一种核酸分子杂交的方法.pdf

一种核酸分子杂交的方法
    本发明涉及一种核酸分子杂交的方法。

    核酸包括核糖核酸(RNA)及脱氧核糖核酸(DNA)。核酸的基本单位是含碱基的核苷酸。相互补的核酸分子链通过碱基配对构成双链的分子结构，这一过程叫分子杂交。当已知序列的单链核酸与另一核酸链形成双链结构时，可根据已知的碱基序列推解出与之互补的分子链的碱基序列。这一分子识别方法可用于遗传检测、医疗诊断、环境监控和保护以及促进社会治安等。一种广泛使用的核酸分子杂交方法是把已知序列的核酸样品固定于固体物质上，所被固定的已知核酸称为固相探针。然后把溶于水相的核酸样品(称液相样品)与固相探针接触，使液相样品中的互补核酸分子与固相探针形成杂交分子，根据杂交分子发出信号的位置及信号地强弱判断液相样品核酸分子的结构特征及其量的信息。一般情况下核酸分子为双链或部分双链结构，在高温下双链分子会分裂成单链的分子，这一过程叫作变性。在进行分子杂交前，液体样品必须进行变性处理以使液相样品中的单链核酸分子与固样的单链探针分子杂交。在大多情况下经变性处理后液相样品中的互补分子链可相互杂交，因而减少了与固相探针杂交的机会，造成了杂交信号弱，检测的灵敏度低。

    本发明的目的是提供一种核酸分子杂交的方法，它能克服现有技术的上述不足。

    一种核酸分子杂交的方法，包括对液相样品进行变性处理，并使液相的核酸样品与固相探针接触，形成固相双链杂交分子，其特征是在杂交过程中，液相样品被移离固相样品，进行变性处理，并重复杂交过程。

    本发明的优点是减少液相样品中双链杂交分子的形成，增加固相杂交分子的数量，从而提高信号强度和分子检测的灵敏度。

    下面通过实施例说明本发明。

    一密封式基因芯片，其内有检测甲、乙、丙三种肝炎病毒的DNA固相探针，该芯片有二个开口，液体样品可由这二个开口出入芯片。用此芯片对一病人血样进行检测。首先把核酸从血样中提纯出来，把核酸中的靶分子进行扩增，并用荧光素对靶分子进行标记。把标记后的样品溶于缓冲液中，把这液相样品加热至95℃进行变性处理，10分钟后冷却致45℃，然后把这样品注入芯片内与固相探针进行分子杂交。10分钟后，把液相样品抽出，重复上述加热及冷却过程，再把重复变性的液相样品注入芯片。不断重复上述热变性和杂交过程，二小时后把液相样品清除，用缓冲液清洗去非特异性杂交的核酸分子。最后用激光扫描仪检测芯片内的杂交分子信号，并得出诊断结论。