h， 过滤 ； 收集滤液， 残渣再用 10 倍体积的 80% 乙醇浸泡过夜， 重复上述操作， 合并两次滤液， 浓缩， 得到桑黄菌丝体醇提 物。 0028 用 NaNO2-Al(NO3)3比色法测定黄酮含量， 烘干后的菌丝体醇提物中黄酮的重量百 分比含量为 40%。 说 明 书 CN 103130550 。
11、A 4 3/4 页 5 0029 实施例 7 桑黄菌丝体抗氧化活性的测定 0030 桑黄菌丝体醇提物的来源同实施例 6 中 ； 测定桑黄菌丝体醇提物的抗氧化活性， 主要进行清除过氧化氢， 超氧阴离子和 DPPH 实验。 0031 具体方法如下 0032 一、 清除 H2O2自由基实验 0033 将醇提物用 70% 乙醇配制成四个浓度， 分别是 1g/mL， 10g/mL， 20g/mL， 50g/mL。对 H2O2的清除实验使用鲁米诺 -H2O2发光反应体系， 用 80% 乙醇做为空白对 照。分别取 5L 加入 96 孔板， 由泵 1 泵入 150L 鲁米诺 -CBS 溶液 （pH9.5） ，。
12、 泵 2 泵入 10L6%H2O2， 在 20启动发光反应， 每 0.6s 记录一次发光值， 连续记录 30s。发光程序如表 3-1 ： 0034 表 3-1H2O2自由基的发光程序 0035 0036 H2O2自由基清除率计算公式如下 0037 0038 结果表明， 高浓度的桑黄菌丝体醇提物对 H2O2自由基的清除率达到 80%。 0039 二、 清除超氧阴离子实验 0040 将醇提物用 80% 乙醇溶解配制成不同的浓度， 即 500g/mL， 800g/mL， 1000g/ mL， 2000g/mL， 用 80% 乙醇做空白对照。采用鲁米诺 - 邻苯三酚 -CBS 体系的化学发光法。 各浓。
13、度样品分别取 10L 加入 96 孔板。由泵 1 泵入 6.2510-4mol/L 邻苯三酚溶液， 泵 2 泵入 150L 鲁米诺 -CBS 溶液 （pH10.2） 。在 20启动发光反应， 每 0.6S 收集一次光信号， 连续收集 30S。 0041 发光程序如表 3-2 ： 0042 表 3-2 清除超氧阴离子的发光程序 0043 0044 超氧阴离子的清除率公式同清除 H2O2自由基清除率公式 说 明 书 CN 103130550 A 5 4/4 页 6 0045 0046 结果表明， 在低浓度 0.5mg/mL 时， 就表现了较高的清除超氧阴离子的能力， 浓度 在 2mg/mL 时， 。
14、清除率接近 100%。 0047 三、 清除 DPPH 自由基实验 0048 取 610-4mol/L DPPH的储备液 100L 加 900L80% 乙醇， 稀释成 610-5mol/ L DPPH工作液。用 80% 乙醇将菌丝体醇提物样品配制成不同浓度 （1g/mL、 20g/mL、 100g/mL， 200g/mL） 。分别取 500L 不同浓度的样品加入 1mL DPPH工作液中， 混匀， 静置 20min 后于 517nm 处测定吸光值， 以 80% 乙醇作为空白。对 DPPH自由基清除率计算 如下 ： 0049 0050 结果表明， 高浓度的醇提物对 DPPH 自由基的清除率达到 40%。 说 明 书 CN 103130550 A 6 。