皮肤改善用和/或治疗用发酵奶和其制造方法.pdf

本发明提供含有来自天然产物的、安全性高、并且皮肤改善效果和/或治疗效果高、制造特性良好的乳酸菌的组合物及发酵奶，并涉及用于皮肤改善和/或治疗的嗜热链球菌OLS3059(Streptococcusthermophilus OLS3059)的用途、含有嗜热链球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)和/或其培养物的皮肤改善用和/或治疗用的组合物、特征在于含有上述组合物的饮料食品、使用保加利亚乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii subspeciesbulgaricus)和嗜热链球菌OLS3059(Streptococcus thermophilusOLS3059)制备而成的皮肤改善用和/或治疗用的发酵奶、以及特征在于含有胶原蛋白肽和/或神经酰胺的上述皮肤改善用和/或治疗用的发酵奶。

1、  用于皮肤改善和/或治疗的嗜热链球菌OLS3059(Streptococcusthermophilus OLS3059)的用途。

2、  皮肤改善用和/或治疗用的组合物，该组合物含有嗜热链球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)和/或其培养物。

3、  根据权利要求2所述的皮肤改善用和/或治疗用的组合物，其中，还含有保加利亚乳杆菌OLL1073R-1(Lactobacillus delbrueckiisubspecies bulgaricus OLL1073R-1)和/或其培养物。

4、  饮料食品，其特征在于，含有权利要求2或3所述的组合物。

5、  皮肤改善用和/或治疗用的发酵奶，该发酵奶是使用保加利亚乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii subspecies bulgaricus)和嗜热链球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)制备而成。

6、  根据权利要求5所述的皮肤改善用和/或治疗用的发酵奶，其特征在于，含有胶原蛋白肽和/或神经酰胺。

7、  制造权利要求5或6所述的皮肤改善用和/或治疗用的发酵奶的方法，其特征在于，制备原料奶后，添加保加利亚乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii subspecies bulgaricus)和嗜热链球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)作为发酵剂，填充到容器中，进行发酵，形成凝乳之后进行冷藏。

8、  制造权利要求5或6所述的皮肤改善用和/或治疗用的发酵奶的方法，其特征在于，制备原料奶后，添加保加利亚乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii subspecies bulgaricus)和嗜热链球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)作为发酵剂，进行发酵，形成凝乳之后，将凝乳破碎，并填充到容器中，进行冷藏。

9、  制造权利要求5或6所述的皮肤改善用和/或治疗用的发酵奶的方法，其特征在于，制备原料奶后，添加保加利亚乳杆菌(Lactobacillusdelbrueckii subspecies bulgaricus)和嗜热链球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)作为发酵剂，进行发酵，形成凝乳之后，将凝乳破碎，并进行冷却，填充到容器中，进行冷藏。

皮肤改善用和/或治疗用发酵奶和其制造方法
技术领域
本发明涉及皮肤改善效果和/或治疗效果高的组合物和使用该组合物的饮料食物及发酵奶，特别涉及含有制造特性良好的乳酸菌的组合物及发酵奶。
背景技术
在以皮肤的改善及治疗等为目的的组合物及饮料食品中，有含有乳酸菌及其培养物的组合物或饮料食品。
作为涉及这些组合物及饮料食品的现有技术，有如下所述的现有技术。
使用特定的乳酸菌的特应性皮炎的抑制剂及食品(专利文献1)。
使用特定的乳酸菌的培养物的具有皮肤改善效果的保湿剂；及对肌肤粗糙及肌肤干燥的预防和治疗有效的、赋予肌肤(皮肤)“光泽”及“弹性”的化妆品组合物(专利文献2)。
将特定的乳酸菌及其培养物用于保持皮肤(肌肤)的免疫系统的平衡及含有乳酸菌及其培养物的食品等(专利文献3)。
美容食品，其通过组合使用胶原蛋白肽及神经酰胺和乳酸菌，除可以期待改善肌肤(皮肤)外，同时还可以期待改善通便、缓解疲劳、减轻肩头发僵等(专利文献4)。
如上所述，发现乳酸菌及其培养物具有皮肤改善效果及治疗效果，一直以来都期待将其应用于产业上。进行了几次具体研究后，认为实际上也存在制品化了的乳酸菌及其培养物。
但是，在以往的研究中，对于乳酸菌和皮肤(肌肤)的关系、或者在乳酸菌中添加有胶原蛋白肽及神经酰胺等的组合物和皮肤(肌肤)的关系的研究是不充分的。因此，对于乳酸菌及发酵奶的改善皮肤的效果等，还处于缺乏科学依据的状态。
另外，对于具有皮肤改善效果等的以往的乳酸菌，在制造发酵奶时，出现不形成凝乳或形成凝乳的时间变得过长的情况。这时，虽然具有皮肤改善效果等，但是，分开管理发酵奶的制造特性差的乳酸菌和用于形成凝乳的制造特性良好的乳酸菌，或由于发酵时间变长，因此总制造时间变长。这时，具有皮肤改善效果等的以往的乳酸菌不是活菌，是死菌，或者耐热性高的限定的菌体。也就是说，具有皮肤改善效果等的以往的乳酸菌不适用于发酵奶的工业上的大量生产(商业生产)等。
例如，欲使用被认为具有皮肤改善效果等的以往的乳酸菌来制造发酵奶时，大致需要如下所述的制造工序。即，(1)单独培养具有皮肤改善效果等的乳酸菌。(2)根据情况利用离心分离法或膜分离法将上述乳酸菌(培养菌体)浓缩至规定的浓度、或者，为了提高乳酸菌的保存性，对培养液进行加热杀菌、或干燥。(3)将形成凝乳的其它乳酸菌、和浓缩的培养菌体、或加热杀菌或干燥过的培养菌体添加到发酵前的调合奶中，进行混合培养。
这些制造工序管理复杂，制造费用、制造时间也增大，且混入杂菌的可能性高。并且，难以得到适口性优异且味道好的发酵奶。
专利文献1：日本特开2000-095697号公报
专利文献2：日本特开2003-081808号公报
专利文献3：日本特表2004-510740号公报
专利文献4：日本特开2004-254632号公报
发明内容
发明要解决的课题
本发明是鉴于上述以往技术的课题点而进行的，其目的在于，提供来自天然产物的、安全性高、皮肤改善效果和/或治疗效果高的组合物和适用于皮肤改善和/或治疗用途的组合物。本发明的目的还在于，提供使用该组合物的皮肤改善效果和/或治疗效果高的饮料食品及发酵奶，特别是含有制造特性良好的乳酸菌的组合物及发酵奶。
用于解决课题的手段
鉴于上述课题，本发明人等进行了专心的研究，结果是，以从发酵奶的制备中使用的乳酸菌中选出皮肤改善效果及治疗效果高的乳酸菌为目的，通过进行体外试验，发现嗜热链球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)的皮肤改善效果和/或治疗效果特别高，由此完成本发明。
即，本发明的权利要求1涉及的发明是用于皮肤改善和/或治疗的嗜热链球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)的用途。
另外，本发明的权利要求2涉及的发明是含有嗜热链球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)和/或其培养物的皮肤改善用和/或治疗用的组合物。
本发明的权利要求3涉及的发明是在权利要求2所述的皮肤改善用和/或治疗用的组合物的基础上，提供还含有保加利亚乳杆菌OLL1073R-1(Lactobacillus delbrueckii subspecies bulgaricusOLL1073R-1)和/或其培养物的皮肤改善用和/或治疗用组合物。
本发明的权利要求4涉及的发明是含有上述权利要求2所述的组合物的饮料食品。
本发明的权利要求5涉及的发明是使用保加利亚乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii subspecies bulgaricus)和嗜热链球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)制备而成的皮肤改善用和/或治疗用的发酵奶。
本发明的权利要求6涉及的发明是权利要求5所述的皮肤改善用和/或治疗用发酵奶，其特征在于，含有胶原蛋白肽和/或神经酰胺。
本发明的权利要求7涉及的发明是权利要求5或权利要求6所述的制造皮肤改善用和/或治疗用的发酵奶的方法，其特征在于，制备原料奶后，添加保加利亚乳杆菌(Lactobacillus delbrueckiisubspecies bulgaricus)和嗜热链球菌OLS3059(Streptococcusthermophilus OLS3059)作为发酵剂(Starter)，填充到容器中，进行发酵，形成凝乳之后进行冷藏。
本发明的权利要求8涉及的发明是权利要求5或权利要求6所述的制造皮肤改善用和/或治疗用的发酵奶的方法，其特征在于，制备原料奶后，添加保加利亚乳杆菌(Lactobacillus delbrueckiisubspecies bulgaricus)和嗜热链球菌OLS3059(Streptococcusthermophilus OLS3059)作为发酵剂，进行发酵，形成凝乳之后，将凝乳破碎，并填充到容器中，进行冷藏。
本发明的权利要求9涉及的发明是权利要求5或权利要求6所述的制造皮肤改善用和/或治疗用的发酵奶的方法，其特征在于，制备原料奶后，添加保加利亚乳杆菌(Lactobacillus delbrueckiisubspecies bulgaricus)和嗜热链球菌OLS3059(Streptococcusthermophilus OLS3059)作为发酵剂，进行发酵，形成凝乳之后，将凝乳破碎，并进行冷却，填充到容器中，进行冷藏。
这里，在本发明中，所谓“皮肤改善效果和/或治疗效果”，是指对皮肤或肌肤的光泽、弹性、发暗、斑、松驰、毛孔粗大、纹理、皱纹、干燥状况、发粘、透明感、发红、粉底的涂抹、浮肿、黑眼圈、皮疹、保湿、色素沉淀中的至少1种以上的状态具有改善效果。
另外，所谓“皮肤改善和/或治疗”，是指对皮肤或肌肤的光泽、弹性、发暗、斑、松驰、毛孔粗大、纹理、皱纹、干燥状况、发粘、透明感、发红、粉底的涂抹、浮肿、黑眼圈、皮疹、保湿、色素沉淀中的至少1种以上的状态进行改善。
进一步，“皮肤改善和/或治疗”还包含改善由以特应性皮炎为首的各种过敏性皮炎引起的肌肤症状及抑制发病。
另外，所谓“皮肤改善用和/或治疗用”，是指以发挥上述皮肤改善效果和/或治疗效果为目的而使用，特别是指适用于发挥上述皮肤改善效果和/或治疗效果的用途。
本发明中，所谓“保加利亚乳杆菌(Lactobacillus delbrueckiisubspecies bulgaricus)”，是指包含所有通过在发酵奶的制备中与嗜热链球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)组合，作为发酵剂，具有形成凝乳能力的乳酸菌的菌。例如有：从明治乳业株式会社制的原味酸奶(Plain Yogurt)、硬质酸奶(Hard Yoghurt)、软质酸奶(Soft Yoghurt)中分离得到的乳酸菌。
本发明中，嗜热链球菌OLS3059(Streptococcus thermophilusOLS3059)是以受理号：FERM P-15487(识别标识：Streptococcusthermophilus OLS3059、保存日(受理日)：平成8年2月29日)保存在由独立行政法人产业技术综合研究所专利生物保管中心的。
由该原保存向基于布达佩斯条约的保存的转移是在2006年11月29日进行的，由国际保存当局赋予保存号FERM BP-10740。
该嗜热链球菌OLS3059的菌体性状如下。
菌落性状：圆形、台状、光滑型
(BL平板培养基(没有马血)，培养温度：37℃，培养时间：48小时)
菌形态：球菌
革兰氏染色：阳性
需氧性：好氧性
糖类利用性
核糖-
甘露醇-
山梨糖醇-
乳糖+
海藻糖-
棉白糖-
麦芽糖-
密二糖-
松三糖-
阿拉伯糖-
另外，本发明中，保加利亚乳杆菌OLL1073R-1(Lactobacillusdelbrueckii subspecies bulgaricus OLL1073R-1)是以受理号：FERMP-17227(识别标识：Lactobacillus delbrueckii subspeciesbulgaricus OLL1073R-1、保存日(受理日)：平成11年2月19日)保存在由独立行政法人产业技术综合研究所专利生物保管中心的。
由该原保存向基于布达佩斯条约的保存的转移是在2006年11月29日进行的，由国际保存当局赋予保存号FERM BP-10741。
该保加利亚乳杆菌OLL1073R-1的菌体性状如下。
菌落性状：不透明、粗糙型
(BL琼脂培养基，培养温度：37℃，培养时间：48小时)
菌形态：杆菌
革兰氏染色：阳性
需氧性：兼性厌氧性
糖类利用性
核糖-
甘露醇-
山梨糖醇-
乳糖+
海藻糖-
棉白糖-
麦芽糖-
密二糖-
松三糖-
阿拉伯糖-
发明效果
本发明能够提供用于皮肤改善和/或治疗的嗜热链球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)的用途。
根据本发明，可以提供来自天然产物的、安全性高、皮肤改善效果和/或治疗效果高的组合物和适用于皮肤改善和/或治疗的用途的组合物。另外，还可以提供使用了该组合物的、皮肤改善效果和/或治疗效果高的饮料食品及发酵奶，特别是含有制造特性良好的乳酸菌的组合物及发酵奶。
根据本发明，可以提供对整肠(通便)改善效果和/或治疗效果高的人的皮肤改善效果和/或治疗效果高的发酵奶和其制造方法。
附图说明
图1是表示给予蒸馏水的组、给予鼠李糖乳杆菌ATCC 53103(Lactobacillus rhamnosus ATCC 53103)的组、给予嗜热链球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)的组及不诱发皮炎的组在试验期间的皮炎发病分数的变化(用平均±标准偏差表示。**P＜0.01，*P＜0.05，Dunnett的多重比较)的图。
图2是表示给予蒸馏水的组、给予鼠李糖乳杆菌ATCC 53103(Lactobacillus rhamnosus ATCC 53103)的组、给予嗜热链球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)的组及不诱发皮炎的组在15日后(day 15)的血清中的总IgE浓度(用平均±标准偏差表示。**P＜0.01，Dunnett的多重比较)的图。
图3是表示给予蒸馏水的组、给予保加利亚乳杆菌OLL1073R-1(Lactobacillus bulgaricus OLL1073R-1)的组及给予嗜热链球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)的组在试验期间的皮炎发病分数的变化(用平均±标准偏差表示。**P＜0.01，*P＜0.05，Dunnett的多重比较)的图。
图4是表示给予蒸馏水的组、给予保加利亚乳杆菌OLL1073R-1(Lactobacillus bulgaricus OLL1073R-1)的组及给予嗜热链球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)的组在15日后(day15)的血清中的总IgE浓度(用平均±标准偏差表示。**P＜0.01，Dunnett的多重比较)的图。
图5是表示给予由保加利亚乳杆菌OLL1073R-1(Lactobacillusbulgaricus OLL1073R-1)和嗜热链球菌OLS3059(Streptococcusthermophilus OLS3059)制备而得的发酵物的组、给予由保加利亚乳杆菌MEP1705601(Lactobacillus delbrueckii subspecies bulgaricusMEP1705601)和嗜热链球菌MEP1705601(Streptococcus thermophilusMEP1705601)制备而得的发酵物的组、给予未发酵物的组及不诱发皮炎且给予未发酵物的组在试验期间的皮炎发病分数的变化(用平均±标准偏差表示。**P＜0.01，*P＜0.05，Dunnett的多重比较)的图。
图6是表示将由嗜热链球菌OLS3059(Streptococcusthermophilus OLS3059)制备而得的发酵奶作为试验餐的受试者的皮肤(肌肤)的弹性的图。
图7是表示将由嗜热链球菌OLS3059(Streptococcusthermophilus OLS3059)制备而得的发酵奶作为试验餐的受试者的皮肤(肌肤)的纹理密度的图。
图8是表示将由嗜热链球菌OLS3059(Streptococcusthermophilus OLS3059)制备而得的发酵奶作为试验餐的受试者的总皮疹数的观察结果的图。
图9是表示将由嗜热链球菌OLS3059(Streptococcusthermophilus OLS3059)制备而得的发酵奶作为试验餐的、由受试者及医生对有用性进行评价的结果的图。
图10是表示将由嗜热链球菌OLS3059(Streptococcusthermophilus OLS3059)制备而得的发酵奶作为试验餐的“整肠改善了“1以上””的受试者的皮肤(肌肤)弹性的图。
图11是表示将由嗜热链球菌OLS3059(Streptococcusthermophilus OLS3059)制备而得的发酵奶作为试验餐的“整肠改善了“2以上””的受试者的皮肤(肌肤)弹性的图。
图12是表示将由嗜热链球菌OLS3059(Streptococcusthermophilus OLS3059)制备而得的发酵奶作为试验餐的“整肠改善了“3以上””的受试者的皮肤(肌肤)弹性的图。
图13是表示将由嗜热链球菌OLS3059(Streptococcusthermophilus OLS3059)制备而得的发酵奶作为试验餐的“整肠改善了“1以上””的受试者的皮肤(肌肤)纹理密度的图。
图14是表示将由嗜热链球菌OLS3059(Streptococcusthermophilus OLS3059)制备而得的发酵奶作为试验餐的“整肠改善了“2以上””的受试者的皮肤(肌肤)纹理密度的图。
图15是表示将由嗜热链球菌OLS3059(Streptococcusthermophilus OLS3059)制备而得的发酵奶作为试验餐的“整肠改善了“3以上””的受试者的皮肤(肌肤)纹理密度的图。
具体实施方式
本发明提案有用于皮肤改善和/或治疗的嗜热链球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)的用途。即，本发明人等进行了专心的研究，结果是，以从发酵奶的制备中使用的乳酸菌中选出皮肤改善效果及治疗效果高的乳酸菌为目的，通过进行体外试验，发现嗜热链球菌OLS3059(Streptococcus thermophilusOLS3059)的皮肤改善效果和/或治疗效果特别高，由此完成本发明。
其次，本发明的组合物是皮肤改善用和/或治疗用的组合物，含有嗜热链球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)和/或其培养物。由于该本发明的皮肤改善用和/或治疗用组合物来自天然产物，因此安全性高、而且皮肤改善效果和/或治疗效果高，是适用于这些用途的。
本发明人等为了从发酵奶的制备中使用的、具有形成凝乳的能力的、制造特性良好的乳酸菌中选出皮肤改善效果和/或治疗效果高的乳酸菌，进行了体外试验，结果如上所述，发现嗜热链球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)的皮肤改善效果和/或治疗效果特别高。
上述本发明的含有嗜热链球菌OLS3059(Streptococcusthermophilus OLS3059)和/或其培养物的皮肤改善用和/或治疗用的组合物还可以含有保加利亚乳杆菌OLL1073R-1(Lactobacillusdelbrueckii subspecies bulgaricus OLL1073R-1)和/或其培养物。
根据本发明人等的实验，可知，在组合嗜热链球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)和/或其培养物、和在菌体外生产粘性多糖类的保加利亚乳杆菌OLL1073R-1(Lactobacillus delbrueckii subspecies bulgaricusOLL1073R-1)和/或其培养物时，皮肤改善效果和/或治疗效果高，也是适用于这些用途的。
这里，嗜热链球菌OLS3059例如使用Bulgaria Yogurt LB81((注册商标)明治乳业株式会社制)。
上述嗜热链球菌OLS3059和/或其培养物、保加利亚乳杆菌OLL1073R-1(Lactobacillus delbrueckii subspecies bulgaricusOLL1073R-1)和/或其培养物，除为分离和精制乳酸菌得到的菌体外，均为包含菌体的培养物、菌体的提取物、培养物的上清液、它们的浓缩液、浓缩物、干燥物、以及根据需要的稀释液、稀释物等，也包含处理培养液、培养物而得到的所有状态的物质。
上述嗜热链球菌OLS3059的活菌及死菌的皮肤改善效果和/或治疗效果都高，都可以用于皮肤改善和/或治疗。另外，保加利亚乳杆菌OLL1073R-1也都可以使用活菌及死菌。另外，嗜热链球菌OLS3059、保加利亚乳杆菌OLL1073R-1也可适用于菌体的培养法、提取法、分离法、浓缩法、干燥法、稀释法等，没有特别限定。用于培养菌体的培养基中通常含有脱脂乳、乳清、酪蛋白等牛乳蛋白质、糖类、酵母提取物等，培养方法可以适当使用通常的各种好氧或厌氧的方法。培养温度例如设定为35～45℃，在培养中使用氢氧化钠等碱，也可以使用将培养基的pH维持在中性到酸性例如pH为5～6左右的中和培养法。除了这样的中和培养法以外，可以使用分批培养法等任意的培养方法，在培养后，可以根据需要将培养物及其上清液浓缩、干燥、稀释。进一步，还可以使用离心分离法或膜分离法，将培养物的上清液和菌体分离，在浓缩菌体的状态下进行回收。并且，还可以对菌体进行超声波处理或酶处理等，提取菌体内的成分，将培养物及其上清液、菌体及其提取物等干燥。这些可以用作本发明的上述组合物的有效成分。
本发明的组合物可以添加任意成分，按照常规方法用作皮肤外用剂。例如，可以适当配合通常的化妆品、准药品、医药品等中使用的各种成分、油剂、增粘剂、防腐剂、乳化剂、颜料、pH调节剂、抗氧化剂、香料等，根据其目的任意地用于霜、乳液、化妆品、粉底、化妆水、洗发剂等。
本发明的饮料食品含有上述本发明的组合物。上述本发明的饮料食品的皮肤改善效果和/或治疗效果高，是适用于这些用途的。
由于上述本发明的组合物以可以食用的乳酸菌作为有效成分，因此，在安全性方面完全没有问题，作为饮料食品、医药品，可以经口和/或非经口给予。
这时，可以单独使用嗜热链球菌OLS3059(Streptococcusthermophilus OLS3059)的菌体，也可以混合在通常的食物成分中使用。另外，可以分别单独使用嗜热链球菌OLS3059和保加利亚乳杆菌OLL1073R-1的菌体，也可以将它们组合起来，混合在通常的食物成分中使用。进一步，还可以将嗜热链球菌OLS3059、或者嗜热链球菌OLS3059和保加利亚乳杆菌OLL1073R-1的组合与口服剂和/或非口服剂的制造中使用的通常的各种辅助剂等混合，进行制剂化。
将嗜热链球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)、或者嗜热链球菌OLS3059和保加利亚乳杆菌OLL1073R-1的组合混合在通常的食物成分、口服剂和/或非口服剂的制造中使用的通常的各种辅助剂等中时，嗜热链球菌OLS3059的添加量(配合量)可以根据摄取本发明的饮料食品的人的年龄、体重、给予方法等适当决定。例如，为10⁹(10的9次方)cfu/日以上，优选为10¹⁰(10的10次方)cfu/日以上。
作为本发明的饮料食品，除含有上述本发明的组合物的饮料(Drink)、片剂(Tablet)等以外，还有饼干、面包、松软蛋糕(spongecake)、发酵奶、酸奶、奶酪、黄油、人造黄油、奶油、果冻等。作为本发明的饮料食品的使用形态、使用方法，有在上述饮料食品中直接添加本发明的组合物的形态、方法。另外，还有将由此得到的作为本发明的饮料食品的酸奶、奶酪、黄油等再添加到饮料食品中的形态、方法。
并且，本发明的饮料食品可以以发挥皮肤改善效果和/或治疗效果为目的用于除通常的饮料食品以外的特定保健用食品、营养功能食品、健康食品等中。
进一步，由于本发明的饮料食品具有皮肤改善效果和/或治疗效果，因此，可以作为附有主要用于皮肤改善和/或治疗的标识的饮料食品。这里，作为标识方法，除标识在饮料食品的包装上以外，还包含刊登在小册子中及在小册子中进行宣传等。
在将本发明的组合物及饮料食品用作医药品时，可以采用片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、糖浆剂等使用形态、使用方法。这时，可以在主剂的赋形剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、矫味剂、除臭剂、溶解辅助剂、悬浮剂、涂膜剂等中使用通常的辅助剂，根据常规的方法进行制剂化。
本发明的发酵奶是皮肤改善用和/或治疗用的发酵奶，是使用保加利亚乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii subspecies bulgaricus)及嗜热链球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)制备的。
由于该本发明的皮肤改善用和/或治疗用的发酵奶是使用从发酵奶的制备中使用的、具有形成凝乳的能力的、制造特性良好的乳酸菌中选出的皮肤改善效果和/或治疗效果高的嗜热链球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)进行调节的，因此，皮肤改善效果和/或治疗效果高。即，上述本发明的发酵奶的皮肤改善效果和/或治疗效果高，适用于这些用途。
进一步，通过将上述那样的嗜热链球菌OLS3059与保加利亚乳杆菌组合，调节乳酸菌，例如将这些组合作为发酵剂使用，可以在相对短的时间内形成凝乳。
在上述本发明的皮肤改善用和/或治疗用的发酵奶中，对于保加利亚乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii subspecies bulgaricus)，可以使用例如从明治乳业株式会社制的原味酸奶、硬质酸奶、软质酸奶中分离得到的乳酸菌。通过组合这些保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌而制备得到的本发明的发酵奶具有以下特征，即适口性优异、味道好、口感润滑、运输制品时凝胶不易变形破坏，凝胶坚固。
使用上述保加利亚乳杆菌(Lactobacillus delbrueckiisubspecies bulgaricus)及嗜热链球菌OLS3059(Streptococcusthermophilus OLS3059)制备而成的本发明的皮肤改善用和/或治疗用的发酵奶可以含有胶原蛋白肽和/或神经酰胺。
如后述的实施例所述，将含有胶原蛋白肽或神经酰胺的本发明的上述发酵奶和不含有胶原蛋白肽或神经酰胺的本发明的上述发酵奶进行比较时，含有胶原蛋白肽或神经酰胺的发酵奶的皮肤改善效果和/或治疗效果有高的倾向。即，与如上所述的使用保加利亚乳杆菌及嗜热链球菌OLS3059制备得到的本发明的发酵奶相比较，通过混合胶原蛋白肽和/或神经酰胺使用，皮肤改善效果和/或治疗效果变高。认为这是由混合皮肤改善效果和/或治疗效果高的乳酸菌(嗜热链球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059))与胶原蛋白肽和/或神经酰胺而得的协同效果。
这里，从发挥这样的效果的观点考虑，发酵奶中所含的胶原蛋白肽优选为500mg％以上，更优选为700mg％以上，进一步优选为900mg％以上。另外，从发挥上述效果的观点考虑，发酵奶中所含的神经酰胺优选为100μg％以上，更优选为200μg％以上，进一步优选为250μg％以上。
从这样的皮肤改善效果和/或治疗效果的相辅效果的观点考虑，在本发明的发酵奶中，除胶原蛋白肽和/或神经酰胺以外，还优选添加鞘磷脂、异黄酮、软骨素、玻璃酸等饮料食品、医药品中使用的各种具有改善新陈代谢的效果的有用成分。
对于以上的本发明的皮肤改善用和/或治疗用发酵奶，为了发现影响皮肤改善效果和/或治疗效果的因素，通过人体试验进行了更详细的研究，结果发现，以上的本发明的发酵奶对被认为是发酵奶的代表性的作用的整肠改善效果高的人的皮肤改善效果和/或治疗效果也高。
具体而言，通过使用含有胶原蛋白肽或神经酰胺的本发明的上述皮肤改善用和/或治疗用发酵奶和不含有胶原蛋白肽或神经酰胺的上述皮肤改善用和/或治疗用发酵奶，比较整肠改善效果的程度和皮肤改善效果的程度，得到如上所述的发现。
即，本发明的上述皮肤改善用和/或治疗用的发酵奶，其特征在于，对于整肠(通便)改善效果和/或治疗效果高的人，上述皮肤改善效果和/或治疗效果高。
作为制造以上的本发明的皮肤改善用和/或治疗用的发酵奶的本发明的发酵奶制造方法，有以下方法。
制备原料奶后，添加保加利亚乳杆菌(Lactobacillusdelbrueckii subspecies bulgaricus)及嗜热链球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)作为发酵剂，填充到容器中，进行发酵，形成凝乳之后进行冷藏。
或者，制备原料奶后，添加保加利亚乳杆菌(Lactobacillusdelbrueckii subspecies bulgaricus)及嗜热链球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)作为发酵剂，进行发酵，形成凝乳之后，将凝乳破碎，并填充到容器中，进行冷藏。
或者，制备原料奶后，添加保加利亚乳杆菌(Lactobacillusdelbrueckii subspecies bulgaricus)及嗜热链球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)作为发酵剂，进行发酵，形成凝乳之后，将凝乳破碎，并进行冷却，填充到容器中，进行冷藏。
这里，在添加保加利亚乳杆菌(Lactobacillus delbrueckiisubspecies bulgaricus)及嗜热链球菌OLS3059(Streptococcusthermophilus OLS3059)作为发酵剂之前进行的原料奶的制备与以往通常的发酵奶制造工序相同，在制备原料奶后，进行均化、杀菌和冷却等处理，制备原料奶。
由此，在制造上述本发明的发酵奶的本发明的制造方法中，组合从发酵奶的制备中使用的、具有形成凝乳的能力的、制造特性良好的乳酸菌中选出的皮肤改善效果和/或治疗效果高的嗜热链球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)和保加利亚乳杆菌，作为发酵剂。
因此，解决了具有皮肤改善效果等的以往的乳酸菌的问题点(课题点)。以往的乳酸菌虽然具有皮肤改善效果等，但是产生分开管理发酵奶的制造特性差的乳酸菌和用于形成凝乳的制造特性良好的乳酸菌，或由于发酵时间变长，因此总制造时间变长等问题。也就是说，具有改善皮肤的效果等的以往的乳酸菌不适合于发酵奶的工业上的大量生产(商业生产)等。
但是，本发明的发酵奶的制造方法解决了上述问题点，因此可以适用于商业生产。工序数目不复杂对于商业生产是重要的。
在上述本发明的发酵奶的制造方法中，制备原料奶的工序中的均化可以在杀菌前和杀菌后的任一者进行，或在两者中都进行。
另外，如上所述，发酵后进行的冷却可以在形成凝乳后、或将凝乳破碎后、或填充到容器中后的任一者进行。
进一步，将凝乳破碎后，还可以添加和混合果肉、蔬菜、各种调味汁、和/或各种添加剂。
本发明的发酵奶的制造方法中，发酵时间为可以在通常的发酵奶的制造中使用的程度即8小时以内，优选为6或5小时以内，更优选为4小时以内。
另外，由于本发明的皮肤改善用和/或治疗用发酵奶的味道极好，因此可以经常使用，并且可以合理地连续摄取。由此，可以进一步提高皮肤改善效果及治疗效果。
以下列举优选的实施例对本发明进行说明，但本发明并不限定于此。
实施例1
(通过体外试验验证特应性皮炎抑制效果)
训养4周龄的NC/Nga雌小鼠(日本SLC株式会社繁殖)，然后分为以下四组。
给予蒸馏水的组(n＝10)
给予嗜热链球菌OLS3059(Streptococcus thermophilusOLS3059)(以下也称为OLS3059。从Bulgaria Yogurt LB81((注册商标)明治乳业株式会社制)中分离)的组(n＝10)
不诱发皮炎的组(n＝7)
给予鼠李糖乳杆菌ATCC 53103(Lactobacillus rhamnosus ATCC53103)(以下也称为ATCC 53103)的组(与给予OLS3059的组的比较对照)(n＝10)。
使它们自由摄取饲料(商品名：CRF-1，Oriental Yeast工业株式会社制)及蒸馏水。
这里，ATCC 53103是已知对特应性皮炎具有效果的乳酸菌。
除不诱发皮炎的组以外的其它3组在试验期间用探子(sonde)经口给予蒸馏水或各种乳酸菌。并且，按照后述的方法，在试验开始7日后(day 0)连日进行皮炎的诱发。即，对于给予蒸馏水的组，在试验期间(1日(day-7)～21日后(day 14))，连日向胃内经口给予(1mg/日/小鼠)蒸馏水，对于给予各种乳酸菌的组，同样，连日向胃内经口给予(1mg/日/小鼠)乳酸菌的水悬浮液。各种乳酸菌的悬浮液是使加热处理(温度75℃、60分钟)过的菌体的冻结干燥物悬浮在蒸馏水中制作而成的。对于各种乳酸菌的悬浮液的菌体浓度，ATCC 53103为7.13×10⁸(10的8次方)cfu/g，OLS 3059为8.56×10⁷(10的7次方)cfu/g。
试验开始7日后(day 0)，诱发皮炎，对发病变化进行评分。另外，在开始诱发皮炎的15日后(day 15)，采取血清，通过ELISA法测定IgE浓度。IgE浓度使用Pharmingen社制的抗体、改变Pharmingen社推荐的协议的一部分进行测定。
螨破碎液的制备按照以下方法进行。即，用无水醚将屋尘螨的整个虫体(Mite-Dp，LSL社制)脱脂后，添加蒸馏水，进行超声波破碎处理。然后，对水溶性部分进行离心分离处理，进行冻结干燥后，用蒸馏水调节，至以蛋白质浓度计为4.5mg/ml(BSA换算，用BioRAD社的DC protein assay进行测定)。
诱发皮炎的试验通过改变海野等人的方法(海野哲史等，过敏症50：1152-1162，2001)来进行。用推子推掉诱发皮炎的部分(头部、耳区及颈部)的毛，然后用刷毛将SDS水溶液(4％)涂敷在所有小鼠的诱发皮炎的部位20次。20次的涂敷量相当于约60μl。SDS水溶液干燥后，对于诱发皮炎的组，同样操作，涂敷螨破碎液20次，对于不诱发皮炎的组，同样操作，涂敷蒸馏水20次。通过每日重复1组上述操作，使诱发皮炎，从试验开始的7日后(day 0)到试验结束连日重复。
IgE的测定按照以下方法进行。即，在96孔板中以2μg/ml的量添加1次抗体用抗IgE抗体(Pharmingen社制)，在温度37℃下静置1小时。用Tween 20/PBS(PBS-Tween、0.05％)进行洗涤，之后添加BSA/PBS(1％)，在室温下静置30分钟。用PBS-Tween进行洗涤后，添加血清样品及标准曲线制作用IgE(Pharmingen社制)，在室温下静置30分钟。用PBS-Tween进行洗涤后，以0.5μg/ml的量添加2次抗体用生物素抗IgE抗体(Pharmingen社制)，在室温下静置1小时。用PBS-Tween进行洗涤后，添加链霉亲和素HRP(Pharmingen社制)，在室温下静置30分钟。用PBS-Tween进行洗涤后，添加TMB+SubstrateChromogen(DAKO社制)，引发显色反应。显色反应后，添加硫酸(1N)，用酶标仪测定吸光度(450nm)，计算出血清中的IgE浓度。
皮炎发病分数的变化示于图1。对[1]形成干皮和痂皮、[2]发红、出血、[3]组织脱落、擦伤、[4]浮肿、[5]挠痒这5项，以“0.无症状”、“ 1.轻度”、“2.中等程度”、“3.重度”这四个等级进行评分，计算出各小鼠的各评分的总和，进行评价。对于开始诱发皮炎13日后(day 13)的发病分数，给予OLS3059的组与给予蒸馏水的组相比，显著性低。另一方面，给予ATCC 53103的组与给予蒸馏水的组相比，没有大的差别。
总IgE浓度示于图2。对于开始诱发皮炎15日后(day 15)的血清中的总IgE，给予OLS3059的组与给予蒸馏水的组相比，IgE浓度显著性低。另一方面，给予ATCC 53103的组与给予蒸馏水的组相比，IgE浓度稍低，但无显著性差异。ATCC 53103是已知对特应性皮炎具有效果的乳酸菌，但OLS3059对特应性皮炎发病的抑制效果比上述ATCC53103高。
实施例2
(通过体外试验验证特应性皮炎抑制效果)
训养4周龄的NC/Nga雌小鼠(日本SLC株式会社繁殖)，然后分为以下三组。
给予蒸馏水的组(n＝4)
给予保加利亚乳杆菌OLL1073R-1(Lactobacillus delbrueckiisubspecies bulgaricus OLL1073R-1，以下也称为OLL1073R-1)的组(n＝6)
给予嗜热链球菌OLS3059(Streptococcus thermophilusOLS3059。从Bulgaria Yogurt LB81(明治乳业株式会社制)中分离)的组(n＝5)
使它们自由摄取饲料(商品名：CRF-1，Oriental Yeast工业株式会社制)及蒸馏水。将皮炎的诱发期间设定为30日，除此以外，设定为与实施例1同样的实验条件。
皮炎发病分数的变化示于图3。对于开始诱发皮炎13日后(day 13)的发病分数，给予OLL1073R-1的组、OLS3059的组与给予蒸馏水的组相比，显著性低。
总IgE浓度示于图4。对于血清中的总IgE，给予OLL1073R-1的组和给予OLS3059的组与给予蒸馏水的组相比，IgE浓度显著性低。本发明的OLS3059对特应性皮炎的发病具有抑制效果。另外，OLL1073R-1对特应性皮炎的发病也具有抑制效果，但本发明的OLS3059的IgE浓度低。
实施例3
(通过体外试验验证特应性皮炎抑制效果)
研究将在实施例2中得到证实的对特应性皮炎的发病发挥了不比本发明的OLS3059逊色的抑制效果的OLL1073R-1和本发明的OLS3059组合使用时，对特应性皮炎发病的抑制效果。
作为与本发明的OLS3059和OLL1073R-1的组合进行比较的对象，采用二者均从Bulgaria Yogurt(明治乳业株式会社制)中分离的保加利亚乳杆菌MEP1705601(Lactobacillus delbrueckii subspeciesbulgaricus MEP1705601)和嗜热链球菌MEP1705601(Streptococcusthermophilus MEP1705601)的组合。
训养4周龄的NC/Nga雌小鼠(日本SLC株式会社繁殖)，然后分为以下四组。
给予用保加利亚乳杆菌OLL1073R-1(Lactobacillusdelbrueckii subspecies bulgaricus OLL1073R-1)和嗜热链球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)制备而成的发酵物的组(以下也称为给予OLL1073R-1+OLS3059的组)(n＝8)
给予用保加利亚乳杆菌MEP1705601(Lactobacillus delbrueckiisubspecies bulgaricus MEP1705601)和嗜热链球菌MEP1705601(Streptococcus thermophilus MEP1705601)制备而成的发酵物的组(以下也称为给予LB MEP1705601+ST MEP1705601的组)(n＝9)
给予未发酵物的组(n＝9)及不诱发皮炎且给予未发酵物的组(以下也称为不产生组)(n＝4)
发酵物、非发酵物的摄取量均设定为100mg/小鼠/日，到试验结束之前连日经口给予。
对于发酵物的菌数，OLL1073R-1为1×10⁹cfu/g，OLS3059为3×10⁹cfu/g，LB MEP1705601为8.6×10⁸cfu/g，ST MEP1705601为2.1×10⁹cfu/g。
发酵物和未发酵物在冻结干燥后，在给予时悬浮在蒸馏水中进行制备。将皮炎的诱发时间设定为29日，除此以外，设定为与实施例1同样的条件。
皮炎发病分数的变化示于图5。对于开始诱发皮炎14日后(day 14)的发病分数，给予OLL1073R-1+OLS3059的组比给予LB MEP1705601+STMEP1705601的组低。
另外，在开始诱发皮炎14日后(day 14)以后，给予OLL1073R-1+OLS3059的组与给予LB MEP1705601+ST MEP1705601的组及给予未发酵物的组相比，显著性低。
将在实施例2中得到证实的对特应性皮炎的发病发挥了不比本发明的OLS3059逊色的抑制效果的OLL1073R-1和本发明的OLS3059组合使用时，对特应性皮炎发病的具有抑制效果。
实施例4
(发酵奶的制造例1)
将鲜奶50.0kg、脱脂奶粉5.0kg、砂糖8.0kg、胶原蛋白肽(商品名：ニツピペプタイド，ニツピコラ一ゲン化妆品社制)1.0kg、含有神经酰胺的魔芋提取物0.1kg(商品名：こんにやくセラミド，UNITIKA株式会社制)、香料0.1kg、水33.8kg在温度65℃下混合溶解，制备调合奶。在65℃下对该调合奶进行均化处理(压力100kg/cm²)，然后在温度95℃下杀菌处理2分钟，直接冷却到温度43～45℃。在进行杀菌了的调合奶中添加乳酸菌发酵剂2.0kg，填充到容器中，然后在温度43℃下发酵4小时，得到发酵奶(凝固型酸奶)。这里，乳酸菌发酵剂使用保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus 2038，从Bulgaria Yogurt LB81((注册商标)明治乳业株式会社制)中分离)和嗜热链球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)(以下也称为OLS3059。从Bulgaria Yogurt LB81((注册商标)明治乳业株式会社制中分离)的等量培养液。
实施例5
(发酵奶饮料的制造例1)
将鲜奶23.0kg、脱脂奶粉12.1kg、水62.9kg在温度70℃下混合溶解，制备调合奶。在温度65℃下对该调合奶进行均化处理(压力150kg/cm²)，然后在温度95℃下杀菌处理10分钟，直接冷却到温度40～45℃。在进行杀菌了的调合奶中添加乳酸菌发酵剂2.0kg，在温度40～45℃下发酵5小时，得到发酵奶。
这里，乳酸菌发酵剂使用保加利亚乳杆菌(Lactobacillusbulgaricus 2038，从Bulgaria Yogurt LB81((注册商标)明治乳业株式会社制)中分离)和嗜热链球菌OLS3059(Streptococcusthermophilus OLS3059)(以下也称为OLS3059。从Bulgaria YogurtLB81((注册商标)明治乳业株式会社制)中分离)的等量培养液。
为了使该发酵奶的凝乳机械性地破坏，进行均化处理(压力150kg/cm²)，然后冷却到温度5℃，得到调合发酵奶。另一方面，将果胶3.0kg、砂糖2.0kg、甜味调料0.02kg、香料0.1kg、水34.0kg在温度65℃下混合溶解，在温度130℃下杀菌处理2秒钟，直接冷却到温度5℃，制备糖液。
以规定的浓度混合调合发酵奶和糖液，得到发酵奶饮料(饮料型酸奶)。
实施例6
(发酵奶饮料的制造例2)
将鲜奶23.0kg、脱脂奶粉12.1kg、水62.9kg在温度70℃下混合溶解，制备调合奶。在温度65℃下对该调合奶进行均化处理(压力150kg/cm²)，然后在温度95℃下杀菌处理10分钟，直接冷却到温度40～45℃。在进行杀菌了的调合奶中添加乳酸菌发酵剂2.0kg，在温度40～45℃下发酵5小时，得到发酵奶。
这里，乳酸菌发酵剂使用保加利亚乳杆菌(Lactobacillusbulgaricus 2038，从Bulgaria Yogurt LB81((注册商标)明治乳业株式会社制)中分离)和嗜热链球菌OLS3059(Streptococcusthermophilus OLS3059)(以下也称为OLS3059。从Bulgaria YogurtLB81((注册商标)明治乳业株式会社制)中分离)的等量培养液。
为了使该发酵奶的凝乳机械性地破坏，进行均化处理(压力150kg/cm²)，然后冷却到温度5℃，得到调合发酵奶。另一方面，将果胶3.0kg、砂糖2.0kg、甜味调料0.02kg、胶原蛋白肽(商品名：胶原蛋白肽5200，新田明胶社制)1.0kg、含有神经酰胺的玉米提取物(商品名：コ一ンセラミド ME1-R，辻制油株式会社制)0.03kg、香料0.1kg、水34.0kg在温度65℃下混合溶解，在温度130℃下杀菌处理2秒钟，直接冷却到温度5℃，制备糖液。
以规定的浓度混合调合发酵奶和糖液，得到发酵奶饮料(饮料型酸奶)。
(实施例7)
在鲜奶1000mL中添加嗜热链球菌OLS3059(Streptococcusthermophilus OLS3059)(以下也称为OLS3059。从Bulgaria YogurtLB81((注册商标)明治乳业株式会社制)中分离)的冻结干燥粉末1g，制备调合奶。对该调合奶进行均化处理，然后在温度130℃下杀菌处理3秒钟，直接冷却到温度10℃以下。将该进行杀菌了的调合奶填充到容器中，得到奶饮料。
实施例8
(通过人体试验验证皮肤(肌肤)改善效果)
将上述实施例4的发酵奶(Streptococcus thermophilusOLS3059，菌体浓度85×10⁷(10的7次方)cfu/g、胶原蛋白肽1000mg/90g、神经酰胺300μg/90g)作为试验餐，以摄取量90g/次、摄取频率2次/日(早上和晚上各一次)的方式进行人体试验28日。受试者为31名女性(平均年龄31.8岁)。
在开始日(摄取试验餐之前)和结束日(28日)，对受试者的皮肤(肌肤)的弹性和皮肤纹理密度进行评价和观察，并且，由医生进行皮疹观察。这里，对于肌肤的弹性，选择左右面颊中的任一个，1处测定2次(商品名：CUTOMETER SEM575，Courage+Khazaka制)。对于肌肤的纹理密度，选择肌肤粗糙部位，对1处进行测定(商品名：VisualImager VI-20，株式会社Inforward制)。总皮疹数通过数皮疹进行评价。
在开始日(摄取试验餐之前)和结束日(28日)，对受试者本人进行调查。调查的内容示于表1。如表1所示，分5个等级对[1]光泽、[2]弹性、[3]发暗、[4]斑、[5]松弛、[6]毛孔、[7]皮肤纹理、[8]皱纹(额头)、[9]皱纹(嘴边)、[10]皱纹(眼睛)、[11]干燥状况、[12]发粘、[13]透明感、[14]发红、[15]粉底的涂抹、[16]浮肿、[17]便秘、[18]黑眼圈这18项进行评价。然后，在结束日，受试者本人和医生评价试验餐的有用性。
表1