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1、(10)申请公布号 CN 104262474 A (43)申请公布日 2015.01.07 CN 104262474 A (21)申请号 201410509728.7 (22)申请日 2014.09.28 C07K 14/415(2006.01) C12P 21/06(2006.01) A61K 38/16(2006.01) A61P 9/10(2006.01) (71)申请人 苏州普罗达生物科技有限公司 地址 215000 江苏省苏州市高新区锦峰路 8 号 15 号楼 (72)发明人 罗瑞雪 (54) 发明名称 一种硒蛋白 S 激动剂多肽及其制备方法、 应 用 (57) 摘要 本发明涉及药物。
2、领域， 具体涉及预防或治疗 脑卒中的多肽化合物。硒蛋白 S 激动剂多肽 1， 其 特征在于 ： 其序列为 GGADRAAAAVEPDVVVKRQERGD。 所述多肽 1 的制备方法， 步骤包括 （1） 煎煮，（2） 酶 解，（3） 蛋白质分离，（4） 半制备 RP-HPLC 分离纯 化，（5） 冻干。所述的酶解采用木瓜蛋白酶和碱性 蛋白酶酶解。 所述的蛋白质分离采用大孔树脂、 葡 聚糖凝胶。硒蛋白 S 激动剂多肽 1 在预防或治疗 脑卒中中的应用。本发明中的硒蛋白 S 激动剂多 肽1可以靶向促进硒蛋白S表达， 提高脑组织中硒 蛋白 S 的含量， 达到预防或治疗脑卒中的作用， 且 安全性好。 (。
3、51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 2 页 序列表 1 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书2页 序列表1页 (10)申请公布号 CN 104262474 A CN 104262474 A 1/1 页 2 1. 一种硒蛋白 S 激动剂多肽， 其特征在于 ： 其序列为 GGADRAAAAVEPDVVVKRQERGD。 2. 一种权利要求 1 所述多肽的制备方法， 其特征在于 ： 步骤包括 （1） 煎煮，（2） 酶解， （3） 蛋白质分离，（4） 半制备 RP-HPLC 分离纯化，（5） 冻干。 3.根据权利要求2所述的多肽的制备方法。
4、， 其特征在于 ： 步骤 （2） 中所述的酶解采用木 瓜蛋白酶和碱性蛋白酶酶解。 4. 根据权利要求 2 所述的多肽的制备方法， 其特征在于 ： 所述的蛋白质分离采用大孔 树脂、 葡聚糖凝胶。 5. 根据权利要求 1 所述的多肽在制备预防或治疗脑卒中药物中的应用。 权 利 要 求 书 CN 104262474 A 2 1/2 页 3 一种硒蛋白 S 激动剂多肽及其制备方法、 应用 技术领域 ： 0001 本发明涉及药物领域， 具体涉及用于预防或治疗脑卒中的多肽提取物。 背景技术 ： 0002 脑卒中已继心脏病和癌症成为人类第三大死亡原因， 也是全球成人致残的主要原 因之一。现阶段， 治疗脑卒中。
5、的方法多为药物治疗。多采用尿激酶， 华法林和阿斯平林等抗 凝血药物治疗， 或采用活血化瘀的中药治疗， 但往往因剂量不当反而引起脑出血， 给治疗带 来更大的危害。 0003 近几年关于缺血性脑卒中的研究已逐渐发现炎症反应对卒中后脑组织损伤具有 重要影响， 脑缺血后持续发展的炎症可加重缺血损伤， 所以抗炎治疗的研究逐渐受到重视 并广泛开展。硒蛋白 S 是一种新发现的内质网和细胞膜驻留硒蛋白。以往的研究结果揭示 硒蛋白 S 可以保护细胞拮抗氧化损伤及内质网应激诱导的细胞凋亡 ； 参与脂蛋白代谢、 精 子发育过程、 炎症反应及将错误折叠蛋白从内质网腔逆向转移到细胞质中然后降解的过程 ( 即内质网相关蛋。
6、白降解 )。曾有报道， 硒蛋白 S 基因多态性与糖尿病、 冠状动脉心脏病或 先兆子痫等疾病密切相关。最新的研究发现， 硒蛋白 S 与脑卒中密切相关。有实验证实体 外培养的星形胶质细胞受到缺血损害时， 硒蛋白 S 的表达增加， 并且可以减轻星形胶质的 缺血损伤， 进而在疾病的发生发展中起到预防或治疗脑卒中的作用。 0004 茶叶中除了富含硒以外， 还富含具有硒蛋白 S 激动剂作用的多肽， 但是过去的技 术有限， 没有从茶叶中提取制备硒蛋白 S 激动剂多肽的报道。 发明内容 ： 0005 本发明目的是针对现有预防或治疗脑卒中药物的特点， 设计一种从茶叶中天然提 取的多肽提取物， 能有效治疗或预防脑。
7、卒中。 0006 技术方案 0007 硒蛋白 S 激动剂多肽 1， 其特征在于 ： 其序列为 GGADRAAAAVEPDVVVKRQERGD。所述 多肽 1 的制备方法， 步骤包括 (1) 煎煮， (2) 酶解， (3) 蛋白质分离， (4) 半制备 RP-HPLC 分 离纯化， (5) 冻干。所述的酶解采用木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶酶解。所述的蛋白质分离采 用大孔树脂、 葡聚糖凝胶。硒蛋白 S 激动剂多肽 1 在预防或治疗脑卒中中的应用。 0008 有益结果 ： 0009 本发明中的硒蛋白 S 激动剂多肽 1 可以靶向促进硒蛋白 S 表达， 提高脑组织中硒 蛋白 S 的含量， 达到预防或治疗脑卒。
8、中的作用， 且安全性好。 具体实施方式 0010 实施例 1 0011 多肽的化学合成方法 0012 将茶叶加水煎煮2h后， 冷却至室温 ； 加入1木瓜蛋白酶和0.5碱性蛋白酶酶解 说 明 书 CN 104262474 A 3 2/2 页 4 4h ； 采用大孔树脂按照分子量分离蛋白质， 再用半制备 RP-HPLC 分离纯化， 得到的产物冻干 后， 即为硒蛋白 S 激动剂多肽 1。应用上述方法提取的激动剂多肽 1， 经过质谱鉴定， 序列为 GGADRAAAAVEPDVVVKRQERGD， 该序列为全新序列。也可以委托上海生工合成。 0013 实施例 2 0014 硒蛋白 S 激动剂多肽 1 的。
9、体外细胞凋亡的测定 0015 本实验研究了硒蛋白 S 激动剂多肽 1 抑制大鼠脑星形胶质细胞凋亡的作用。当细 胞用 10mol/LTNF- 处理后， 经 TUNEL 染色后发现与培养基对照组相比出现了很多绿色 亮点， 说明体系中存在凋亡的细胞。当 20mol/L 硒蛋白 S 激动剂多肽 1 与 TNF- 共孵 育后， 镜检看到比单纯加 TNF- 的对照组较少的绿色亮点。对拍摄照片进行计数并统计 后， 发现用 10mol/LTNF- 处理的细胞凋亡率约为 66.3， 而 20mol/L 激动剂多肽 1 与 TNF- 共同处理的细胞凋亡率减少到 31.3 (p 苏州普罗达生物科技有限公司 一种硒蛋白 S 激动剂多肽及其制备方法、 应用 1 PatentIn version 3.3 1 23 PRT 人工序列 1 Gly Gly Ala Asp Arg Ala Ala Ala Ala Val Glu Pro Asp Val Val Val 1 5 10 15 Lys Arg Gln Glu Arg Gly Asp 20 序 列 表 CN 104262474 A 5 。