一种丹参酮ⅡA微球制剂的制备方法.pdf

本发明公开了一种丹参酮ⅡA微球制剂的制备方法。该方法是将丹参酮ⅡA和高分子聚合物溶于有机溶剂中，随后加到分散介质中，乳化并挥发有机溶媒，然后抽滤、洗涤、干燥，即得丹参酮ⅡA微球。本发明不仅大大提高了载药量和包封率，而且具有溶解性好、稳定性好、安全无毒、缓释性好、持续性好和高效性好的特点。

权利要求书
1.  丹参酮ⅡA微球制剂的制备方法，其特征在于：该方法是将丹 参酮ⅡA和高分子聚合物溶于有机溶剂中，随后加到分散介质中，乳 化并挥发有机溶媒，然后抽滤、洗涤、干燥，即得丹参酮ⅡA微球。

2.  根据权利要求1所述的丹参酮ⅡA微球制剂的制备方法，其特 征在于：所述的高分子聚合物为PLLA或mPEG-PDLLA。

3.  实现权利要求1或2所述的丹参酮ⅡA微球制剂的制备方法， 其特征在于：其制备方法具体如下；
(1)O相的制备：将10～40mg丹参酮ⅡA与50～200mg/mL高 分子聚合物溶解于1～2.5mL有机溶剂中，涡旋混匀，配成O相，备 用；
(2)W相的制备：将2～3mg/mL表面活性剂聚乙烯醇溶于100～ 500mL去离子水中，形成W相，备用；
(3)乳剂的制备：在0-25℃温度下以800～1500rpm的转速 匀速搅拌，将上述O相缓慢加入W相中，制成O/W型乳剂；
(4)微球的形成：冰浴条件下，以800～1500rpm的转速匀速 搅拌，至有机溶剂完全挥发；
(5)微球的收集：静置沉淀，去除上清液，在滤器上抽滤收集， 蒸馏水洗涤3次，干燥，即得。

4.  实现权利要求3所述的丹参酮ⅡA微球制剂的制备方法，其特 征在于：其制备方法具体如下；
(1)O相的制备：将10～40mg丹参酮ⅡA与50～100mg/mL PLLA溶解于1.5～2.5mL有机溶剂中，涡旋混匀，配成O相，备用；
(2)W相的制备：将2～3mg/mL表面活性剂PVA溶于100～500 mL去离子水中，形成W相，备用；
(3)乳剂的制备：在0-25℃温度下以800～1500rpm的转速 匀速搅拌，将上述O相缓慢加入W相中，制成O/W型乳剂；
(4)微球的形成：冰浴条件下，以800～1500rpm rpm的转速 匀速搅拌，至有机溶剂完全挥发；
(5)微球的收集：静置沉淀，去除上清液，在滤器上抽滤收集， 蒸馏水洗涤3次，干燥，即得。

5.  实现权利要求3所述的丹参酮ⅡA微球制剂的制备方法，其特 征在于：其制备方法具体如下；
(1)O相的制备：将10～40mg丹参酮ⅡA与50～100mg/mL mPEG-PDLLA溶解于1～2mL有机溶剂中，涡旋混匀，配成O相，备 用；
(2)W相的制备：将2～3mg/mL表面活性剂PVA溶于100～500 mL去离子水中，形成W相，备用；
(3)乳剂的制备：在0-25℃温度下以800～1500rpm的转速 匀速搅拌，将上述O相缓慢加入W相中，制成O/W型乳剂；
(4)微球的形成：冰浴条件下，以800～1500rpm rpm的转速 匀速搅拌，至有机溶剂完全挥发；
(5)微球的收集：静置沉淀，去除上清液，在滤器上抽滤收集， 蒸馏水洗涤3次，干燥，即得。

6.  实现权利要求1至5任一项所述的丹参酮ⅡA微球制剂的制备 方法，其特征在于：所述的有机溶剂为二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮中 的一种或一种以上的组合。

7.  实现权利要求6所述的丹参酮ⅡA微球制剂的制备方法，其特 征在于：所述的步骤(3)乳剂的制备中，在4℃温度下以800～1500 rpm的转速匀速搅拌，将上述O相缓慢加入W相中，制成O/W型乳剂。

说明书一种丹参酮ⅡA微球制剂的制备方法
技术领域
本发明涉及丹参酮ⅡA微球制剂的制备方法，属于微球制剂领域。
背景技术
微球是指药物溶解或分散于高分子材料中形成的微小球状实体， 球形或类球形。微球粒径范围一般为1～500μm，可以供注射、口 服、滴鼻或皮下埋植给药使用，属于基质型骨架微粒，微球制剂作为 一种新型给药技术，既能通过调节和控制药物的释放速度实现长效的 目的，又能保护药物不受体内酶的影响而降解，掩盖药物的不良口味， 减少给药次数和药物刺激，提高疗效和药物稳定性。例如亮丙瑞林微 球缓释时间就长达6个月，改变原来每日给药的方式，大大减轻了病 人的痛苦。这类剂型的开发，对于发展缓控释给药系统，具有重要的 意义。
聚乳酸(PLA)及其共聚物是具有良好生物相容性和生物降解性 的高分子聚合物，主要用作医用手术防粘连膜，注射用微胶囊、微球 及埋植剂缓释制剂的辅料，可用作组织工程细胞培养的多孔支架，孔 隙率、孔径和降解速率可调。PLA微球作为缓控释给药系统，可以控 制微粒的大小、延长药物释放时间、降低毒副作用等。其分为左旋和 外消旋两类。左旋聚乳酸(PLLA)也称为左旋聚丙交酯，属于聚酯家 族。单个的乳酸分子中有一个羟基和一个羧基，多个乳酸分子在一起， -OH与别的分子的-COOH脱水缩合，-COOH与别的分子的-OH脱水缩合 形成的聚合物。具有优良的力学强度并且降解时间长一般为3-3.5 年，有好的抗溶剂性。
外消旋聚乳酸与甲氧基聚乙二醇的二嵌段共聚物(mPEG-PDLLA) 是由亲水性链段mPEG和疏水链段PDLLA聚合而成，具有良好的生物 降解性和生物相容性，亲水性链段伸展于水相，疏水性链段伸展于油 相。更利于制备O/W的难溶性药物微球。
丹参酮ⅡA(tanshinone ⅡA)是唇形科植物丹参Salvia  miltiorrhiza Bge.的干燥根及根茎中提取的脂溶性菲醌化合物，具 有显著扩张冠脉、减轻缺氧引起的心肌损伤、扩张血管、改善微循环 障碍、降低氧化低密度脂蛋白(OXLDL)的生成、保护OXLDL引起的血 管内皮细胞损伤等作用，对治疗冠心病、心绞痛、心律过速有显著疗 效，并在临床广泛应用。临床用于治疗心血管病的中成药制剂，如片 剂、胶囊、冲剂、针剂，但其存在着载药量和包封率不理想，不溶或 微溶于水，生物利用度低，吸收较差的问题，这在一定程度上影响其 疗效的发挥。且其生物半衰期短，需要增加给药次数，以达到相应的 血药浓度，病人顺应性差。
发明内容
本发明的目的在于，提供一种丹参酮ⅡA微球制剂的制备方法。 本发明不仅大大提高了载药量和包封率，而且具有溶解性好、稳定性 好、安全无毒、缓释性好、持续性好和高效性好的特点。
为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案如下：一种丹参酮 ⅡA微球制剂的制备方法，该方法是将丹参酮ⅡA和高分子聚合物溶于 有机溶剂中，随后加到分散介质中，乳化并挥发有机溶媒，然后抽滤、 洗涤、干燥，即得丹参酮ⅡA微球。
上述的丹参酮ⅡA微球制剂的制备方法中，所述的高分子聚合物 为PLLA或mPEG-PDLLA。
前述的丹参酮ⅡA微球制剂的制备方法中，其制备方法具体如下；
(1)O相的制备：将10～40mg丹参酮ⅡA与50～100mg/mL高 分子聚合物溶解于1～2.5mL有机溶剂中，涡旋混匀，配成O相，备 用；
(2)W相的制备：将2～3mg/mL表面活性剂聚乙烯醇(PVA) 溶于100～500mL去离子水中，形成W相，备用；
(3)乳剂的制备：在0-25℃温度下以800～1500rpm的转速 匀速搅拌，将上述O相缓慢加入W相中，制成O/W型乳剂；
(4)微球的形成：冰浴条件下，以800～1500rpm的转速匀 速搅拌，至有机溶剂完全挥发；
(5)微球的收集：静置沉淀，去除上清液，在滤器上抽滤收集， 蒸馏水洗涤3次，干燥，干燥的方式为放入干燥器中室温干燥，或真 空干燥，或冷冻干燥即得。
前述的丹参酮ⅡA微球制剂的制备方法中，其制备方法具体如下；
(1)O相的制备：将10～40mg丹参酮ⅡA与50～100mg/mL  PLLA溶解于1.5～2.5mL有机溶剂中，涡旋混匀，配成O相，备用；
(2)W相的制备：将2～3mg/mL表面活性剂PVA溶于100～500 mL去离子水中，形成W相，备用；
(3)乳剂的制备：在0-25℃温度下以800～1500rpm的转速 匀速搅拌，将上述O相缓慢加入W相中，制成O/W型乳剂；
(4)微球的形成：冰浴条件下，以800～1500rpm rpm的转速 匀速搅拌，至有机溶剂完全挥发；
(5)微球的收集：静置沉淀，去除上清液，在滤器上抽滤收集， 蒸馏水洗涤3次，干燥，即得。
前述的丹参酮ⅡA微球制剂的制备方法中，其制备方法具体如下；
(1)O相的制备：将10～40mg丹参酮ⅡA与50～100mg/mL  mPEG-PDLLA溶解于1～2mL有机溶剂中，涡旋混匀，配成O相，备 用；
(2)W相的制备：将2～3mg/mL表面活性剂PVA溶于100～500 mL去离子水中，形成W相，备用；
(3)乳剂的制备：在0-25℃温度下以800～1500rpm的转速 匀速搅拌，将上述O相缓慢加入W相中，制成O/W型乳剂；
(4)微球的形成：冰浴条件下，以800～1500rpm rpm的转速 匀速搅拌，至有机溶剂完全挥发；
(5)微球的收集：静置沉淀，去除上清液，在滤器上抽滤收集， 蒸馏水洗涤3次，干燥，即得。
前述的丹参酮ⅡA微球制剂的制备方法中，所述的有机溶剂为二 氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮中的一种或一种以上的组合。
前述的丹参酮ⅡA微球制剂的制备方法中，所述的步骤(3)乳剂 的制备中，在4℃温度下以800～1500rpm的转速匀速搅拌，将上 述O相缓慢加入W相中，制成O/W型乳剂。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
1、作为载体的高分子聚合物L-聚乳酸、单氧基聚乙二醇-D、 L-聚乳酸，以及作为稳定剂的PVA等成分，均对人体无毒，安全可靠， 并且可以为人体所代谢。
2、本发明很好地解决了其溶解性、稳定性，延长了体内的作用 时间，具有优越的缓释性、持续性和高效性，从而提高了疗效，降低 了剂量。
3、本发明的微球制剂对心脑血管微循环障碍及治疗及抑制血管 内血栓的形成起到了积极的作用。
4、本发明大大提高了载药量和包封率，工艺稳定，工艺重复性 较好。
微球载药量和包封率的测定试验：
精密称取10mg微球样品，加入5mL二氯甲烷，涡旋10min， 3500rpm离心10min，重复上述操作3次，合并上清液，二氯甲烷 定容至25mL,精密吸取2mL至25mL容量瓶中，DCM定容。以紫外 分光光度法在波长269nm处检测吸光度A值。
将所测得的吸光度A值代入标准曲线方程中，求得药物含量测 定值，计算溶液中的药物含量。根据测得的一定质量微球中的药物含 量，按照下列公式计算微球的包封率和载药量：
载药量(％)＝(微球中药物的含量/微球的总质量)×100％
包封率(％)＝(微球中药物的含量/投药量)×100％
丹参酮ⅡA-PLLA微球的正交试验
在单因素试验的基础上，根据预试验结果，选取对微球质量影 响较显著的四个因素，即投药量(A)，DCM体积(B)，PVA浓度(C)， 外水相体积(D)设计安排实验，每号实验重复3次，按照L9(34)正 交试验设计安排实验，因素与水平见表1。以载药量(S1)、包封率 (S2)和收率(S3)为考察指标，根据指标对微球质量贡献大小的差 异分配不同的权重系数，即微球的载药量占40％，包封率占40％，收 率占20％，再计算多个指标的加权求和值S(S＝40％×S1/Smax1+40％ ×S2/Smax2+20％×S3/Smax3)进行综合评价，优选高分子聚合物。
表1 因素水平表

表2 L9(34)正交试验结果

表3 方差分析表

从正交分析结果及方差分析表明，各因素对丹参酮ⅡA-PLLA微球 质量的影响大小依次为A＞B＞D＞C。由于因素A，B，D对综合评分 有极显著影响，综合考虑得出最佳处方为丹参酮ⅡA35mg，二氯甲烷 2mL，PVA浓度3％,外水相体积150mL。
工艺验证：
按试验结果得到的工艺进行验证，紫外分光光度法进行含量测 定，得载药量为(24.33±1.5)％，包封率为(94.93±1.4)％，效果 非常理想。
丹参酮ⅡA-mPEG-PLLA微球的单因素试验
采用乳化溶剂挥发法，进行单因素试验(投药量15、15、35、 40mg，材料重量50、75、100mg/mL，PVA浓度2、2.5、3％，外水 相体积100、150、200mL，搅拌速度800、1000、1300rpm)，基本 条件为投药量35mg、材料重量150mg、PVA浓度2.5％，外水相体积 150mL、搅拌速度1000rpm，以其中一项为变量，固定其他条件进行 微球的制备研究。
单因素试验结果表明，当投药量为28.93mg，材料重量为100mg， 外水相为250ml，溶剂为DCM:ACE 1.6:0.4时，制备得到的微球载 药量为22.21％，包封率大于等于82.94％。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明，但是所列实施例并非 用于限制本发明。
实施例1：丹参酮ⅡA-PLLA微球的制备：
(1)O相的制备：将10mg丹参酮ⅡA与PLLA溶解于2mL二氯甲 烷(DCM)中，制得PLLA浓度为75g/ml，涡旋混匀，配成O相，备 用；
(2)W相的制备：将表面活性剂PVA溶于150mL去离子水中， 制得PVA浓度为3mg/mL，形成W相，备用；
(3)乳剂的制备：在4℃温度下以1000rpm的转速匀速搅拌， 将上述O相缓慢加入W相中，制成O/W型乳剂；
(4)微球的形成：冰浴条件下，以1000rpm的转速匀速搅拌， 至有机溶剂完全挥发；
(5)微球的收集：静置沉淀，去除上清液，在滤器上抽滤收集， 蒸馏水洗涤3次，放入干燥器中室温干燥48小时，即得。
实施例2：丹参酮ⅡA-PLLA微球的制备：
(1)O相的制备：将35mg丹参酮ⅡA与75mg/mL PLLA溶解于 1mLDCM中，涡旋混匀，配成O相，备用；
(2)W相的制备：将PVA溶于150mL去离子水中，制得PVA浓 度为3mg/mL，形成W相，备用；
(3)乳剂的制备：在4℃温度下以800rpm的转速匀速搅拌，将 上述O相缓慢加入W相中，制成O/W型乳剂；
(4)微球的形成：冰浴条件下，以1000rpm的转速匀速搅拌， 至有机溶剂完全挥发；
(5)微球的收集：静置沉淀，去除上清液，在滤器上抽滤收集， 蒸馏水洗涤3次，放入干燥器中室温干燥48小时，即得。
实施例3：丹参酮ⅡA微球制剂的制备:
(1)O相的制备：将35mg丹参酮ⅡA与75mg/mL PLLA溶解于 2mLDCM中，涡旋混匀，配成O相，备用；
(2)W相的制备：将PVA溶于150mL去离子水中，制得PVA浓 度为3mg/mL，形成W相，备用；
(3)乳剂的制备：在4℃温度下以1500rpm的转速匀速搅拌， 将上述O相缓慢加入W相中，制成O/W型乳剂；
(4)微球的形成：冰浴条件下，以1500rpm的转速匀速搅拌， 至有机溶剂完全挥发；
(5)微球的收集：静置沉淀，去除上清液，在滤器上抽滤收集， 蒸馏水洗涤3次，放入干燥器中室温干燥48小时，即得。
实施例4：丹参酮ⅡA-mPEG-PDLLA微球的制备：
(1)O相的制备：将35mg丹参酮ⅡA与75mg/mL mPEG-PDLLA溶 解于1mLDCM和1ml丙酮(ACE)中，涡旋混匀，配成O相，备用；
(2)W相的制备：将PVA溶于150mL去离子水中，制得PVA浓 度为3mg/mL，形成W相，备用；
(3)乳剂的制备：在4℃温度下以800rpm的转速匀速搅拌，将 上述O相缓慢加入W相中，制成O/W型乳剂；
(4)微球的形成：冰浴条件下，以1000rpm的转速匀速搅拌， 至有机溶剂完全挥发；
(5)微球的收集：静置沉淀，去除上清液，在滤器上抽滤收集， 蒸馏水洗涤3次，放入干燥器中室温干燥48小时，即得。
实施例5：丹参酮ⅡA-mPEG-PDLLA微球的制备：
(1)O相的制备：将35mg丹参酮ⅡA与75mg/mL mPEG-PDLLA溶 解于1.6mLDCM和0.4ml ACE中，涡旋混匀，配成O相，备用；
(2)W相的制备：将PVA溶于150mL去离子水中，制得PVA浓 度为3mg/mL，形成W相，备用；
(3)乳剂的制备：在4℃温度下以800rpm的转速匀速搅拌，将 上述O相缓慢加入W相中，制成O/W型乳剂；
(4)微球的形成：冰浴条件下，以1000rpm的转速匀速搅拌， 至有机溶剂完全挥发；
(5)微球的收集：静置沉淀，去除上清液，在滤器上抽滤收集， 蒸馏水洗涤3次，放入干燥器中室温干燥48小时，即得。