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1、(10)申请公布号 CN 104045690 A (43)申请公布日 2014.09.17 CN 104045690 A (21)申请号 201410286781.5 (22)申请日 2014.06.25 C07K 7/08(2006.01) A61K 38/10(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (71)申请人 苏州普罗达生物科技有限公司 地址 215000 江苏省苏州市高新区竹园路 209 号 (72)发明人 罗瑞雪 (54) 发明名称 生长抑素受体激动剂多肽及其应用 (57) 摘要 本发明涉及药物领域， 具体涉及具有抑制 生长抑素表达， 治疗肝癌的多肽。其序列为 。
2、GGLGLPFLATQNAAS 是全新的序列， 体外促进生长 抑素结合， 并在体内试验中提高荷瘤小鼠生存率， 具有潜在的新药开发价值。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 4 页 序列表 1 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书4页 序列表1页 (10)申请公布号 CN 104045690 A CN 104045690 A 1/1 页 2 1. 生长抑素受体激动剂多肽， 其特征在于其序列为 GGLGLPFLATQNAAS。 2. 一种药物组合物， 其特征在于其包含如权利要求 1 所述多肽与一种以上药学上可接 受的赋形剂、 填充剂。
3、、 粘合剂、 润滑剂、 崩解剂、 或稳定剂。 3. 如权利要求 2 所述的药物组合物， 其特征在于， 所述组合物为注射剂。 4. 如权利要求 1 所述的多肽， 其特征在于有效剂量为 10mg/kg。 5. 如权利要求 1 所述的生长抑素受体激动剂多肽在制备治疗肝癌药物中的应用。 权 利 要 求 书 CN 104045690 A 2 1/4 页 3 生长抑素受体激动剂多肽及其应用 技术领域 0001 本发明涉及生长抑素受体激动剂多肽及其应用， 具体涉及具有促进生长抑素受体 活性， 治疗肝癌的多肽。 背景技术 0002 肝癌是我国最常见的恶性肿瘤之一， 20 世纪90 年代以来， 我国肝癌死亡率已。
4、上升 到恶性肿瘤的第 2 位， 每年约有 13 万人死于肝癌。原发性肝癌病情发展快， 若不经治疗， 自 然生存期平均为 4.3 个月， 即使手术切除预后也不理想， 5 年生存率为 37.2， 小肝癌手术 后 5 年生存率也仅为 53.5。影响肝癌患者手术治疗效果的主要原因是复发和转移。肝癌 术后复发率可高达60% 以上， 即使小肝癌术后复发率亦高达40%。 目前生物靶向治疗肿瘤是 非常有前景的， 靶向治疗是针对肿瘤发生过程中阻断某个或多个信号通路， 达到治疗肿瘤 的目的。 0003 生长抑素除了具有抑制消化道激素分泌外， 还有抑制消化道肿瘤如胃癌、 胰腺癌、 肝癌等肿瘤细胞增生的作用， 因而生。
5、长抑素成为潜在的治疗肿瘤的药物， 尤其是对于肝癌， 它具有抑制肿瘤生长， 诱导细胞凋亡等作用。 目前已有文献报道， 将人工合成的长效生长抑 素类似物用于晚期肝癌的治疗并取得一定效果。药理学研究证实， 生长抑素与肿瘤组织中 的生长抑素受体 （SSTR） 特异结合才能发挥抑制肿瘤生长的作用。包括肝癌在内的许多实 体肿瘤均存在 SSTR 的表达， 而且体外受体放射自显影和放射配体结合研究也发现肝癌组 织存在 SSTR。因此， 生长抑素受体激动剂， 可以促进 SSTR 的活性， 抑制肿瘤的生长， 是预防 和治疗肝癌复发的新靶点。但是， 尚未有开发成熟的生长抑素受体激动剂多肽的治疗肝癌 的药物。 000。
6、4 本专利中的生长抑素受体激动剂多肽 2 已证明在肝癌中有效， 具有在其他肿瘤模 型中开发的前景。 发明内容 0005 发明目的 本发明提供全新的序列， 该序列生长抑素受体激动剂， 对预防和治疗肝癌复发具有很 好的疗效。 0006 技术方案 生长抑素受体激动剂多肽， 其特征在于其序列为 GGLGLPFLATQNAAS。 0007 生长抑素受体激动剂多肽对预防和治疗肝癌复发药物中的应用。 0008 有益效果 利用固相合成法化学合成生长抑素受体激动剂多肽， 该多肽具有全新的序列， 该多肽 可促进生长抑素受体的活性， 预防和治疗肝癌复发。在 1 微摩尔水平上体外促进生长抑素 结合， 并在体内试验中提。
7、高荷瘤小鼠生存率， 具有潜在的新药开发价值。 说 明 书 CN 104045690 A 3 2/4 页 4 具体实施方式 0009 本发明涉及多肽由吉尔生化 （上海） 合成。 0010 实施例 1 生长抑素受体激动剂多肽对体外生长抑素受体与生长抑素亲和力的影响。 0011 将对数生长的 HepG2 细胞， 以 1.0105加入 96 孔培养板中， 培养 24h， 实验孔、 阳 性药物对照孔分别加入不同浓度的实验药物生长抑素受体激动剂多肽 2 和阳性对照药物 长春新碱 ； 空白组加入相同体积的溶剂， 同时， 加入 125I 标记的生长抑素。每孔设五个复孔， 培养 48h。洗去上清液， 用 - 液。
8、体闪烁计数器计算放射强度， 判断生长抑素受体与生长抑素 的结合力， 放射强度强度越强， 结合越多， 反之， 放射强度强度越弱， 结合越少。 结果表明， 随 生长抑素受体激动剂多肽 2 浓度增加， 与生长抑素结合逐渐增加， 说明与生长抑素结合能 力随药物浓度的增加而不断减加。 0012 表 1 多肽对 HepG2 对体外生长抑素受体与生长抑素亲和力的影响 实施例 2 生长抑素受体激动剂多肽 2 对体外培养肿瘤细胞的生长和存活 IC50。 0013 采用 MTT 比色法。将对数生长的 HepG2 细胞， 以 1.0105 加入 96 孔培养板中， 培 养 24h， 实验孔、 阳性药物对照孔分别加入。
9、不同浓度的实验药物生长抑素受体激动剂多肽 2 和阳性对照药物长春新碱 ； 空白组加入相同体积的溶剂。每孔设五个复孔， 培养 48h， 分别 在 0h、 2h、 8h、 14h、 20h、 24h、 36h、 ， 48h 每孔加入 MTT， 作用 4h 后， 加入 DMSO， 孵育 30min， 在 酶标仪 620nm 处测定吸光度 A 值， 按公式肿瘤细胞生长抑制率 （1- 实验组吸光值 / 对照 组吸光值） 100。计算出实验药物的 IC50 为 7.49M。 0014 实施例 3 生长抑素受体激动剂多肽对 HepG2 细胞迁移的作用。 0015 将 10mg/ml Matrigel（BD 。
10、公司， USA）用无血清的细胞培养液以 1:3 稀释， 涂布 于 Transwell 小室 （Greiner 公司， USA） 膜上， 室温风干。将培养到对数生长期的 HepG2 细 胞用胰蛋白酶消化， 收集， 用无血清细胞培养液重悬， 于显微镜下计数， 将细胞浓度调整到 1105 个 /ml。配制各组试验用液， 分组如下 ： 空白对照组 ： 为不含药物的无血清细胞培养 液 ； 恩度组 ： 用不含药物的无血清细胞培养液将 5mg/ml 的恩度储液稀释到预定浓度 ； 生长 说 明 书 CN 104045690 A 4 3/4 页 5 抑素受体激动剂多肽组 ： 用不含药物的无血清细胞培养液将生长抑。
11、素受体激动剂多肽稀释 到各个预定浓度。 将细胞接种到Transwell小室中， 每孔100l， 并将各组试验用液加入小 室中。24 孔板中加入 0.6ml 含 5% 胎牛血清和 1% 内皮细胞生长因子 （ECGS） 的细胞培养液 刺激细胞迁移， 于 5%CO2， 37孵育 24 小时。弃去孔中培液， 用无水乙醇常温固定 30 分钟， 0.1% 结晶紫常温染色 10 分钟， 清水漂净， 用棉签轻轻擦掉上层未迁移细胞， 显微镜下观察 并随机选择四个视野拍照计数。按照公式计算迁移抑制率 （migration inhibition,MI） ： MI（%） =(1-Ntest/Ncontrol)100% 其中 Ntest 为测试组的细胞迁移数， Ncontrol 为空白对照组的细胞迁移数。试验得到 的结果以 mean SD 表示， 并进行统计 T 检验， *P 苏州普罗达生物科技有限公司 生长抑素受体激动剂多肽及其应用 1 PatentIn version 3.3 1 15 PRT 人工序列 1 Gly Gly Leu Gly Leu Pro Phe Leu Ala Thr Gln Asn Ala Ala Ser 1 5 10 15 序 列 表 CN 104045690 A 7 。