一种土甘草A及其提取方法和用途.pdf

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1、(10)申请公布号 CN 104341430 A (43)申请公布日 2015.02.11 CN 104341430 A (21)申请号 201410522224.9 (22)申请日 2014.09.30 C07D 493/04(2006.01) A61K 31/37(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (71)申请人 广西中医药大学 地址 530213 广西壮族自治区南宁市青秀区 五合大道 13 号 (72)发明人 韦建华 霍丽妮 黄茂春 陈睿 冯旭 (74)专利代理机构 北京远大卓悦知识产权代理 事务所 ( 普通合伙 ) 11369 代理人 靳浩 (54) 发明名称 。

2、一种土甘草 A 及其提取方法和用途 (57) 摘要 本 发 明 公 开 了 一 种 土 甘 草 A 及 其 提 取 方 法 和 用 途。 该 土 甘 草 A 的 结 构 式 为 ： 该 土 甘 草 A 的化学名称为3-(对甲氧苯基)-4-羟基-5-甲氧 基 -2 ， 2 - 二甲基 -6， 7- 二氢吡喃香豆素， 分子 式为C22H20O6， 相对分子量为380。 本发明的土甘草 A 具有抗肿瘤等生物活性， 并且其提取方法简便 易行， 提取率较高， 能有效应用到制备抗肿瘤药物 中， 且能对人胃癌细胞、 肝癌细胞株、 人肺癌细胞、 子宫颈癌细胞、 卵巢癌细胞等产生很强抑制作用。 (51)Int.。

3、Cl. 权利要求书 1 页 说明书 3 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书3页 (10)申请公布号 CN 104341430 A CN 104341430 A 1/1 页 2 1. 一种土甘草 A， 其特征在于， 所述土甘草 A 的结构式为 ： 所述土甘草A的化学名称为 ： 3-(对甲氧苯基)-4-羟基-5-甲氧基-2 ， 2 -二甲基-6， 7- 二氢吡喃香豆素 ； 所述土甘草 A 的分子式为 ： C22H20O6； 所述土甘草 A 的相对分子量为 ： 380。 2. 一种如权利要求 1 所述的土甘草 A 的提取方法， 其特征在于， 包括如。

4、下步骤 ： 1) 以两粤黄檀粗粉为原料， 以乙醇作为溶剂， 采用渗漉法进行提取， 蒸发溶剂后得到提 取物浸膏。 2) 将所述提取物浸膏加水悬浮， 然后向悬浮液加入石油醚萃取并分离石油醚部位浸 膏， 再向悬浮液中加入乙酸乙酯萃取得到乙酸乙酯部位浸膏 ； 3) 取所述乙酸乙酯部位浸膏， 反复用硅胶柱色谱分离， 得到无色透明颗粒状结晶化合 物， 即为目标产物土甘草 A。 3.一种如权利要求1所述的土甘草A的用途， 其特征在于， 所述土甘草A作为制备抗肿 瘤药物的用途。 权 利 要 求 书 CN 104341430 A 2 1/3 页 3 一种土甘草 A 及其提取方法和用途 技术领域 0001 本发明。

5、涉及医药化学技术领域， 具体涉及一种土甘草 A 及其提取方法， 以及将土 甘草 A 用于制备抗肿瘤药物上。 背景技术 0002 癌症已上升为仅次于心血管疾病的人类第二大 “杀手” 疾病。癌症和心血管疾病 已经成为死亡的首要原因。 从植物中寻找开发有效抗肿瘤新药的前景是广阔的， 目前， 众多 不同结构和作用机制的天然活性产物已成为国内外抗肿瘤新药研究的热点。 在我国连续启 动的两批重大新药创制项目中， 植物来源药物特别是利用我国植物资源的天然药物的研发 都被列为重点支持对象， 由于植物来源的抗肿瘤药物的作用机制独特， 抗癌疗效显著， 已在 临床应用上逐步占据主导地位。 0003 根据 中国植物志。

6、 记载， 黄檀属植物 (Dalbergia) 在我国有 28 种， 目前只有两种 被研究， 尤其是降香 Dalbergia odorifera 被研究得最多。许多药理活性均表明降香具有 抗糖尿病， 抗氧化， 抗高血糖， 抗炎， 肿瘤以及抗菌等作用， 因此从该属植物中开发出糖尿病 药物非常有意义。两粤黄檀 (Dalbergia benthami Prain)， 又名 ： 蕉藤麻， 两粤檀， 藤本， 生 于疏林和灌木丛中， 分布在广东、 广西、 海南等地。药用部位为茎， 可用于通经活血， 主治跌 打损伤、 筋骨疼痛和气滞血瘀所致月经不调等症状。 0004 目前， 对该植物的研究无任何文献报道.。 。

7、本发明首次从该植物中分离出并鉴定出 一化合物， 经核磁、 质谱鉴定为土甘草 A， 在植物中的含量高达 3.5。该化合物最初来源于 土甘草 Derris eriocarpa How 中， 但是该植物中含量较低， 使得应用受到局限。土甘草 A 属于香豆素类化合物， 具有抗肿瘤等生物活性， 因此， 本专利为该化合物的开发应用提供了 有力的保证。 发明内容 0005 本发明的一个目的是提供一种土甘草A， 该土甘草A具有抗肿瘤等生物活性。 另一 个目的是提供一种提取该土甘草A的方法， 并且该土甘草A能够应用在制备抗肿瘤药物中， 使提取得的抗肿瘤药物具备有效的预防和抑制肿瘤恶化的作用。 0006 为了解决。

8、上述技术问题， 本发明提供了一种土甘草 A 及其提取方法和用途。 0007 本发明的土甘草 A 的结构式为 ： 0008 0009 该土甘草 A 的化学名称为 ： 3-( 对甲氧苯基 )-4- 羟基 -5- 甲氧基 -2 ， 2 - 二甲 基 -6， 7- 二氢吡喃香豆素 ； 说 明 书 CN 104341430 A 3 2/3 页 4 0010 该土甘草 A 的分子式为 ： C22H20O6； 0011 该土甘草 A 的相对分子量为 ： 380。 0012 通过以下方法可以提取到该土甘草 A， 其包括如下步骤 ： 0013 1) 以两粤黄檀粗粉为原料， 以乙醇作为溶剂， 采用渗漉法进行提取，。

9、 蒸发溶剂后得 到提取物浸膏。 0014 2) 将提取物浸膏加水悬浮， 然后向悬浮液加入石油醚萃取并分离石油醚部位浸 膏， 再向悬浮液中加入乙酸乙酯萃取得到乙酸乙酯部位浸膏 ； 0015 3) 取所述乙酸乙酯部位浸膏， 反复用硅胶柱色谱分离， 得到无色透明颗粒状结晶 化合物， 即为目标产物土甘草 A。 0016 该土甘草 A 可以用于制备抗肿瘤药物， 比如制成抗肿瘤的注射剂、 片剂、 丸剂、 胶 囊、 悬浮剂或乳剂中的一种或多种药品。 0017 本发明的有益效果 ： 本发明从两粤黄檀中提取到的土甘草 A 具有抗肿瘤等生物活 性。并且本发明的提取方法简便易行， 提取率较高， 能有效应用到制备抗肿。

10、瘤药物中， 且能 对人胃癌细胞、 肝癌细胞株、 人肺癌细胞、 子宫颈癌细胞、 卵巢癌细胞等产生很强抑制作用。 具体实施方式 0018 下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明， 以令本领域技术人员参照说明书 文字能够据以实施。 0019 实施例 1 0020 本发明土甘草 A 的提取方法包括如下具体步骤 ： 0021 1) 取两粤黄檀粗粉 10.0kg， 用 10 倍量 80乙醇渗漉提取， 合并提取液， 蒸发溶剂 后得到提取物浸膏 ； 0022 2) 将提取物浸膏加水悬浮， 然后向悬浮液加入石油醚萃取并分离石油醚部位浸 膏， 再向悬浮液中加入乙酸乙酯萃取得到乙酸乙酯部位浸膏 ； 0023 3)。

11、 取乙酸乙酯部位浸膏 30g， 反复用硅胶柱色谱分离， 得到无色透明颗粒状结 晶化合物， 即为目标产物土甘草 A。该硅胶柱色谱分离的做法可以根据以下操作 ： 先以氯 仿 - 丙酮梯度洗脱 ( 氯仿 80 1 50 1 30 1 151 7 1 3 1 丙 酮 )， 共收集 358 流份， 用 TLC 检识合并， 合并相同流分， 共得到 14 个组分 (A、 B、 C、 D、 E、 F、 G、 H、 I、 G、 K、 L、 M、 N) ； 其中， I 组分为白色粉末状， 然后取 300mg 组分 I， 以石油醚 - 丙酮梯 度洗脱 (15 1 7 1 3 1)， 共收集 103 流份， 用 TL。

12、C 检识合并， 合并相同流分， 得到 的组分在石油醚 - 丙酮 (7 1) 洗脱部位， 得到无色透明颗粒状结晶化合物 80.55mg， 该无 色透明颗粒状结晶化合物为土甘草 A。 0024 上述实施例 1 提取得的土甘草 A 的结构式为 ： 0025 0026 该土甘草 A 的化学名称为 3-( 对甲氧苯基 )-4- 羟基 -5- 甲氧基 -2 ， 2 - 二 说 明 书 CN 104341430 A 4 3/3 页 5 甲基 -6， 7- 二氢吡喃香豆素， 分子式为 C22H20O6， 相对分子量为 380。经过理化分析仪得 到其理化性质为 ： 无色透明颗粒状， m.p.203-206。EI。

13、-MS(m/z) ： 381M+1+， 380M+， 315M-15， 337， 321， 307， 233， 232， 217， 203， 175， 161， 148， 138， 133。1H-NMR(400MHz， CDCl3) ： 9.97(1H， s， 4-OH)， 7.46(2H， dd， J 11.4Hz， 2.9Hz， H-2， H-6 )， 6.97(2H， dd， J 8.7Hz， 2.9Hz， H-3， H-5 )， 6.63(1H， s， H-Ar)， 6.50(1H， d， J 10Hz， H-4 )， 5.77(1H， d， J 10Hz， H-3 )， 3.96(3。

14、H， s， 4 -OCH3)， 3.77(3H， s， 5-OCH3)， 1.48(6H， s， -CH3)。13C-NMR(125MHz， CDCl3) ： 160.1(C-2)， 101.7(C-3)， 162.6(C-4)， 153.7(C-5)， 124.2(C-6)， 157.6(C-7)， 110.6(C-8)， 152.1(C-9)， 103.8(C-10)， 123.2(C-1 )， 131.4(C-2 )， 113.5(C-3 )， 158.8(C-4 )， 113.5(C-5 )， 131.4(C-6 )， 77.5(C-2 )， 115.0(C-3 )， 131.7(C-。

15、4 )， 64.4(3 -OCH3)， 55.2(5-OCH3)。 0027 实施例 2 0028 将上述实施例 1 提取得到的土甘草 A 进行体外抗肿瘤活性实验 ： 0029 MTT 法广泛用于一些生物活性因子的活性检测、 大规模的抗肿瘤药物筛选、 细胞毒 性试验以及肿瘤放射敏感性测定等， 具有灵敏度高、 经济等特点。外源性 MTT 能被活细胞线 粒体中的琥珀酸脱氢酶还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒 (Formazan) 并沉积在细胞中， 用酶联免疫检测仪在 490nm 波长处测定其光吸收值， 可间接反映活细胞数量。在一定细胞 数范围内， MTT 结晶形成的量与细胞数成正比。通过计算化合物对肿。

16、瘤细胞抑制率为 50 时， 所对应药物的浓度， 称为半数抑制浓度 IC50， 即半数抑制浓度， 一般来说， IC50的数值越 小， 说明该药物对细胞的抑制活性越高。本实验利用 Bliss 法计算得到了本发明的土甘草 A 和 5-FU 对人胃癌细胞、 肝癌细胞株、 人肺癌细胞、 子宫颈癌细胞、 卵巢癌细胞等抑制率为 50时的 IC50值。实验结果如下表所示 ： 0030 从实施例2的结果可以看出， 本发明的土甘草A经体外抗肿瘤实验表明， 其具有强 的抗肿瘤活性成分。本发明的土甘草 A 可以制成抗肿瘤的注射剂、 片剂、 丸剂、 胶囊、 悬浮剂 或乳剂中的一种或多种药品。本发明的土甘草 A 及其提取。

17、成的药物都能对人胃癌细胞、 肝 癌细胞株、 人肺癌细胞、 子宫颈癌细胞、 卵巢癌细胞等产生很强抑制作用。从表中的对比数 据可得， 其对子宫颈癌细胞 HeLa 的抑制作用最为明显， 治疗效果更好， 并且本发明的土甘 草A对其他癌细胞的抑制作用也比5-FU的效果要好， 本发明为研究开发新的抗肿瘤药物提 供了新的思路。 0031 尽管本发明的实施方案已公开如上， 但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列 运用， 它完全可以被适用于各种适合本发明的领域， 对于熟悉本领域的人员而言， 可容易地 实现另外的修改， 因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下， 本发明并不限 于特定的细节。 说 明 书 CN 104341430 A 5 。