蛋白酶体抑制剂MG132作为菊酯类杀虫剂增效剂的应用.pdf

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1、10申请公布号CN102017965A43申请公布日20110420CN102017965ACN102017965A21申请号201010548754222申请日20101118A01N47/12200601A01N53/08200601A01P7/0420060171申请人南京医科大学地址210029江苏省南京市汉中路140号72发明人孙艳孙林春焦健华贺骥孙海波于婧马磊沈波朱昌亮74专利代理机构南京知识律师事务所32207代理人卢亚丽54发明名称蛋白酶体抑制剂MG132作为菊酯类杀虫剂增效剂的应用57摘要本发明涉及蛋白酶体抑制剂MG132的一种新功能，具体是蛋白酶体抑制剂MG132作为菊酯类。

2、杀虫剂增效剂的应用。本发明提供了蛋白酶体抑制剂MG132的一种新用途，为研制新型高效的有机杀虫剂，提供了新途径。51INTCL19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书3页附图1页CN102017977A1/1页21蛋白酶体抑制剂MG132作为菊酯类杀虫剂增效剂的应用。2如权利要求1所说的应用，其特征在于，所说的菊酯类杀虫剂是溴氰菊酯。权利要求书CN102017965ACN102017977A1/3页3蛋白酶体抑制剂MG132作为菊酯类杀虫剂增效剂的应用技术领域0001本发明涉及蛋白酶体抑制剂MG132的一种新功能，具体是蛋白酶体抑制剂MG132作为菊酯类杀虫剂增效剂。

3、的应用。背景技术0002使用有机杀虫剂是消灭农林、卫生害虫，保证农林作物增产和人民身体健康的重要手段。然而，随着有机杀虫剂的广泛使用和剂量增加，导致了害虫抗药性的发生及发展，增大了利用杀虫剂消灭害虫的难度，加剧了对环境的破坏和对人类健康的威胁。因此，寻找有效方法，提高害虫对有机杀虫剂的敏感性是目前迫切需要解决的问题。0003蛋白酶体是生物体内的一种巨型蛋白质复合物，主要作用是降解细胞不需要的或受到损伤或折叠错误的的蛋白质。蛋白酶体也是一类抗原递呈系统（CLASSIANTIGENPRESENTATION）的重要成员。MG132是一种蛋白酶体抑制剂，它可以与蛋白酶体的催化亚基结合从而抑制蛋白酶体的。

4、功能。发明内容0004本发明的目的是提供蛋白酶体抑制剂MG132的一种新用途。0005本发明的技术方案是蛋白酶体抑制剂MG132可以作为菊酯类杀虫剂增效剂的应用。0006上述技术方案中所说的菊酯类杀虫剂可以是但不仅限于溴氰菊酯。0007上述技术方案中所说的蛋白酶体抑制剂可以是但不仅限于MG132发明人使用蛋白酶体抑制剂MG132抑制抗溴氰菊酯蚊细胞的蛋白酶体功能，随后用CCK8法对细胞存活率进行检测。结果显示，使用蛋白酶体抑制剂MG132处理抗溴氰菊酯蚊细胞后，细胞在溴氰菊酯作用下的存活率较对照组明显降低（P005）,表明蛋白酶体抑制剂MG132增加了蚊细胞对溴氰菊酯的敏感性。0008参照世界。

5、卫生组织蚊幼虫生物测定的标准方法，进一步用蛋白酶体抑制剂MG132和溴氰菊酯共同对蚊的四龄幼虫进行生物测定。结果显示，用蛋白酶体抑制剂MG132处理的蚊四龄幼虫的存活率较对照组明显降低（P005）,表明蛋白酶体抑制剂MG132增加了蚊幼虫对溴氰菊酯的敏感性。该实验使用了3种不同抗性水平的蚊幼虫进行检测，3次结果一致。0009体内和体外的实验结果均表明，蛋白酶体抑制剂MG132可以增加蚊对溴氰菊酯的敏感性。0010蛋白酶体抑制剂MG132已经作为商品化试剂被应用于科学研究及其他领域。由于其可以增加蚊虫对溴氰菊酯的敏感性，其作为溴氰菊酯杀虫剂的增效剂的应用可以理解。具体的应用可以是但不仅限于以下方。

6、式，如将蛋白酶体抑制剂MG132添加到溴氰菊酯中，可以增强杀虫剂的功效。说明书CN102017965ACN102017977A2/3页40011本发明的有益效果体现在，提供了蛋白酶体抑制剂MG132的一种新用途，为研制新型高效的有机杀虫剂，提供了新途径。附图说明0012图1是不同浓度的MG132对蚊抗性细胞存活率的影响。0013图2是MG132处理后蚊抗性细胞对溴氰菊酯抗性的改变。0014图3是不同浓度的MG132对蚊幼虫存活率的影响。具体实施方式0015实施例中所用的MG132购自美国SANTACRUZ公司，溴氰菊酯购自美国SIGMA公司。0016除非特别说明，本发明中所使用的术语，一般为本。

7、领域普通技术人员通常理解的含义。0017下面结合具体的实施例，并参照数据进一步详细地描述本发明。这些实施例只是为了举例说明本发明，而非以任何方式限制本发明的范围。0018在以下的实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。所用试剂的来源、商品名以及有必要列出其组成成分者，均在首次出现时标明，其后所用相同试剂如无特殊说明，均以首次标明的内容相同。0019实施例1蛋白酶体抑制剂MG132增加抗溴氰菊酯蚊细胞对溴氰菊酯的敏感性。0020正常蚊C6/36细胞购自中国典型培养物保藏中心，在本实验室用溴氰菊酯逐代筛选70余代，建立抗溴氰菊酯蚊C6/36细胞系,LC50为12568MG/M。

8、L，是正常蚊细胞的89倍。0021发明者先设置一系列浓度梯度的MG132（0UM4UM）作用于抗溴氰菊酯蚊细胞，检测细胞存活率以确定合适的MG132实验浓度。如图1所示，选择1UM作为MG132在实验中的浓度。0022实验分对照组和实验组。实验组蚊细胞用1UM蛋白酶体抑制剂MG132处理，对照组细胞则不做处理（DMSO对照）。在细胞培养液中加入一系列浓度梯度的溴氰菊酯（1005,10,1015,100,1025MG/L）72小时后，用CCK8法检测细胞的存活率。0023实验结果（图2）在1005,10,1015,100,1025MG/L的溴氰菊酯浓度下，实验组的细胞存活率依次为90,76,74。

9、,59和50，对照组的细胞存活率依次为97,93,85,75和74（P005）。实验组细胞存活率较对照组相比显著降低，表明蛋白酶体抑制剂MG132可以提高抗溴氰菊酯蚊细胞对溴氰菊酯的敏感性。0024实施例2蛋白酶体抑制剂MG132增加抗溴氰菊酯蚊四龄幼虫对溴氰菊酯的敏感性。0025淡色库蚊敏感品系由中国军事医学科学院提供，从未暴露于任何杀虫剂,其对溴氰菊酯的LC50为0008PPM；在本实验室经过不同浓度的溴氰菊酯数十代筛选，得到了不同水平的抗性蚊，分别用005PPM和056PPM的溴氰菊酯维持培养。实验分MG132对照组，溴氰菊酯对照组和MG132溴氰菊酯实验组，每组20只蚊四龄幼虫，分别在。

10、3种说明书CN102017965ACN102017977A3/3页5品系蚊中进行实验。0026为了确定合适的MG132工作浓度，我们将蚊四龄幼虫暴露于一系列浓度梯度的MG132（0UM8UM）中，观察幼虫存活。结果如图3，选择1UM作为MG132在实验中的浓度。0027MG132对照组用1UMMG132处理蚊四龄幼虫24小时，计数幼虫存活数。0028溴氰菊酯对照组将幼虫暴露于溴氰菊酯24小时后，计数幼虫存活数。0029MG132溴氰菊酯实验组先用1UMMG132处理蚊四龄幼虫，将幼虫暴露于溴氰菊酯24小时后，计数幼虫存活数。0030实验结果存活056PPM005PPM0008PPMMG132对照组202019溴氰菊酯组对照组131715MG132溴氰菊酯实验组51211结果表明，使用蛋白酶体抑制剂MG132后可以增加蚊幼虫对溴氰菊酯的敏感性。说明书CN102017965ACN102017977A1/1页6图1图2图3说明书附图CN102017965A。