一种展库酸A的提取方法.pdf

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1、(10)申请公布号 CN 102863496 A (43)申请公布日 2013.01.09 CN 102863496 A *CN102863496A* (21)申请号 201210366662.1 (22)申请日 2012.09.28 C07J 9/00(2006.01) (71)申请人南京泽朗农业发展有限公司地址 211225 江苏省南京市溧水县白马镇工业集中区食品园 3 号 (72)发明人苏刘花 (54) 发明名称一种展库酸 A 的提取方法 (57) 摘要本发明公开了一种展库酸 A 的提取方法，属于天然药物化学领域。所述的方法包括以下过程：以玉桂薄孔菌子实体为原料，。

2、加入闪式提取器中，以 95% 乙醇溶液为提取溶剂，进行闪式提取，过滤得到提取液，浓缩，浓缩液经过双水相溶剂系统萃取，收集有机相，浓缩后采用高速逆流色谱分离，以氯仿 - 甲醇 - 水为溶剂系统，流分减压浓缩，即得展库酸 A。本发明采用闪式提取、双水相溶剂系统萃取和高速逆流色谱分离技术，高效环保，适合产业规模化生产。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页说明书 2 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请权利要求书 1 页说明书 2 页 1/1 页 2 1. 一种展库酸 A 的提取方法，其特征在于包括以下步骤：（1）以玉。

3、桂薄孔菌子实体为原料，于 65干燥至恒重，粉碎，加入闪式提取器中，以 95% 乙醇溶液为提取溶剂，进行闪式提取，过滤得到提取液；（2）提取液浓缩后得到粗提物，用双水相溶剂系统进行萃取，收集有机相萃取液，减压回收溶剂得浓缩液；（3）将浓缩液用高速逆流色谱分离纯化，以氯仿 - 甲醇 - 水两相溶剂系统，上相为固定相，下相为流动相，根据图谱收集成分，低温浓缩干燥即得展库酸 A。 2. 如权利要求 1 所述的一种展库酸 A 的提取方法，其特征在于所述步骤（1）中闪式提取电压为 140-160V，提取时间为 90s-120s。 3. 如权利要求 1 。

4、所述的一种展库酸 A 的提取方法，其特征在于所述步骤（2）中双水相溶剂系统为乙醇 / 硫酸铵双水相体系，称取 22g 硫酸铵加入 65ml 水中，溶解结束加入 32ml 无水乙醇。 4.如权利要求1所述的一种展库酸A的提取方法，其特征在于所述步骤（3）中氯仿-甲醇 - 水体积比为（12-14）：（8-10）：（5-8）。权利要求书 CN 102863496 A 2 1/2 页 3 一种展库酸 A 的提取方法技术领域 0001 本发明属于天然物质的提取技术领域，涉及一种展库酸 A 的提取方法。背景技术 0002 展库酸 A（Zhankuic acid 。

5、A），分子式为 C29H40O5，分子量为 468.63，是从多孔菌科 (Polyporaceae) 玉桂薄孔菌Antrndia cinnamomea Chang & Chou,sp.nov.子实体中分离得到的一种活性成分。研究发现，展库酸 A 对淋巴白血病细胞 P388 呈细胞毒活性， IC50 为 1.8g/ml。 0003 经文献检索，国内尚未发现展库酸 A 的工业提取方法相关报道。发明内容 0004 本发明的目的是提供一种高效、环保的展库酸 A 的提取方法。 0005 为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：（1）以玉桂薄孔菌子实体为原料，于 65干燥至恒重。

6、，粉碎，加入闪式提取器中，以 95% 乙醇溶液为提取溶剂，进行闪式提取，过滤得到提取液；（2）提取液浓缩后得到粗提物，用双水相溶剂系统进行萃取，收集有机相萃取液，减压回收溶剂得浓缩液；（3）将浓缩液用高速逆流色谱分离纯化，以氯仿 - 甲醇 - 水两相溶剂系统，上相为固定相，下相为流动相，根据图谱收集成分，低温浓缩干燥即得展库酸 A。 0006 所述步骤（1）中闪式提取电压为 140-160V，提取时间为 90s-120s。 0007 所述步骤（2）中双水相溶剂系统为乙醇 / 硫酸铵双水相体系，称取 22g 硫酸铵加入 65ml 水中，溶。

7、解结束加入 32ml 无水乙醇。 0008 所述步骤（3）中氯仿 - 甲醇 - 水体积比为（12-14）：（8-10）：（5-8）。 0009 本发明的有益效果是：（1）本发明采用闪式提取法，快速高效、低耗能、环保；（2）本发明所用乙醇 / 硫酸铵双水相体系可以回收、重复利用，节约了试剂，降低了成本；（3）本发明利用高速逆流色谱分离展库酸 A，分离过程无产品损失，高效，制备周期短。 0010 具体实施方式：下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。 0011 实施例 1 ：取玉桂薄孔菌子实体 10。

8、0g，于 65干燥至恒重，粉碎，加入闪式提取器中，以 95% 乙醇溶液为提取溶剂，提取电压为 150V，提取时间为 100s，进行闪式提取，过滤得到提取液，提取液浓缩后得到粗提物；称取 22g 硫酸铵加入 65ml 水中，溶解结束加入 32ml 无水乙醇，建立乙醇 / 硫酸铵双水相体系，将粗提物加入 3L 乙醇 / 硫酸铵双水相体系中，振荡摇匀，静置，收集上相，减压回收溶剂得浓缩液；取氯仿、甲醇、水按 13:8:7 比例混合，静置分层，取上相泵入色谱管，开启高速逆流色谱仪，调整转速为 900rpm，同时把下相以 2.5ml/min。

9、流速说明书 CN 102863496 A 3 2/2 页 4 泵入，注入浓缩液，紫外检测器监测，监测波长为 266nm，收集流分，减压浓缩后，干燥即得展库酸 A，含量 96.4%。 0012 实施例 2 ：取玉桂薄孔菌子实体 100g，于 65干燥至恒重，粉碎，加入闪式提取器中，以 95% 乙醇溶液为提取溶剂，提取电压为 160V，提取时间为 120s，进行闪式提取，过滤得到提取液，提取液浓缩后得到粗提物；称取 22g 硫酸铵加入 65ml 水中，溶解结束加入 32ml 无水乙醇，建立乙醇 / 硫酸铵双水相体系，将粗提物加入 2.5L。

10、乙醇 / 硫酸铵双水相体系中，振荡摇匀，静置，收集上相，减压回收溶剂得浓缩液；取氯仿、甲醇、水按 14:9:8 比例混合，静置分层，取上相泵入色谱管，开启高速逆流色谱仪，调整转速为 850rpm，同时把下相以 3ml/min 流速泵入，注入浓缩液，紫外检测器监测，监测波长为 266nm，收集流分，减压浓缩后，干燥即得展库酸 A，含量 94.6%。 0013 实施例 3 ：取玉桂薄孔菌子实体 100g，于 65干燥至恒重，粉碎，加入闪式提取器中，以 95% 乙醇溶液为提取溶剂，提取电压为 160V，提取时间为 90s，进行闪式提。

11、取，过滤得到提取液，提取液浓缩后得到粗提物；称取 22g 硫酸铵加入 65ml 水中，溶解结束加入 32ml 无水乙醇，建立乙醇 / 硫酸铵双水相体系，将粗提物加入 3L 乙醇 / 硫酸铵双水相体系中，振荡摇匀，静置，收集上相，减压回收溶剂得浓缩液；取氯仿、甲醇、水按 12:10:5 比例混合，静置分层，取上相泵入色谱管，开启高速逆流色谱仪，调整转速为 800rpm，同时把下相以 3ml/min 流速泵入，注入浓缩液，紫外检测器监测，监测波长为 266nm，收集流分，减压浓缩后，干燥即得展库酸 A，含量 94.9%。 0014 实。

12、施例 4 ：取玉桂薄孔菌子实体 100g，于 65干燥至恒重，粉碎，加入闪式提取器中，以 95% 乙醇溶液为提取溶剂，提取电压为 140V，提取时间为 120s，进行闪式提取，过滤得到提取液，提取液浓缩后得到粗提物；称取 22g 硫酸铵加入 65ml 水中，溶解结束加入 32ml 无水乙醇，建立乙醇 / 硫酸铵双水相体系，将粗提物加入 2L 乙醇 / 硫酸铵双水相体系中，振荡摇匀，静置，收集上相，减压回收溶剂得浓缩液；取氯仿、甲醇、水按 13:10: 5 比例混合，静置分层，取上相泵入色谱管，开启高速逆流色谱仪，调整转速为 850rpm，同时把下相以 3ml/min 流速泵入，注入浓缩液，紫外检测器监测，监测波长为 266nm，收集流分，减压浓缩后，干燥即得展库酸 A，含量 95.5%。说明书 CN 102863496 A 4 。

摘要
申请专利号：	CN201210366662.1	申请日：	2012.09.28
公开号：	CN102863496A	公开日：	2013.01.09
当前法律状态：	撤回	有效性：	无权
法律详情：	发明专利申请公布后的视为撤回IPC(主分类):C07J 9/00申请公布日:20130109\|\|\|实质审查的生效IPC(主分类):C07J 9/00申请日:20120928\|\|\|公开
IPC分类号：	C07J9/00	主分类号：	C07J9/00
申请人：	南京泽朗农业发展有限公司
发明人：	苏刘花
地址：	211225 江苏省南京市溧水县白马镇工业集中区食品园3号
优先权：
专利代理机构：		代理人：
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内容摘要

本发明公开了一种展库酸A的提取方法，属于天然药物化学领域。所述的方法包括以下过程：以玉桂薄孔菌子实体为原料，加入闪式提取器中，以95%乙醇溶液为提取溶剂，进行闪式提取，过滤得到提取液，浓缩，浓缩液经过双水相溶剂系统萃取，收集有机相，浓缩后采用高速逆流色谱分离，以氯仿-甲醇-水为溶剂系统，流分减压浓缩，即得展库酸A。本发明采用闪式提取、双水相溶剂系统萃取和高速逆流色谱分离技术，高效环保，适合产业规模化生产。

权利要求书

权利要求书一种展库酸A的提取方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）以玉桂薄孔菌子实体为原料，于65℃干燥至恒重，粉碎，加入闪式提取器中，以95%乙醇溶液为提取溶剂，进行闪式提取，过滤得到提取液；
（2）提取液浓缩后得到粗提物，用双水相溶剂系统进行萃取，收集有机相萃取液，减压回收溶剂得浓缩液；
（3）将浓缩液用高速逆流色谱分离纯化，以氯仿‑甲醇‑水两相溶剂系统，上相为固定相，下相为流动相，根据图谱收集成分，低温浓缩干燥即得展库酸A。
如权利要求1所述的一种展库酸A的提取方法，其特征在于所述步骤（1）中闪式提取电压为140‑160V，提取时间为90s‑120s。
如权利要求1所述的一种展库酸A的提取方法，其特征在于所述步骤（2）中双水相溶剂系统为乙醇/硫酸铵双水相体系，称取22g硫酸铵加入65ml水中，溶解结束加入32ml无水乙醇。
如权利要求1所述的一种展库酸A的提取方法，其特征在于所述步骤（3）中氯仿‑甲醇‑水体积比为（12‑14）：（8‑10）：（5‑8）。

说明书

说明书一种展库酸A的提取方法
技术领域
本发明属于天然物质的提取技术领域，涉及一种展库酸A的提取方法。
背景技术
展库酸A（Zhankuic acid A），分子式为C29H40O5，分子量为468.63，是从多孔菌科(Polyporaceae) 玉桂薄孔菌Antrndia cinnamomea Chang & Chou,sp.nov.子实体中分离得到的一种活性成分。研究发现，展库酸A对淋巴白血病细胞P388呈细胞毒活性，IC50为1.8μg/ml。
经文献检索，国内尚未发现展库酸A的工业提取方法相关报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种高效、环保的展库酸A的提取方法。
为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
（1）以玉桂薄孔菌子实体为原料，于65℃干燥至恒重，粉碎，加入闪式提取器中，以95%乙醇溶液为提取溶剂，进行闪式提取，过滤得到提取液；
（2）提取液浓缩后得到粗提物，用双水相溶剂系统进行萃取，收集有机相萃取液，减压回收溶剂得浓缩液；
（3）将浓缩液用高速逆流色谱分离纯化，以氯仿‑甲醇‑水两相溶剂系统，上相为固定相，下相为流动相，根据图谱收集成分，低温浓缩干燥即得展库酸A。
所述步骤（1）中闪式提取电压为140‑160V，提取时间为90s‑120s。
所述步骤（2）中双水相溶剂系统为乙醇/硫酸铵双水相体系，称取22g硫酸铵加入65ml水中，溶解结束加入32ml无水乙醇。
所述步骤（3）中氯仿‑甲醇‑水体积比为（12‑14）：（8‑10）：（5‑8）。
本发明的有益效果是：（1）本发明采用闪式提取法，快速高效、低耗能、环保；（2）本发明所用乙醇/硫酸铵双水相体系可以回收、重复利用，节约了试剂，降低了成本；（3）本发明利用高速逆流色谱分离展库酸A，分离过程无产品损失，高效，制备周期短。
具体实施方式：
下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
实施例1：
取玉桂薄孔菌子实体100g，于65℃干燥至恒重，粉碎，加入闪式提取器中，以95%乙醇溶液为提取溶剂，提取电压为150V，提取时间为100s，进行闪式提取，过滤得到提取液，提取液浓缩后得到粗提物；称取22g硫酸铵加入65ml水中，溶解结束加入32ml无水乙醇，建立乙醇/硫酸铵双水相体系，将粗提物加入3L乙醇/硫酸铵双水相体系中，振荡摇匀，静置，收集上相，减压回收溶剂得浓缩液；取氯仿、甲醇、水按13:8:7比例混合，静置分层，取上相泵入色谱管，开启高速逆流色谱仪，调整转速为900rpm，同时把下相以2.5ml/min流速泵入，注入浓缩液，紫外检测器监测，监测波长为266nm，收集流分，减压浓缩后，干燥即得展库酸A，含量96.4%。
实施例2：
取玉桂薄孔菌子实体100g，于65℃干燥至恒重，粉碎，加入闪式提取器中，以95%乙醇溶液为提取溶剂，提取电压为160V，提取时间为120s，进行闪式提取，过滤得到提取液，提取液浓缩后得到粗提物；称取22g硫酸铵加入65ml水中，溶解结束加入32ml无水乙醇，建立乙醇/硫酸铵双水相体系，将粗提物加入2.5L乙醇/硫酸铵双水相体系中，振荡摇匀，静置，收集上相，减压回收溶剂得浓缩液；取氯仿、甲醇、水按14:9:8比例混合，静置分层，取上相泵入色谱管，开启高速逆流色谱仪，调整转速为850rpm，同时把下相以3ml/min流速泵入，注入浓缩液，紫外检测器监测，监测波长为266nm，收集流分，减压浓缩后，干燥即得展库酸A，含量94.6%。
实施例3：
取玉桂薄孔菌子实体100g，于65℃干燥至恒重，粉碎，加入闪式提取器中，以95%乙醇溶液为提取溶剂，提取电压为160V，提取时间为90s，进行闪式提取，过滤得到提取液，提取液浓缩后得到粗提物；称取22g硫酸铵加入65ml水中，溶解结束加入32ml无水乙醇，建立乙醇/硫酸铵双水相体系，将粗提物加入3L乙醇/硫酸铵双水相体系中，振荡摇匀，静置，收集上相，减压回收溶剂得浓缩液；取氯仿、甲醇、水按12:10:5比例混合，静置分层，取上相泵入色谱管，开启高速逆流色谱仪，调整转速为800rpm，同时把下相以3ml/min流速泵入，注入浓缩液，紫外检测器监测，监测波长为266nm，收集流分，减压浓缩后，干燥即得展库酸A，含量94.9%。
实施例4：
取玉桂薄孔菌子实体100g，于65℃干燥至恒重，粉碎，加入闪式提取器中，以95%乙醇溶液为提取溶剂，提取电压为140V，提取时间为120s，进行闪式提取，过滤得到提取液，提取液浓缩后得到粗提物；称取22g硫酸铵加入65ml水中，溶解结束加入32ml无水乙醇，建立乙醇/硫酸铵双水相体系，将粗提物加入2L乙醇/硫酸铵双水相体系中，振荡摇匀，静置，收集上相，减压回收溶剂得浓缩液；取氯仿、甲醇、水按13:10: 5比例混合，静置分层，取上相泵入色谱管，开启高速逆流色谱仪，调整转速为850rpm，同时把下相以3ml/min流速泵入，注入浓缩液，紫外检测器监测，监测波长为266nm，收集流分，减压浓缩后，干燥即得展库酸A，含量95.5%。