一种可用于创面修复的复合微球的制备方法.pdf

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1、(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201410682602.X (22)申请日 2014.11.24 A61K 38/18(2006.01) A61K 9/16(2006.01) A61K 47/04(2006.01) A61K 47/34(2006.01) A61P 17/02(2006.01) A61P 7/04(2006.01) A61K 33/42(2006.01) (71)申请人华南理工大学地址 510006 广东省广州市番禺区广州大学城华南理工大学 (72)发明人魏坤梁猛 (74)专利代理机构广州粤高专利商标代理有限公司 44102 代理人何淑。

2、珍 (54) 发明名称一种可用于创面修复的复合微球的制备方法 (57) 摘要本发明公开了一种可用于创面修复的复合微球的制备方法，该方法主要为：将 PLGA 溶于二氯甲烷中，得到溶液 a ；将高比面积 SiO2、磷酸三钙和碳酸氢铵溶液加溶液 a 中，进行搅拌，得到混合液；混合液体加入到聚乙烯醇溶液中，进行搅拌；用去离子水冲洗微球，然后进行冻干，得到一种可用于创面修复的复合微球。与未加碳酸氢铵制作的微球相比，添加碳酸氢铵后，微球表面会观察到很多细小的孔洞，所以使得微球的比表面积增大，将微球附着于皮肤创伤处，由于高比面积 SiO2和微球表面。

3、孔洞的存在，能够充分吸收皮肤渗透出的体液，而且钙皮肤止血和细胞增殖方面发挥着重要作用，加入磷酸钙盐能促进皮肤创伤部位的快速恢复。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请权利要求书1页说明书4页附图2页 (10)申请公布号 CN 104474533 A (43)申请公布日 2015.04.01 CN 104474533 A 1/1 页 2 1.一种可用于创面修复的复合微球的制备方法，包括以下步骤：（1）将 PLGA 溶于二氯甲烷中，得到溶液 a ；（2）将高比面积 SiO2、碱性成纤维细胞生长因子 FGF-21、磷酸。

4、三钙和碳酸氢铵溶液加入步骤（1）所得溶液 a 中，进行搅拌，使溶液中各物质分散均匀，得到混合液；（3）将（2）混合液体加入到聚乙烯醇溶液中，进行搅拌；（4）用去离子水冲洗微球，然后进行冻干，得到一种可用于创面修复的复合微球。 2.根据权利要求 1 所述的可用于创面修复的复合微球的制备方法，其特征在于，在步骤（1）中，所述 PLGA 加入量为 0.51.5g，二氯甲烷为 4.55.5ml。 3.根据权利要求 1 所述的可用于创面修复的复合微球的制备方法，其特征在于，在步骤（2）中，高比面积 SiO2和磷酸三钙的加入量均为 0.10.15。

5、g，碱性成纤维细胞生长因子 FGF-21 为 1525g，碳酸氢铵溶液浓度为 11.5mg/ml、体积为 11.5ml，搅拌速率为 20002500r/min，搅拌时间为 57min。 4.根据权利要求 1 所述的可用于创面修复的复合微球的制备方法，其特征在于，在步骤（3）中，所述聚乙烯醇溶液质量百分比浓度为 11.5%、体积为 500550ml，搅拌速率为 450550r/min、时间为 612h。 5.根据权利要求 1 所述的可用于创面修复的复合微球的制备方法，其特征在于，步骤（4）中，所述冻干的时间为 4872h。权利要求书 CN 1044。

6、74533 A 2 1/4 页 3 一种可用于创面修复的复合微球的制备方法技术领域 0001 本发明涉及皮肤创伤药物的载药微球的制备方法，具体涉及一种可用于创面修复的复合微球的制备方法。背景技术 0002 当今社会随着人们对生活品质需求的提高，人们对外表形象也越来越重视。在日常生活中人们的皮肤会难免受到外界的影响而产生创伤。创伤后皮肤渗透出的体液要及时清理，否则会引发炎症等，使得皮肤创伤部位的组织修复受阻。 0003 高比表面的 SiO2内部具有孔洞结构，能够充分吸收体液，将其与 PLGA 和磷酸钙盐结合制成微球，可以发挥多方面的效果。PLGA 作为支架材料广泛用于。

7、骨组织修复工程，通过对 PLGA 的一些改性，使得其在骨组织修复工程领域具有广阔的应用前景。在此微球中， PLGA 同样发挥支架作用，其将高比表面的 SiO2和磷酸钙盐结合在一起，既能使高比表面的 SiO2起到吸收体液的作用，又能发挥磷酸钙盐中钙离子的止血效果。具有孔洞的微球则增大了微球与皮肤的接触面积，更能发挥上述两作用。但传统方法制备得到的多孔微球存在孔道较大，比表面积小的问题。发明内容 0004 本发明克服上述缺陷，提供一种可用于创面修复的复合微球的制备方法，通过加入少量的碳酸氢铵溶液，让其作为致孔剂来使得微球中产生极小的孔道，孔道的大小与传统方法在制得。

8、同等粒径大小的多孔微球相比，形成的孔道小很多，可以增加微球的比表面积。 0005 本发明通过以下技术方案实现。 0006 一种可用于创面修复的复合微球的制备方法，包括以下步骤： 0007 (1) 将 PLGA 溶于二氯甲烷中，得到溶液 a ； 0008 (2)将高比面积SiO2、碱性成纤维细胞生长因子FGF-21、磷酸三钙和碳酸氢铵溶液加入步骤 (1) 所得溶液 a 中，进行搅拌，使溶液中各物质分散均匀，得到混合液； 0009 (3) 将 (2) 混合液体加入到聚乙烯醇溶液中，进行搅拌； 0010 (4) 用去离子水冲洗微球，然后进行冻干，得到一种可用于创面修。

9、复的复合微球。 0011 上述方法中，在步骤 (1) 中，所述 PLGA 加入量为 0.5 1.5g，二氯甲烷为 4.5 5.5ml。 0012 上述方法中，在步骤(2)中，高比面积SiO2和磷酸三钙的加入量均为0.10.15g，碱性成纤维细胞生长因子 FGF-21 为 15 25g，碳酸氢铵溶液浓度为 1 1.5mg/ml、体积为 1 1.5ml，搅拌速率为 2000 2500r/min，搅拌时间为 5 7min。 0013 上述方法中，在步骤(3)中，所述聚乙烯醇溶液质量百分比浓度为11.5、体积为 500 550ml，搅拌速率为 450 550r/min、。

10、时间为 6 12h。 0014 上述方法中，步骤 (4) 中，所述冻干的时间为 48 72h。说明书 CN 104474533 A 3 2/4 页 4 0015 与现有技术相比，本发明的优势在于： 0016 1) 微球中加入高比面积 SiO2，能够充分吸收受伤处的体液。 0017 2) 微球中复合磷酸三钙，可发挥钙离子的止血效果。 0018 3) 微球制备时加入碳酸氢铵，产生孔隙，可增大微球与皮肤的接触面积。 0019 4)微球中高比面积SiO2和孔隙为修复皮肤的药物增加了附着位点，提高了修复皮肤的效率。附图说明 0020 图 1 为实施例 1 中未添加碳酸氢铵的。

11、复合微球的 SEM 扫描图像。 0021 图 2 为实施例 1 中未添加碳酸氢铵的复合微球的局部 SEM 扫描图像。 0022 图 3 为实施例 2 添加碳酸氢铵的复合微球的 SEM 扫描图像。 0023 图 4 为实施例 2 添加碳酸氢铵的复合微球的局部 SEM 扫描图像。具体实施方式 0024 下面结合具体实施例对本发明作进一步地具体详细描述，但本发明的实施方式不限于此，对于未特别注明的工艺参数，可参照常规技术进行。 0025 实施例 1 0026 (1) 将 1gPLGA 溶解于 5ml 二氯甲烷中。 0027 (2) 待 PLGA 完全溶解后，向溶液中加入 0.1g 高比面。

12、积 SiO2和 0.15g 磷酸三钙，在 2000r/min 下搅拌 5min。 0028 (3) 上述溶液加入到 500ml， 1的聚乙烯醇溶液中，室温以 500r/min 的转速下搅拌 10h。 0029 (4) 停止搅拌，用去离子水冲洗 10 次。 0030 (5) 将冲洗后的微球进行冻干，冻干时间为 48h，得到磷酸钙盐 /PLGA/ 高比面积 SiO2微球。 0031 实施例 2 0032 (1) 将 1gPLGA 溶解于 5ml 二氯甲烷中。 0033 (2)待PLGA完全溶解后，向溶液中加入0.1g高比面积SiO2、 0.15g磷酸三钙和1ml 浓度为 1mg/ml。

13、的碳酸氢铵溶液，在 2000r/min 下搅拌 5min。 0034 (3)上述溶液加入到500ml1的聚乙烯醇溶液中，室温以500r/min的转速下搅拌 10h。 0035 (4) 停止搅拌，用去离子水冲洗 10 次。 0036 (5)将冲洗后的微球进行冻干，冻干时间为48h，得到带有孔的磷酸钙盐/PLGA/高比面积 SiO2微球。 0037 实施例 3 0038 (1) 将 1gPLGA 溶解于 5ml 二氯甲烷中。 0039 (2) 待 PLGA 完全溶解后，向溶液中加入 0.1g 高比面积 SiO2、 20g 碱性成纤维细胞生长因子 FGF-21 和 0.15g 磷酸。

14、三钙，在 2000r/min 下搅拌 5min。 0040 (3)上述溶液加入到500ml1的聚乙烯醇溶液中，室温以500r/min的转速下搅拌说明书 CN 104474533 A 4 3/4 页 5 10h。 0041 (4) 停止搅拌，用去离子水冲洗 10 次。 0042 将冲洗后的微球进行冻干，冻干时间为 48h，得到磷酸钙盐 /PLGA/ 高比面积 SiO2 微球。 0043 实施例 4 0044 (1) 将 1gPLGA 溶解于 5ml 二氯甲烷中。 0045 (2) 待 PLGA 完全溶解后，向溶液中加入 0.1g 高比面积 SiO2、 20g 碱性成纤维细胞生。

15、长因子 FGF-21、 0.15g 磷酸三钙和 1ml 浓度为 1mg/ml 的碳酸氢铵溶液，在 2000r/min 下搅拌 5min。 0046 (3)上述溶液加入到500ml1的聚乙烯醇溶液中，室温以500r/min的转速下搅拌 10h。 0047 (4) 停止搅拌，用去离子水冲洗 10 次。 0048 (5)将冲洗后的微球进行冻干，冻干时间为48h，得到带有孔的磷酸钙盐/PLGA/高比面积 SiO2微球。 0049 实施例 5 0050 SEM 图像对比 0051 图 1-4 中可以看出，因为制作工艺相同， 2 组微球的粒径大小相同，均为 200m 左右，而且两种微球。

16、的表面粗糙度相似。从整体 SEM 图像中能够看到图 3 与图 1 相比，表面有很多微小的孔，在局部 SEM 图像中能清晰的看到图 2 中，微球表面没有孔洞，而图 4 中分散着孔洞，孔径大小为 1m。 0052 实施例 6 0053 大鼠皮肤创伤愈合率的对比 0054 取 30 只 200g 左右的 SD 大鼠，麻醉后背部剃毛，以手术刀在背部各做一个 5 毫米深、 3 厘米长的切口，对照组使用生理盐水，实验组创伤处涂抹本发明实施例 1 的创面修复凝胶，分别于 3,10,17 天记录创伤愈合率。结果表明，具有孔的复合微球愈合效果优于无孔的复合微球，而且因为高比表面。

17、积 SiO2可以与细胞生长因子相互吸附，具有载药的作用，同时微球的孔洞增大了比表面积，使得载药量增大，能够载更多的细胞生长因子，所以实施例 4 的愈合效果最为理想。 0055 表 1 不同时间点记录的不同处理组大鼠皮肤创伤愈合率 0056 说明书 CN 104474533 A 5 4/4 页 6 0057 本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明权利要求的保护范围之内。说明书 CN 104474533 A 6 1/2 页 7 图 1 图 2 说明书附图 CN 104474533 A 7 2/2 页 8 图 3 图 4 说明书附图 CN 104474533 A 8 。

摘要
申请专利号：	CN201410682602.X	申请日：	2014.11.24
公开号：	CN104474533A	公开日：	2015.04.01
当前法律状态：	撤回	有效性：	无权
法律详情：	发明专利申请公布后的视为撤回IPC(主分类):A61K 38/18申请公布日:20150401\|\|\|实质审查的生效IPC(主分类):A61K 38/18申请日:20141124\|\|\|公开
IPC分类号：	A61K38/18; A61K9/16; A61K47/04; A61K47/34; A61P17/02; A61P7/04; A61K33/42(2006.01)N	主分类号：	A61K38/18
申请人：	华南理工大学
发明人：	魏坤; 梁猛
地址：	510006广东省广州市番禺区广州大学城华南理工大学
优先权：
专利代理机构：	广州粤高专利商标代理有限公司44102	代理人：	何淑珍
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内容摘要

本发明公开了一种可用于创面修复的复合微球的制备方法，该方法主要为：将PLGA溶于二氯甲烷中，得到溶液a；将高比面积SiO2、磷酸三钙和碳酸氢铵溶液加溶液a中，进行搅拌，得到混合液；混合液体加入到聚乙烯醇溶液中，进行搅拌；用去离子水冲洗微球，然后进行冻干，得到一种可用于创面修复的复合微球。与未加碳酸氢铵制作的微球相比，添加碳酸氢铵后，微球表面会观察到很多细小的孔洞，所以使得微球的比表面积增大，将微球附着于皮肤创伤处，由于高比面积SiO2和微球表面孔洞的存在，能够充分吸收皮肤渗透出的体液，而且钙皮肤止血和细胞增殖方面发挥着重要作用，加入磷酸钙盐能促进皮肤创伤部位的快速恢复。

权利要求书

权利要求书
1.  一种可用于创面修复的复合微球的制备方法，包括以下步骤：
（1）将PLGA溶于二氯甲烷中，得到溶液a；
（2）将高比面积SiO2、碱性成纤维细胞生长因子FGF-21、磷酸三钙和碳酸氢铵溶液加入步骤（1）所得溶液a中，进行搅拌，使溶液中各物质分散均匀，得到混合液；
（3）将（2）混合液体加入到聚乙烯醇溶液中，进行搅拌；
（4）用去离子水冲洗微球，然后进行冻干，得到一种可用于创面修复的复合微球。

2.  根据权利要求1所述的可用于创面修复的复合微球的制备方法，其特征在于，在步骤（1）中，所述PLGA加入量为0.5~1.5g，二氯甲烷为4.5~5.5ml。

3.  根据权利要求1所述的可用于创面修复的复合微球的制备方法，其特征在于，在步骤（2）中，高比面积SiO2和磷酸三钙的加入量均为0.1~0.15g，碱性成纤维细胞生长因子FGF-21为15~25μg，碳酸氢铵溶液浓度为1~1.5mg/ml、体积为1~1.5ml，搅拌速率为2000~2500r/min，搅拌时间为5~7min。

4.  根据权利要求1所述的可用于创面修复的复合微球的制备方法，其特征在于，在步骤（3）中，所述聚乙烯醇溶液质量百分比浓度为1~1.5%、体积为500~550ml，搅拌速率为450~550r/min、时间为6~12h。

5.  根据权利要求1所述的可用于创面修复的复合微球的制备方法，其特征在于，步骤（4）中，所述冻干的时间为48~72h。

说明书

说明书一种可用于创面修复的复合微球的制备方法
技术领域
本发明涉及皮肤创伤药物的载药微球的制备方法，具体涉及一种可用于创面修复的复合微球的制备方法。
背景技术
当今社会随着人们对生活品质需求的提高，人们对外表形象也越来越重视。在日常生活中人们的皮肤会难免受到外界的影响而产生创伤。创伤后皮肤渗透出的体液要及时清理，否则会引发炎症等，使得皮肤创伤部位的组织修复受阻。
高比表面的SiO2内部具有孔洞结构，能够充分吸收体液，将其与PLGA和磷酸钙盐结合制成微球，可以发挥多方面的效果。PLGA作为支架材料广泛用于骨组织修复工程，通过对PLGA的一些改性，使得其在骨组织修复工程领域具有广阔的应用前景。在此微球中，PLGA同样发挥支架作用，其将高比表面的 SiO2和磷酸钙盐结合在一起，既能使高比表面的SiO2起到吸收体液的作用，又能发挥磷酸钙盐中钙离子的止血效果。具有孔洞的微球则增大了微球与皮肤的接触面积，更能发挥上述两作用。但传统方法制备得到的多孔微球存在孔道较大，比表面积小的问题。
发明内容
本发明克服上述缺陷，提供一种可用于创面修复的复合微球的制备方法，通过加入少量的碳酸氢铵溶液，让其作为致孔剂来使得微球中产生极小的孔道，孔道的大小与传统方法在制得同等粒径大小的多孔微球相比，形成的孔道小很多，可以增加微球的比表面积。
本发明通过以下技术方案实现。
一种可用于创面修复的复合微球的制备方法，包括以下步骤：
(1)将PLGA溶于二氯甲烷中，得到溶液a；
(2)将高比面积SiO2、碱性成纤维细胞生长因子FGF-21、磷酸三钙和碳酸氢铵溶液加入步骤(1)所得溶液a中，进行搅拌，使溶液中各物质分散均匀，得到混合液；
(3)将(2)混合液体加入到聚乙烯醇溶液中，进行搅拌；
(4)用去离子水冲洗微球，然后进行冻干，得到一种可用于创面修复的复合微球。
上述方法中，在步骤(1)中，所述PLGA加入量为0.5～1.5g，二氯甲烷为 4.5～5.5ml。
上述方法中，在步骤(2)中，高比面积SiO2和磷酸三钙的加入量均为 0.1～0.15g，碱性成纤维细胞生长因子FGF-21为15～25μg，碳酸氢铵溶液浓度为 1～1.5mg/ml、体积为1～1.5ml，搅拌速率为2000～2500r/min，搅拌时间为5～7min。
上述方法中，在步骤(3)中，所述聚乙烯醇溶液质量百分比浓度为1～1.5％、体积为500～550ml，搅拌速率为450～550r/min、时间为6～12h。
上述方法中，步骤(4)中，所述冻干的时间为48～72h。
与现有技术相比，本发明的优势在于：
1)微球中加入高比面积SiO2，能够充分吸收受伤处的体液。
2)微球中复合磷酸三钙，可发挥钙离子的止血效果。
3)微球制备时加入碳酸氢铵，产生孔隙，可增大微球与皮肤的接触面积。
4)微球中高比面积SiO2和孔隙为修复皮肤的药物增加了附着位点，提高了修复皮肤的效率。
附图说明
图1为实施例1中未添加碳酸氢铵的复合微球的SEM扫描图像。
图2为实施例1中未添加碳酸氢铵的复合微球的局部SEM扫描图像。
图3为实施例2添加碳酸氢铵的复合微球的SEM扫描图像。
图4为实施例2添加碳酸氢铵的复合微球的局部SEM扫描图像。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步地具体详细描述，但本发明的实施方式不限于此，对于未特别注明的工艺参数，可参照常规技术进行。
实施例1
(1)将1gPLGA溶解于5ml二氯甲烷中。
(2)待PLGA完全溶解后，向溶液中加入0.1g高比面积SiO2和0.15g磷酸三钙，在2000r/min下搅拌5min。
(3)上述溶液加入到500ml，1％的聚乙烯醇溶液中，室温以500r/min的转速下搅拌10h。
(4)停止搅拌，用去离子水冲洗10次。
(5)将冲洗后的微球进行冻干，冻干时间为48h，得到磷酸钙盐/PLGA/高比面积SiO2微球。
实施例2
(1)将1gPLGA溶解于5ml二氯甲烷中。
(2)待PLGA完全溶解后，向溶液中加入0.1g高比面积SiO2、0.15g磷酸三钙和1ml浓度为1mg/ml的碳酸氢铵溶液，在2000r/min下搅拌5min。
(3)上述溶液加入到500ml1％的聚乙烯醇溶液中，室温以500r/min的转速下搅拌10h。
(4)停止搅拌，用去离子水冲洗10次。
(5)将冲洗后的微球进行冻干，冻干时间为48h，得到带有孔的磷酸钙盐/PLGA/ 高比面积SiO2微球。
实施例3
(1)将1gPLGA溶解于5ml二氯甲烷中。
(2)待PLGA完全溶解后，向溶液中加入0.1g高比面积SiO2、20μg碱性成纤维细胞生长因子FGF-21和0.15g磷酸三钙，在2000r/min下搅拌5min。
(3)上述溶液加入到500ml1％的聚乙烯醇溶液中，室温以500r/min的转速下搅拌10h。
(4)停止搅拌，用去离子水冲洗10次。
将冲洗后的微球进行冻干，冻干时间为48h，得到磷酸钙盐/PLGA/高比面积SiO2微球。
实施例4
(1)将1gPLGA溶解于5ml二氯甲烷中。
(2)待PLGA完全溶解后，向溶液中加入0.1g高比面积SiO2、20μg碱性成纤维细胞生长因子FGF-21、0.15g磷酸三钙和1ml浓度为1mg/ml的碳酸氢铵溶液，在2000r/min下搅拌5min。
(3)上述溶液加入到500ml1％的聚乙烯醇溶液中，室温以500r/min的转速下搅拌10h。
(4)停止搅拌，用去离子水冲洗10次。
(5)将冲洗后的微球进行冻干，冻干时间为48h，得到带有孔的磷酸钙盐/PLGA/ 高比面积SiO2微球。
实施例5
SEM图像对比
图1-4中可以看出，因为制作工艺相同，2组微球的粒径大小相同，均为 200μm左右，而且两种微球的表面粗糙度相似。从整体SEM图像中能够看到图 3与图1相比，表面有很多微小的孔，在局部SEM图像中能清晰的看到图2中，微球表面没有孔洞，而图4中分散着孔洞，孔径大小为1μm。
实施例6
大鼠皮肤创伤愈合率的对比
取30只200g左右的SD大鼠，麻醉后背部剃毛，以手术刀在背部各做一个 5毫米深、3厘米长的切口，对照组使用生理盐水，实验组创伤处涂抹本发明实施例1的创面修复凝胶，分别于3,10,17天记录创伤愈合率。结果表明，具有孔的复合微球愈合效果优于无孔的复合微球，而且因为高比表面积SiO2可以与细胞生长因子相互吸附，具有载药的作用，同时微球的孔洞增大了比表面积，使得载药量增大，能够载更多的细胞生长因子，所以实施例4的愈合效果最为理想。
表1不同时间点记录的不同处理组大鼠皮肤创伤愈合率

本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明权利要求的保护范围之内。