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1、(10)申请公布号 CN 104327000 A (43)申请公布日 2015.02.04 CN 104327000 A (21)申请号 201410583836.9 (22)申请日 2014.10.27 C07D 249/12(2006.01) A61K 31/4196(2006.01) A61P 19/06(2006.01) (71)申请人 张远强 地址 528000 广东省佛山市禅城区普澜一路 一号 5 楼 (72)发明人 不公告发明人 (54) 发明名称 苯基取代的三氮唑亚磺酰丙二酸类化合物、 其制备方法及用途 (57) 摘要 本发明涉及与高尿酸血症和痛风相关的 药物领域。具体而言， 。
2、本发明涉及一类含苯基 取代的三氮唑亚磺酰丙二酸结构的尿酸转运 体 1 抑制剂、 其制备方法、 及含有它们的药物 组合物以及它们在制备糖尿病药物中的应用。 其中， R选自H、 卤素取代基。 (51)Int.Cl. 权利要求书 2 页 说明书 8 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书2页 说明书8页 (10)申请公布号 CN 104327000 A CN 104327000 A 1/2 页 2 1. 具有通式 I 结构的化合物， 其中， R 选自 H、 卤素取代基。 2. 权利要求 1 所定义的通式 I 化合物， 选自下列化合物， 3. 权利要求 2 所定义的。
3、通式 I 化合物， 选自下列化合物， 4. 合成权利要求 1-3 任一所定义的通式 I 的化合物的方法 ： 权 利 要 求 书 CN 104327000 A 2 2/2 页 3 化合物 II 与 - 溴代丙二酸二甲酯在碱存在下反应， 得到化合物 IV ； 化合物 IV 在溴 仿中与亚硝酸钠和二氯乙酸反应得到化合物V ； 化合物V在碱性条件下水解得到化合物VI ； 化合物 VI 与 1 当量氧化剂氧化得到化合物 I。 5.权利要求1-3之一所定义的通式I化合物在制备治疗高尿酸血症和痛风药物方面的 用途。 权 利 要 求 书 CN 104327000 A 3 1/8 页 4 苯基取代的三氮唑亚磺酰。
4、丙二酸类化合物、 其制备方法及 用途 技术领域 0001 本发明涉及治疗高尿酸血症和痛风相关的药物领域。具体而言， 本发明涉及对 高尿酸血症和痛风有治疗作用的一类苯基取代的三氮唑亚磺酰丙二酸结构的尿酸转运体 1(urate transporter 1,URAT1) 抑制剂、 制备方法、 含有它们的药物组合物以及在医药上 的用途。 背景技术 0002 痛风是一种慢性代谢性疾病， 以高尿酸血症和尿酸单钠盐 (MSU) 沉积在关节等部 位而引起的痛疼为主要特征， 主要原因为嘌呤代谢紊乱和 / 或尿酸排泄障碍。据估计， 目前 全球痛风患者有 2000 多万。目前用于治疗痛风的药物包括用于缓解疼痛的抗炎。
5、药物 ( 如 秋水仙碱等 )、 抑制尿酸生成药物 ( 以别嘌醇和非布索坦为代表的黄嘌呤氧化酶抑制剂 )、 粗尿酸排泄药物(以丙磺舒、 苯磺唑酮、 苯溴马隆和氯沙坦为代表的尿酸排泄药物)和尿酸 酶(以pegloticase为代表)。 这些药物存在不同的程度的毒副作用， 如苯溴马隆有引起爆 发性肝炎的危险， 别嘌醇有肝脏及骨髓毒性和变态反应等不良反应， 等等。 0003 Lesinurad(RDEA 594) 是一种由 Ardea 公司研制的可以抑制肾脏中尿酸转运体 (urate transporter 1,URAT1) 而通过尿液的途径来排出血液中尿酸的口服药物， 目前处 于 III 期临床阶段。
6、。Lesinurad 最早由 Valeant 公司研发的抗病毒药物 RDEA806 发展而来。 现在 Lesinurad 的所有权目前由于 Ardea 公司被收购而属于 Astra Zeneca。 0004 0005 本发明公开了一类含苯基取代的三氮唑亚磺酰丙二酸结构的 URAT1 抑制剂， 这些 化合物可用于制备治疗高尿酸血症和痛风的药物。 发明内容 0006 本发明的一个目的是提供一种具有良好活性， 具有通式 I 的一类化合物。 0007 本发明的另一个目的是提供制备具有通式 I 的化合物的方法。 0008 现结合本发明的目的对本发明内容进行具体描述。 0009 本发明具有通式 (I) 的。
7、化合物具有下述结构式 ： 0010 说 明 书 CN 104327000 A 4 2/8 页 5 0011 其中， R 选自卤素取代基。 0012 优选通式 (I) 的化合物具有以下结构， 0013 0014 更优选通式 (I) 的化合物具有以下结构， 0015 0016 本发明所述通式 (I) 化合物通过以下路线合成 ： 0017 说 明 书 CN 104327000 A 5 3/8 页 6 0018 化合物II与-溴代丙二酸二甲酯在碱存在下反应， 得到化合物IV ； 化合物IV在 溴仿中与亚硝酸钠和二氯乙酸反应得到化合物 V ； 化合物 V 在碱性条件下水解得到化合物 VI ； 化合物 V。
8、I 与 1 当量氧化剂氧化得到化合物 I。 0019 本发明所述通式 I 化合物具有 URAT1 的抑制作用， 可作为有效成分用于制备高尿 酸血症和痛风的治疗药物。本发明所述通式 I 化合物的活性是通过受体结合试验来验证 的。 0020 本发明的通式 I 化合物在相当宽的剂量范围内是有效的。例如每天服用的剂量约 在 1mg-500mg/ 人范围内， 分为一次或数次给药。实际服用本发明通式 I 化合物的剂量可由 医生根据有关的情况来决定。 具体实施方式 0021 下面结合实施例对本发明作进一步的说明。需要说明的是， 下述实施例仅是用于 说明， 而并非用于限制本发明。本领域技术人员根据本发明的教导。
9、所做出的各种变化均应 在本申请权利要求所要求的保护范围之内。 0022 实施例 1 化合物 I-1 的合成 0023 说 明 书 CN 104327000 A 6 4/8 页 7 0024 A. 化合物 IV-1 的合成 0025 化合物 II 参照专利文献 WO2011085009 制备。5.96g(20mmol) 化合物 II-1 和 4.22g(20mmol) 化合物 III 溶于 100mL 干燥的 DMF 中， 室温下搅拌， 加入 8.29g(60mmol) 固 体 K2CO3， 而后反应混合物在室温下搅拌， 直到 TLC 跟踪发现反应完成 ( 一般 12h 以内 )。反 应混合物倾。
10、倒入400mL冰水中， 搅拌， 使用100mL3的CH2Cl2萃取， 合并萃取相， 使用100mL 5的盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥。 抽滤除去干燥剂， 滤液在旋转蒸发仪上蒸干， 得到的残余 物使用柱层析纯化， 得到化合物 IV-1， 白色固体， ESI-MS,m/z 551(M+Na+)。 0026 B. 化合物 V-1 的合成 0027 6.33g(12mmol) 化合物 IV-1 溶于 30mL 溴仿中， 室温下搅拌， 加入 3.45g(50mmol) NaNO2和 3.00g 苄基三乙基溴化铵， 而后加入 6.45g(50mmol) 二氯乙酸。所得混合物在室 温下搅拌， 直到 TLC 跟。
11、踪发现反应完成 ( 一般 12h 以内 )。反应混合物倾倒入 300mL 冰水 中， 搅拌， 使用 100mL3 的 CH2Cl2萃取， 合并萃取相， 依次使用 100mL 2的 Na2S2O3溶液和 100mL 5的盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥。 抽滤除去干燥剂， 滤液在旋转蒸发仪上蒸干， 得到 的残余物使用柱层析纯化， 得到化合物 V-1， 白色固体， ESI-MS,m/z 613(M+Na+)。 0028 C. 化合物 VI-1 的合成 0029 4.72g(8mmol) 化合物 V-1 溶于 30mL 甲醇中， 室温下搅拌， 加入 3mL10的 LiOH 溶液， 所得混合物室温下搅拌， 。
12、直到 TLC 跟踪发现反应完成 ( 一般 3h 以内 )。反应混合物 倾倒入 200mL 冰水中， 搅拌， 使用浓盐酸调节 pH 2-3， 100mL3 的 CH2Cl2萃取， 合并萃取 相， 使用 100mL 5的盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥。抽滤除去干燥剂， 滤液在旋转蒸发仪上 蒸干， 得到的残余物使用柱层析纯化， 得到化合物 VI-1， 白色固体， ESI-MS,m/z 562， 564， 560(M-H-)。 0030 D. 化合物 I-1 的合成 0031 3.38g(6mmol)化合物VI-1溶于10mL CH2Cl2中， 搅拌， 加入1.20g(7.0mmol)间氯 过氧苯甲酸(m。
13、CPBA)， 室温下搅拌5h小时。 反应混合物倾倒入200mL冰水中， 搅拌， 100mL3 的 CH2Cl2萃取， 合并萃取相， 依次使用 100mL 2 Na2S2O3溶液、 100mL 饱和 NaHCO3和 100mL 说 明 书 CN 104327000 A 7 5/8 页 8 5的盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥。 抽滤除去干燥剂， 滤液在旋转蒸发仪上蒸干， 得到的残余 物使用柱层析纯化， 得到化合物 I-1， 黄白色固体， ESI-MS,m/z 578， 580， 576(M-H-)。 0032 实施例 2-8 0033 参照实施例 1 操作步骤， 合成了下表所列化合物。 0034 说 。
14、明 书 CN 104327000 A 8 6/8 页 9 说 明 书 CN 104327000 A 9 7/8 页 10 0035 实施例 9 0036 本发明所述的化合物及相关化合物对 URAT1 抑制的 IC50 值按照文献记载的类似 的方法测定 (US2014/0005136 中实施例 12)。 0037 构建稳定表达人源化 URAT1 转运体的细胞株 ： 将人源化 URAT1 基因 (SLC22A112) 从质粒 pCMV6-XL-5(Origene) 亚克隆到真核表达的质粒 pCMV6/neo(Origene) 上。基因测 序证实了人源化 URAT1 与基因库中记录的信息一致 (NM。
15、_144585.2)。HEK293 人胚胎肾细胞 (ATCC#CRL-1573)在EMEM组织培养液中在5的CO2和95的空气气氛中培养。 使用L2000 型转染剂 (Invitrogene) 将 pCMV6/Neo/URAT1 转染到 HEK293 细胞上。24 小时后， 将被转染 的细胞分到直径为 10cm 的组织培养皿中， 继续生长一天， 而后将培养基更换为含有 0.5mg/ mL G418(Gibco) 的新鲜的培养基。8 天后， 选择并收集耐药性菌落， 并用其测试对 14C- 标记 的尿酸的转运活性。将 HEK293/URAT1 细胞以 75,000/ 孔的密度种植于聚 D- 赖氨酸。
16、覆盖的 96 孔板上。 0038 这些细胞在培养箱中 37下生长过夜， 而后冷却到室温下， 其中的培养液使用 250L/ 孔的清洗液洗涤一次 (125mM 葡萄糖酸钠、 pH 7.3 的 10mMHEPES)。将待测化合 物或者空白对照加到含有40M的 14C-标记尿酸(54mCi/mmol)的缓冲液中， 所述缓冲液含 有 125mM 葡萄糖酸钠、 4.8mM 葡萄糖酸钾、 1.2mM 磷酸二氢钾、 1.2mM 硫酸镁、 1.3mM 葡萄糖酸 钙、 5.6mM 葡萄糖、 25mM HEPES， 最终 pH 7.3。96 孔板在室温下培养 10 分钟， 接着依次用 50L/ 孔和 250L/ 孔。
17、的上述清洗液各清洗三次。在 96 孔板上加入 Microscint 20 型液 闪剂， 板子在 45下培养过夜， 而后在 TopCount Plate Reader 上读数， 并据此计算 IC50。 0039 结果如下列表所示。 0040 本发明的部分化合物对 URAT1 的 IC50值 化合物IC50(hURAT1,nM) Lesinurad22.4 I-18.3 I-228.0 I-314.7 I-49.1 说 明 书 CN 104327000 A 10 8/8 页 11 I-635.6 I-724.2 I-820.5 0041 上述IC50的测定结果表明， 本发明化合物为强的URAT1抑制剂， 可以用来制备治疗 高尿酸血症和痛风的药物。 说 明 书 CN 104327000 A 11 。