一种纳米脂质载体的制备方法技术领域
本发明涉及一种纳米脂质载体的制备方法。
背景技术
将药物分子或载药纳米制剂与靶向分子连接，可以与细胞表面的受体结合，将药
物选择性地递送至肿瘤细胞从而提高药效。叶酸受体是一种糖基化磷脂肌醇连接的膜糖蛋
白，叶酸具有无毒、免疫原性弱、性质稳定的特点，与叶酸受体亲和力高。研究表明相较于正
常细胞，叶酸受体在多种人类肿瘤细胞(如卵巢癌、肺癌、乳腺癌、结直肠癌、肺癌等)膜表面
过度表达，且叶酸与其他分子共价连接后，仍保持对细胞膜表面叶酸受体的高亲和力，这为
叶酸特异性受体介导的肿瘤细胞靶向提供了依据。牛血清白蛋白(BSA)分子中赖氨酸的一
氨基及末端氨基众多，是对其进行化学修饰的有效部位，能够与叶酸活性酯共价连接。白蛋
白在中性pH条件下荷负电，可以通过静电引力吸附于阳离子纳米载体表面以延长血液滞留
时间，并且白蛋白可被肿瘤和炎症部位优先摄取，本身就具有一定的靶向作用。
发明内容
本发明提出一种纳米脂质载体的制备方法。
一种纳米脂质载体的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）将FA5mg溶于二甲基亚砜(DMSO)1mL中，加入缩水剂EDC3mg和羧基活化剂NHS2mg，避
光、室温下搅拌反应4h后将DMSO溶液缓慢加入到BSA水溶液(20mg/mL，3mL)中，在避光环境
中、室温下搅拌反应10h；
（2）将混合物过SephadexG-25凝胶柱，除去未反应的FA；
（3）收集未反应的FA，
（4）精密称取AL5mg、MCT25mg、PC75mg和PTX4mg或香豆素42g溶于甲醇3mL中，20-50℃减
压旋蒸成膜并真空过夜，加入1.0-3.5mg/mLBSA溶液4mL，35摄氏度环境下水合15-30min，冰
浴探头超声，经0.22纳米微孔滤膜过膜数次后即得包载PTX或香豆素的BSA.cNLCsHJ；
（5）将BSA水溶液替换为FA—BSA水溶液即得FA-BSA—cNLCs。
所述步骤（4）中BSA溶液为2.5mg/mL。
所述步骤（4）中水和时间为20 min。
所述步骤（4）的反应温度为35℃。
本发明所述方法制备的纳米脂质载体，显著提高了肿瘤细胞对纳米载体的特异性
摄取，并提高了在荷瘤裸鼠体内的抗肿瘤效果。可见，叶酸修饰的主动靶向纳米脂质载体，
增加了肿瘤细胞主动靶向能力，提高了体内抗肿瘤效果。
具体实施方式
实施例1。
一种纳米脂质载体的制备方法，包括以下步骤：
（1）将FA5mg溶于二甲基亚砜(DMSO)1mL中，加入缩水剂EDC3mg和羧基活化剂NHS2mg，避
光、室温下搅拌反应4h后将DMSO溶液缓慢加入到BSA水溶液(20mg/mL，3mL)中，在避光环境
中、室温下搅拌反应10h；
（2）将混合物过SephadexG-25凝胶柱，除去未反应的FA；
（3）收集未反应的FA，
（4）精密称取AL5mg、MCT25mg、PC75mg和PTX4mg或香豆素42g溶于甲醇3mL中，20-50℃减
压旋蒸成膜并真空过夜，加入1.0-3.5mg/mLBSA溶液4mL，35摄氏度环境下水合15-30min，冰
浴探头超声，经0.22纳米微孔滤膜过膜数次后即得包载PTX或香豆素的BSA.cNLCsHJ；
（5）将BSA水溶液替换为FA—BSA水溶液即得FA-BSA—cNLCs。
实施例2。
一种纳米脂质载体的制备方法，包括以下步骤：
（1）将FA5mg溶于二甲基亚砜(DMSO)1mL中，加入缩水剂EDC3mg和羧基活化剂NHS2mg，避
光、室温下搅拌反应4h后将DMSO溶液缓慢加入到BSA水溶液(20mg/mL，3mL)中，在避光环境
中、室温下搅拌反应10h；
（2）将混合物过SephadexG-25凝胶柱，除去未反应的FA；
（3）收集未反应的FA，
（4）精密称取AL5mg、MCT25mg、PC75mg和PTX4mg或香豆素42g溶于甲醇3mL中，20-50℃减
压旋蒸成膜并真空过夜，加入1.0-3.5mg/mLBSA溶液4mL，35摄氏度环境下水合15-30min，冰
浴探头超声，经0.22纳米微孔滤膜过膜数次后即得包载PTX或香豆素的BSA.cNLCsHJ；
（5）将BSA水溶液替换为FA—BSA水溶液即得FA-BSA—cNLCs。
所述步骤（4）中BSA溶液为2.5mg/mL。
实施例3。
一种纳米脂质载体的制备方法，包括以下步骤：
（1）将FA5mg溶于二甲基亚砜(DMSO)1mL中，加入缩水剂EDC3mg和羧基活化剂NHS2mg，避
光、室温下搅拌反应4h后将DMSO溶液缓慢加入到BSA水溶液(20mg/mL，3mL)中，在避光环境
中、室温下搅拌反应10h；
（2）将混合物过SephadexG-25凝胶柱，除去未反应的FA；
（3）收集未反应的FA，
（4）精密称取AL5mg、MCT25mg、PC75mg和PTX4mg或香豆素42g溶于甲醇3mL中，20-50℃减
压旋蒸成膜并真空过夜，加入1.0-3.5mg/mLBSA溶液4mL，35摄氏度环境下水合15-30min，冰
浴探头超声，经0.22纳米微孔滤膜过膜数次后即得包载PTX或香豆素的BSA.cNLCsHJ；
（5）将BSA水溶液替换为FA—BSA水溶液即得FA-BSA—cNLCs。
所述步骤（4）中水和时间为20 min。
所述步骤（4）的反应温度为35℃。