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1、(10)申请公布号 CN 102827779 A (43)申请公布日 2012.12.19 CN 102827779 A *CN102827779A* (21)申请号 201210338168.4 (22)申请日 2012.09.13 CGMCC No.6379 2012.07.17 C12N 1/14(2006.01) C12R 1/77(2006.01) (71)申请人 广东志康药业股份有限公司 地址 515343 广东省揭阳市普宁市池尾收费 站南侧环西工业园生产研发大楼二楼 申请人 中国医学科学院药用植物研究所 (72)发明人 张霖 郭顺星 孙思胜 吴育槟 翁飞鹏 陈晓梅 吴俊强 陈德丰。
2、 (74)专利代理机构 揭阳市博佳专利代理事务所 44252 代理人 黄镜芝 (54) 发明名称 一株诱导降香黄檀形成降香的真菌 (57) 摘要 本发明公开了一株能够诱导降香黄檀形成 中药降香的真菌菌株， 它是保藏编号为 CGMCC No.6379 的镰孢属真菌 JXMFC-5（Fusariumsp.） ； 它的培养特性是 ： 在 PDA 培养基上菌落为白色， 气 生菌丝为毡状， 菌落背面为微黄色， 生长 1 周菌落 直径为 68cm， 小型分生孢子单孢， 椭圆形或长圆 形， 稍弯曲，（7.9210.64） （2.13.76） m。该 菌株接种到降香黄檀树的树干， 能够诱导植物形 成中药降香。。
3、该菌株的应用， 既能够快速解决降 香资源紧缺矛盾 ； 又利于合理开发降香黄檀树资 源， 具有重要的经济、 社会和生态效益。 (83)生物保藏信息 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 3 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 3 页 1/1 页 2 1. 一株诱导降香黄檀形成降香的真菌， 它是保藏编号为 CGMCC No.6379 的镰孢属真菌 JXMFC-5 （Fusarium sp.） ； 它的培养特性是 ： 在 PDA 培养基上菌落为白色， 气生菌丝为毡状， 菌落背面为微黄色， 生长 1 周菌落直径为 68cm， 小型分。
4、生孢子单孢， 椭圆形或长圆形， 稍弯 曲，（7.9210.64） （2.13.76 ） m。 2. 如权利要求 1 所述的真菌， 其培养方法为 ： 先将这株真菌自低温保藏的斜面试管菌 种活化后， 转接于 PDA 培养基的平皿中， 25恒温培养 47 天， 然后转接于锯末 - 麦麸固体 培养基中， 恒温培养 1535 天， 培养温度为 2228 ； 待菌丝长满培养基三分之二之后就可 以作为接菌菌株使用。 3. 如权利要求 1 所述的真菌， 其特征在于 ： 它能诱导降香黄檀树产生中药降香。 权 利 要 求 书 CN 102827779 A 2 1/3 页 3 一株诱导降香黄檀形成降香的真菌 技术领。
5、域 0001 本发明属于生物工程技术领域， 具体地说涉及一株能够诱导降香黄檀形成降香的 真菌。 背景技术 0002 降香黄檀Dalbergia odorifera T. Chen， 又名降香、 花梨母 （海南） ， 豆科蝶形花 亚科黄檀属常绿乔木， 是我国 5 属 8 类 34 种珍贵红木品种之一， 也是海南省特有的濒危树 种， 属国家二级保护植物， 其树干和根的干燥心材为名贵中药 “降香” 。降香具有行气活血， 止痛、 止血的功效， 可用于脘腹疼痛， 肝郁肋痛， 胸痹刺痛， 跌打损伤， 外伤出血等病症， 入药 始见于我国唐代， 在传统中医学和藏医学中已有上千年的历史。 中华人民共和国药典 从。
6、 1985 年版开始， 规定降香黄檀为降香的基源植物。由于降香价格高， 市场需求极大， 近年来 降香黄檀遭到掠夺式砍伐， 野生资源趋于枯竭。近年来， 为保护濒危的降香黄檀自然资源， 并实现对资源的可持续利用， 除产区海南省外， 在广东、 广西、 云南等省已成功引种降香黄 檀， 并建成了一些规模化的人工种植基地。自然条件下， 降香的产生过程十分缓漫， 一般生 长 78 年的降香黄檀主干开始形成心材， 二十年左右才能积累到一定数量以供药用， 结香 过程往往长达几十年甚至上百年， 不能满足社会的用药需求。 0003 目前， 生产上主要靠降香黄檀自然生长形成药材， 生产周期过长是其最大的缺陷。 因此，。
7、 充分利用降香黄檀资源， 提高结香效率， 加快结香过程， 增加产量， 缓解药材供需矛 盾， 是当前降香生产上亟待解决的关键问题。 0004 经文献检索， 尚未见到利用真菌诱导降香黄檀生产中药降香的相关公开报道。利 用微生物来提高降香产量， 改善品质， 缩短生产周期， 是最有应用前景的途径之一， 适用于 大规模标准化、 商品化生产， 对降香黄檀资源的保护、 开发和利用提供有效的途径， 具有重 要的经济、 社会和生态效益。 发明内容 0005 本发明的目的在于提供一株能够诱导降香黄檀形成降香的真菌， 该株真菌菌株是 从降香黄檀的结香部位分离得到的， 它能诱导降香黄檀树干分泌形成中药降香。 0006。
8、 为实现上述目的， 本发明采用的技术步骤是先培养真菌， 再将真菌接种到降香黄 檀树的树干上。 经过一段时间后， 在接种部位的周围会产生中药降香， 该物质燃烧时能产生 降香燃烧特有的辛辣香气。 0007 本发明采用的一株真菌经鉴定为镰孢 (Fusarium sp.)， 保藏编号 CGMCC No.6379。这株真菌于 2012 年 7 月 17 日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中 心保藏， 保藏单位地址 ： 北京市朝阳区北辰西路 1 号院 3 号， 中国科学院微生物研究所。 0008 真菌 JXMFC-5 的培养特性为 ： 在 PDA 培养基上菌落为白色， 气生菌丝为毡状， 菌落 背面。
9、为微黄色， 生长 1 周菌落直径为 68cm， 小型分生孢子单孢， 椭圆形或长圆形， 稍弯曲， （7.9210.64） （2.13.76） m。 说 明 书 CN 102827779 A 3 2/3 页 4 0009 具体地说， 本发明的培养技术步骤如下 ： 将由降香黄檀茎干结香部位分离得到的镰孢 (Fusarium sp.) 属真菌JXMFC-5自低温 保藏的斜面试管菌种活化后， 转接于 PDA 培养基的平皿中， 25恒温培养 47 天， 然后转接 于锯末 - 麦麸固体培养基中， 恒温培养 1535 天 ； 锯末 - 麦麸培养温度为 2228。 0010 将上述培养的菌种接种到锯末 - 麦麸。
10、复合固体培养基中进行培养， 待菌丝长到培 养基三分之二之后就可以作为接菌菌株使用 ； 锯末 - 麦麸复合固体培养基中锯末 - 麦麸的 体积比为 1:1。 具体实施方式 0011 一株诱导降香黄檀形成降香的真菌， 其培养方法为 ： 先将这株真菌自低温保藏的 斜面试管菌种活化后， 转接于 PDA 培养基的平皿中， 25恒温培养 47 天， 然后转接于锯 末 - 麦麸固体培养基中， 恒温培养 1535 天， 培养温度为 2228 ； 锯末 - 麦麸复合固体培 养基中锯末 - 麦麸的体积比为 1:1， 待菌丝长到培养基三分之二之后就可以作为接菌菌株 使用。 0012 实施例 1 PDA 培养基平皿中培。
11、养的真菌 JXMFC-5 接种在锯末 - 麦麸复合固体培养基上生长 15 天， 备用。 0013 选取树龄为 5 年的降香黄檀树， 用直径为 lcm 的钻头在树干上钻孔 3 个， 孔深为 23cm， 各个孔洞上下间的间隔约为 10cm， 左右间隔约为 7cm， 每个孔洞各接入 0.81.2g 上 述培养 15 天的真菌 JXMFC-5。 0014 接种4个月后进行观察 ： 接入真菌JXMFC-5的孔洞周围均有紫褐色的降香产生， 从 孔洞周围取下的木料燃烧时， 产生浓烈的独特的降香香味， 且其醇溶性固形物含量达到 10% 以上， 符合药典规定要求。 0015 比较例 1 PDA 培养基平皿中培养。
12、的真菌 JXMFC-5 接种在锯末 - 麦麸复合固体培养基上生长 20 天， 备用。 0016 选取树龄为 6 年的降香黄檀树， 用直径为 lcm 的钻头在树干上钻孔 6 个， 孔深为 23cm， 各个孔洞上下间的间隔约为15cm， 左右间隔约为6cm， 其中3个孔洞各接入0.81.2g 上述培养 20 天的真菌 JXMFC-5， 另外 3 个孔洞各注射 5% 硫酸锌 5ml。 0017 接种 4 个月后进行观察 ： 接入真菌 JXMFC-5 的孔洞周围均有紫褐色的降香产生 ； 注射 5% 硫酸锌的孔洞周围有浅黄色的降香产生。从孔洞周围取下木料燃烧时， JXMFC-5 形 成的紫褐色的降香产生。
13、较浓烈的独特的降香香味。 0018 按照 2010 年版药典规定的热浸法测定降香醇溶性浸出物， 各称取接种真菌 JXMFC-5 4 个月形成的降香、 5% 硫酸锌诱导形成的降香和市售降香 0.3g， 精密称定 ( 准确 至 0.0001g)， 每个样做三个重复， 置 100ml 的锥形瓶中， 精密加乙醇 30ml， 密塞， 称定重量， 静置 1 小时后， 连接回流冷凝管， 加热至沸腾， 并保持微沸 1 小时。放冷后， 取下锥形瓶， 密 塞， 再称定重量， 用乙醇补足减失的重量， 摇匀， 用干燥滤器滤过， 精密量取滤液 10ml， 置已 干燥至恒重的蒸发皿中， 在水浴上蒸干后， 于105干燥3小。
14、时， 置干燥器中冷却30分钟， 迅 速精密称定重量。以干燥品计算供试品中醇溶性浸出物的含量 （%） 。其测定结果如下表 ： 说 明 书 CN 102827779 A 4 3/3 页 5 表 1 不同处理诱导形成的降香与市售降香的醇溶性浸出物含量 不同处理JXMFC-55% 硫酸锌 市售降香 醇溶性浸出物含量 （%）10.10.35.60.2 8.40.6 2010版药典规定降香醇溶性浸出物的含量不少于8%， 可见真菌JXMFC-5诱导形成的降 香质量较好。 0019 比较例 2 PDA 培养基平皿中培养的真菌 JXMFC-5 接种在锯末 - 麦麸复合固体培养基上生长 25 天， 备用。 002。
15、0 选取树龄为 5 年的降香黄檀树， 用直径为 lcm 的钻头在树干上钻孔 6 个， 孔深为 23cm， 各个孔洞上下间的间隔约为20cm， 左右间隔约为8cm， 6个孔洞各接入0.81.2g上述 培养 25 天的真菌 JXMFC-5。 0021 接种2个月后， 取3个孔的样品进行观察 ： 接入真菌的孔洞周围均有浅紫褐色降香 产生。从孔洞周围取下木料燃烧时， 能产生降香燃烧的独特气味。按照比较例 1 的方法， 测 定接菌 2 个月诱导形成的降香的醇溶性固形物含量为 5.0%。 0022 接种4个月后， 取3个孔的样品进行观察 ： 接入真菌的孔洞周围均有深紫褐色物质 降香产生。从孔洞周围取下木料燃烧时， 能产生降香燃烧的独特气味， 且气味浓烈。按照比 较例 1 的方法， 测定接菌 4 个月诱导形成的降香的醇溶性固形物含量达到 10.1%。 0023 可见， 接种真菌 JXMFC-5 4 个月时形成的降香质量较好。 说 明 书 CN 102827779 A 5 。