乌风蛇油产品及其制备方法.pdf

本发明涉及以乌风蛇油为主的产品及其制备方法，以药品级乌风蛇为原料，粉粹，加入丙酮，氮气保护浸提、经活性炭脱臭脱色，得到精制乌风蛇油。丙酮浸提残渣加入中性蛋白酶和胰蛋白酶进行酶解，高温处理后离心，上清液加入乙醚沉淀，沉淀即为小肽干燥物，与精制乌风蛇油混合得乌风蛇油产品。该方法能有效的避免了亚油酸的破坏，出油率高，色泽浅，透明度高，无沉淀和悬浮物，黏性较小，亚油酸含量高达到16％以上，产品保质期长。

权利要求书
1.  乌风蛇油产品是由精制乌风蛇油与小肽干燥物混合制得，其中各原料成份以以下重量份 组成：将精制乌风蛇油50份加热35～45℃后，加入小肽干燥物0.01～8份后搅拌均匀后真 空冷冻干燥所制成。

2.  根据权利要求1的方法，其中各原料成分以以下重量份组成：精制乌风蛇油50份、小肽 干燥物0.05～5份混合后制成的。

3.  根据权利要求1的方法，其中各原料成分以以下重量份组成：精制乌风蛇油50份、小肽 干燥物0.5～3份混合后制成的。

4.  根据权利要求1的方法，其中各原料成分以以下重量份组成：精制乌风蛇油50份、小肽 干燥物1份混合后制成的。

5.  根据权利要求1或2或3或4的方法，其中所述精制乌风蛇油和小肽干燥物的制备方法， 其具体步骤如下：
(1)粉粹：将药品级乌风蛇进行粉粹至10-20目，得蛇粉；
(2)丙酮浸提：向上述蛇粉加入丙酮，在氮气保护室温搅拌浸提两次，每次浸提 60-90min，经陶瓷膜过滤得浸提液，合并两次浸提液得丙酮滤液和蛇残渣；
(3)脱色脱臭：向丙酮滤液加入适量的中性活性碳颗粒，在氮气保护下室温脱色20-30 分钟，陶瓷膜过滤一次，40℃减压浓缩去除丙酮，得油状物，用两倍体积的乙醇进行萃取一 次，得乙醇萃取物，40℃减压浓缩去除乙醇得精制乌风蛇油；
(4)酶解：丙酮浸提残渣加入两倍重量的水，加入中性蛋白酶，至终浓度达到5-10U/L， 不断搅拌，在30℃下酶解1h，再加入胰蛋白酶，至终浓度达到15-20U/L，进行酶解，不断 搅拌，在37℃下酶解2-4h；
(5)小肽分离提取：90-100℃高温处理酶解液10-30min后，6000rpm离心5min，上 清液加入两倍体积乙醚静置5～20min，6000rpm离心5min，沉淀干燥得小肽干燥物。

6.  根据权利要求5的方法，其中步骤(2)中所述丙酮的用量，其体积L/蛇粉重量kg的比例为 3～6:1。

7.  根据权利要求5的方法，其中步骤(3)中所述中性活性碳颗粒的用量，其重量kg/蛇粉丙 酮滤液体积L的比例为3～6:50，中性活性碳颗粒直径大小0.2-5mm。

说明书乌风蛇油产品及其制备方法
技术领域
本发明属于动物油提取分离技术领域，具体涉及以乌风蛇油为主的产品及其制备方法。
背景技术
乌风蛇俗称乌蛇、乌梢蛇，为游蛇科乌梢蛇属体形较大的无毒蛇，广泛分布于中国， 生活在丘陵地带，狭食性蛇类，以蛙类(主食)、蜥蜴、鱼类、鼠类等为食。由于栖息地破 坏及人类大量捕杀，目前野外生存数量大减，应予保护。乌梢蛇可入药。主治：祛风，通络， 止痉。用于风湿顽痹，麻木拘挛，中风口眼歪斜，半身不遂，抽搐痉挛，破伤风，麻风疥癣， 瘰疬恶疮。
蛇油含有丰富的天然活性物质和抑菌成分，具有超强渗透力，可以直接渗透人体皮肤， 促进皮肤细胞新陈代谢，增强皮肤免疫调节功能；是一种既富有营养又利于保健的物质，我 国中医或民间喜用蛇油治病保健，具有调节内分泌失调，润肠通便，养颜美容，防止皮肤衰 老、防止血管硬化有很好的作用。蛇油含有12种脂肪酸，主要有亚油酸、亚麻酸等不饱和 脂肪酸及甘油棕榈酸等。其中最多的不饱和脂肪酸——亚油酸，较长时间的过高温度会导致 其氧化。
公开号为CN104027669A的中国专利公开了一种治疗头风的中药方剂，其特征在于 是由以下重量配比的中药原料制成：清半夏10-20份，天麻10-20份，白术10-20份，茯 苓10-30份，龙骨15-45份，牡蛎15-45份，葛根15-45份，泽泻10-30份，薏苡仁15-45 份，陈皮10-30份，乌蛸蛇10-30份，威灵仙10-30份，丹参20-40份，降香10-30份， 延胡索10-30份，五灵脂10-30份，桃仁10-30份，红花10-30份，僵蚕10-30份。本发 明对于头风引起的头痛、头晕等症的治疗具有固本培元、标本兼治、疗效明显，且无毒副作 用、治愈后复发率低等优点。
公开号为CN104013867A的中国专利公开了一种治疗湿疹的中药，其主要是有以下 中药材组成：苦参、白鲜皮、何首乌、青黛、乌梢蛇、黄柏、白芷、蒲黄、马齿苋、蒲公英、 鲜芦根、鱼腥草、薏苡仁、白芥子、荆芥、防风、杏仁、甘草。本发明旨在弥补已有技术的 缺陷，提供一种疗效明显、标本兼治、无毒副作用的治疗湿疹的中药。
公开号为CN103385905A的中国专利公开了一种治疗治疗皮炎湿疹类疾病的复合中 药外用制剂，其特征是由按下列重量百分比的原料和药学上可接受的载体制备而成：蛇油 3—15份、紫草3—12份、四季青10—45份。其剂型为乳膏剂、乳剂、搽剂、脂质体或喷 雾剂。本发明应用于皮炎湿疹类疾病的临床治疗，具有抗炎、抗过敏、抗菌、保湿等作用， 且效果显著。
公开号为CN103027870A的中国专利公开了一种天然美白护手霜，它包括以下质量 百分比的组分：40-50％甘油、5-10％尿素、10-15％矿油、3-9％丝瓜精华、1-3％肉豆蔻酸 异丙脂、2-6％聚二甲基硅氧烷、2-4％桂花提取物、2-8％凡士林、1-3％月桂基磷酸酯钾、 1-3％鲸蜡硬脂醇、3-7％芦荟提取物、3-9％蛇油精华，余量为去离子水。本发明天然美白 护手霜具有丝瓜精华美白精华，天然美白无副作用，蛇油精华和芦荟提取物能有效舒缓皮肤 干裂、滋润皮肤，防冻防裂，同时该护手霜还具有天然桂花香味。
公开号为CN102895167A的中国专利公开了一种蛇油护手霜，具体涉及一种有效防 止皮肤粗糙干燥、冻裂的蛇油护手霜。本发明由蛇油20％—30％，甘油15％—20％，洋甘 菊精华液1％—3％，霍霍巴油1％—3％，红花籽油0.5％—1％，矿油0.2％—0.5％，鲸蜡 硬脂醇0.2％—0.5％，山梨醇0.2％—0.5％，羊胎素精华0.2％—0.5％，月桂醇硫酸酯钠 0.5％—2％，环已硅氧烷0.2％—0.5％，香精0.2％—0.5％，其余为医用凡士林。本发明富 含多种滋润保护营养成分，减少干燥、寒冷等恶劣环境对皮肤表层是伤害，促进肌肤新陈代 谢速度以及提高免疫力，恢复和保持双手肌肤弹性。
公开号为CN101537124的中国专利公开了一种治疗烧伤的药膏，药物组份为：龙脑 50-70g，刘寄奴80-100g，海螵蛸80-100g，煅炉甘石140-160g，硼砂90-110g，红花20-30g， 血竭30-50g，朱砂40-50g，露蜂房20-30g，白芨90-110g，生牡蛎13-150g，蛇油150-200g， 凡士林1800-2200g。先取前十二味纯净中药分别单味炮制后捣细过100目筛，然后均匀混 合，再将凡士林熔化煮沸，分别将蛇油和混合药粉加入凡士林中搅匀，冷却后封装。本发明 药膏具有快速止疼，控制创面渗出液所需时间短，消炎效果明显，治疗简便，创面愈后无疤 痕等优点，通过临床观察，其治疗效果明显比现有治疗烧伤药物更佳。
公开号为CN103610869A的中国专利公开了一种烧伤膏，它由下列原料制成的药膏： 红花、地榆、侧柏叶、三七、血竭、野菊花。将上述各原料药洗净，烘干，烤熟，研成末， 过筛后，将各原料药粉末混合均匀后用刺猬油和蛇油调和成膏状，即制成本发明所述的烧伤 膏。本发明提供的一种烧伤膏及其制备方法，可以解决现有烧伤类药物的缺点，能有效地治 疗热力烧伤、化学烧伤、放射性烧伤和物理性烧伤；制造工艺简单，安全可靠。
公开号为CN103638307A的中国专利公开了一种蛇油湿润烫伤膏，是由蛇油、虎杖、 黄柏、鸡内金、白及、地榆、樟脑、凡士林8种原料组成。它集蛇油、虎杖、黄柏、鸡内 金、白及、地榆、樟脑于一体，对烧烫伤创面治愈快，不需消痂植皮，治愈后不留疤痕，具 有清热、解毒、消肿止痛，收敛生肌，使用方便，制造简单，治疗费用低的特点。解决了现 有治疗烧、烫伤的药物治疗时间长，费用高，愈后易留有疤痕的问题。对于皮肤冻伤、溃烂 也有特殊的疗效。
公开号为CN103735846A的中国专利公开了一种冻疮膏及其制备方法，该冻疮膏由 以下成分按照重量配比配置而成：25-45份当归，15-25份红花，20-30份白芷，25-35份 桂皮，10-20份白芨，20-30份芦荟凝胶汁，5-10份蜂蜡茶籽油，20-30份蛇油，10-20份 维生素B3，15-30份尿囊素。有益效果：本发明的药物毒副作用小，伤口愈合快，止痒效 果好，治疗效果优良，价格低廉。
公开号为CN103393844A的中国专利公开了一种治疗胃病的药物配方，涉及医药配 方领域里的治疗胃病的药物配方，尤其是一种治疗时间短，成本低廉和治疗效果良好的治疗 胃病的药物配方。其由眼镜蛇脂肪、五步蛇脂肪、乌梢蛇脂肪和珍珠茶油按照一定的提炼方 式和一定的比例混合而成。此药物配方治疗胃病时间非常短，半个月左右可以治愈，而且此 配方简单，成本非常低廉，可以给患者节省不必要的开支；而在治疗效果上不会对肠胃产生 刺激性，也不会有其他任何的副作用。
公开号为CN102885875A的中国专利公开了一种治疗烧伤烫伤的药物配方，涉及医 药配方领域里的治疗烧伤烫伤的药物配方，尤其是一种治疗时间短，成本低廉和治疗效果良 好的治疗烧伤烫伤的药物配方。其由眼镜蛇脂肪、五步蛇脂肪、乌梢蛇脂肪和珍珠茶油按照 一定的提炼方式和一定的比例混合而成。此药物配方治疗烧伤烫伤时间非常短，伤口一般在 一周内愈合，而且此配方简单，成本非常低廉，可以给患者节省不必要的开支；而在治疗效 果上不会留下疤痕，也不会有其他任何的副作用。
在《乌梢蛇Ⅱ型胶原蛋白提取和纯化及对AA大鼠干预作用》文献资料上表明，胶原 蛋白是哺乳动物体内含量最多、分布最广的功能性蛋白，占蛋白质总量的25％～30％；并 实验表明乌梢蛇Ⅱ型胶原蛋白是通过口服后与体内的PP细胞作用，产生抑制性炎症因子， 从而达到抑制炎症因子的作用。
在《胶原寡聚肽保湿抗皱功效评价及其机制的初步探讨》文献资料上表明，胶原寡肽 可以在短期内显著增加皮肤角质层的含水量，改善眼周皱纹，并有提亮肤色的作用；在细胞 水平，可以显著促进成纤维细胞增殖。
上述文献资料表明，国内对蛇油利用研究应用较多，但对各种蛇油的制备方法研究很 少，传统方法是简单把蛇体内剥离的脂肪，在锅中熬炼而成，熬炼可使蛇油中不饱和脂肪酸 容易氧化，功效成分被破坏，使药效降低。也有人采用在超声波下提取，采用蒸馏的方法回 收溶剂，并通氮气，得到该精制蛇油。虽然在传统方法上做了一定改进，缩短熬制时间，使 产品质量有一定的提升，缩短蛇油高温炼制的时间，但仍然没有脱离高温熬制这一环节。另 外，蛇胶原蛋白直接与蛇油混合敷上皮肤，很难直接入皮肤吸收，因此研制一种有效保护蛇 油功效成分的蛇油制备方法具有十分重要的意义。
发明内容
蛇本身含有大量不饱和脂肪酸，并能长期存在，主要是蛇体中含有大量抗氧化的胶原 蛋白质或小肽，现有方法都直接先将脂肪和蛋白质剥离，在提取过程中采用隔离氧气减缓不 饱和脂肪酸氧化，但主要任务是在产品使用过程减缓不饱和脂肪酸氧化，目前已公开文献资 料无法达到这一目的，为了克服上述现有技术中的不足，本发明的目就是提供一种提取效率 高、提高蛇油中功效成分的乌风蛇油制备方法。
本发明采用如下技术方案：以药品级乌风蛇为原料，粉粹，加入丙酮，氮气保护浸提、 经活性炭脱臭脱色，得到精制乌风蛇油。丙酮浸提残渣分别加入中性蛋白酶和胰蛋白酶进行 酶解，高温处理后离心，上清液加入乙醚沉淀，沉淀即为小肽干燥物，与精制乌风蛇油混合 得乌风蛇油产品。
乌风蛇油产品是由精制乌风蛇油与小肽干燥物直接混合制成的，取一定量的小肽干燥 物再加入等重量的水溶解，再将精制乌风蛇油加热35～45℃后溶解，把小肽水溶液按比例 加入到溶解后的蛇油中，搅拌均匀后真空冷冻干燥所制成。
在一个实施方案中，乌风蛇油产品是由各原料成份以以下重量份组成：精制乌风蛇油 50份、小肽干燥物0.01～8份。
在一个具体实施方案中，其中各原料成分以以下重量份组成：精制乌风蛇油50份、 小肽干燥物0.05～5份。
在一个具体实施方案中，其中各原料成分以以下重量份组成：精制乌风蛇油50份、 小肽干燥物0.5～3份。
在一个具体实施方案中，其中各原料成分以以下重量份组成：精制乌风蛇油50份、 小肽干燥物1份混合后制成的。
所述精制乌风蛇油和小肽干燥物的制备方法，其具体步骤如下：
(1)粉粹：将药品级乌风蛇进行粉粹至10-20目，得蛇粉；
(2)丙酮浸提：向上述蛇粉加入丙酮，在氮气保护室温搅拌浸提两次，每次浸提 60-90min，经陶瓷膜过滤得浸提液，合并两次浸提液得丙酮滤液和蛇残渣；
(3)脱色脱臭：向丙酮滤液加入适量的中性活性碳颗粒，在氮气保护下室温脱色20-30 分钟，陶瓷膜过滤一次，40℃减压浓缩去除丙酮，得油状物，用两倍体积的乙醇进行萃取一 次，得乙醇萃取物，40℃减压浓缩去除乙醇得精制乌风蛇油。
(4)酶解：丙酮浸提残渣加入两倍重量的水，加入中性蛋白酶，至终浓度达到5-10U/L， 不断搅拌，在30℃下酶解1h，再加入胰蛋白酶，至终浓度达到15-20U/L，进行酶解，不断 搅拌，在37℃下酶解2-4h；
(5)小肽分离提取：90-100℃高温处理酶解液10-30min后，6000rpm离心5min，上清 液加入两倍体积乙醚静置5～20min，6000rpm离心5min，沉淀干燥得小肽干燥物。
在一个实施方案中，步骤(2)中所述丙酮的用量，其体积L/蛇粉重量kg的比例为3～ 6:1。
在一个实施方案中，步骤(3)中所述中性活性碳颗粒的用量，其重量kg/蛇粉丙酮滤液 体积L的比例为3～6:50，中性活性碳颗粒直径大小0.2-5mm。
在一个实施方案中，步骤(4)中所述中性蛋白酶和胰蛋白酶都可以从市场上购买，一 般中性蛋白酶活性为500U/kg，胰蛋白酶活性为300U/kg，“U”是指国际通用的酶活性单位。
技术效果
(1)本方法采用的是相对易得的药品级乌风蛇为原料，原料相对丰富。
(2)采用蛋白质内切酶对已变性蛋白的多肽链进行大片段酶解，能得到大量的小肽类物 质，用于乌风蛇油的抗氧化剂和蛇油护肤品的添加剂，将小肽类物质添加于蛇油中能大大提 高其利用率和肽类物质的稳定性。
(3)采用丙酮冷浸法进行提取蛇油，有效的避免了亚油酸的破坏，经丙酮浸提后的蛇蛋 白质会部分变性，更有利于后期的酶解过程，也能防止直接水解成单个氨基酸。
(4)本发明得到的产品出油率高，色泽浅，透明度高，无沉淀和悬浮物，黏性较小，亚 油酸含量高达到16％以上，产品保质期长。
具体实施方式
下面用本发明的实施实例来进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限制本发明。
实施例1
将药品级乌风蛇100kg进行粉粹至10-20目，得蛇粉。向蛇粉加入200L的丙酮，在氮 气保护室温搅拌浸提90min，经孔径为0.22μm的陶瓷膜过滤得浸提液，再向浸提过的蛇粉 加入200L的丙酮，在氮气保护室温搅拌浸提60min，经孔径为0.22μm的陶瓷膜过滤得浸提 液，合并两次浸提液得丙酮滤液和蛇残渣。向丙酮滤液加入0.5mm中性活性碳颗粒12kg， 在氮气保护下室温脱色20-30分钟，陶瓷膜过滤一次，40℃减压浓缩去除丙酮，得油状物， 用两倍体积的乙醇进行萃取一次，得乙醇萃取物，40℃减压浓缩去除乙醇得精制乌风蛇油 12.08kg。
将丙酮浸提残渣85kg加入170kg的水，加入5kg的中性蛋白酶，至终浓度达到5-10U/L， 不断搅拌，在30℃下酶解1h，再加入12kg胰蛋白酶，至终浓度达到15-20U/L，进行酶解， 不断搅拌，在37℃下酶解3h。100℃下高温处理酶解液15min后，6000rpm离心5min， 上清液加入两倍体积乙醚静置15min，6000rpm离心5min，沉淀干燥得小肽干燥物30kg。 将精制乌风蛇油50kg加热35～45℃后，加入小肽干燥物1kg后搅拌均匀后真空冷冻干燥所 制得乌风蛇油产品，经气相色谱仪检测所制蛇油产品中亚油酸得含量为16.39％。
对照实施例1
取药品级乌风蛇100kg，粉碎到通过10目筛，得蛇粉；将上述蛇粉加入400kg丙酮， 浸提150min，回收丙酮得得粗蛇油加入3％的中性活性炭，加热至50℃脱色20分钟，500 目过滤去除活性炭，即得精制乌风蛇油。经气相色谱仪检测所制蛇油产品中亚油酸得含量为 17.2％。
对照实施例2
按CN103468390A提供的方法，所述具体步骤如下：抽取蛇的脂肪组织，多次清洗， 去除混入的蛇皮、纤维等杂质；将抽取的脂肪进行加热炼制，10min后，停止加热，得 炼出液，1min内趁热用纱布过滤1遍，直至滤液肉眼看不见杂质，得到滤液和滤渣，所 得滤液为蛇油主液；将上述滤渣进行压榨5min，直至无油渗出为止，得压榨液；将上述 压榨液进行过滤1遍，所得滤液为滤渣中所含蛇油；合并过且过上述所得滤液得蛇油粗 产品；将蛇油粗产品用有机溶剂萃取3次，有机溶剂质量为蛇油粗产品质量的1倍，在 频率为30KHZ的超声波下提取5min,合并有机溶剂层液体，用蒸馏法回收有机溶剂，并 通氮气；再取回收有机溶剂后的蛇油产品，加有机溶剂萃取3次，有机溶剂质量为蛇油 粗产品质量的1倍，在频率为30KHZ的超声波下提取5min,合并有机溶剂层液体，蒸馏 法回收有机溶剂，并通氮气，除尽有机溶剂即得该精制蛇油。所述蛇的脂肪组织是腹部 抽取的脂肪。所述加热炼制温度为30℃。所述压榨压力为1000Psi。所述蒸馏法回 收有机溶剂，温度控制在40℃。所得蛇油为淡黄色或黄色油状液体，蛇腥味较重。经 气相色谱仪检测所得蛇油中亚油酸的含量为15.60％。
实施例2
将药品级乌风蛇200kg进行粉粹至10-20目，得蛇粉。向蛇粉加入400L的丙酮，在氮 气保护室温搅拌浸提90min，经孔径为0.22μm的陶瓷膜过滤得浸提液，再向浸提过的蛇粉 加入400L的丙酮，在氮气保护室温搅拌浸提60min，经孔径为0.22μm的陶瓷膜过滤得浸提 液，合并两次浸提液得丙酮滤液和蛇残渣。向丙酮滤液加入0.5mm中性活性碳颗粒25kg， 在氮气保护下室温脱色20-30分钟，陶瓷膜过滤一次，40℃减压浓缩去除丙酮，得油状物， 用两倍体积的乙醇进行萃取一次，得乙醇萃取物，40℃减压浓缩去除乙醇得精制乌风蛇油 26.65kg。
将丙酮浸提残渣170kg加入340kg的水，加入10kg的中性蛋白酶，至终浓度达到5-10U/L， 不断搅拌，在30℃下酶解1h，再加入25kg胰蛋白酶，至终浓度达到10-20U/L，进行酶解， 不断搅拌，在30℃下酶解4h。100℃下高温处理酶解液20min后，6000rpm离心5min， 上清液加入两倍体积乙醚静置20min，6000rpm离心5min，沉淀干燥得小肽干燥物75kg。 将精制乌风蛇油50kg加热35～45℃后，加入小肽干燥物1.5kg后搅拌均匀后真空冷冻干燥 所制得乌风蛇油产品，经气相色谱仪检测所制蛇油产品中亚油酸得含量为16.23％。
表1.产品放置不同时间后亚油酸含量情况