一种米炒美洲大蠊炮制品及其制备方法.pdf

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1、(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201410401802.3 (22)申请日 2014.08.15 201310361794.X 2013.08.19 CN A61K 35/64(2015.01) A23L 1/29(2006.01) A61P 1/16(2006.01) (71)申请人成都百草和济科技有限公司地址 610041 四川省成都市高新区高朋大道 5 号 1 栋 206 室 (72)发明人苏柘僮熊永爱邹俊波 (74)专利代理机构成都高远知识产权代理事务所 ( 普通合伙 ) 51222 代理人李高峡 (54) 发明名称一种米炒美洲大蠊炮制品及其。

2、制备方法 (57) 摘要本发明提供了一种米炒美洲大蠊炮制品，其特征在于：所述炮制品中，多肽含量在 30以上，总氨基酸含量在 12以上，油脂含量在 12以内。本发明研究表明，通过米炒制的美洲大蠊炮制品，其总氨基酸、多肽等有效成分含量显著提高，脂溶性成分明显降低，其药效活性也得到了明显的提升，为临床用药提供了新的选择。 (66)本国优先权数据 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请权利要求书1页说明书5页 (10)申请公布号 CN 104415056 A (43)申请公布日 2015.03.18 CN 104415。

3、056 A 1/1 页 2 1. 一种米炒美洲大蠊炮制品，其特征在于：所述炮制品中，多肽含量在 30以上，总氨基酸含量在 12以上，油脂含量在 12以内。 2. 根据权利要求 1 所述的米炒美洲大蠊炮制品，其特征在于：总氨基酸含量在 14以上。 3. 根据权利要求 1 所述的米炒美洲大蠊炮制品，其特征在于：所述炮制品是由大米和已处死的美洲大蠊炮制而成。 4. 米炒美洲大蠊炮制品的制备方法，其特征在于：它包括如下操作步骤： (1) 活体美洲大蠊，处死后，除去杂质，干燥备用； (2)取大米和已处死的美洲大蠊，在150180下拌炒，取出，筛去大米，。

4、放凉，即得米炒美洲大蠊炮制品。 5. 根据权利要求 4 所述的制备方法，其特征在于：步骤 (1) 中，在 60烘干。 6. 根据权利要求 4 所述的制备方法，其特征在于：步骤 (2) 中，投入已处死的美洲大蠊之前，对大米进行预热。 7. 根据权利要求 4 或 6 所述的制备方法，其特征在于：步骤 (2) 的具体操作如下：将炮制用容器进行预热，加入大米，中火预热 2min，投入已处死的美洲大蠊， 150 180拌炒 5min，取出，筛去米，放凉，即得。 8. 根据权利要求 4 7 任意一项所述的制备方法，其特征在于：已处死的美洲大蠊与大米。

5、的用量比为 (3 6):1。 9. 根据权利要求 8 所述的制备方法，其特征在于：已处死的美洲大蠊与大米的用量比为 4:1。 10.权利要求13任意一项所述米炒美洲大蠊炮制品在制备保肝降酶、或治疗或预防肝损伤、治疗或预防酒精性脂肪肝的药物或保健品中的用途。权利要求书 CN 104415056 A 2 1/5 页 3 一种米炒美洲大蠊炮制品及其制备方法技术领域 0001 本发明涉及一种米炒美洲大蠊炮制品及其制备方法。背景技术 0002 美洲大蠊 P erip laneta am ericana 为昆虫纲有翅亚纲蜚蠊目蜚蠊科大蠊属昆虫，俗称 “蟑螂” ，其入药始载。

6、于神农本草经。众多的研究表明，美洲大蠊中的化学成分主要分为两大类。第一类为信息素是大蠊向体外释放的具有挥发性的信息素成分，主要包括性信息素和聚集信息素。第二类为氨基酸和各种昆虫神经肽，是存在于其机体内的化学成分。 0003 美洲大蠊药材传统的炮制方法为美洲大蠊成虫沸水烫死，晒干或60烘干。然而，目前对美洲大蠊药材的炮制方法还未见有较为系统的研究。发明内容 0004 本发明的目的在于提供一种米炒美洲大蠊炮制品及其制备方法。 0005 本发明提供了一种米炒美洲大蠊炮制品，所述炮制品中，多肽含量在 30以上，总氨基酸含量在 12以上，油脂含量在 12以内。 0006。

7、进一步地，总氨基酸含量在 14以上。 0007 更进一步地，所述炮制品是由米和已处死的美洲大蠊炮制而成。 0008 例如，本发明所述米为大米。 0009 本发明还提供了米炒美洲大蠊炮制品的制备方法，它包括如下操作步骤： 0010 (1) 活体美洲大蠊，处死后，除去杂质，干燥备用； 0011 (2)取大米和已处死的美洲大蠊，在150180下拌炒，取出，筛去大米，放凉，即得米炒美洲大蠊炮制品。 0012 其中，步骤 (1) 中，在 60烘干。 0013 其中，步骤 (2) 中，投入已处死的美洲大蠊之前，对大米进行预热。 0014 进一步地，步骤 (2) 。

8、的具体操作如下： 0015 将炮制用容器进行预热，加入大米，中火预热 2min，投入已处死的美洲大蠊， 150 180拌炒 5min，取出，筛去米，放凉，即得。 0016 本发明所述中火指 170 180，可以用电磁炉控制温度，亦可采用其他方式控制温度 ( 俞金芳 . 火候的标准 J. 中药材 ,1990,06:48.)。中火预热的目的是让米粒受热，便于美洲大蠊加入时受热的均匀性，前期研究表明，预热 2 分钟左右已经能让容器中米粒受热完全。 0017 更进一步地，已处死的美洲大蠊与大米的用量比为 (3 6):1。 0018 优选地，已处死的美洲大蠊与大米的用量。

9、比为 4:1。 0019 本发明还提供了上述米炒美洲大蠊炮制品在制备治疗或预防肝损伤的药物或保健品中的用途。说明书 CN 104415056 A 3 2/5 页 4 0020 进一步地，所述肝损伤是酒精性肝损伤。 0021 本发明还提供了上述米炒美洲大蠊炮制品在制备保肝降酶的药物或保健品中的用途。 0022 本发明研究表明，通过大米炒制的美洲大蠊炮制品，其总氨基酸、多肽等有效成分含量显著提高，脂溶性成分明显降低，其药效活性也得到了明显的提升，为临床用药提供了新的选择。具体实施方式 0023 实施例 1 米炒美洲大蠊炮制品的制备 0024 活体美洲大蠊，处死后，。

10、除去杂质， 60烘干备用。将炮制用砂锅进行预热，然后加入30g大米，中火预热2min，投入120g已电击处死的美洲大蠊虫体， 150180拌炒5min，取出，筛去大米，放凉即得。 0025 实施例 2 炮制方法的考察 0026 一、美洲大蠊炮制前后的对比 0027 1. 药物和炮制辅料 0028 (1) 活体美洲大蠊成虫。 0029 (2) 粳米。 0030 2. 药物的炮制方法 0031 (1) 样品一：活体美洲大蠊成虫处死后，除去杂质， 60烘干备用。将炮制用砂锅进行预热，然后加入 40g 大米，中火预热 2min，投入 120g 已处死的美洲大蠊虫体， 1。

11、50 180拌炒 5min，取出，筛去大米，放凉，即得 ( 美洲大蠊 : 大米 3:1)。 0032 (2) 样品二：活体美洲大蠊成虫处死后，除去杂质， 60烘干备用。将炮制用砂锅进行预热，然后加入 30g 大米，中火预热 2min，投入 120g 已处死的美洲大蠊虫体， 150 180拌炒 5min，取出，筛去大米，放凉，即得 ( 美洲大蠊 : 大米 4:1)。 0033 (3) 样品二：活体美洲大蠊成虫处死后，除去杂质， 60烘干备用。将炮制用砂锅进行预热，然后加入 24g 大米，中火预热 2min，投入 120g 已处死的美洲大蠊虫体， 150。

12、 180拌炒 5min，取出，筛去大米，放凉，即得 ( 美洲大蠊 : 大米 5:1)。 0034 (4) 样品二：活体美洲大蠊成虫处死后，除去杂质， 60烘干备用。将炮制用砂锅进行预热，然后加入 20g 大米，中火预热 2min，投入 120g 已处死的美洲大蠊虫体， 150 180拌炒 5min，取出，筛去大米，放凉，即得 ( 美洲大蠊 : 大米 6:1)。 0035 (5) 样品五：活体美洲大蠊成虫处死后，除去杂质， 60烘干备用 ( 未经炮制组 )。 0036 3. 油脂、多肽及总氨基酸含量对比 0037 3.1 供试品制备 0038 取美洲大蠊 1。

13、20g，粉碎，用 70 95乙醇回流提取 2 3 次，合并提取液，采用正己烷萃取后，收集萃取液，剩余液体离心 10min，上清液静置 8h，滤过，滤液回收乙醇并浓缩成稠膏，加入纯水，加热搅拌，静置，冷却，取下清液，过滤，滤液浓缩成稠膏，经干燥得美洲大蠊提取物，按上述方法分别制备 2 项下美洲大蠊样品一至五提取物。 0039 精密称取美洲大蠊提取物约 0.8g，加水定容至 50mL，摇匀，即得。 0040 3.2 对照品制备说明书 CN 104415056 A 4 3/5 页 5 0041 精密称取牛血清蛋白标准品 0.10045g，加水定。

14、容至 10mL，摇匀，即得。 0042 精密称取丙氨酸对照品 15.84mg，置 100mL 量瓶中，加 10异丙醇溶液适量，使其溶解，并稀释至刻度，摇匀。精密量取 5mL，至 50mL 量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得。 0043 3.2 检测方法 0044 3.2.1 总氨基酸含量测定 0045 按照 2010 版中国药典蛋白质及氨基酸测定项下规定，采用紫外 - 可见分光光度计，以 540nm 为检测波长对样品多肽和总氨基酸含量进行测定。3.2.2 油脂含量测定 0046 搜集 3.1 项下正己烷萃取物，将正己烷部分在室温下浓缩干，称重，计算油脂含。

15、量。 0047 4 实验结果 0048 结果见表 1。 0049 表 1 美洲大蠊炮制前后油脂、多肽和总氨基酸的含量比较 ( ) 0050 0051 由表 1 可知，样品一、二、三、四中油脂含量均低于样品五，而多肽和总氨基酸含量均高于样品五。 0052 5 实验结论 0053 美洲大蠊采用米炒炮制后油脂含量明显降低，而多肽和总氨基酸含量均有明显升高。 0054 二、药理实验对比 0055 1. 仪器与试剂 0056 (1) 全自动生化分析仪。 0057 (2) 低温离心机。 0058 (3)56红星二锅头。 0059 (4) 生理盐水。 0060 (5) 羧甲基纤维素钠。。

16、 0061 2. 实验动物 0062 昆明种雄性小鼠，体重 18.5 22.5g，由成都达硕生物科技有限公司提供，实验动物合格证号： scxkc(111)2008-24。 0063 3. 药理试验方法 0064 3.1 实验分组及给药 0065 小鼠适应性喂养一周后，按体重随机分为 7 组，每组 10 只，分别作为：模型对照组：等体积的 0.5羧甲基纤维素钠水溶液；样品一组： 6.67gkg-1；样品二说明书 CN 104415056 A 5 4/5 页 6 组： 6.67gkg-1；样品三组： 6.67gkg-1；样品四组： 6.67gkg。

17、-1；；样品五组： 6.67gkg-1；另按体重随机称取 10 只正常小鼠作为正常对照组：等体积的 0.5羧甲基纤维素钠水溶液。每组小鼠每天灌胃 1 次，连续 30 天。 0066 3.2 模型制备 0067 末次灌胃给药 1h 后，除正常对照组外均灌胃给予红星二锅头 14ml/kg，每日 1 次，连续 3d。 0068 3.3 检测指标 0069 肝脏重量系数：末次给予乙醇后禁食不禁水 12h，颈椎脱臼处死小鼠，迅速取出肝脏，用冷生理盐水洗净血渍，滤纸吸干后称重，计算肝重系数。 0070 肝重系数 (g/g) 肝脏重量 / 体重 100 0071 生化指。

18、标：称重后将肝脏制备成 100g/L 肝匀浆，测定肝匀浆上清液中 ALT、 AST、 GGT 活性。 0072 3.4 数据处理方法 0073 应用 SPSS17.0 软件进行统计分析。数据以均数标准误表示，组间采用单因素方差分析，方差齐者组间进行 LSD 检验，方差不齐者进行 Dunnett s T3 检验。 0074 4 实验结果 0075 4.1 对肝脏重量系数的影响结果见表 2。 0076 表 2 肝脏重量系数测定结果 0077 0078 与模型组比较， *P0.01，*P0.05 ；与样品五组比较，P0.01，P0.05 ； 0079 由表 2 可知，与正常组。

19、比较，模型组和样品五组小鼠肝脏重量系数均有显著增大 (P0.05) ；与模型组比较，样品一至四组小鼠肝脏重量系数均有显著性减小 (P0.05)，样品五组有增大趋势；与样品五组比较，样品一至四组小鼠肝脏重量系数也均有显著性减小 (P0.05)，表明美洲大蠊药材不经炮制会对酒精性肝损伤产生毒副作用，而采用粳米炮制后，其毒副作用降低或被消除，其中以样品二组毒副作用最轻。 0080 4.2 对急生化指标 ALT、 AST、 GGT 的影响结果见表 3。 0081 表 3 肝脏 ALT、 AST、 GGT 检测结果说明书 CN 104415056 A 6 5/5 页 7。

20、 0082 0083 与模型组比较， *P0.01，*P0.05 ；与样品五组比较，P0.01，P0.05 ； 0084 由表 3 可知， ALT ：与正常组比较，模型组有显著升高 (P0.05)，样品五组有极显著升高 (P0.01) ；与模型组比较，样品五组有显著升高 (P0.05)，样品一四组均有显著性降低 (P0.05) ；与样品五组比较，样品一、三和四组均有显著性降低 (P0.05)，样品二组有极显著降低 (P0.01) ； 0085 AST ：与正常组比较，模型组有极显著升高 (P0.01)，样品五组也有极显著升高 (P0.01) ；与模型组比较，。

21、样品五组有显著升高 (P0.05)，样品一组和四组均有显著性降低 (P0.05)，样品二组和三组均有极显著降低 (P0.01) ；与样品五组比较，样品一组和四组均有显著性降低 (P0.05)，样品二组和三组均有极显著降低 (P0.01)。 0086 GGT ：与正常组比较，模型组和样品五组均有显著升高 (P0.05) ；与模型组比较，样品五组有显著升高 (P0.05)，样品一至四组均有显著性降低 (P0.05) ；与样品五组比较，样品一、三和四组均有显著降低 (P0.05)，样品二组有极显著降低 (P0.01)。 0087 以上实验结果从肝脏生化指标角度证明。

22、了美洲大蠊药材不经炮制会对酒精性肝损伤产生严重毒副作用。采用粳米炮制后，其毒副作用降低或被消除，其中以样品二组毒副作用最轻。 0088 5 实验小结 0089 美洲大蠊药材采用米炒炮制可降低或消除其对酒精性肝损伤的毒副作用，其最佳炮制工艺为：活体美洲大蠊成虫处死后，除去杂质， 60烘干备用。将炮制用砂锅进行预热，然后加入 30g 大米，中火预热 2min，投入 120g 已电击处死的美洲大蠊虫体， 150 180拌炒 5min，取出，筛去大米，放凉即得 ( 美洲大蠊 : 大米 4:1)。 0090 三、研究结论 0091 (1) 美洲大蠊药材采用米炒炮制可降低油脂含量，增加多肽和总氨基酸含量。 0092 (2)美洲大蠊药材采用米炒炮制可降低或消除其对酒精性肝损伤的毒副作用。 (3) 其最佳炮制工艺为：活体美洲大蠊成虫处死后，除去杂质， 60烘干备用。将炮制用砂锅进行预热，然后加入 30g 大米，中火预热 2min，投入 120g 已电击处死的美洲大蠊虫体， 150 180拌炒 5min，取出，筛去大米，放凉即得 ( 美洲大蠊 : 大米 4:1)。说明书 CN 104415056 A 7 。

摘要
申请专利号：	CN201410401802.3	申请日：	2014.08.15
公开号：	CN104415056A	公开日：	2015.03.18
当前法律状态：	实审	有效性：	审中
法律详情：	实质审查的生效IPC(主分类):A61K35/64申请日:20140815\|\|\|公开
IPC分类号：	A61K35/64(2015.01)I; A23L1/29; A61P1/16	主分类号：	A61K35/64
申请人：	成都百草和济科技有限公司
发明人：	苏柘僮; 熊永爱; 邹俊波
地址：	610041四川省成都市高新区高朋大道5号1栋206室
优先权：	201310361794X 2013.08.19 CN
专利代理机构：	成都高远知识产权代理事务所(普通合伙)51222	代理人：	李高峡
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内容摘要

本发明提供了一种米炒美洲大蠊炮制品，其特征在于：所述炮制品中，多肽含量在30％以上，总氨基酸含量在12％以上，油脂含量在12％以内。本发明研究表明，通过米炒制的美洲大蠊炮制品，其总氨基酸、多肽等有效成分含量显著提高，脂溶性成分明显降低，其药效活性也得到了明显的提升，为临床用药提供了新的选择。

权利要求书

权利要求书
1.  一种米炒美洲大蠊炮制品，其特征在于：所述炮制品中，多肽含量在30％以上，总氨基酸含量在12％以上，油脂含量在12％以内。

2.  根据权利要求1所述的米炒美洲大蠊炮制品，其特征在于：总氨基酸含量在14％以上。

3.  根据权利要求1所述的米炒美洲大蠊炮制品，其特征在于：所述炮制品是由大米和已处死的美洲大蠊炮制而成。

4.  米炒美洲大蠊炮制品的制备方法，其特征在于：它包括如下操作步骤：
(1)活体美洲大蠊，处死后，除去杂质，干燥备用；
(2)取大米和已处死的美洲大蠊，在150～180℃下拌炒，取出，筛去大米，放凉，即得米炒美洲大蠊炮制品。

5.  根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，在60℃烘干。

6.  根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：步骤(2)中，投入已处死的美洲大蠊之前，对大米进行预热。

7.  根据权利要求4或6所述的制备方法，其特征在于：步骤(2)的具体操作如下：
将炮制用容器进行预热，加入大米，中火预热2min，投入已处死的美洲大蠊，150～180℃拌炒5min，取出，筛去米，放凉，即得。

8.  根据权利要求4～7任意一项所述的制备方法，其特征在于：已处死的美洲大蠊与大米的用量比为(3～6):1。

9.  根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于：已处死的美洲大蠊与大米的用量比为4:1。

10.  权利要求1～3任意一项所述米炒美洲大蠊炮制品在制备保肝降酶、或治疗或预防肝损伤、治疗或预防酒精性脂肪肝的药物或保健品中的用途。

说明书

说明书一种米炒美洲大蠊炮制品及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种米炒美洲大蠊炮制品及其制备方法。
背景技术
美洲大蠊P erip laneta am ericana为昆虫纲有翅亚纲蜚蠊目蜚蠊科大蠊属昆虫，俗称“蟑螂”，其入药始载于《神农本草经》。众多的研究表明，美洲大蠊中的化学成分主要分为两大类。第一类为信息素是大蠊向体外释放的具有挥发性的信息素成分，主要包括性信息素和聚集信息素。第二类为氨基酸和各种昆虫神经肽，是存在于其机体内的化学成分。
美洲大蠊药材传统的炮制方法为美洲大蠊成虫沸水烫死，晒干或60℃烘干。然而，目前对美洲大蠊药材的炮制方法还未见有较为系统的研究。
发明内容
本发明的目的在于提供一种米炒美洲大蠊炮制品及其制备方法。
本发明提供了一种米炒美洲大蠊炮制品，所述炮制品中，多肽含量在30％以上，总氨基酸含量在12％以上，油脂含量在12％以内。
进一步地，总氨基酸含量在14％以上。
更进一步地，所述炮制品是由米和已处死的美洲大蠊炮制而成。
例如，本发明所述米为大米。
本发明还提供了米炒美洲大蠊炮制品的制备方法，它包括如下操作步骤：
(1)活体美洲大蠊，处死后，除去杂质，干燥备用；
(2)取大米和已处死的美洲大蠊，在150～180℃下拌炒，取出，筛去大米，放凉，即得米炒美洲大蠊炮制品。
其中，步骤(1)中，在60℃烘干。
其中，步骤(2)中，投入已处死的美洲大蠊之前，对大米进行预热。
进一步地，步骤(2)的具体操作如下：
将炮制用容器进行预热，加入大米，中火预热2min，投入已处死的美洲大蠊，150～180℃拌炒5min，取出，筛去米，放凉，即得。
本发明所述中火指170～180℃，可以用电磁炉控制温度，亦可采用其他方式控制温度(俞金芳.火候的标准[J].中药材,1990,06:48.)。中火预热的目的是让米粒受热，便于美洲大蠊加入时受热的均匀性，前期研究表明，预热2分钟左右已经能让容器中米粒受热完全。
更进一步地，已处死的美洲大蠊与大米的用量比为(3～6):1。
优选地，已处死的美洲大蠊与大米的用量比为4:1。
本发明还提供了上述米炒美洲大蠊炮制品在制备治疗或预防肝损伤的药物或保健品中的用途。
进一步地，所述肝损伤是酒精性肝损伤。
本发明还提供了上述米炒美洲大蠊炮制品在制备保肝降酶的药物或保健品中的用途。
本发明研究表明，通过大米炒制的美洲大蠊炮制品，其总氨基酸、多肽等有效成分含量显著提高，脂溶性成分明显降低，其药效活性也得到了明显的提升，为临床用药提供了新的选择。
具体实施方式
实施例1 米炒美洲大蠊炮制品的制备
活体美洲大蠊，处死后，除去杂质，60℃烘干备用。将炮制用砂锅进行预热，然后加入30g大米，中火预热2min，投入120g已电击处死的美洲大蠊虫体，150～180℃拌炒5min，取出，筛去大米，放凉即得。
实施例2 炮制方法的考察
一、美洲大蠊炮制前后的对比
1.药物和炮制辅料
(1)活体美洲大蠊成虫。
(2)粳米。
2.药物的炮制方法
(1)样品一：活体美洲大蠊成虫处死后，除去杂质，60℃烘干备用。将炮制用砂锅进行预热，然后加入40g大米，中火预热2min，投入120g已处死的美洲大蠊虫体，150～180℃拌炒5min，取出，筛去大米，放凉，即得(美洲大蠊:大米＝3:1)。
(2)样品二：活体美洲大蠊成虫处死后，除去杂质，60℃烘干备用。将炮制用砂锅进行预热，然后加入30g大米，中火预热2min，投入120g已处死的美洲大蠊虫体，150～180℃拌炒5min，取出，筛去大米，放凉，即得(美洲大蠊:大米＝4:1)。
(3)样品二：活体美洲大蠊成虫处死后，除去杂质，60℃烘干备用。将炮制用砂锅进行预热，然后加入24g大米，中火预热2min，投入120g已处死的美洲大蠊虫体，150～180℃拌炒5min，取出，筛去大米，放凉，即得(美洲大蠊:大米＝5:1)。
(4)样品二：活体美洲大蠊成虫处死后，除去杂质，60℃烘干备用。将炮制用砂锅进行预热，然后加入20g大米，中火预热2min，投入120g已处死的美洲大蠊虫体，150～180℃拌炒5min，取出，筛去大米，放凉，即得(美洲大蠊:大米＝6:1)。
(5)样品五：活体美洲大蠊成虫处死后，除去杂质，60℃烘干备用(未经炮制组)。
3.油脂、多肽及总氨基酸含量对比
3.1供试品制备
取美洲大蠊120g，粉碎，用70～95％乙醇回流提取2～3次，合并提取液，采用正己烷萃取后，收集萃取液，剩余液体离心10min，上清液静置8h，滤过，滤液回收乙醇并浓缩成稠膏，加入纯水，加热搅拌，静置，冷却，取下清液，过滤，滤液浓缩成稠膏，经干燥得美洲大蠊提取物，按上述方法分别制备2项下美洲大蠊样品一至五提取物。
精密称取美洲大蠊提取物约0.8g，加水定容至50mL，摇匀，即得。
3.2对照品制备
精密称取牛血清蛋白标准品0.10045g，加水定容至10mL，摇匀，即得。
精密称取丙氨酸对照品15.84mg，置100mL量瓶中，加10％异丙醇溶液适量，使其溶解，并稀释至刻度，摇匀。精密量取5mL，至50mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得。
3.2检测方法
3.2.1总氨基酸含量测定
按照2010版《中国药典》蛋白质及氨基酸测定项下规定，采用紫外-可见分光光度计，以540nm为检测波长对样品多肽和总氨基酸含量进行测定。3.2.2油脂含量测定
搜集3.1项下正己烷萃取物，将正己烷部分在室温下浓缩干，称重，计算油脂含量。
4实验结果
结果见表1。
表1 美洲大蠊炮制前后油脂、多肽和总氨基酸的含量比较(％)

由表1可知，样品一、二、三、四中油脂含量均低于样品五，而多肽和总氨基酸含量均高于样品五。
5实验结论
美洲大蠊采用米炒炮制后油脂含量明显降低，而多肽和总氨基酸含量均有明显升高。
二、药理实验对比
1.仪器与试剂
(1)全自动生化分析仪。
(2)低温离心机。
(3)56°红星二锅头。
(4)生理盐水。
(5)羧甲基纤维素钠。
2.实验动物
昆明种雄性小鼠，体重18.5～22.5g，由成都达硕生物科技有限公司提供，实验动物合格证号：scxkc(111)2008-24。
3.药理试验方法
3.1实验分组及给药
小鼠适应性喂养一周后，按体重随机分为7组，每组10只，分别作为：①模型对照组：等体积的0.5％羧甲基纤维素钠水溶液；②样品一组：6.67g·kg-1；③样品二组：6.67g·kg-1；④样品三组：6.67g·kg-1；⑤样品四组：6.67g·kg-1；⑥；样品五组：6.67g·kg-1；另按体重随机称取10只正常小鼠作为正常对照组⑦：等体积的0.5％羧甲基纤维素钠水溶液。每组小鼠每天灌胃1次，连续30天。
3.2模型制备
末次灌胃给药1h后，除正常对照组外均灌胃给予红星二锅头14ml/kg，每日1次，连续3d。
3.3检测指标
①肝脏重量系数：末次给予乙醇后禁食不禁水12h，颈椎脱臼处死小鼠，迅速取出肝脏，用冷生理盐水洗净血渍，滤纸吸干后称重，计算肝重系数。
肝重系数(g/g)＝肝脏重量/体重×100％
②生化指标：称重后将肝脏制备成100g/L肝匀浆，测定肝匀浆上清液中ALT、AST、GGT活性。
3.4数据处理方法
应用SPSS17.0软件进行统计分析。数据以均数±标准误表示，组间采用单因素方差分析，方差齐者组间进行LSD检验，方差不齐者进行Dunnett’s T3检验。
4实验结果
4.1对肝脏重量系数的影响结果见表2。
表2 肝脏重量系数测定结果

与模型组比较，**P<0.01，*P<0.05；与样品五组比较，△△P<0.01，△P<0.05；
由表2可知，与正常组比较，模型组和样品五组小鼠肝脏重量系数均有显著增大(P<0.05)；与模型组比较，样品一至四组小鼠肝脏重量系数均有显著性减小(P<0.05)，样品五组有增大趋势；与样品五组比较，样品一至四组小鼠肝脏重量系数也均有显著性减小(P<0.05)，表明美洲大蠊药材不经炮制会对酒精性肝损伤产生毒副作用，而采用粳米炮制后，其毒副作用降低或被消除，其中以样品二组毒副作用最轻。
4.2对急生化指标ALT、AST、GGT的影响结果见表3。
表3 肝脏ALT、AST、GGT检测结果

与模型组比较，**P<0.01，*P<0.05；与样品五组比较，△△P<0.01，△P<0.05；
由表3可知，ALT：与正常组比较，模型组有显著升高(P<0.05)，样品五组有极显著升高(P<0.01)；与模型组比较，样品五组有显著升高(P<0.05)，样品一～四组均有显著性降低(P<0.05)；与样品五组比较，样品一、三和四组均有显著性降低(P<0.05)，样品二组有极显著降低(P<0.01)；
AST：与正常组比较，模型组有极显著升高(P<0.01)，样品五组也有极显著升高(P<0.01)；与模型组比较，样品五组有显著升高(P<0.05)，样品一组和四组均有显著性降低(P<0.05)，样品二组和三组均有极显著降低(P<0.01)；与样品五组比较，样品一组和四组均有显著性降低(P<0.05)，样品二组和三组均有极显著降低(P<0.01)。
GGT：与正常组比较，模型组和样品五组均有显著升高(P<0.05)；与模型组比较，样品五组有显著升高(P<0.05)，样品一至四组均有显著性降低(P<0.05)；与样品五组比较，样品一、三和四组均有显著降低(P<0.05)，样品二组有极显著降低(P<0.01)。
以上实验结果从肝脏生化指标角度证明了美洲大蠊药材不经炮制会对酒精性肝损伤产生严重毒副作用。采用粳米炮制后，其毒副作用降低或被消除，其中以样品二组毒副作用最轻。
5实验小结
美洲大蠊药材采用米炒炮制可降低或消除其对酒精性肝损伤的毒副作用，其最佳炮制工艺为：活体美洲大蠊成虫处死后，除去杂质，60℃烘干备用。将炮制用砂锅进行预热，然后加入30g大米，中火预热2min，投入120g 已电击处死的美洲大蠊虫体，150～180℃拌炒5min，取出，筛去大米，放凉即得(美洲大蠊:大米＝4:1)。
三、研究结论
(1)美洲大蠊药材采用米炒炮制可降低油脂含量，增加多肽和总氨基酸含量。
(2)美洲大蠊药材采用米炒炮制可降低或消除其对酒精性肝损伤的毒副作用。(3)其最佳炮制工艺为：活体美洲大蠊成虫处死后，除去杂质，60℃烘干备用。将炮制用砂锅进行预热，然后加入30g大米，中火预热2min，投入120g已电击处死的美洲大蠊虫体，150～180℃拌炒5min，取出，筛去大米，放凉即得(美洲大蠊:大米＝4:1)。