结合IL-17A和IL-17F的抗体分子
本发明涉及对IL-17A和IL-17F的抗原决定簇具有特异性的抗体分子。本发明还涉及该抗体分子的治疗用途及其生产方法。
白介素17(IL-17)，也称为CTLA-8或IL-17A，是促炎细胞因子，其刺激各种非免疫细胞分泌各种各样的其他细胞因子。IL-17A能够诱导粘附细胞，如成纤维细胞、角质细胞、上皮和内皮细胞分泌IL-6、IL-8、PGE2、MCP-1和G-CSF，并且还能够诱导ICAM-1表面表达、T细胞增殖，以及在受照射的成纤维细胞存在下共同培养时，诱导CD34+人祖细胞的生长并分化成嗜中性白细胞(Fossiez等，1998，Int.Rev.Immunol 16，541-551)。IL-17A主要由激活的记忆T细胞产生并通过与遍在分布的细胞表面受体(IL-17R)结合而发挥作用(Yao等，1997，Cytokine，9，794-800)。它也可以通过结合IL-17RA和IL-17RC的复合物而发挥作用(Toy等，2006，J.Immunol.177(11)；36-39)。称为“TH17细胞”的产生IL-17的T细胞涉及某些癌症的发病机理(Weaver等，2006，Immunity，24，677-688；Langowski等，2006，442，461-465；Iwakura和Ishigame，2006，J.Clin.Invest.116，5，1218-1222)。
已经鉴定了多种IL-17的同系物，其在调节炎症反应中具有相似和不同的作用。对于IL-17细胞因子/受体家族的综述，参见Dumont，2003，Expert Opin.Ther.Patents，13，287-303。一种这样的同系物是IL-17F，也称为IL-24和ML-1，其与IL-17A大约55％相同，并且被认为与IL-17A共享相同的受体(Kolls和Linden 2004，Immunity，21，467-476；Hymowitz等，2001，EMBO J.20(19)，5332-5341；Kuestner等，2007，Journal of Immunology，179，5462-5473)。
IL-17A和IL-17F都可以形成同型二聚体和杂二聚体蛋白，其所有都由激活的人CD4+T细胞产生(Wright等，2007，J Biol Chem.282(18)，13447-13455)。
IL-17可能促进很多由异常免疫反应介导的疾病，如类风湿性关节炎和呼吸道炎症，以及器官移植排斥和抗肿瘤免疫。IL-17活性抑制剂是本领域熟知的，例如小鼠IL-17R：人Fc融合蛋白、小鼠可溶性IL-17R和抗IL-17单克隆抗体已经被用来证明IL-17在各种类风湿性关节炎模型中的作用(Lubberts等，J.Immunol.2001，167，1004-1013；Chabaud等，Arthritis Res.2001，3，168-177)。此外，中和多克隆抗体已经被用来减少腹膜粘连的形成(Chung等，2002，J.Exp.Med.，195，1471-1478)。WO04/106377中描述了从大鼠得到的抗人IL-17抗体。WO2006/054059中描述了亲和力为大约220pM的人源化抗IL-17抗体。WO2006/013107中描述了亲和力为大约188pM的完全人抗IL-17单克隆抗体。WO2006/088833中描述了结合IL-17F和IL-17A/IL-17F的抗体。WO2005/010044中描述了特异性结合IL-17A/IL-17F杂二聚体的抗体。
IL-17F拮抗作用与对抗哮喘的保护作用相关(Kawaguchi等，2006，J.Allergy Clin.Immunol.117(4)；795-801)，并且认为IL-17F在关节炎病理学中也起着作用(Lubberts 2003，CurrentOpinion in Investigational Drugs，4(5)，572-577)。
因此，IL-17A和IL-17F的双重拮抗剂在治疗IL-17介导的疾病中比单独的拮抗剂更有效。07年9月20日公开的WO2007/106769中描述了结合IL-17A和IL-17F的抗体。
我们已经能够证明分离能够结合IL-17A和IL-17F并且能够中和IL-17的两个同种型的活性的抗体是可能的。因此，本发明提供了能够结合IL-17A和IL-17F的抗IL-17抗体。特别地，本发明的抗体能够特异性地结合IL-17A和IL-17F，即，该抗体不与IL-17的其他同种型结合。优选地，本发明的抗体还结合IL-17A/IL-17F杂二聚体。优选地，本发明的抗体中和IL-17A和IL-17F的活性。在一个实施方案中，本发明的抗体还中和IL-17A/IL-17F杂二聚体的活性。因此，本发明的抗体具有可以抑制IL-17A和IL-17F的生物活性的有利特性。因此，本发明还提供了这样的抗体在治疗和/或预防由IL-17A或IL-17F任一种或两种介导的疾病，如自体免疫或炎症疾病或癌症中的用途。
如在此所用的，术语“中和抗体”描述了例如，通过阻断IL-17A和IL-17F结合一种或多种受体和通过阻断IL-17A/IL-17F杂二聚体结合一种或多种受体，能够中和IL-17A和IL-17F的生物信号活性的抗体。将认识到如在此所用的术语“中和”指的是可以部分或完全降低生物信号活性。此外，将认识到通过抗体中和IL-17A和IL-17F的程度可以相同或不同。在一个实施方案中，IL-17A/IL-17F杂二聚体活性的中和程度与IL-17A或IL-17F活性的中和程度相同，可以相同或不同。
在一个实施方案中，本发明的抗体特异性结合IL-17A和IL-17F。特异性结合意思是抗体对IL-17A和IL-17F多肽(包括IL-17A/IL-17F杂二聚体)的亲和性比其他多肽高。优选，IL-17A和IL-17F多肽是人。在一个实施方案中，抗体还结合猕猴IL-17F。
IL-17A或IL-17F多肽或表达一种或两种所述多肽的两种细胞混合物可以用来产生特异性识别多肽的抗体。IL-17多肽(IL-17A和IL-17F)可以是“成熟”多肽或其生物活性片段或衍生物，优选包括受体结合位点。优选，IL-17多肽是成熟多肽。可以通过本领域公知的方法从含有表达系统的遗传工程宿主细胞来制备IL-17多肽或从天然生物来源收集。在本发明的应用中，术语“多肽”包括肽、多肽和蛋白。这些可以互换使用，除非另外指出。在一些情况中，IL-17多肽可以是较大蛋白如融合蛋白的一部分，例如，与亲和性标记物融合。可以获得对抗这些多肽产生的抗体，其中动物的免疫是必需的，通过将多肽给予动物，优选非人动物，使用公知和常规的方案，参见，例如，Handbook of Experimental Immunology(实验免疫学手册)，D.M.Weir(编辑)，Vol 4，Blackwell Scientific Publishers，Oxford，England，1986。可以将许多温血动物，如兔子、小鼠、大鼠、绵羊、奶牛或猪免疫。然而，通常优选的是小鼠、兔子、猪和大鼠。
用于本发明的抗体包括完整的抗体及其功能性活性片段或衍生物，可以是，但不限于，单克隆、多价、多特异性、人源化或嵌合抗体，结构域抗体，例如，上述任一种的VH、VL、VHH、单链抗体、Fab片段、Fab’和F(ab’)2片段和抗原决定部分结合片段。其他抗体片段包括国际专利申请WO2005003169、WO2005003170和WO2005003171中描述的那些。抗体片段及其生产是本领域公知的，参见，例如，Verma等，1998，Journal of Immunological Methods，216，165-181；Adair和Lawson，2005.Therapeutic antibodies.Drug Design Reviews-Online 2(3)：209-217。
用于本发明中的抗体包括免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫活性部分，即，含有特异性结合抗原的抗原结合位点的分子。本发明的免疫球蛋白分子可以是任何种类(例如，IgG、IgE、IgM、IgD和IgA)或亚类的免疫球蛋白分子。
可以通过本领域已知的任何方法制备单克隆抗体，如杂交瘤技术(Kohler & Milstein，1975，Nature，256：495-497)、三源杂交瘤技术、人B细胞杂交瘤技术(Kozbor等，1983，Immunology Today，4：72)和EBV杂交瘤技术(Cole等，Monoclonal Antibodies andCancer Therapy(单克隆抗体和癌症治疗)，pp77-96，Alan R Liss，Inc.，1985)。
用于本发明的抗体也可以使用单淋巴细胞抗体法来产生，通过由例如Babcook，J.等，1996，Proc.Natl.Acad.Sci.USA93(15)：7843-78481；WO92/02551；WO2004/051268和国际专利申请号WO 2004/106377描述的方法克隆和表达由选择用于生产特异性抗体的单淋巴细胞产生的免疫球蛋白可变结构域cDNA。
人源化抗体是具有一个或多个来自非人物种的互补决定区(CDR)和来自人免疫球蛋白分子的框架区的抗体分子(参见，例如US5,585,089；WO91/09967)。
嵌合抗体是已经基因工程化的免疫球蛋白基因编码的那些抗体，使得轻链和重链基因由属于不同物种的免疫球蛋白基因片段组成。这些嵌合抗体很可能抗原性较低。可以通过本领域已知的方法制得二价抗体(Milstein等，1983，Nature 305：537-539；WO 93/08829，Traunecker等，1991，EMBO J.10：3655-3659)。多价抗体可以包括多特异性或可以是单特异性的(参见，例如，WO92/22853和WO05/113605)。
用于本发明的抗体还可以使用本领域已知的各种噬菌体展示法生产，并包括Brinkman等(在J.Immunol.Methods，1995，182：41-50)、Ames等(J.Immunol.Methods，1995，184：177-186)、Kettleborough等(Eur.J.Immunol.1994，24：952-958)、Persic等(Gene，19971879-18)、Burton等(Advancezs in Immunology，1994，57：191-280)和WO90/02809；WO91/10737；WO 92/01047；WO92/18619；WO 93/11236；WO 95/15982；WO 95/20401和US 5,698,426；5,223,409；5,403,484；5,580,717；5,427,908；5,750,753；5,821,047；5,571,698；5,427,908；5,516,637；5,780,225；5,658,727；5,733,743和5,969,108中公开的方法。用于生产单链抗体的技术，如US4,946,778中所述的那些也适用于产生结合IL-17A和IL-17F的单链抗体。此外，转基因小鼠，或其他生物体，包括其他哺乳动物，可以用于表达人源化抗体。
抗体可变结构域中的残基通常根据Kabat等设计的系统来编号。这个系统在Kabat等，1987，在Sequences of Proteins ofImmunological Interest(免疫学关注的蛋白的序列)，US Departmentof Health and Human Services，NIH，USA (以下称作“Kabat等(上文)”)中列出。本说明书中使用这个编号系统，除非另外指出。
Kabat残基命名并不总是直接对应于氨基酸残基的线性编号。实际的线性氨基酸序列可能含有比严格的Kabat编号更少或增加的氨基酸，严格的Kabat编号对应于基础可变结构域结构的结构组分，无论是框架区还是互补决定区(CDR)的缩短或插入。对于给定的抗体，残基的正确Kabat编号可以通过抗体序列与“标准”Kabat编号序列的同源性残基比对来确定。
根据Kabat编号系统，重链可变结构域的CDR位于残基31-35(CDR-H1)、残基50-65(CDR-H2)和残基95-102(CDR-H3)。然而，根据Chothia(Chothia，C.和Lesk，A.M.J.Mol.Biol.，196，901-917(1987))，相当于CDR-H1的环从残基26延伸至残基32。因此，按照Kabat编号系统和Chothia的拓扑环定义联合所述，如在此所用的‘CDR-H1’包括残基26至35。
根据Kabat编号系统，轻链可变结构域的CDR位于残基24-34(CDR-L1)、残基50-56(CDR-L2)和残基89-97(CDR-L3)。
在本发明的一个实施方案中，提供了对人IL-17A和人IL-17F具有特异性的中和抗体，其包含重链，其中重链可变结构域包含至少一个如下的CDR：具有SEQ ID NO：1给出的CDR-H1序列的CDR，具有SEQID NO：2给出的CDR-H2序列的CDR和具有SEQ ID NO：3给出的CDR-H3序列的CDR。
在本发明的另一个实施方案中，提供了对人IL-17A和人IL-17F具有特异性的中和抗体，其包含重链，其中重链可变结构域的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少两个选自下列序列：SEQ ID NO：1给出的CDR-H1序列，SEQ ID NO：2给出的CDR-H2序列和SEQ ID NO：3给出的CDR-H3序列。例如，该抗体可以包含重链，其中CDR-H1具有SEQ IDNO：1给出的序列CDR-H2具有SEQ ID NO：2给出的序列。或者，该抗体可以包含重链，其中CDR-H1具有SEQ ID NO：1给出的序列而CDR-H3具有SEQ ID NO：3给出的序列，或该抗体可以包含重链，其中CDR-H2具有SEQ ID NO：2给出的序列而CDR-H3具有SEQ ID NO：3给出的序列。为避免疑惑，应理解包括全部排列。
在本发明的另一个实施方案中，提供了对人IL-17A和IL-17F具有特异性的中和抗体，其包含重链，其中重链可变结构域包含SEQ IDNO：1给出的CDR-H1序列，SEQ ID NO：2给出的CDR-H2序列和SEQ IDNO：3给出的CDR-H3序列。
在本发明的一个实施方案中，提供了对人IL-17A和IL-17F具有特异性的中和抗体，其包含轻链，其中轻链可变结构域包含至少一个如下的CDR：具有SEQ ID NO：4给出的CDR-L1序列的CDR，具有SEQ IDNO：5给出的CDR-L2序列的CDR和具有SEQ ID NO：6给出的CDR-L3序列的CDR。
在本发明的另一个实施方案中，提供了对人IL-17A和IL-17F具有特异性的中和抗体，其包含轻链，其中轻链可变结构域的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少两个选自下列序列：SEQ ID NO：4给出的CDR-L1序列，SEQ ID NO：5给出的CDR-L2序列和SEQ ID NO：6给出的CDR-L3序列。例如，该抗体可以包含轻链，其中CDR-L1具有SEQ IDNO：4给出的序列而CDR-L2具有SEQ ID NO：5给出的序列。或者，该抗体可以包含轻链，其中CDR-L1具有SEQ ID NO：4给出的序列而CDR-L3具有SEQ ID NO：6给出的序列，或该抗体可以包含轻链，其中CDR-L2具有SEQ ID NO：5给出的序列而CDR-L3具有SEQ ID NO：6给出的序列。为避免疑惑，应理解包括全部排列。
在本发明的另一个实施方案中，提供了对人IL-17A和IL-17F具有特异性的中和抗体，其包含轻链，其中可变结构域包含SEQ ID NO：4给出的CDR-L1序列，SEQ ID NO：5给出的CDR-L2序列和SEQ ID NO：6给出的CDR-L3序列。
本发明的抗体分子优选分别包含互补轻链或互补重链。
因此，在一个实施方案中，根据本发明的抗体包含重链和轻链，其中重链可变结构域包含SEQ ID NO：1给出的CDR-H1序列、SEQ ID NO：2给出的CDR-H2序列和SEQ ID NO：3给出的CDR-H3序列，其中轻链可变结构域包含SEQ ID NO：4给出的CDR-L1序列、SEQ ID NO：5给出的CDR-L2序列和SEQ ID NO：6给出的CDR-L3序列。
应认识到可以对本发明提供的CDR进行一个或多个氨基酸置换，而不显著改变抗体结合IL-17A和IL-17F以及中和IL-17A和IL-17F活性的能力。本领域技术人员可以容易地测试任何氨基酸置换对结合和中和的影响，例如通过使用在此所述的方法。因此，本发明提供了包含一个或多个选自以下的CDR的抗体：CDRH-1(SEQ ID NO：1)、CDRH-2(SEQ ID NO.2)、CDRH-3(SEQ ID NO：3)、CDRL-1(SEQ IDNO：4)、CDRL-2(SEQ ID NO：5)和CDRL-3(SEQ ID NO：6)，其中一个或多个CDR中的一个或多个氨基酸已被另一个氨基酸置换。还应认识到可以改变一个或多个CDR的长度，而不显著改变抗体结合IL-17A和IL-17F以及中和IL-17A和IL-17F活性的能力。
在一个实施方案中，本发明的抗体包含重链，其中重链可变结构域包含三个CDR，其中CDRH-1的序列与SEQ ID NO：1给出的序列具有至少60％的同一性或相似性，CDRH-2与SEQ ID NO：2给出的序列具有至少60％的同一性或相似性和/或CDRH-3与SEQ ID NO：3给出的序列具有至少60％的同一性或相似性。在另一个实施方案中，本发明的抗体包含重链，其中重链可变结构域包含三个CDR，其中CDRH-1的序列与SEQ ID NO：1给出的序列具有至少70％、80％、90％、95％或98％的同一性或相似性，CDRH-2与SEQ ID NO：2给出的序列具有至少70％、80％、90％、95％或98％的同一性或相似性和/或CDRH-3与SEQ ID NO：3给出的序列具有至少70％、80％、90％、95％或98％的同一性或相似性。
如在此所用的“同一性”表示比对序列中任何特定位置的氨基酸残基在这些序列之间是相同的。如在此所用的“相似性”表示比对序列中任何特定位置的氨基酸残基在这些序列之间是相似类型的。例如，亮氨酸可以取代异亮氨酸或缬氨酸。常常可以彼此取代的其他氨基酸包括但不限于：
-苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸(具有芳香侧链的氨基酸)；
-赖氨酸、精氨酸和组氨酸(具有碱性侧链的氨基酸)；
-天冬氨酸和谷氨酸(具有酸性侧链的氨基酸)；
-天冬酰胺和谷氨酰胺(具有酰胺侧链的氨基酸)；和
-半胱氨酸和甲硫氨酸(具有含硫侧链的氨基酸)。
可以容易地计算同一性和相似性的程度(ComputationalMolecular Biology(计算分子生物学)，Lesk，A.M.编辑，OxfordUniversity Press，New York，1988；Biocomputing.Informatics andGenome Projects(生物计算信息学和基因组计划)，Smith，D.W.编辑，Academic Press，New York，1993；Computer Analysis ofSequence Data(序列数据的计算机分析)，Part 1，Griffin，A.M.和Griffin，H.G.编辑，Humana Press，New Jersey，1994；SequenceAnalysis in Molecular Biology(分子生物学中的序列分析)，vonHeinje，G.，Academic Press，1987；和Sequence Analysis Primer(序列分析引物)，Gribskov，M.和Devereux，J.编辑，M StocktonPress，New York，1991)。
在另一个实施方案中，本发明的抗体包含轻链，其中轻链可变结构域包含三个CDR，其中CDRL-1的序列与SEQ ID NO：4给出的序列具有至少60％的同一性或相似性，CDRL-2与SEQ ID NO：5给出的序列具有至少60％的同一性或相似性和/或CDRL-3与SEQ ID NO：6给出的序列具有至少60％的同一性或相似性。在另一个实施方案中，本发明的抗体包含轻链，其中轻链可变结构域包含三个CDR，其中CDRL-1的序列与SEQ ID NO：4给出的序列具有至少70％、80％、90％、95％或98％的同一性或相似性，CDRL-2与SEQ ID NO：5给出的序列具有至少70％、80％、90％、95％或98％的同一性或相似性和/或CDRL-3与SEQ ID NO：6给出的序列具有至少70％、80％、90％、95％或98％的同一性或相似性。
在一个实施方案中，本发明提供的抗体是单克隆抗体。
在一个实施方案中，本发明提供的抗体是嵌合抗体。
在一个实施方案中，本发明提供的抗体是CDR移植抗体分子，包含SEQ ID NOS：1至6提供的一个或多个CDR。如在此所用的，术语“CDR移植抗体分子”是指其中重链和/或轻链含有移植入受体抗体(例如人抗体)的重链和/或轻链可变结构域框架的来自供体抗体(例如鼠单克隆抗体)的一个或多个CDR(如果期望，包括一个或多个修饰的CDR)的抗体分子。对于综述，参见Vaughan等，NatureBiotechnology，16，535-539，1998。在一个实施方案中，不是转移整个CDR，只有以上描述的任何一个CDR的一个或多个特异性决定残基被转入人抗体框架中(参见，例如Kashmiri等，2005，Methods，36，25-34)。在一个实施方案中，只有以上描述的一个或多个CDR的特异性决定残基被转入人抗体框架中。在另一实施方案中，只有以上描述的每一个CDR的特异性决定残基被转入人抗体框架中。
当移植CDR或特异性决定残基时，考虑产生CDR的供体抗体的类别/类型后，可以使用任何适当的受体可变结构域框架序列，包括小鼠、灵长类动物和人框架区。优选，根据本发明的CDR移植抗体具有包含人受体框架区以及一个或多个如上所述的CDR或特异性决定残基的可变结构域。因此，一个实施方案中，提供了中和CDR移植抗体，其中可变结构域包含人受体框架区和非人供体CDR。
可用于本发明中的人框架区实例是KOL、NEWM、REI、EU、TUR、TEI、LAY和POM(Kabat等，上文)。例如，KOL和NEWM可用于重链，REI可用于轻链，而EU、LAY和POM同时可用于重链和轻链。或者，可以使用人种系序列；这些可以从http://vbase.mrc-cpe.ac.uk/获得。
在本发明的CDR移植抗体中，受体重链和轻链不必需来源于相同抗体，如果期望，可以包含具有来源于不同链的框架区的复合链。
对于本发明CDR移植抗体的重链，优选的框架区来源于人亚组VH3序列1-33-07连同JH4。因此，提供了包含至少一个非人供体CDR的中和CDR移植抗体，其中重链框架区来源于人亚组序列1-33-07连同JH4。人JH4的序列如下：(YFDY)WGQGTLVTVSS。YFDY基序是CDR-H3的一部分，而不是框架4的一部分(Ravetch，JV.等，1981，Cell，27，583-591)。
对于本发明CDR移植抗体的轻链，优选的框架区来源于人种系亚组VK1序列2-1-(1)L4连同JK1。因此，提供了包含至少一个非人供体CDR的中和CDR移植抗体，其中轻链框架区来源于人亚组序列VK12-1-(1)L4连同JK1。JK1序列如下：(WT)FGQGTKVEIK。WT基序是CDR-L3的一部分，而不是框架4的一部分(Hieter，PA.，等，1982，J.Biol.Chem.，257，1516-1522)。
同样，在本发明的CDR移植抗体中，框架区也不需要与受体抗体具有完全相同的序列。例如，可以将不常见的残基转变为对于受体链类别或类型来说更常见的残基。或者，可以改变受体框架区中所选择的残基，使得它们对应于供体抗体中相同位置发现的残基(参见，Reichmann等，1998，Nature，332，323-324)。这种改变应该保持在恢复供体抗体亲和性所必需的最低限度。WO 91/09967中列出了选择可能需要改变的受体框架区中残基的方案。
优选，在本发明的CDR移植抗体分子中，如果受体重链具有人VH3序列1-33-07连同JH4，那么除了一个或多个供体CDR外，重链的受体框架区至少在第94位包含供体残基(根据Kabat等，(上文))。因此，提供了CDR移植抗体，其中至少重链可变结构域第94位的残基是供体残基。
优选，在根据本发明的CDR移植抗体分子中，如果受体轻链具有人亚组VK1序列2-1-(1)L4连同JK1，那么不转移供体残基，即仅转移CDR。因此，提供了CDR移植抗体，其中仅仅将CDR转入供体框架中。
供体残基是来自供体抗体的残基，即，最初产生CDR的抗体。
在一个实施方案中，本发明的抗体包含重链，其中重链可变结构域包含SEQ ID NO：9给出的序列(gH9)。
在另一个实施方案中，本发明的抗体包含重链，其中重链可变结构域包含与SEQ ID NO：9给出的序列具有至少60％同一性或相似性的序列。在一个实施方案中，本发明的抗体包含重链，其中重链可变结构域包含与SEQ ID NO：9给出的序列具有至少70％，80％，90％，95％或98％同一性或相似性的序列。
在一个实施方案中，本发明的抗体包含轻链，其中轻链可变结构域包含SEQ ID NO：7给出的序列(gL7)。
在另一个实施方案中，本发明的抗体包含轻链，其中轻链可变结构域包含与SEQ ID NO：7给出的序列具有至少60％同一性或相似性的序列。在一个实施方案中，本发明的抗体包含轻链，其中轻链可变结构域包含与SEQ ID NO：7给出的序列具有至少70％，80％，90％，95％或98％同一性或相似性的序列。
在一个实施方案中，本发明的抗体包含重链和轻链，其中重链可变结构域包含SEQ ID NO：9给出的序列，其中轻链可变结构域包含SEQ ID NO：7给出的序列。
在本发明的另一个实施方案中，抗体包含重链和轻链，其中重链可变结构域包含与SEQ ID NO：9给出的序列具有至少60％同一性或相似性的序列，而轻链可变结构域包含与SEQ ID NO：7给出的序列具有至少60％同一性或相似性的序列。优选，该抗体包含重链和轻链，其中重链可变结构域包含与SEQ ID NO：9给出的序列具有至少70％，80％，90％，95％或98％同一性或相似性的序列，其中轻链可变结构域包含与SEQ ID NO：7给出的序列具有至少70％，80％，90％，95％或98％同一性或相似性的序列。
如上所述，本发明的抗体分子可以包含具有全长重链和轻链的完整抗体分子或其片段，如结构域抗体，例如，VH、VL、VHH、Fab、修饰的Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv或scFv片段。
考虑到所提出的该抗体分子的功能，尤其是可能需要的效应功能后，可以选择本发明抗体分子的恒定区结构域，如果存在。例如，恒定区结构域可以是人IgA、IgD、IgE、IgG或IgM结构域。尤其是，当抗体分子意欲用于治疗用途和需要抗体效应功能时，可以使用人IgG恒定区结构域，特别是IgG1和IgG3同种型。或者，当抗体分子意欲用于治疗目的且不需要抗体效应功能，例如用于简单阻断IL-17活性时，可以使用IgG2和IgG4同种型。例如，可以使用如Angal等，Molecular Immunology，1993，30(1)，105-108中所述的其中第241位的丝氨酸已经转变为脯氨酸的IgG4分子。特别优选的是包含这种改变的IgG4恒定区结构域。
在一个实施方案中，抗体重链包含CH1结构域，抗体轻链包含CL结构域，κ或λ。
在优选的实施方案中，本发明提供的抗体是对人IL-17A和IL-17F具有特异性的中和抗体，其中重链恒定区包含人IgG4恒定区，其中第241位丝氨酸已经被脯氨酸取代，如Angal等，上文中所述的。因此，本发明提供了其中重链包含SEQ ID NO：15中给出的序列或由该序列组成的抗体。
在本发明的一个实施方案中，抗体包含重链，其中重链可变结构域包含与SEQ ID NO：15给出的序列具有至少60％同一性或相似性的序列。优选，抗体包含重链，其中重链可变结构域包含与SEQ ID NO：15给出的序列具有至少70％，80％，90％，95％或98％同一性或相似性的序列。
在一个实施方案中，根据本发明的抗体分子包含轻链，该轻链包含SEQ ID NO：11中给出的序列。
在本发明的一个实施方案中，抗体包含轻链，其中轻链包含与SEQID NO：11给出的序列具有至少60％同一性或相似性的序列。优选，抗体包含轻链，其中轻链包含与SEQ ID NO：11给出的序列具有至少70％，80％，90％，95％或98％同一性或相似性的序列。
在一个实施方案中，本发明提供了抗体，其中重链包含SEQ IDNO：15给出的序列或由该序列组成，而轻链包含SEQ ID NO：11给出的序列或由该序列组成。
在本发明的一个实施方案中，抗体包含重链和轻链，其中重链包含与SEQ ID NO：15给出的序列具有至少60％同一性或相似性的序列，而轻链包含与SEQ ID NO：11给出的序列具有至少60％同一性或相似性的序列。优选，该抗体包含重链和轻链，其中重链包含与SEQ ID NO：15给出的序列具有至少70％，80％，90％，95％或98％同一性或相似性的序列，其中轻链包含与SEQ ID NO：11给出的序列具有至少70％，80％，90％，95％或98％同一性或相似性的序列。
本发明还提供了人IL-17A的特定区域或表位和/或人IL-17F的特定区域或表位和/或人IL-17A/F杂二聚体的特定区域或表位，其与本发明提供的抗体结合，尤其是包含重链序列gH9(SEQ ID NO：9)和/或轻链序列gL7(SEQ ID NO：7)的抗体。
可以通过本领域已知的任何合适的表位作图方法结合本发明提供的任何一个抗体来鉴定人IL-17A多肽的特定区域或表位和人IL-17F多肽的特定区域或表位和人IL-17A/F杂二聚体的特定区域或表位。这种方法的实例包括筛选与本发明抗体结合的来源于IL-17A和IL-17F的不同长度的肽，最小的片段可以特异性结合含有该抗体识别的表位序列的抗体。IL-17肽可以合成产生或通过蛋白水解消化合适的IL-17多肽来制备。可以通过例如质谱分析来鉴定结合该抗体的肽。在另一个实例中，可使用NMR核磁共振来鉴定由本发明抗体结合的表位。一旦得到鉴定，如果需要，则可以使用结合本发明抗体的表位片段，如果需要，用作免疫原来获得结合相同表位的其他中和抗体。
交叉阻断根据本发明的抗体结合的抗体，尤其是包含重链序列gH9(SEQ ID NO：9)和轻链序列gL7(SEQ ID NO：7)的抗体，可以类似地用于中和IL-17A和IL-17F活性。因此，本发明还提供了结合人IL-17A和人IL-17F的中和抗体，其交叉阻断如上所述任何一个抗体与人IL-17A和/或人IL-17F和/或人IL-17A/F杂二聚体的结合和/或通过那些抗体中的任一种交叉阻断其与IL-17A和/或IL-17F和/或人IL-17A/F杂二聚体的结合。在一个实施方案中，这样的抗体结合如上所述抗体相同的表位。在另一个实施方案中，交叉阻断中和抗体结合由上文中所述抗体结合的表位接近和/或重叠的表位。在另一个实施方案中，本发明这个方面的交叉阻断中和抗体不结合与本发明抗体相同的表位或与所述表位接近和/或重叠的表位。
可以使用本领域中任何合适的方法来鉴定交叉阻断抗体，例如，使用竞争性ELISA或BIAcore，其中交叉阻断抗体与人IL-17A和/或人IL-17F的结合阻止了本发明抗体的结合，或反之亦然。
在一个实施方案中，提供了结合人IL-17A和人IL-17F的中和抗体，其交叉阻断重链包含序列gH9(SEQ ID NO：9)和轻链包含序列gL7(SEQ ID NO：7)的抗体与人IL-17A和人IL-17F的结合。在一个实施方案中，本发明提供的交叉阻断抗体抑制包含重链序列gH9(SEQID NO：9)和轻链序列gL7(SEQ ID NO：7)的抗体与IL-17A和IL-17F的结合，对IL-17A的抑制高于80％，优选高于85％，更优选高于90％，甚至更优选高于95％，对IL-17F的抑制高于80％，优选高于85％，更优选高于90％，甚至更优选高于95％。
在一个实施方案中，提供了结合人IL-17A和IL-17F的中和抗体，其交叉阻断重链包含序列gH9(SEQ ID NO：9)和轻链包含序列gL7(SEQID NO：7)的抗体与人IL-17A、人IL-17F和人IL-17A/F杂二聚体的结合。在一个实施方案中，本发明提供的交叉阻断抗体抑制包含重链序列gH9(SEQ ID NO：9)和轻链序列gL7(SEQ ID NO：7)的抗体与IL-17A、IL-17F和IL-17A/F杂二聚体的结合，对IL-17A的抑制高于80％，优选高于85％，更优选高于90％，甚至更优选高于95％，对IL-17F的抑制高于80％，优选高于85％，更优选高于90％，甚至更优选高于95％，对IL-17A/F的抑制高于80％，优选高于85％，更优选高于90％，甚至更优选高于95％。
在一个实施方案中，提供了结合人IL-17A和人IL-17F的中和抗体，其交叉阻断重链包含序列gH9(SEQ ID NO：9)和轻链包含序列gL7(SEQ ID NO：7)的抗体与人IL-17A、或与人IL-17F或人IL-17A/F杂二聚体的结合。在一个实施方案中，本发明提供的交叉阻断抗体抑制包含重链序列gH9(SEQ ID NO：9)和轻链序列gL7(SEQ ID NO：7)的抗体与IL-17A或IL-17F或IL-17A/F的结合，该抑制高于80％，优选高于85％，更优选高于90％，甚至更优选高于95％。
可替换地或另外地，可以通过包含重链序列gH9(SEQ ID NO：9)和轻链序列gL7(SEQ ID NO：7)的抗体来交叉阻断根据本发明该方面的中和抗体与人IL-17A和人IL-7F的结合。因此，还提供了结合人IL-17A和人IL-17F的中和抗体，通过包含重链序列gH9(SEQ IDNO：9)和轻链序列gL7(SEQ ID NO：7)的抗体交叉阻断其与人IL-17A和人IL-17F的结合。在一个实施方案中，通过包含重链序列gH9(SEQID NO：9)和轻链序列gL7(SEQ ID NO：7)的抗体抑制了本发明的该方面提供的中和抗体与人IL-17A和人IL-17F的结合，该抑制高于80％，优选高于85％，更优选高于90％，甚至更优选高于95％。
在另一个实施方案中，提供了结合人IL-17A和人IL-17F的中和抗体分子，通过包含重链序列gH9(SEQ ID NO：9)和轻链序列gL7(SEQID NO：7)的抗体交叉阻断了其与人IL-17A、人IL-17F和IL-17A/F杂二聚体的结合。在一个实施方案中，通过包含重链序列gH9(SEQ IDNO：9)和轻链序列gL7(SEQ ID NO：7)的抗体抑制了本发明的该方面提供的中和抗体与人IL-17A、人IL-17F和人IL-17A/F杂二聚体的结合，该抑制高于80％，优选高于85％，更优选高于90％，甚至更优选高于95％。
因此，还提供了结合人IL-17A和人IL-17F的中和抗体分子，通过包含重链序列gH9(SEQ ID NO：9)和轻链序列gL7(SEQ ID NO：7)的抗体交叉阻断了其与人IL-17A或人IL-17F或人IL-17A/F杂二聚体的结合。在一个实施方案中，通过包含重链序列gH9(SEQ ID NO：9)和轻链序列gL7(SEQ ID NO：7)的抗体抑制了本发明的该方面提供的中和抗体与人IL-17A或人IL-17F或人IL-17A/F杂二聚体的结合，该抑制高于80％，优选高于85％，更优选高于90％，甚至更优选高于95％。
本发明任一方面的抗体分子优选具有高结合亲和性，优选纳摩尔，甚至更优选皮摩尔。将认识到根据本发明的抗体对人IL-17A的结合亲和性不同于相同抗体对人IL-17F和/或IL-17A/F杂二聚体的结合亲和性。在一个实例中，本发明的抗体分子对IL-17A的亲和性高于对IL-17F的亲和性。在一个实例中，本发明的抗体分子对IL-17A的亲和性是其对IL-17F的结合亲和性的至少10倍。在一个实例中，本发明的抗体分子对IL-17A的亲和性是其对IL-17F的结合亲和性的至少50倍。在一个实例中，本发明的抗体分子对IL-17A的亲和性是其对IL-17F的结合亲和性的至少100倍。在一个实例中，本发明的抗体分子对IL-17F的亲和性高于对IL-17A的亲和性。在一个实例中，本发明的抗体分子对IL-17A的亲和性和对IL-17F的亲和性相同。在一个实例中，本发明的抗体分子对IL-17A具有皮摩尔的亲和性，而对IL-17F具有纳摩尔的亲和性。在一个实例中，本发明的抗体分子对IL-17F具有纳摩尔的亲和性，而对IL-17A具有皮摩尔的亲和性。在一个实例中，本发明的抗体分子对IL-17A和IL-17F都具有纳摩尔的亲和性。在一个实例中，本发明的抗体分子对IL-17A和IL-17F都具有皮摩尔的亲和性。
优选，本发明的抗体分子对IL-17A具有优于10nM的结合亲和性。在一个实施方案中，本发明的抗体分子对IL-17A具有优于500pM的亲和性。在一个实施方案中，本发明的抗体分子对IL-17A具有优于100pM的亲和性。在一个实施方案中，本发明的抗体分子对IL-17A具有优于20pM的亲和性。在一个实施方案中，本发明的抗体对IL-17A具有16pM的亲和性。
优选，本发明的抗体分子对IL-17F具有优于10nM的结合亲和性。在一个实施方案中，本发明的抗体分子对IL-17F具有优于2nM的亲和性。在一个实施方案中，本发明的抗体对IL-17F具有1.75nM的亲和性。
优选，本发明的抗体分子对IL-17A/F杂二聚体具有优于10nM的结合亲和性。在一个实施方案中，本发明的抗体分子对IL-17A/F杂二聚体具有优于500pM的结合亲和性。在一个实施方案中，本发明的抗体分子对IL-17A/F杂二聚体具有优于150pM的结合亲和性。在一个实施方案中，本发明的抗体分子对IL-17A/F杂二聚体具有116pM的结合亲和性。
在一个实施方案中，本发明的抗体分子对猕猴IL-17F具有优于2nM的结合亲和性。在一个实施方案中，本发明的抗体分子对猕猴IL-17F具有1.03nM的结合亲和性。
应认识到可以使用本领域已知的任何合适方法来改变本发明提供的抗体的亲和性。因此，本发明还涉及本发明抗体分子的变体，其对IL-17A和或IL-17F具有提高的亲和性。可以通过很多亲和性成熟方案获得这种变体，包括使CDR突变(Yang等，J.Mol.Biol.，254，392-403，1995)、链改组(Marks等，Bio/Technology，10，779-783，1992)、使用大肠杆菌突变株(Low等，J.Mol.Biol.，250，359-368，1996)、DNA改组(Patten等，Curr.Opin.Biotechnol，8，724-733，1997)、噬菌体展示(Thompson等，J.Mol.Biol.，256，77-88，1996)和有性PCR(sexual PCR)(Crameri等，Nature，391，288-291，1998)。Vaughan等(上文)讨论了这些亲和性成熟的方法。
在一个实施方案中，本发明的抗体分子中和IL-17A和IL-17F活性，例如，在实施例中描述的体外试验中。在一个实施方案中，本发明提供了对人IL-17A和IL-17F具有特异性的中和抗体，其在小于5nM的浓度下能够抑制50％0.8nM人IL-17A的活性，在小于12nM的浓度下能够抑制50％4.2nM人IL-17F的活性，用IL-17A或IL-17F诱导的从海拉细胞的IL-6释放来度量所述抑制活性。在一个实施方案中，抑制50％IL-17A的抗体浓度小于3nM。在一个实施方案中，抑制50％IL-17F的抗体浓度小于11nM。在一个实施方案中，该试验中使用的人IL-17A和人IL-17F是重组人IL-17A和IL-17F。在一个实施方案中，中和抗体是人源化或完全人的抗体。
如果期望，本发明使用的抗体可以缀合一个或多个效应分子。将认识到效应分子可以包括单个效应分子或两个或更多这种分子，这种分子连接形成可以连接本发明抗体的单独部分。在期望获得连接效应分子的抗体片段的情况下，这可以通过标准化学或重组DNA程序来制备，其中抗体片段直接连接或通过偶联剂连接效应分子。缀合这样的效应分子与抗体的技术是本领域公知的(参见，Hellstrom等，Controlled Drug Delivery(受控药物传送)，第2版，Robinson等，编辑，1987，pp.623-53；Thorpe等，1982，Immunol.Rev.，62：119-58和Dubowchik等，1999，Pharmacology and Therapeutics(药理学和治疗学)，83，67-123)。特定的化学方法，包括，例如，WO 93/06231、WO 92/22583、WO 89/00195、WO 89/01476和WO 03031581中所述的那些。或者，在效应分子是蛋白或多肽的情况下，可以使用重组DNA程序实现连接，例如，如WO 86/01533和EP 0392745中所述的。
如在此所用的的术语效应分子包括，例如，抗肿瘤剂、药物、毒素、生物活性蛋白，例如酶、其他抗体或抗体片段、合成或天然存在的聚合物、核酸及其片段，例如DNA、RNA及其片段、放射性核素，特别是放射性碘、放射性同位素、螯合金属、纳米颗粒和报告基团，如荧光化合物或通过NMR或ESR光谱术可检测到的化合物。
效应分子的实例可以包括细胞毒素或细胞毒剂，包括对细胞有害(例如，杀灭)的任何试剂。实例包括combrestatins、多拉司他汀、epothilones、星形孢菌素、maytansinoids、spongistatins、根霉素、软海绵素、杆孢菌素、hemiasterlins、紫杉酚、细胞松弛素B、短杆菌肽D、溴化乙锭、吐根碱、丝裂霉素、鬼臼亚乙苷、tenoposide、长春新碱、长春花碱、秋水仙素、阿霉素、柔红霉素、二羟炭疽菌素二酮、米托蒽醌、光辉霉素、放线菌素D、1-去氢睾酮、糖皮质激素、普鲁卡因、丁卡因、利多卡因、心得安和嘌呤霉素及其类似物或同系物。
效应分子还包括但不限于抗代谢物(例如，氨甲蝶呤、6-巯基嘌呤、6-巯基鸟嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶氨烯咪胺)、烷化剂(例如，二氯甲二乙胺、thioepa苯丁酸氮芥、苯丙氨酸氮芥、亚硝脲氮芥(BSNU)和环己亚硝脲(CCNU)、环磷酰胺、白消安、二溴甘露醇、链脲佐菌素、丝裂霉素C和顺二氯化二氨亚铂(II)(DDP)顺铂)、蒽环类抗生素(例如，柔红霉素(daunorubicin)(以前是(daunomycin)和阿霉素)、抗生素(例如，放线菌素(dactinomycin)(以前是actinomycin)、博莱霉素、光辉霉素、氨茴霉素(AMC)、刺孢霉素或多卡米星)和抗有丝分裂剂(例如，长春新碱和长春花碱)。
其他效应分子可以包括螯合放射性核素，如111In和90Y、Lu177、铋213、锎252、铱192和钨188/铼188；或药物，如但不限于，烷基磷酸胆碱、拓扑异构酶I抑制剂、紫杉烷和苏拉明。
其他效应分子包括蛋白、肽和酶。感兴趣的酶包括但不限于蛋白水解酶、水解酶、裂解酶、异构酶、转移酶。感兴趣的蛋白、多肽和肽包括但不限于免疫球蛋白，毒素，如相思豆毒蛋白、蓖麻毒A、假单胞菌外毒素或白喉毒素，蛋白，如胰岛素、肿瘤坏死因子、α-干扰素、β-干扰素、神经生长因子、血小板衍生生长因子或组织纤溶酶原激活物、血栓形成剂或抗血管生成剂，例如，制管张素或内皮抑制素，或生物反应调节物，如淋巴因子、白细胞间介素-1(IL-1)、白细胞间介素-2(IL-2)、白细胞间介素-6(IL-6)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、神经生长因子(NGF)或其他生长因子和免疫球蛋白。
其他效应分子可以包括例如用于诊断中的可检测物质。可检测物质的实例包括各种酶、辅基、荧光物质、发光物质、生物发光物质、放射性核素、正电子放射金属(用于正电子发射层析成像)和非放射性顺磁性金属离子。关于可以缀合抗体用作诊断的金属离子，通常参见美国专利No.4,741,900。合适的酶包括辣根过氧化酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或乙酰胆碱酯酶；合适的辅基包括链霉抗生物素蛋白、抗生物素蛋白和生物素；合适的荧光物质包括伞形酮、荧光素、异硫氰酸荧光素、若丹明、二氯三嗪基胺荧光素、丹磺酰氯和藻红蛋白；合适的发光物质包括鲁米诺；合适的生物发光物质包括荧光素酶、莹光素和水母发光蛋白；和合适的放射性核素包括125I、131I、111In和99Tc。
在另一个实例中，效应分子可以提高抗体在体内的半衰期和/或降低抗体的免疫原性和/或提高抗体穿过上皮屏障递送到免疫系统。该类型合适的效应分子实例包括聚合物、白蛋白、白蛋白结合蛋白或白蛋白结合化合物，如WO 05/117984中描述的那些。
在效应分子是聚合物的情况下，它通常可以是合成的或天然存在的聚合物，例如，任选取代的直链或支链聚烷撑、聚亚烷基或聚乙二醇聚合物或分支或不分支的多糖，例如，同型或异型多糖。
可以存在于上述合成聚合物上的特定的任选取代基包括一个或多个羟基、甲基或甲氧基。
合成聚合物的特定实例包括任选取代的直链或支链聚(乙二醇)、聚(丙二醇)、聚(乙烯醇)或其衍生物，特别是任选取代的聚(乙二醇)，如单甲氧基聚(乙二醇)或其衍生物。
特定的天然存在的聚合物包括乳糖、直链淀粉、葡聚糖、糖原或其衍生物。
在此所用的“衍生物”意欲包括反应性的衍生物，例如，巯基-选择性的活性基团，如马来酰亚胺等。反应性基团可以直接连接或通过衔接片段连接聚合物。将认识到这种基团的残基在有些情况下会作为抗体片段和聚合物之间的连接基形成产物的一部分。
聚合物的大小可以根据需要而变化，但是平均分子量通常为500Da至50000Da，优选5000至40000Da，更优选20000至40000Da。尤其可以基于产品的预定用途来选择的聚合物大小，例如，局限于特定组织如肿瘤的能力或延长循环半衰期的能力(对于综述，参见Chapman，2002，Advanced Drug Delivery Reviews，54，531-545)。因此，例如，在产物意欲离开循环并穿过组织，例如用于治疗肿瘤的情况下，使用小分子量聚合物可能是有利的，例如，大约5000Da的分子量。对于产物保留在循环中的应用，使用较高分子量的聚合物可能是有利的，例如，具有20000Da至40000Da范围的分子量。
特别优选的聚合物包括聚烷撑聚合物，如聚(乙二醇)，或尤其是甲氧基聚(乙二醇)或其衍生物，且特别具有约15000Da至约40000Da范围的分子量。
在一个实例中，将本发明中使用的抗体与聚(乙二醇)(PEG)部分连接。在一个特别的实例中，该抗体是抗体片段并可以通过位于抗体片段中的任何可利用氨基酸侧链或末端氨基酸官能团例如任何游离氨基、亚氨基、硫醇基、羟基或羧基与PEG分子连接。这种氨基酸可以天然存在于抗体片段中或可以使用重组DNA方法而工程化至片段中(参见，例如，US 5,219,996；US 5,667,425；WO 98/25971)。在一个实例中，本发明的抗体分子是修饰的Fab片段，其中修饰是将一个或多个氨基酸添加至其重链C末端以允许连接效应分子。优选，另外的氨基酸形成修饰的绞链区，该区含有可以连接效应分子的一个或多个半胱氨酸残基。多个位点可用于连接两个或多个PEG分子。
优选通过位于抗体中的至少一个半胱氨酸残基的硫醇基共价连接PEG分子。与修饰的抗体片段连接的每个聚合物分子可以与位于片段中的半胱氨酸残基的硫原子共价连接。共价键通常将是二硫键或尤其是硫-碳键。在硫醇基用作适当激活效应分子的连结点的情况下，例如，可以使用硫醇选择性衍生物，如马来酰亚胺和半胱氨酸衍生物。激活的聚合物可以用作制备如上所述的聚合物修饰的抗体片段的原料。激活的聚合物可以是含有硫醇反应性基团的任何聚合物，如α-卤素羧酸或酯，例如，碘乙酰胺，酰亚胺，例如，马来酰亚胺，乙烯基砜或二硫化物。这种原料可购得(例如从Nektar，以前的ShearwaterPolymers Inc.，Huntsville，AL，USA)或可以从可购得的原料使用常规化学步骤制备。特定的PEG分子包括20K甲氧基-PEG-胺(可从Nektar，以前的Shearwater；Rapp Polymere；和SunBio获得)和M-PEG-SPA(可从Nektar，以前的Shearwater获得)。
在一个实施方案中，该抗体是PEG化的修饰Fab片段，即，具有与其共价连接的PEG(聚(乙二醇))，例如根据EP 0948544中公开的方法[请参阅“Poly(ethyleneglycol)Chemistry，Biotechnicaland Biomedical Applications”(聚(乙二醇)化学，生物技术和生物药物应用，1992，J.Milton Harris(编辑)，Plenum Press，New York，“Poly(ethyleneglycol)Chemistry and BiologicalApplications”(聚(乙二醇)化学和生物应用)，1997，J.MiltonHarris和S.Zalipsky(编辑)，American Chemical Society，Washington DC和“Bioconjugation Protein Coupling Techniques forthe Biomedical Sciences”(用于生物药物科学的生物缀合蛋白连接技术)，1998，M.Aslam和A.Dent，Grove Publishers，New York，Chapman，A.2002，Advanced Drug Delivery Reviews 2002，54：531-545]。在一个实例中，PEG与绞链区的半胱氨酸连接。在一个实例中，PEG修饰的Fab片段具有与修饰绞链区中单个硫醇基共价连接的马来酰亚胺基团。赖氨酸残基可以与马来酰亚胺基团共价连接，并且赖氨酸残基上的每个胺基可以连接分子量为大约20,000Da的甲氧基聚(乙二醇)聚合物。因此与Fab片段连接的PEG的总分子量可以是大约40,000Da。
在一个实施方案中，本发明提供了对人IL-17A和IL-17F具有特异性的中和抗体，其是修饰的Fab片段，具有包含SEQ ID NO：9给出序列的重链和包含SEQ ID NO.7给出序列的轻链，并且在其重链C末端具有含与效应分子连接的至少一个半胱氨酸残基的修饰绞链区。优选，效应分子是PEG和使用(WO 98/25971和WO 2004072116)中所述的方法连接，由此赖氨酰马来酰亚胺基与重链C末端的半胱氨酸残基连接，并且赖氨酰残基的每个氨基与分子量约20,000Da的甲氧基聚(乙二醇)残基共价连接。因此与抗体连接的PEG的总分子量可以是大约40,000Da。
在另一个实例中，效应分子可以与抗体片段连接，使用国际专利申请WO 2005/003169、WO 2005/003170和WO 2005/003171中描述的方法。
本发明还提供了编码本发明抗体分子的重链和/或轻链的分离DNA序列。优选，该DNA序列编码本发明抗体分子的重链或轻链。本发明的DNA序列可以包括合成的DNA，例如化学方法生产的，cDNA、基因组DNA或其任何组合。
编码本发明抗体分子的DNA序列可以通过本领域技术人员公知的方法获得。例如，可以按照需要从确定的DNA序列或基于相应的氨基酸序列来合成编码部分或全部抗体重链和轻链的DNA序列。
编码受体框架序列的DNA是本领域技术人员普遍可获得的并且可以根据它们的已知氨基酸序列容易地合成。
可以使用分子生物学的标准技术来制备编码本发明抗体分子的DNA序列。可以使用寡核苷酸合成技术完全或部分地合成所需的DNA序列。如果需要，可以使用定点诱变和聚合酶链式反应(PCR)技术。
SEQ ID NO：8；SEQ ID NO：10；SEQ ID NO：13；SEQ ID NO：14；SEQID NO：17和SEQ ID NO：18中提供了合适序列的实例。SEQ ID NO：18中的核苷酸1-57个SEQ ID NO：14中的核苷酸1-60编码来自鼠抗体B72.3的信号肽序列(Whittle等，1987，Protein Eng.1(6)499-505)，将其分裂来产生本发明的中和抗体分子。
本发明还涉及含有本发明的一个或多个DNA序列的克隆或表达载体。因此，提供了包含编码本发明抗体的一个或多个DNA序列的克隆或表达载体。优选，克隆或表达载体分别包含编码本发明抗体分子轻链和重链的两个DNA序列。优选，根据本发明的载体包含SEQ ID NO：14和SEQ ID NO：18给出的序列。SEQ ID NO：18中的核苷酸1-57和SEQID NO：14中的核苷酸1-60编码来自小鼠抗体B72.3的信号肽序列(分别是SEQ ID NO：16中的残基1-19和SEQ ID NO：12中的1-20)，最优选将其分裂来获得本发明的中和抗体分子。
可以构建载体的一般方法、转染方法和培养方法是本领域技术人员公知的。在这方面，参考“Current Protocols in MolecularBiology”(分子生物学中的通用方案)，1999，F.M.Ausubel(编辑)，Wiley Interscience，New York和Cold Spring HarborPublishing生产的Maniatis Manual。
还提供了包含一个或多个克隆或表达载体的宿主细胞，该载体包含编码本发明抗体的一个或多个DNA序列。任何合适的宿主细胞/载体系统可以用于表达编码本发明抗体分子的DNA序列。可以使用细菌，例如，大肠杆菌，和其他微生物系统，或也可以使用真核生物例如哺乳动物宿主细胞表达系统。合适的哺乳动物宿主细胞包括CHO、骨髓瘤或杂交瘤细胞。
本发明还提供了生产根据本发明的抗体分子的方法，包括在适于引起从编码本发明抗体分子的DNA表达蛋白的条件下培养含有本发明载体的宿主细胞，和分离该抗体分子。
该抗体分子可以只包含重链或轻链多肽，而在这样情况下，只需要重链或轻链多肽编码序列来用于转染宿主细胞。对于包含重链和轻链的产物的生产，可以用两个载体转染细胞系，第一个载体编码轻链多肽，而第二个载体编码重链多肽。或者，可以使用单个载体，该载体包含编码轻链和重链多肽的序列。
由于本发明抗体可用于治疗和/或预防病理情况，本发明还提供了包含本发明抗体分子并结合一种或多种药物学上可接受的赋形剂、稀释剂或载体的药物或诊断组合物。因此，提供了根据本发明的抗体用于制备药物的用途。该组合物通常以无菌药物组合物的一部分提供，该药物组合物通常包括药物学上可接受的载体。本发明的药物组合物可以另外包含药物学上可接受的佐剂。
本发明还提供了制备药物或诊断组合物的方法，包括将本发明的抗体分子连同一种或多种药物学上可接受的赋形剂、稀释剂或载体一起添加和混合。
抗体分子可以是药物或诊断组合物中唯一的活性成分或可以伴有其他活性成分，包括其他抗体成分，例如抗TNF、抗IL-1β、抗T细胞、抗IFNγ或抗LPS抗体，或非抗体成分，如黄嘌呤。
该药物组合物优选包含治疗有效量的本发明抗体。如在此所用的术语“治疗有效量”是指治疗、改善或预防目标疾病或病情所需，或呈现出可检测的治疗或预防作用所需的治疗剂量。对于任何抗体，可以在细胞培养试验或在动物模型中初步估计治疗有效量，通常在啮齿类、兔、狗、猪或灵长类动物中。该动物模型也可以用于测定合适的浓度范围和给药途径。然后这种信息可用于确定在人类中的有效剂量和给药途径。
对于人患者的精确治疗有效量将取决于疾病状况的严重性、患者的一般健康状况、患者的年龄、体重和性别、饮食、给药的时间和频率、药物联合、对治疗的反应敏感性和耐受度/反应。该含量可以通过常规实验确定并且在临床医师的判断之内。通常，治疗有效量为0.01mg/kg至50mg/kg，优选0.1mg/kg至20mg/kg。药物组合物可以方便地以每剂含有预定量本发明活性剂的单位剂型存在。
该组合物可以单独给予患者或可以联合其他试剂、药物和激素给予(例如同时、按序或分开)。
本发明抗体分子给予的剂量取决于所治疗病情的性质、存在的炎症程度和取决于该抗体分子是用于预防还是治疗现有的病情。
剂量的次数将取决于抗体分子的半衰期及其作用的持续时间。如果抗体分子具有短半衰期(例如2至10小时)，需要每天给予一剂或多剂。或者，如果抗体分子具有半长衰期(例如2至15天)，仅需要给予每天一次、每周一次乃至每1个月或2个月一次的剂量。
药物学上可接受的载体本身不应该诱导产生对接受该组合物的个体有害的抗体并且不应该有毒。合适的载体可以是大的、缓慢代谢的大分子，如蛋白质、多肽、脂质体、多糖、聚乳酸、聚乙醇酸、聚氨基酸、氨基酸共聚物和无活性的病毒颗粒。
可以使用药物学上可接受的盐，例如无机酸盐，如盐酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐和硫酸盐，或有机酸盐，如醋酸盐、丙酸盐、丙二酸盐和苯甲酸盐。
治疗组合物中的药物学上可接受的载体可以另外含有液体，如水、盐水、甘油和乙醇。另外，辅料，如润湿剂或乳化剂或pH缓冲剂可以存在于这样的组合物中。这样的载体能使该药物组合物配制成片剂、丸剂、糖衣丸、胶囊、液体、凝胶、糖浆、浆液和悬浮液，用于由患者摄取。
优选的给药形式包括适于非肠道给药的形式，例如通过注射或输注，例如通过快速浓注或连续输注。在产品用于注射或输注的情况下，可以采用含油或含水载体中的悬浮液、溶液或乳浊液的形式，并且可以含有配制剂，如悬浮剂、防腐剂、稳定剂和/或分散剂。或者，抗体分子可以是干燥形式，在使用前用合适的无菌液体重建。
一旦配制，本发明的组合物可以直接给予患者。待治疗的患者可以是动物。然而，优选该组合物适于给予人患者。
本发明的药物组合物可以通过许多途径给予，包括但不限于口腔、静脉内、肌内、动脉内、髓内、鞘内、心室内、透皮、经皮下(例如，参见WO 98/20734)、皮下、腹膜内、鼻内、肠内、局部、舌下、阴道内或直肠途径。也可以使用无痛皮下喷射器给予本发明的药物组合物。通常，治疗组合物可以制备成可注射的，液体溶液或悬浮液。也可以制成适于注射前以溶于或悬浮于液体载体的固体形式。
通常通过注射、皮下、腹膜内、静脉内或肌内注射或递送至组织间隙来实现组合物的直接递送。还可以将组合物给予受损处。剂量治疗可以是单剂量方案或多剂量方案。
将认识到组合物中的活性成分将是抗体分子。正因为如此，它在胃肠道易于降解。因此，如果组合物通过胃肠道途径给予，该组合物将需要含有保护抗体不被降解的试剂，但其一旦被胃肠道吸收则释放该抗体。
药物学上可接受载体的深入讨论可在Remington′sPharmaceutical Sciences(雷明顿氏药物科学)(Mack PublishingCompany，N.J.1991)中获得。
还设想了通过使用基因治疗给予本发明的抗体。为了实现这一点，将在合适的DNA成分控制下的编码抗体分子的重链和轻链的DNA序列导入患者种，使得从DNA序列表达该抗体链并在原位装配。
本发明还提供了用于控制炎性疾病的抗体分子。优选，该抗体分子可用于减轻炎性过程或预防炎性过程。
本发明还提供了用于治疗或预防由IL-17A和/或IL-17F介导的或与升高的IL-17A和/或IL-17F水平相关的病理失调的本发明的抗体分子。优选，病理情况选自：感染(病毒、细菌、真菌和寄生虫性的)、与感染相关的内毒素性休克、关节炎、类风湿性关节炎、哮喘、盆腔炎、阿尔茨海默氏病、克罗恩氏病、炎症性肠病、溃疡性结肠炎、Peyronie氏疾病、乳糜泻、胆囊疾病、藏毛病、腹膜炎、银屑病、脉管炎、手术粘连、中风、I型糖尿病、莱姆关节炎、脑膜脑炎、免疫介导的中枢和外周神经系统的炎性障碍，如多发性硬化和吉-巴综合征、其他自体免疫障碍、胰腺炎、外伤(手术)、移植抗宿主疾病、移植排斥、癌症(实体肿瘤，如黑素瘤、肝胚细胞瘤、肉瘤、鳞状细胞癌、移行细胞癌、卵巢癌和血液系统恶性肿瘤，尤其是急性髓性白血病、慢性粒性白血病、胃癌和结肠癌)、心脏病，包括缺血性疾病，如心肌梗塞以及动脉粥样硬化、血管内凝血、骨吸收、骨质疏松症、骨关节炎、牙周炎和胃酸过少。
本发明还提供了用于治疗或预防疼痛的根据本发明的抗体分子。
本发明进一步提供了根据本发明的抗体分子用于制造治疗或预防由IL-17A和/或IL-17F介导的或与升高的IL-17A和/或IL-17F水平相关的病理失调的药物的用途。优选病理失调是类风湿性关节炎或多发性硬化。
本发明进一步提供了根据本发明的抗体分子在制备治疗或预防疼痛的药物中的用途。
本发明的抗体分子可以用于期望降低IL-17A和/或IL-17F在人或动物体中的作用的任何疗法中。IL-17A和/或IL-17F可以在体内循环或可以以出乎意料的高水平局部存在于体内的特定部位，例如炎症部位。
优选根据本发明的抗体分子用于控制炎性疾病、自体免疫疾病或癌症。
本发明还提供了治疗患有由IL-17A和/或IL-17F介导的疾病或处于这种风险中的人或动物患者的方法，该方法包括将有效量的本发明的抗体分子给予患者。
根据本发明的抗体分子也可以用于诊断，例如涉及IL-17A和/或IL-17F的病况的体内诊断和成像。
在下面参照附图的实施例中，仅通过说明进一步描述了本发明，其中：
图1：
a)抗体CA028_0496的轻链V区(SEQ ID NO：7)
b)抗体CA028_0496的重链V区(SEQ ID NO：9)
c)抗体CA028_496的CDRH1(SEQ ID NO：1)，CDRH2(SEQ ID NO：2)，CDRH3(SEQ ID NO：3)，CDRL1(SEQ ID NO：4)，CDRL2(SEQ ID NO：5)，CDRL3(SEQ ID NO：6)。
d)抗体CA028_496的轻链(SEQ ID NO：11)。
e)抗体CA028_496的重链(SEQ ID NO：15)。
f)编码抗体CA028_496的轻链并包括信号序列的DNA(SEQ IDNO：14)。
g)编码抗体CA028_496的重链并包括信号序列的DNA(SEQ IDNO：18)。
图2
a)抗体CA028_0496(图例中称为Ab#496)对人IL-17A诱导的从海拉细胞产生IL-6的作用。
b)抗体CA028_0496(图例中称为Ab#496)对人IL-17F诱导的从海拉细胞产生IL-6的作用。
DNA操作和一般方法
使用大肠杆菌菌株INVαF′(Invitrogen)转化和常规培养生长。DNA限制和修饰酶得自Roche Diagnostics Ltd.和New EnglandBiolabs。使用Maxi质粒纯化试剂盒(QIAGEN，目录号12165)进行质粒制备。使用ABI Prism Big Dye终止测序试剂盒(目录号4304149)进行DNA测序反应并在ABI 3100自动测序仪(Applied Biosystems)上运行。使用AutoAssembler程序(Applied Biosystems)分析数据。寡核苷酸得自Invitrogen。使用IgG装配ELISA确定IgG的浓度。
IL-17同种型
重组IL-17A和IL-17F购自R&D Systems。
通过使用GS连接物连接IL-17A和IL-17F来产生重组IL-17A/F杂二聚体。杂二聚体具有以下序列(SEQ ID NO：19)。
MGITIPRNPGCPNSEDKNFPRTVMVNLNIHNRNTNTNPKRSSDYYNRSTSPWNLHRN
EDPERYPSVIWEAKCRHLGCINADGNVDYHMNSVPIQQEILVLRREPPHCPNSFRLEK
ILVSVGCTCVTPIVHHVAGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSRKIPKVGHTFFQKPESCP
PVPGGSMKLDIGIINENQRVSMSRNIESRSTSPWNYTVTWDPNRYPSEVVQAQCRNL
GCINAQGKEDISMNSVPIQQETLVVRRKHQGCSVSFQLEKVLVTVGCTCVTPVIHHV
Q
重组猕猴IL-17F(SEQ ID NO：20)
MRKIPKVGHTFFQKPESCPPVPEGSMKLDTGIINENQRVSMSRNIESRSTSPWNYTVTWDPN
RYPSEVVQAQCKHLGCINAQGKEDISMNSVPIQQETLVLRRKHQGCSVSFQLEKVLVTVGCT
CVTPVIHHVQ
通过Entelechon GmbH化学合成编码IL-17A/F杂二聚体的DNA序列，并在NdeI/XhoI位点亚克隆至pET43.1a中。使用引入NdeI和XhoI限制位点的引物通过PCR扩增编码cyno IL-17F的DNA序列。将PCR产物与pCR4Blunt-TOPO连接并且在消化和在NdeI/XhoI位点上与pET43.1a连接之前验证序列。
使用编码IL-17同种型的pET43.1a DNA来转染BL21(DE3)细胞并将选择的羧苄青霉素抗性克隆在含有2％葡萄糖和50μg/ml羧苄青霉素的2TY培养液中在37℃下生长过夜。然后将培养物稀释并在相同的培养基中生长至0.5-0.7的OD600，用1mM IPTG诱导并在37℃下再生长4-5小时。
通过离心收集细胞并从细胞制得包含体。将包含体溶解于50mMTris-HCl、5M盐酸胍、50mM NaCl、1mM EDTA、2mM还原型谷胱甘肽、0.2mM氧化型谷胱苷肽(pH8.5)中。通过将溶解的蛋白质逐滴加入上述不含盐酸胍的缓冲液中使IL-17蛋白重折叠，使用强烈搅拌。选择最终的体积，使得最终的蛋白浓度不超过0.1mg/ml。
如果需要，用10mM MES pH6进行缓冲液交换之前，将重折叠的蛋白溶液浓缩。然后将蛋白施加至用20mM MES pH6平衡的Sepharose SPHP柱上。用超过10柱体积的MES pH6中的0-500mM线性梯度NaCl洗脱蛋白。对于IL-17F，梯度延伸至600mM NaCl。为了进一步纯化IL-17，收集来自Sepharose SP HP柱的相关级分，浓缩并用20mM CAPSO(pH10)稀释，并施加至用20mM CAPSO平衡的Mono Q柱上。用超过20柱体积的20mM CAPSO中的0-250mM线性梯度NaCl洗脱蛋白。收集含有IL-17的级分并使用1M MES pH6中和。
实施例1：中和抗IL-17抗体的产生
用重组人IL-17(购自R&D systems)免疫雌性Sprague Dawly大鼠。大鼠接受100μl弗氏佐剂中20μg IL-17的四次免疫。使用WO 04/051268中所述的方法分离结合人IL-17的抗体225。分离抗体225重链可变结构域(VH)和轻链可变结构域(VL)的基因并且通过逆转录PCR克隆后测序。
使用人V区受体框架并通过改变该框架区的供体残基数量来设计一系列的人源化VL和VH区。设计八个移植VL区(gL1-8)和9个移植VH区(gH1-9)，并通过寡核苷酸装配和PCR诱变构建基因。
将轻链移植序列亚克隆至人轻链表达载体pKH10.1中，其含有编码人C-κ恒定区(Km3同种异型)的DNA。将重链移植序列亚克隆至人γ-4表达载体pVhg4P FL中，其含有编码含铰链稳定突变S241P的人γ-4恒定区的DNA(Angal等，上文)。将质粒共转染至CHO细胞中，并且在IL-17结合和中和测试中筛选所产生抗体的活性。根据制造商的说明书使用LipofectamineTM2000程序(InVitrogen，目录号11668)进行CHO细胞的转染。
基于表达、亲和性和中和潜能选择了最佳的移植物(gL7gH9)，并命名为CA028_0496。该抗体的V区序列对于轻链(gL7)和重链(gH9)各自显示于图1(a)和(b)，以及SEQ ID NO：7和9中。
重链受体框架是人种系序列VH3 1-3 3-07，框架4来自人JH区种系JH4的这个部分。轻链受体框架是人种系序列VK1 2-1-(1)L4，框架4来自人JK区种系JK1的这个部分。
实施例2：抗体CA028_0496中和IL-17、IL-17F和IL-17A/F杂二聚体
海拉细胞
测试了抗体CA028_0496对抗海拉细胞中人重组IL-17和人重组IL-17F的潜能，并与抗体CDP435相比较(WO 06/054059)。海拉细胞获自ATCC的细胞库(ATCC CCL-2)。将细胞生长于补充10％胎牛血清、青霉素、庆大霉素和谷氨酰胺的Dulbecco改良的Eagle培养基(DMEM)中。将1×104个细胞涂布于96孔平底组织培养平板中。将细胞孵育过夜并在测试缓冲液中洗涤一次。在固定浓度的人TNF-α存在下孵育人IL-17A(25ng ml-1)或人IL-17F(125ng ml-1)，用抗体CA028_0496或抗体CDP435预先孵育该混合物。然后将细胞因子加抗体加入孵育过夜的海拉细胞中。细胞培养物上清液中IL-6的产生与加入细胞中的IL-17A/IL-17F含量成比例。通过ELISA测量人IL-6水平并通过与已知的人IL-6标准浓度相比较来定量。
数据(图2a和2b)表明抗体CA028_0496有效地中和了人重组IL-17A，并且对人IL-17F具有一定的活性。来自这些实验的数据表明抗体CA028_0496对人重组IL-17(25ng ml-1)产生了43/ng/ml的IC50，对重组IL-17F(125ng ml-1)产生了1477ng/ml的IC50。
因此，抗体CA028_0496在该测试中对人重组IL-17(0.78nM)产生了0.29M的IC50，对人重组IL-17F(4.16nM)产生了10.18nM的IC50(计算基于每个IgG，假定145,000的分子量为平均的IgG4，并假定IL-17A和IL-17F是二聚体)。
人小胶质细胞
将人小胶质细胞(TCS Cellworks)涂布于平底96-孔平板中5,000个细胞/孔，总体积为100μl，并且放置24小时，使其连接塑料。在该，在10ng/ml人重组TNFα存在和不存在下，将滴定度(5、1、0.2和0.04μg/ml)的人重组IL-17A、人重组IL-17F、猕猴重组IL-17F和人重组IL-17A/F杂二聚体加入孔中，重复三份。对照孔不含有刺激物，含有单独的IL-17A(100ng/ml)、单独的TNFα以及IL-17A和TNFα一起。以110μl/孔的总体积将所有细胞因子加入，使总的孔体积为210μl。在涉及抗体的实验中，以相同的方式涂布细胞。24小时后，在相同的时间加入抗体和细胞因子，以获得总的200μl终体积中所述的终浓度。
在37℃再孵育24小时后，收集上清液并在-20℃冷冻直至分析。为了分析，将上清液稀释1/10，并根据制造商的说明使用人IL-6MSD试剂盒测量IL-6。
发现测试的所有IL-17同种型在该测试中是有活性的，特别是在TNFα的存在下。
在TNFα存在下测试抗体CA028_0496对抗人小胶质细胞中的人重组IL-17A、人重组IL-17F、猕猴重组IL-17F和人重组IL-17A/F杂二聚体的潜能，并使用上述方法与对照抗体和IL-17A特异性抗体相比较。
对照抗体对任一种所测试的细胞因子的活性没有作用。
抗体CA028_0496具有对抗所有三种细胞因子IL-17、IL-17F和IL-17A/F的抑制活性，包括猕猴IL-17F，而IL-17A特异性抗体只具有对抗IL-17A和IL-17A/F杂二聚体的抑制活性。
实施例3：抗体CA028_0496(人IgG4恒定区)对IL-17A和IL-17F的亲和性
使用BIAcore 3000(BIAcore AB)进行BIA(BiamolecularInteraction Analysis)。所有实验均在25℃下进行。Fc片段特异性的Affinipure Fc片段山羊抗人IgG(Jackson ImmunoResearch)通过胺类偶联化学作用以≈6000反应单位(RU)的捕获水平固定在CM5探测芯片上。HBS-EP缓冲液(10mM HEPES pH 7.4，0.15M NaCl，3mMEDTA，0.005％表面活性剂P20，BIAcore AB)用作运行缓冲液，流速10μL/分钟。注射10μL抗体CA028_0496(1.81mg/ml)用于由固定的抗人IgG-Fc捕获。在以30μL/min流速从50nM至nM以下的双倍稀释，对捕获的CA028_0496滴定人IL-17A和IL-17同种型。通过注射30μL 40mM HCl，接着一次5μL 5mM NaOH，重新产生表面。
使用BIAevaluation软件(3.2版本)按照标准程序双重参照和分析背景扣除结合曲线。从拟合算法测定动力参数。
对抗体CA028_0496结合IL-17A测定的亲和值为16pM。对IL-17F为1750pM。抗体CA028_0496不结合其他IL-17同种型(IL-17B、C、D和E)。因此，抗体CA028_0496特异性地结合IL-17A和IL-17F。
实施例4：抗体CA028_0496(鼠IgG1恒定区)对IL-17A、猕猴IL-17F和IL-17A/F杂二聚体的亲和性
使用BIAcore 3000(BIAcore AB)进行BIA(BiamolecularInteraction Analysis)。
所有实验在25℃进行。Fc片段特异性的Affinipure F(ab’)2片段山羊抗鼠IgG(Jackson ImmunoResearch)通过胺类偶联化学作用以≈6000反应单位(RU)的捕获水平固定在CM5探测芯片上(BiacoreAB)。HBS-EP缓冲液(10mM HEPES pH 7.4，0.15M NaCl，3mM EDTA，0.005％表面活性剂P20，BIAcore AB)用作运行缓冲液，流速10μL/分钟。注射10μL 4μg/mL抗体CA028_0496用于由固定的抗鼠IgG-Fc。在以30μL/分钟流速从25nM至nM以下的双倍稀释，对捕获的CA028_0496滴定人IL-17A、cyno IL-17F和杂二聚体A/F。通过以10μL/分钟的速率注射10μL 40mM HCl，接着注射5μL 5mM NaOH，重新产生表面。
使用BIAevaluation软件(3.2版本)按照标准程序分析双重参照的背景扣除结合曲线。由拟合算法确定动力学参数。
抗体CA028_0496对IL-17A具有21pM的亲和性，IL-17A/F杂二聚体为116pM。对猕猴IL-17F为1030pM。
当然能理解仅通过实施例描述了本发明，决不意味着限制本发明，并且在以下权利要求范围内可以进行细节的改动。本发明的每个实施方案的优选特征也针对加以必要的变化的每个其他实施方案。将本说明书中引用的全部出版物，包括但不限于专利和专利申请，在此引入本文作为参考，如同每个单独出版物具体和单独指出被引入本文作为参考，如同充分阐明一样。
序列表
<110>UCB PHARMA S.A.
Adams，Ralph
Popplewell，Andrew
Rapecki，Stephen
<120>结合IL-17A和IL-17F的抗体分子
<130>G0035-WO01
<160>20
<170>PatentIn version 3.3
<210>1
<211>10
<212>PRT
<213>黑鼠
<400>1
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Asn Met Ala
1 5 10
<210>2
<211>17
<212>PRT
<213>人造
<220>
<223>CDRH2
<400>2
Thr Ile Thr Tyr Glu Gly Arg Asn Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210>3
<211>16
<212>PRT
<213>人造
<220>
<223>CDRH3
<400>3
Pro Pro Gln Tyr Tyr Glu Gly Ser Ile Tyr Arg Leu Trp Phe Ala His
1 5 10 15
<210>4
<211>11
<212>PRT
<213>人造
<220>
<223>CDRLl
<400>4
Arg Ala Asp Glu Ser Val Thr Thr Leu Met His
1 5 10
<210>5
<211>7
<212>PRT
<213>黑鼠
<400>5
Leu Val Ser Asn Arg Glu Ser
1 5
<210>6
<211>9
<212>PRT
<213>黑鼠
<400>6
Gln Gln Thr Trp Ser Asp Pro Trp Thr
1 5
<210>7
<211>108
<212>PRT
<213>人造
<220>
<223>gL7
<400>7
Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Asp Glu Ser Val Thr Thr Leu
20 25 30
Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Leu Val Ser Asn Arg Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Trp Ser Asp Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210>8
<211>324
<212>DNA
<213>人造
<220>
<223>gL7
<400>8
gccatccagc tgacccagag cccttcctct ctcagcgcca gtgtcggaga cagagtgact 60
attacctgca gggctgacga aagcgtgacc acattgatgc actggtacca acagaagcct 120
ggcaaagccc ccaagctcct gatctatctg gtttccaatc gggagtctgg agtccccagc 180
aggttcagcg gcagtgggtc tggaactgac tttaccctga caatctcctc actccagccc 240
gaagatttcg ccacctacta ttgccagcag acttggagcg acccttggac atttggacag 300
ggcacaaaag tggagatcaa gcgt 324
<210>9
<211>125
<212>PRT
<213>人造
<220>
<223>gH9
<400>9
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Asn Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Thr Tyr Glu Gly Arg Asn Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ser Pro Pro Gln Tyr Tyr Glu Gly Ser Ile Tyr Arg Leu Trp Phe
100 105 110
Ala His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210>10
<211>375
<212>DNA
<213>人造
<220>
<223>gH9
<400>10
gaggttcagc tcgttgaatc cggaggcgga ctcgtgcagc ctgggggctc cttgcggctg 60
agctgcgctg ccagtggctt cactttcagc gattacaata tggcctgggt gcgccaggcc 120
ccaggcaagg gtctggagtg ggtggccaca attacctatg agggcagaaa cacttattac 180
cgggattcag tgaaagggcg atttaccatc agcagggata atgcaaagaa cagtctgtac 240
ctgcagatga actctctgag agctgaggac accgctgtct actattgtgc aagcccaccc 300
cagtactatg agggctcaat ctacagattg tggtttgccc attggggcca gggaacactg 360
gtgaccgtct cgagc 375
<210>11
<211>214
<212>PRT
<213>人造
<220>
<223>GL7+恒定结构域
<400>11
Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Asp Glu Ser Val Thr Thr Leu
20 25 30
Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Leu Val Ser Asn Arg Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Trp Ser Asp Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210>12
<211>234
<212>PRT
<213>人造
<220>
<223>信号+gL7+恒定结构域
<400>12
Met Ser Val Pro Thr Gln Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Leu Thr
1 5 10 15
Asp Ala Arg Cys Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser
20 25 30
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Asp Glu Ser
35 40 45
Val Thr Thr Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
50 55 60
Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Val Ser Asn Arg Glu Ser Gly Val Pro Ser
65 70 75 80
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
85 90 95
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Trp
100 105 110
Ser Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
115 120 125
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
130 135 140
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
145 150 155 160
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
165 170 175
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
180 185 190
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
195 200 205
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
210 215 220
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230
<210>13
<211>645
<212>DNA
<213>人造
<220>
<223>gL7+恒定结构域
<400>13
gccatccagc tgacccagag cccttcctct ctcagcgcca gtgtcggaga cagagtgact 60
attacctgca gggctgacga aagcgtgacc acattgatgc actggtacca acagaagcct 120
ggcaaagccc ccaagctcct gatctatctg gtttccaatc gggagtctgg agtccccagc 180
aggttcagcg gcagtgggtc tggaactgac tttaccctga caatctcctc actccagccc 240
gaagatttcg ccacctacta ttgccagcag acttggagcg acccttggac atttggacag 300
ggcacaaaag tggagatcaa gcgtacggta gcggccccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gttag 645
<210>14
<211>705
<212>DNA
<213>人造
<220>
<223>信号+gL7+恒定结构域
<400>14
atgtcagttc ccacacaggt gctgggcctg cttctgttgt ggctcaccga tgctaggtgt 60
gccatccagc tgacccagag cccttcctct ctcagcgcca gtgtcggaga cagagtgact 120
attacctgca gggctgacga aagcgtgacc acattgatgc actggtacca acagaagcct 180
ggcaaagccc ccaagctcct gatctatctg gtttccaatc gggagtctgg agtccccagc 240
aggttcagcg gcagtgggtc tggaactgac tttaccctga caatctcctc actccagccc 300
gaagatttcg ccacctacta ttgccagcag acttggagcg acccttggac atttggacag 360
ggcacaaaag tggagatcaa gcgtacggta gcggccccat ctgtcttcat cttcccgcca 420
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 480
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 540
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 600
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 660
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gttag 705
<210>15
<211>452
<212>PRT
<213>人造
<220>
<223>gH9+恒定结构域
<400>15
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Asn Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Thr Tyr Glu Gly Arg Asn Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ser Pro Pro Gln Tyr Tyr Glu Gly Ser Ile Tyr Arg Leu Trp Phe
100 105 110
Ala His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
115 120 125
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser
130 135 140
Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
145 150 155 160
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
165 170 175
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
180 185 190
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys
195 200 205
Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu
210 215 220
Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu
225 230 235 240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260 265 270
Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275 280 285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr
290 295 300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser
325 330 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr
405 410 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435 440 445
Ser Leu Gly Lys
450
<210>16
<211>471
<212>PRT
<213>人造
<220>
<223>信号+gH9+恒定结构域
<400>16
Met Glu Trp Ser Trp Val Phe Leu Phe Phe Leu Ser Val Thr Thr Gly
1 5 10 15
Val His Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
20 25 30
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
35 40 45
Ser Asp Tyr Asn Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Val Ala Thr Ile Thr Tyr Glu Gly Arg Asn Thr Tyr Tyr Arg
65 70 75 80
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn
85 90 95
Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Ser Pro Pro Gln Tyr Tyr Glu Gly Ser Ile Tyr Arg
115 120 125
Leu Trp Phe Ala His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
130 135 140
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
145 150 155 160
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
165 170 175
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
180 185 190
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
195 200 205
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
210 215 220
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
225 230 235 240
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
245 250 255
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
260 265 270
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
275 280 285
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
290 295 300
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
305 310 315 320
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
325 330 335
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
340 345 350
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
355 360 365
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
370 375 380
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
385 390 395 400
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
405 410 415
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
420 425 430
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
435 440 445
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
450 455 460
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
465 470
<210>17
<211>1963
<212>DNA
<213>人造
<220>
<223>gH9+恒定结构域
<400>17
gaggttcagc tcgttgaatc cggaggcgga ctcgtgcagc ctgggggctc cttgcggctg 60
agctgcgctg ccagtggctt cactttcagc gattacaata tggcctgggt gcgccaggcc 120
ccaggcaagg gtctggagtg ggtggccaca attacctatg agggcagaaa cacttattac 180
cgggattcag tgaaagggcg atttaccatc agcagggata atgcaaagaa cagtctgtac 240
ctgcagatga actctctgag agctgaggac accgctgtct actattgtgc aagcccaccc 300
cagtactatg agggctcaat ctacagattg tggtttgccc attggggcca gggaacactg 360
gtgaccgtct cgagcgcttc tacaaagggc ccatccgtct tccccctggc gccctgctcc 420
aggagcacct ccgagagcac agccgccctg ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgaa 480
ccggtgacgg tgtcgtggaa ctcaggcgcc ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccggct 540
gtcctacagt cctcaggact ctactccctc agcagcgtgg tgaccgtgcc ctccagcagc 600
ttgggcacga agacctacac ctgcaacgta gatcacaagc ccagcaacac caaggtggac 660
aagagagttg gtgagaggcc agcacaggga gggagggtgt ctgctggaag ccaggctcag 720
ccctcctgcc tggacgcacc ccggctgtgc agccccagcc cagggcagca aggcatgccc 780
catctgtctc ctcacccgga ggcctctgac caccccactc atgcccaggg agagggtctt 840
ctggattttt ccaccaggct ccgggcagcc acaggctgga tgcccctacc ccaggccctg 900
cgcatacagg ggcaggtgct gcgctcagac ctgccaagag ccatatccgg gaggaccctg 960
cccctgacct aagcccaccc caaaggccaa actctccact ccctcagctc agacaccttc 1020
tctcctccca gatctgagta actcccaatc ttctctctgc agagtccaaa tatggtcccc 1080
catgcccacc atgcccaggt aagccaaccc aggcctcgcc ctccagctca aggcgggaca 1140
ggtgccctag agtagcctgc atccagggac aggccccagc cgggtgctga cgcatccacc 1200
tccatctctt cctcagcacc tgagttcctg gggggaccat cagtcttcct gttcccccca 1260
aaacccaagg acactctcat gatctcccgg acccctgagg tcacgtgcgt ggtggtggac 1320
gtgagccagg aagaccccga ggtccagttc aactggtacg tggatggcgt ggaggtgcat 1380
aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag ttcaacagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc 1440
ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaac ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac 1500
aaaggcctcc cgtcctccat cgagaaaacc atctccaaag ccaaaggtgg gacccacggg 1560
gtgcgagggc cacatggaca gaggtcagct cggcccaccc tctgccctgg gagtgaccgc 1620
tgtgccaacc tctgtcccta cagggcagcc ccgagagcca caggtgtaca ccctgccccc 1680
atcccaggag gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta 1740
ccccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac 1800
cacgcctccc gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc tacagcaggc taaccgtgga 1860
caagagcagg tggcaggagg ggaatgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca 1920
caaccactac acacagaaga gcctctccct gtctctgggt aaa 1963
<210>18
<211>2020
<212>DNA
<213>人造
<220>
<223>信号+gH9+恒定结构域
<400>18
atggaatggt cctgggtctt cctgtttttc ctttctgtca caaccggggt gcacagcgag 60
gttcagctcg ttgaatccgg aggcggactc gtgcagcctg ggggctcctt gcggctgagc 120
tgcgctgcca gtggcttcac tttcagcgat tacaatatgg cctgggtgcg ccaggcccca 180
ggcaagggtc tggagtgggt ggccacaatt acctatgagg gcagaaacac ttattaccgg 240
gattcagtga aagggcgatt taccatcagc agggataatg caaagaacag tctgtacctg 300
cagatgaact ctctgagagc tgaggacacc gctgtctact attgtgcaag cccaccccag 360
tactatgagg gctcaatcta cagattgtgg tttgcccatt ggggccaggg aacactggtg 420
accgtctcga gcgcttctac aaagggccca tccgtcttcc ccctggcgcc ctgctccagg 480
agcacctccg agagcacagc cgccctgggc tgcctggtca aggactactt ccccgaaccg 540
gtgacggtgt cgtggaactc aggcgccctg accagcggcg tgcacacctt cccggctgtc 600
ctacagtcct caggactcta ctccctcagc agcgtggtga ccgtgccctc cagcagcttg 660
ggcacgaaga cctacacctg caacgtagat cacaagccca gcaacaccaa ggtggacaag 720
agagttggtg agaggccagc acagggaggg agggtgtctg ctggaagcca ggctcagccc 780
tcctgcctgg acgcaccccg gctgtgcagc cccagcccag ggcagcaagg catgccccat 840
ctgtctcctc acccggaggc ctctgaccac cccactcatg cccagggaga gggtcttctg 900
gatttttcca ccaggctccg ggcagccaca ggctggatgc ccctacccca ggccctgcgc 960
atacaggggc aggtgctgcg ctcagacctg ccaagagcca tatccgggag gaccctgccc 1020
ctgacctaag cccaccccaa aggccaaact ctccactccc tcagctcaga caccttctct 1080
cctcccagat ctgagtaact cccaatcttc tctctgcaga gtccaaatat ggtcccccat 1140
gcccaccatg cccaggtaag ccaacccagg cctcgccctc cagctcaagg cgggacaggt 1200
gccctagagt agcctgcatc cagggacagg ccccagccgg gtgctgacgc atccacctcc 1260
atctcttcct cagcacctga gttcctgggg ggaccatcag tcttcctgtt ccccccaaaa 1320
cccaaggaca ctctcatgat ctcccggacc cctgaggtca cgtgcgtggt ggtggacgtg 1380
agccaggaag accccgaggt ccagttcaac tggtacgtgg atggcgtgga ggtgcataat 1440
gccaagacaa agccgcggga ggagcagttc aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc 1500
accgtcctgc accaggactg gctgaacggc aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa 1560
ggcctcccgt cctccatcga gaaaaccatc tccaaagcca aaggtgggac ccacggggtg 1620
cgagggccac atggacagag gtcagctcgg cccaccctct gccctgggag tgaccgctgt 1680
gccaacctct gtccctacag ggcagccccg agagccacag gtgtacaccc tgcccccatc 1740
ccaggaggag atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctaccc 1800
cagcgacatc gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac 1860
gcctcccgtg ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaggctaa ccgtggacaa 1920
gagcaggtgg caggagggga atgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa 1980
ccactacaca cagaagagcc tctccctgtc tctgggtaaa 2020
<210>19
<211>286
<212>PRT
<213>人造
<220>
<223>IL-17A/F杂二聚体
<400>19
Met Gly Ile Thr Ile Pro Arg Asn Pro Gly Cys Pro Asn Ser Glu Asp
1 5 10 15
Lys Asn Phe Pro Arg Thr Val Met Val Asn Leu Asn Ile His Asn Arg
20 25 30
Asn Thr Asn Thr Asn Pro Lys Arg Ser Ser Asp Tyr Tyr Asn Arg Ser
35 40 45
Thr Ser Pro Trp Asn Leu His Arg Asn Glu Asp Pro Glu Arg Tyr Pro
50 55 60
Ser Val Ile Trp Glu Ala Lys Cys Arg His Leu Gly Cys Ile Asn Ala
65 70 75 80
Asp Gly Asn Val Asp Tyr His Met Asn Ser Val Pro Ile Gln Gln Glu
85 90 95
Ile Leu Val Leu Arg Arg Glu Pro Pro His Cys Pro Asn Ser Phe Arg
100 105 110
Leu Glu Lys Ile Leu Val Ser Val Gly Cys Thr Cys Val Thr Pro Ile
115 120 125
Val His His Val Ala Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
130 135 140
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Lys Ile Pro Lys Val Gly
145 150 155 160
His Thr Phe Phe Gln Lys Pro Glu Ser Cys Pro Pro Val Pro Gly Gly
165 170 175
Ser Met Lys Leu Asp Ile Gly Ile Ile Asn Glu Asn Gln Arg Val Ser
180 185 190
Met Ser Arg Asn Ile Glu Ser Arg Ser Thr Ser Pro Trp Asn Tyr Thr
195 200 205
Val Thr Trp Asp Pro Asn Arg Tyr Pro Ser Glu Val Val Gln Ala Gln
210 215 220
Cys Arg Asn Leu Gly Cys Ile Asn Ala Gln Gly Lys Glu Asp Ile Ser
225 230 235 240
Met Asn Ser Val Pro Ile Gln Gln Glu Thr Leu Val Val Arg Arg Lys
245 250 255
His Gln Gly Cys Ser Val Ser Phe Gln Leu Glu Lys Val Leu Val Thr
260 265 270
Val Gly Cys Thr Cys Val Thr Pro Val Ile His His Val Gln
275 280 285
<210>20
<211>134
<212>PRT
<213>人造
<220>
<223>猕猴IL-17F
<400>20
Met Arg Lys Ile Pro Lys Val Gly His Thr Phe Phe Gln Lys Pro Glu
1 5 10 15
Ser Cys Pro Pro Val Pro Glu Gly Ser Met Lys Leu Asp Thr Gly Ile
20 25 30
Ile Asn Glu Asn Gln Arg Val Ser Met Ser Arg Asn Ile Glu Ser Arg
35 40 45
Ser Thr Ser Pro Trp Asn Tyr Thr Val Thr Trp Asp Pro Asn Arg Tyr
50 55 60
Pro Ser Glu Val Val Gln Ala Gln Cys Lys His Leu Gly Cys Ile Asn
65 70 75 80
Ala Gln Gly Lys Glu Asp Ile Ser Met Asn Ser Val Pro Ile Gln Gln
85 90 95
Glu Thr Leu Val Leu Arg Arg Lys His Gln Gly Cys Ser Val Ser Phe
100 105 110
Gln Leu Glu Lys Val Leu Val Thr Val Gly Cys Thr Cys Val Thr Pro
115 120 125
Val Ile His His Val Gln
130