包含总状土木香提取物和柚皮苷的可食用组合物.pdf

本发明提供并涉及一种有益于抗糖尿病的可食用组合物。糖尿病是在当今世界主要和经常发生的健康问题之一。制药公司在开发用于预防和控制糖尿病的新型药物的领域非常活跃。在市场上可获得若干药物用于治疗2型糖尿病。有现有技术记载了用于预防葡萄糖耐受不良和/或糖尿病的组合物和/或疗法。我们已经发现，虽然现有技术公开了用于治疗糖尿病的组合物和疗法，但是没有公开任何有效控制GLP-1活性从而控制糖尿病的食品组合物。本发明人在广泛致力于提供一种用于预防糖尿病的可食用组合物时，惊奇地发现总状土木香与柚皮苷的特定组合对于控制和/或预防糖尿病是有效的，从而满足前述目的中的一个或多个。

权利要求书
1.  可食用组合物，其包含：
a. 0.01-10重量%的总状土木香提取物；和
b. 0.01-10重量%的柚皮苷。

2.  如权利要求1所述的组合物，其中总状土木香与柚皮苷的比率为1：0.01至1：10。

3.  如前述权利要求1或2中任一项所述的组合物，其中所述总状土木香提取物为总状土木香根或其部分的提取物。

4.  如权利要求3所述的组合物，其中所述总状土木香提取物为水提取物。

5.  如前述权利要求中任一项所述的组合物，其中柚皮苷的来源为水果。

6.  如权利要求4所述的组合物，其中所述水果为柑橘属水果。

7.  如前述权利要求中任一项所述的组合物，其为液体例如汤或饮料、涂抹品、调味品、甜点或面包的形式。

8.  如权利要求7所述的组合物，其中所述饮料为茶基饮料。

9.  如权利要求中任一项所述的组合物，其为固体或粉状食品补充剂的形式。

10.  制备可食用组合物的方法，其包括以下步骤：将0.01-10重量%的总状土木香提取物和0.01-10重量%的柚皮苷与其它成分混合和/或掺合以得到所述可食用组合物。

11.  如权利要求10所述的方法，其中总状土木香与柚皮苷的比率为1：0.01至1：10。

12.  如前述权利要求1-9中任一项所述的组合物，用于治疗糖尿病。

13.  如前述权利要求1-9中任一项所述的组合物，用于治疗2型糖尿病。

14.  如前述权利要求1-9中任一项所述的组合物，用于保持GLP-1活性。

15.  如前述权利要求1-9中任一项所述的组合物，用于抑制DPP-4。

说明书包含总状土木香提取物和柚皮苷的可食用组合物
发明领域
本发明涉及一种可食用组合物。尤其是，本发明涉及一种有益于抗糖尿病的可食用组合物。
发明背景
糖尿病是在当今世界主要和经常发生的健康问题之一。一些人从他们的父母亲遗传糖尿病（1型），而一些人由于他们不健康的生活方式和代谢失调而获得糖尿病（2型）。无论是1型或2型，长期来看糖尿病证实在缺乏任何预防糖尿病的早期行为的情况下是危及生命的疾病。
2型糖尿病使二肽基肽酶-4（DPP-4）的水平升高，从而使胰高血糖素样肽-1（GLP-1）的活性降低。GLP-1的主要作用之一是维持血糖水平。由于DPP-4升高而使GLP-1活性降低会诱发失衡，从而使血糖水平升高。DPP-4抑制GLP-1的作用并且使血糖水平升高（Holst等人. 1998; Inhibition of the activity of dipeptidyl-peptidase IV as a treatment for type 2 diabetes; Diabetes, Vol. 47, 1663-1670和Karagiannis等人. 2012; Dipeptidyl peptidase-4 inhibitors for treatment of type 2 diabetes mellitus in the clinical setting: systematic review and meta-analysis. British Medical Journal 344）。
制药公司在开发用于预防和控制糖尿病的新型药物的领域非常活跃。在市场上可获得若干药物用于治疗糖尿病。
糖尿病的一个问题是由于该疾病没有立即可见的影响因而人们通常不认为糖尿病是严重的疾病。因此，大多数人不注意采取任何行动来预防糖尿病。通常涉及药物的另一个问题是人们只有当他们身体欠佳时才服药。每天服药通常具有一些负面心理效应。
有现有技术记载了用于预防葡萄糖耐受不良和/或糖尿病的组合物和/或疗法。
US2012094942（Elcelyx Therapautics Inc., 2012）公开了调节个体中的激素浓度的方法，该方法包括给药包含化学感受受体配体的组合物，其中该组合物适合于将该配体递送到所述个体的一个或多个肠区域。还提供了涉及调节GLP-1（总）、GLP-1（活性）、GLP-2、胃泌酸调节素、PYY（总）、PYY 3-36、CCK、GIP、胰岛素、C肽、活性肠高血糖素（glycentin）、尿鸟苷素胰淀素（uroguanylin amylin）、以及胃饥饿素（总）、胃饥饿素（活性）和胰高血糖素中的一种或多种的循环浓度的方法。
WO 2008/118011（Phyto Health Pharma B.V., 2008）记载了一种用于治疗糖尿病的组合物。更具体地，该发明涉及一种用于治疗糖尿病的草药组合物。在其一个实施方案中，该发明提供一种包含姜黄（Curcuma longa）、匙羹藤（Gymneme sylvestre）、苦瓜（Momordica charantia）、葫芦巴（Trigonella foenum graecum）和至少一种榄仁树属（Terminalia）的一部分或提取物的组合物。
US2011/274680（Mazed, Mohammad A等人, 2011）公开了一种用于降低老年痴呆症、心血管疾病和糖尿病的风险的膳食补充剂中的生物活性化合物的增效化学组合物。其还公开了针对患有2型糖尿病的人的无糖甜味剂/超级甜味剂的化学组合物，以及用于降低老年痴呆症、心血管疾病和糖尿病的风险的生物活性化合物和/或生物活性分子的纳米胶囊化和靶向纳米递送。还公开了基于微机电系统（MEMS）的生物活性化合物和/或生物活性分子的被动和主动递送。提及总状土木香（Inula racemosa）作为用于降低心血管疾病的风险的植物性治疗药物的一种，而没有公开用于有效控制GLP-1活性的增效可食用组合物。
我们已经发现，虽然现有技术公开了用于治疗糖尿病的组合物和疗法，但是没有公开任何有效控制GLP-1活性从而控制糖尿病的食品组合物。
因此，需要提供一种具有抗糖尿病益处的可食用食品组合物，其能够控制GLP-1活性而不用服用任何药物且因而没有任何负面心理效应。
发明目的
因此，本发明的一个目的是提供一种用于预防糖尿病的可食用组合物。
本发明的另一个目的是提供一种通过抑制DPP-4而控制GLP-1活性的可食用组合物。
本发明的再一个目的是提供一种用于控制和预防糖尿病的适合的替代物。
本发明人在广泛致力于提供一种用于预防糖尿病的可食用组合物时，惊奇地发现总状土木香的提取物与柚皮苷的特定组合对于控制和/或预防糖尿病是有效的，从而满足前述目的中的一个或多个。
发明内容
根据本发明的第一个方面，提供一种可食用组合物，其包含：
a. 0.01-10重量%的总状土木香提取物；和
b. 0.01-10重量%的柚皮苷。
根据本发明的第二个方面，提供一种制备可食用组合物的方法，其包括以下步骤：将0.01-10重量%的总状土木香提取物和0.01-10重量%的柚皮苷与其它成分混合和/或掺合以得到所述可食用组合物。
本发明的一个方面的任何特征可用于本发明的任何其它方面。术语“包含”旨在表示“包括”而未必是“由……组成”或“由……构成”。换句话说，所列出的步骤或选项不需要是穷举的。除了在操作和比较例中或者另外明确指出，本说明书中所有表示材料的量或反应条件、材料的物理性质和/或用途的数字应被理解为用词语“约”修饰。以“x-y”的形式表示的数值范围应被理解为包括x和y。当对于特定的特征以“x-y”的形式记载多个优选范围时，应理解还考虑组合不同端点的所有范围。
发明详述
本发明提供一种可食用组合物，其包含：
a. 0.01-10重量%的总状土木香提取物；和
b. 0.01-10重量%的柚皮苷。
术语可食用组合物优选是指可以被人摄取的组合物。
所述可食用组合物优选包含0.1-10重量%，更优选1-10重量%，还更优选3-10重量%和最优选5-10重量%的总状土木香提取物。
总状土木香是菊科（Asteraceae）的一种观赏植物。总状土木香在温带和高山的西喜马拉雅地区生长，并且在克什米尔常见，而且也称为“Pushkarmool”。“总状土木香的提取物”在本文应被理解为通过用液体、优选水提取这种植物的根、或优选这种根的部分而可得到的组合物。在本文，“总状土木香的提取物”与“总状土木香提取物”相同。所有上述提及的百分比基于该组合物的固体重量。如果该组合物含有高百分比的水，则上述提及的总状土木香提取物的百分比必须据此解释。
所述可食用组合物还优选包含0.1-10重量%，更优选1-10重量%，还更优选3-10重量%和最优选5-10重量%的柚皮苷。
“柚皮苷”在此涉及如下所示的分子结构，并且在化学上也称为4,5,7-三羟基二氢黄酮7-鼠李糖葡萄糖苷（化学式：C27H32014，Mw = 580.54），包括其可食用的盐。

柚皮苷是在水果例如柑橘属水果，尤其是葡萄中天然存在的二氢黄酮苷。柚皮苷是葡萄柚中主要的类黄酮之一。用于本发明目的的柚皮苷的优选来源为来自柑橘属水果，主要为葡萄。
在本发明的组合物中，总状土木香与柚皮苷的比率优选为1：0.01至1：10，更优选为1：0.1至1：10，还更优选为1：1至1：10，并且最优选为1：1至1：5。
虽然本发明的可食用组合物不限于任何特定的可食用组合物，但是本发明的优选的组合物为液体例如汤或饮料、涂抹品（spread）、调味品、甜点或面包的形式。
最优选的饮料为茶基饮料。
本文所提及的术语茶基饮料优选包括红茶基饮料、绿茶基饮料和乌龙茶基饮料。优选的形式可以是液体茶饮料、即饮茶、茶汁等，热泡和/或冷泡均可。
本发明的可食用组合物还可以为固体或粉状食品补充剂的形式。
本发明还提供一种制备可食用组合物的方法，其包括以下步骤：将0.1-10重量%的总状土木香提取物和0.1-10重量%的柚皮苷与其它成分混合和/或掺合以得到所述可食用组合物。
上述提及的术语“其它成分”是指制备目标可食用产品所需的组成成分，例如，在制备汤组合物（目标可食用产品）的情况下，术语“其它成分”优选为淀粉、盐、糖、酵母提取物、脂肪粉、蔬菜片、调味料、色素等。
为了制备本发明的可食用组合物，所述总状土木香提取物可以通过在70-100℃的温度下用水提取（煮沸）总状土木香的根2-6小时、然后冷却而制备。之后，将该溶液过滤和浓缩。所述浓缩步骤优选在旋转蒸发器中进行。
或者，也可以使用市售（如果有的话）的总状土木香水提取物粉末。
本发明的组合物主要被开发用于预防和控制糖尿病、更具体地为2型糖尿病。
不希望被理论所束缚，据称2型糖尿病与DPP-4（二肽基肽酶-4）升高从而GLP-1（胰高血糖素样肽-1）活性降低有关。GLP-1通常维持平衡，从而控制血糖水平。提高DPP-4的水平会抑制GLP-1的活性。本发明主要开发用于抑制DPP-4，从而保持GLP-1的活性，其又控制血糖水平。
本发明提供组合物有益于抗糖尿病的用途。
本发明提供组合物用于治疗2型糖尿病的用途。
本发明提供组合物用于保持GLP-1活性的用途。
本发明提供组合物用于抑制DPP-4的用途。
现在将借助于实施例说明本发明，这些实施例用于例证，而无论如何不限制本发明的范围。
实施例
制备总状土木香提取物：
通过利用以下步骤制备总状土木香提取物：
从当地（Bangalore, India）市场购买总状土木香（pushkarmool）植物。可以获得茎粗约3-6cm的植物，其为pushkarmool的根和茎的组合。然后，通过带有200 μm尺寸筛的粉碎机（剪切磨，Retsch SM 100）制备干的总状土木香粉末。
从干的总状土木香粉末制备总状土木香提取物。将100g干的总状土木香根粉末在800mL水中浸泡约14小时，然后在80℃煮沸4小时。然后，将其冷却至约35℃，接着过滤该溶液而得到澄清的溶液。然后使用旋转蒸发器（Heidolph Laborota 4002）将该溶液浓缩至干（水分含量约3%）。将该提取物用于如下所述的其它实验。
体外DPP-4酶测定：
取96孔板（NEST Biotechnology Co. Ltd, Cat No 701001）。在96孔板的各孔中，按照表1以不同的浓度放入总状土木香提取物（如上制备的）、柚皮苷（SIGMA, Cat. No: N1376）以及总状土木香提取物与柚皮苷的组合。在各孔中，还加入4ng人重组二肽基肽酶-IV（DPP-IV）酶（PROSPEC ISRAEL, Cat. No. ENZ 375）。然后，使用pH-8的TRIS-HCl缓冲液使最终体积直到200μl/孔。该TRIS-HCl缓冲液通过将2.42 g的TRIS（三羟甲基氨基甲烷；供应商：Sisco Research Laboratory ltd, Cat No 2044122）基料、0.372 g的EDTA（SIGMA, Cat No E6758）、和5.644 g的NaCl 加入900 mL的蒸压milli-Q水（Millipore? India）中，并搅拌其直至其溶解（约30分钟）而制备。然后，使用盐酸将该溶液的pH调节为8.0，然后用蒸压milli-Q水使该溶液的体积直到1000 mL。
使用酶标仪（BIO-RAD LAB INDIA, 型号680）将酶和总状土木香提取物与柚皮苷的组合混合1分钟，并在孵育箱（Thermo Scientific, Model 3111; 条件：在37℃下）中孵育10分钟。然后，通过添加10μL/孔的19 mM的底物甘氨酸-脯氨酸对硝基苯胺（Gly-Pro-p-NA）（其相当于GLP-1）而引发酶反应。由于没有可获得的市售的产色GLP-1，Gly-Pro-p-NA是普遍接受和市售的用于DPP-4酶的底物。我们在测定中使用与GLP-1相当的Gly-Pro-p-NA。还报道了使用Gly-Pro-p-NA代替GLP-1（Yogisha 等人, Journal of Natural Products, Vol. 3(2010):76-79）。
还将三个不同组的样品作为对照用于该测定，即，仅上述使用的相同浓度的底物（Gly-Pro-p-NA）（对照1），仅上述使用的相同浓度的DPP-4酶（对照2），另一个为上述使用的相同浓度的Gly-Pro-p-NA与DPP-4的组合（对照3）。
将所有上述反应混合物再次在同一孵育箱中在相同条件下孵育1小时。然后，通过加入100μL/孔的柠檬酸盐缓冲液抑制酶活性。该柠檬酸盐缓冲液通过将2.1 g的柠檬酸一水合物（Sisco Research laboratory ltd, Cat No 0348216）和2.94 g的柠檬酸三钠二水合物（Sisco Research laboratory ltd, Cat No 1949110）加入90 mL的蒸压milli-Q水（Millipore? India）中并搅拌其直至其溶解（约30分钟）而制备。然后，用盐酸将该溶液的pH调节为4.0，然后用蒸压milli-Q水使该溶液的体积直到100 mL。然后，使用酶标仪（BIO-RAD LAB INDIA，型号680）在405nm的波长下测定吸光度。
为了得到总状土木香和柚皮苷的%抑制，将对照3的吸光度值视为DPP-4的100%活性。
使用下式计算其它样品的DPP-4的%活性：

然后，通过从100减去%活性而计算样品的%抑制。将实验结果以下汇总于表1。
表1：
实施例编号总状土木香(μg/孔)柚皮苷(μg/孔)总状土木香：柚皮苷的比率%抑制SD*A1000-5.610.02B0116-18.541.42C0232-18.435.02D0580-18.110.7011001161 : 1.1641.027.0121002321 : 2.3242.795.1131005801 : 5.828.930.39
*表1中的SD表示特定样品群的标准偏差。
根据上表，显然在本发明范围内的比率下的总状土木香与柚皮苷的组合（实施例1、2和3）与以相同浓度单独使用的总状土木香或柚皮苷的任一个（实施例A、B、C和D）相比，提供高得多的“%抑制”。因此，显然总状土木香与柚皮苷的组合当以特定的比率使用时提供协同益处。
制备可食用组合物：
汤组合物：
该汤组合物通过根据下表将干成分混合而制备：
表2：
成分重量%玉米淀粉46NaCl10糖（通常可获得的蔗糖）12酵母提取物2脂肪粉（卵磷脂）4液态脂肪（卵磷脂）2干蔬菜片17调味料2.5色素0.5总状土木香提取物2柚皮苷2
然后，使用15 g上述组合物在100 mL热水（约90℃）中制备汤，并由一组专业品尝员品尝。发现添加总状土木香提取物和柚皮苷没有改变该汤的味道。该汤与对照汤（不添加总状土木香提取物和柚皮苷）一样美味。