包含甲状旁腺激素、缓冲剂和稳定剂的稳定的甲状旁腺激素组合物 【技术领域】
本发明涉及稳定的甲状旁腺激素(PTH)，其中包含缓冲剂和稳定剂，及更具体地，本发明涉及稳定的PTH组合物，其中使用琥珀酸、苹果酸、组氨酸或碳酸氢铵作为缓冲剂，使用山梨糖醇或甘露醇作为稳定剂。
背景技术
人甲状旁腺激素(PTH)作为含有84个氨基酸的多肽由甲状旁腺分泌。它在体内具有调节钙代谢的重要作用，从而控制骨的生长和浓缩。已有报告指出在低Ca2+浓度下分泌的PTH通过作用于骨和肾细胞促进Ca2+的释放(Mayer，G.P.(1979)Endocrinology 2，607-611；Rotts，J.T.，Kronenberg，H.M.，Rosenbaltt，M.(1982)Adv.Protein Chem.35，323-396)，且PTH即使具有全部氨基酸序列的一部分，仍表现出其生物活性，其中PTH(1-34)是有代表性的在氨基末端(N-末端)区域含有34个氨基酸的活性片段(Br.Med.J.1980280：1340-44)。尽管PTH(1-34)和PTH(1-38)的生物活性彼此类似，仍发现在雄性和雌性大鼠中，PTH(1-34)导致骨肉瘤(恶性骨瘤)发病率增高的副作用，所述骨肉瘤的发病率依赖于剂量和处理的持续时间(Barbehenn EK et al.，Trends Endocrinol Metab.2001Nov；12(9)：383)，这一直是一个严重的问题。
根据已开发的遗传工程技术，PTH已经从多种细菌、酶等中以重组蛋白质的形式制备而成(J.Biol.Chem.1989264(8)：4367-74)，然而，其活性容易丧失，该丧失是由诸如氧化作用、脱酰胺作用等的化学变性和肽键断裂造成的。实验上，当使含有84个氨基酸的PTH(1-84)与氧化剂，如过氧化氢反应时，PTH(1-84)的活性迅速降低，这是由Met8和Met18残基的氧化所引起的，这些在最初的研究中有所揭示(The Journal of BiologicalChemistry，Vol.259，No.9，5507-5513，1984)。
在开发具有生物活性的肽，如用于医学目的的PTH中，必然要考虑PTH分离和保存的稳定性。然而，PTH的上述不稳定性已经成为PTH制剂的严重障碍。因此，考虑到制剂，对克服该障碍的稳定的组合物多种研究引起了科学上的注意力。
PCT公开号WO/1993/11785公开了稳定的甲状旁腺激素组合物，其含有糖和氯化钠，和PCT公开号WO/1999/31137公开了PTH的稳定晶体形式及其制备方法；然而，这两个文献都没有描述包含缓冲剂和稳定剂的稳定的PTH组合物。
其间，PCT公开号WO/1999/39337公开了含有醋酸盐或酒石酸盐和糖类的稳定的PTH组合物，它相似于与根据本发明的含有缓冲剂和稳定剂的PTH组合物。然而，所述缓冲剂和稳定剂的成分与本发明的那些不相同。另外，本发明的PTH组合物不比上面所参考的文献中的PTH组合物更容易分解(见表3)，且本发明的PTH组合物的稳定性在冷冻干燥后显著地增高，从而确保其稳定性高于上述文献中的PTH组合物的稳定性。此外，以上文献集中PTH的一部分——PTH(1-34)的稳定性，而本发明显示能够在很高的水平上保持全长PTH(1-84)的稳定性，这是本发明与众不同的特征。
通常，很难配制不稳定的全长PTH，这是因为氨基酸的长度越长，分解就越容易发生。此外，由于已有报道指出当长期施用时，PTH(1-34)具有可能引起骨肉瘤的发生的副作用(FDA已命令医药公司将这种危险作为警告写入PTH(1-34)的产物——特拉帕肽中)。医药公司已设法开发不具有危险的全长PTH的制剂。
因此，本发明的发明人认识到如下内容并完成了本发明：本发明的PTH组合物能够从蛋白质PTH稳定配制，所述蛋白质PTH比正常低分子量药物更加不稳定，这是因为当琥珀酸，苹果酸，组氨酸或碳酸氢铵作为缓冲剂使用且山梨糖醇或甘露醇作为稳定剂使用时，本发明的PTH组合物不易分解。
公开内容
技术问题
本发明的一个目的是提供液体甲状旁腺激素组合物，所述液体甲状旁腺激素组合物包含甲状旁腺激素、缓冲剂和稳定剂。
本发明的另一个目的是提供甲状旁腺激素组合物，所述甲状旁腺激素组合物经冷冻干燥具有含量低于2％的水，且包含甲状旁腺激素、缓冲剂和稳定剂。
技术解决方案
本发明提供液体甲状旁腺激素组合物，所述液体甲状旁腺激素组合物包含治疗有效剂量的甲状旁腺激素，一定剂量缓冲剂，该剂量能够调节pH值在4.0-6.0的范围内变化，和在0.05-20重量份范围内的稳定剂。
另外，本发明提供甲状旁腺激素组合物，所述甲状旁腺激素组合物经冷冻干燥具有含量低于2％的水，且包含甲状旁腺激素、缓冲剂和稳定剂。
此外，本发明提供一种利用冷冻干燥的组合物制备注射剂的方法。
在下文中，将不具体描述本发明。
首先，本发明提供甲状旁腺激素，所述甲状旁腺激素包含治疗有效剂量的甲状旁腺激素，一定剂量缓冲剂，该剂量能够调节pH值在4.0-6.0的范围内变化，和在0.05-20重量份范围内的稳定剂。
人甲状旁腺激素(PTH)作为含有84个氨基酸的多肽由甲状旁腺(parathyroid glans)分泌。它在体内调节钙代谢中具有重要作用，从而控制骨的生长和浓缩。已有报告指出PTH即使具有全部氨基酸序列的一部分，仍表现出其生物活性，且PTH(1-34)是有代表性的在氨基末端(N-末端)区域含有34个氨基酸的活性片段(Br.Med.J.1980280：1340-44)。根据本发明，PTH包括具有来源于上述氨基酸序列的PTH活性的所有片段以及具有1到84的氨基酸序列的PTH。另外，本发明的PTH包括最初的34个或更多的N-末端残基，例如，PTH(1-34)，PTH(1-37)，PTH(1-38)和PTH(1-41)，以及1-5个用于提高PTH稳定性和半衰期的氨基酸取代。例如，它包括这样的PTH氨基酸取代，其用提高PTH对氧化的稳定性的亮氨酸或其他疏水性氨基酸取代在第8和/或第18位置的蛋氨酸残基，以及用提高PTH对蛋白酶稳定性的胰蛋白酶非敏感性氨基酸，例如组氨酸或其他氨基酸，替换第25到27区域的氨基酸。优选地，本发明涉及由84个氨基酸组成的PTH，该PTH是通过利用微生物的重组制备方法(美国专利5,010,010)或通过化学合成(美国专利4,427,827)制备的。
PTH易于分解，该分解是由诸如氧化作用、脱酰胺作用等的化学变性和肽键断裂造成的。由于其长度最长，全长PTH(1-84)更容易分解。因此，为了用于医学目的，稳定PTH是最为重要的。本发明的发明人通过制备与多种缓冲剂和稳定剂混合的多种PTH组合物，检验了哪种组合物最为稳定。
首先，为了选择适合于利用由重组大肠杆菌制备的PTH(1-84)(SEQ.ID.No.1)制备稳定的PTH组合物的pH值，制备在pHs上有代表性的缓冲溶液并将PTH(1-84)加入到所述溶液中，从而比较所述组合物的稳定性。结果，证实了最稳定PTH组合物的pH值为5.0(见表1)。稳定性的比较通过利用反相(RP)HPLC测定保存下来的PTH组合物的量的方法进行。
根据以上结果，本发明的发明人意欲选择适当的缓冲剂，该选择是通过设置pH值为5.0并改变所使用的缓冲剂的种类进行的。利用琥珀酸、苹果酸、组氨酸、醋酸、甘氨酸或柠檬酸作为缓冲剂对PTH(1-84)组合物的测试在50℃进行7天，然而利用RP HPLC测定保存下来的PTH(1-84)的量。作为结果，证实了用于制备稳定的PTH组合物的缓冲剂种类包括琥珀酸、苹果酸、醋酸、柠檬酸以及它们的盐，或氨基酸组氨酸、精氨酸或甘氨酸，优选地为，琥珀酸、苹果酸、组氨酸以及它们的盐(见表2)。
根据以上结果，本发明的发明人意欲选择适当的稳定剂，该选择是通过选择琥珀酸、苹果酸或组氨酸作为缓冲剂，并改变所使用的稳定剂的种类来进行的，其中所述琥珀酸、苹果酸或组氨酸是高度评级为导致大量保存下来的PTH的3种物质。利用山梨糖醇或甘露醇作为稳定剂对PTH(1-84)组合物的测试在40℃进行7天，然后利用RP HPLC测定保存下来的PTH(1-84)的量。作为结果，证实了用于制备稳定的PTH组合物的稳定剂种类包括山梨糖醇、甘露醇、海藻糖、蔗糖、EDTA或吐温80，优选地，山梨糖醇或甘露醇(见表3)。
当制备液体PTH组合物时，PTH浓度为10μg/mL-5,000μg/mL，优选地，50μg/mL-500μg/mL，且另外包括胃肠道外可接受的防腐剂，优选地，间甲酚或苯甲醇。
此外，本发明提供液体甲状旁腺激素组合物，所述液体甲状旁腺激素组合物包含治疗有效剂量的甲状旁腺激素，一定剂量缓冲剂，该剂量能够调节pH值在4.0-6.0的范围内，和在0.05-20重量份范围内的稳定剂。
根据以上结果，本发明的发明人制备这样的液体PTH组合物，该PTH组合物包含确定为最适合于制备稳定的PTH组合物的缓冲剂和稳定剂，另外还制备这样的液体PTH组合物，该液体PTH组合物包含作为缓冲剂的碳酸氢铵和作为稳定剂的山梨糖醇或甘露醇，冷冻干燥所述液体PTH组合物具有含量低于2％的水，然后将它们保存在4℃。此时，由于碳酸氢铵用作缓冲剂可在酸性条件下挥发，所以设定该液体PTH组合物的pH值为7.0-8.5，并冷冻干燥该液体PTH组合物。冷冻干燥的PTH组合物可通过水合作用制备为注射剂。如果在冷冻干燥过程中加入的缓冲剂是琥珀酸、苹果酸或组氨酸，则利用蒸馏水进行水合作用，而如果在冷冻干燥过程中加入的缓冲剂是碳酸氢铵，则利用缓冲溶液进行水合作用，这是因为碳酸氢铵在冷冻干燥过程中可挥发。
将缓冲剂和稳定剂在冷冻干燥的PTH中的浓度表示为液体注射剂的最终浓度。从冷冻干燥的组合物通过加入水、缓冲剂或混合的液体(缓冲剂和稳定剂的)制备的用于注射施用的最终液体的成分为10μg/mL-5,000μg/mL的PTH，优选地，50μg/mL-500μg/mL；0.1mM-100mM的缓冲剂；和0.05-20重量份的稳定剂，最终pH值优选地在4.0-6.0的范围内。
将由上述方式制备的液体组合物保存在50℃三天，从而利用RP HPLC测定保存下来的PTH的量。作为结果，证实了冷冻干燥的PTH组合物非常稳定，因为测量到80％或更多的量的冷冻干燥后由蒸馏水水合的保存下来的PTH组合物(见表4)。具体地，已明白其中使用碳酸氢铵，保存下来的PTH的量非常稳定，因为测量到90％或更多的量的保存下来的PTH(见表4)。
另外，本发明的PTH组合物包括胃肠道外可接受的防腐剂，优选地，间甲酚或苯甲醇。
本发明的组合物除上述成分外可包括至少一种提供相同或相似功能的有效成分。
本发明的组合物除了上述成分外还可包含至少一种药用载体。所述药用载体可包含选自由下列各项组成的组中的至少一项：盐溶液、无菌水、林格氏溶液、缓冲盐溶液、右旋糖溶液、麦芽右旋糖(maltodextrose)溶液、甘油、乙醇、脂质体以及它们的混合物，并且，如果需要还进一步包含其它普通的添加剂，如抗氧化剂、缓冲溶液、细菌抑制剂等。另外，可将稀释剂、分散剂、表面活性剂和润滑剂加入其中，从而用于制备可注射制剂，如水性溶液、混悬液和乳剂等。而且，对靶器官或其它配体的特异性抗体可与PTH相连接，从而特异性作用于该靶标。另外，化学缀合物可与PTH(1-84)相结合或聚合物可与PTH(1-84)相混合。例如，该PTH化学缀合物物质或该聚合物混合物可包括PTH缀合物质，其中PTH化学结合于聚乙二醇，聚乙烯醇等，或包括与聚乳酸-共-乙二醇(polylactic-co-glycolicalcohol)(PLGA)混合的微粒。
根据本发明的PTH组合物的给药方法不受上述特别限制，而依照所要求的方法，可使用胃肠道外给药(例如，静脉内的、皮下的、腹膜内的或局部的给药)或口服给药。胃肠道外给药是理想的，更特别地，通过皮下注射或静脉内注射的给药是优选的。剂量可以是多样的，这根据患者的体重、年龄、性别、健康和饮食状况、给药时间、给药方法、排泄率、疾病的严重性等。每日剂量大约0.1μg/kg-2mg/kg，优选地，0.5μg/kg-100μg/kg。最理想的是每天一次或分为若干次施用该PTH组合物。
通过对小鼠经静脉内注射施用本发明的PTH组合物进行了毒性实验，将该PTH组合物鉴定为安全物质，其50％致命剂量LD50为至少4mg/kg。
本发明的PTH组合物可独立地或与任何其它治疗方法联合使用，所述其他治疗方法诸如手术、激素治疗、药物治疗、利用生物反应调节剂的方法等。
附图简述
本发明优选的实施方案的应用参考附图得到最好的理解，其中：
图1是显示了利用高效液相色谱(HPLC)分析PTH稳定性的结果的图，该分析是在将PTH在pH6.0-8.0的缓冲溶液(磷酸盐溶液)中，在50℃保持了7天后进行的，其中分别使用了20mM和pH6.0的磷酸盐溶液和20mM和pH7.0的磷酸盐溶液，20mM和pH8.0的磷酸盐溶液以及标准PTH(1-84)的初始状态；
图2是显示了利用HPLC分析PTH稳定性的结果的图，该分析是在将PTH在pH4.0-6.0的缓冲溶液(柠檬酸盐溶液)中，在50℃保持了7天后进行的，其中分别使用了20mM和pH4.0的柠檬酸盐溶液、20mM和pH5.0的柠檬酸盐溶液，20mM和pH6.0的柠檬酸盐溶液以及标准PTH(1-84)的初始状态；
图3是显示了利用HPLC分析PTH稳定性的结果的图，该分析是在将PTH在缓冲溶液(琥珀酸、苹果酸或柠檬酸)中，在50℃保持了7天后进行的，其中分别使用了20mM和pH5.0的柠檬酸钠缓冲溶液、20mM和pH5.0的苹果酸钠缓冲溶液和20mM和pH5.0的琥珀酸钠缓冲溶液以及标准PTH(1-84)的初始状态；
图4显示描绘了利用HPLC分析PTH稳定性的结果的图，该分析是在将包含缓冲剂和稳定剂的液体PTH组合物在40℃保持了7天后进行的，其中，在图(a)中分析了含有琥珀酸和山梨糖醇的液体组合物；在图(b)中分析了含有琥珀酸和海藻糖的液体组合物；在图(c)中分析了含有组氨酸和山梨糖醇的液体组合物；在图(d)中分析了含有组氨酸和海藻糖的液体组合物，并且，其中0表示PTH(1-84)的初始状态；1表示将各种液体组合物在40℃保持了1天；3表示将各种液体组合物在40℃保持了3天；并且7表示将各种液体组合物在40℃保持了7天；
图5显示描绘了利用HPLC分析PTH稳定性的结果的图，该分析是在对包含缓冲剂和稳定剂的冷冻干燥的PTH组合物进行水合并将它们保持在50℃达三天后进行的，其中使用蒸馏水进行水合作用，其中在图(a)中分析了含有柠檬酸和山梨糖醇的冷冻干燥的组合物；在图(b)中分析了含有琥珀酸和山梨糖醇的冷冻干燥的组合物；在图(c)中分析了含有苹果酸和山梨糖醇的冷冻干燥的组合物；在图(d)中分析了含有组氨酸和山梨糖醇的冷冻干燥的组合物，并且，其中0天表示PTH(1-84)水合后的初始状态；3天表示将各种冷冻干燥的组合物PTH(1-84)水合后在50℃保持了3天；和
图6显示描绘了利用HPLC分析PTH稳定性的结果的图，该分析是在将包含挥发性缓冲剂和稳定剂的冷冻干燥的PTH组合物与含有缓冲剂的液体水合，并将它们保持在50℃三天后进行的，其中使用了含有碳酸氢铵和甘露醇的冷冻干燥的组合物，其中使用柠檬酸溶液进行水合作用并如图(a)中所示；使用琥珀酸(succine acid)溶液进行水合作用并如图(b)中所示；使用苹果酸溶液进行水合作用并如图(c)中所示；和使用组氨酸溶液进行水合作用并如图(d)中所示，并且其中0天表示PTH(1-84)水合后的初始状态；3天表示将各种PTH(1-84)组合物水合后在50℃保持了3天。
实施本发明的最佳方式
在下文中，将参考附图给出本发明的详述。本发明不受以下的实施方案限制，且在本发明的精神和范围内的许多变化是可能的。提供本发明的实施方案，从而向本领域中的任何的技术人员更完整地解释本发明。
实施例1：选择适合于制备稳定的PTH(1-84)组合物的pH值
用于本发明的PTH(1-84)(SEQ.ID.No.1)由重组的大肠杆菌制备而来。本发明通过在韩国专利号10-0230578中所公开的方法使用PTH(1-84)，所述PTH(1-84)是完全由用表达载体(pA15UP，p153PTH和pm153PTH)转化的大肠杆菌MC1061分离而来的，本发明还通过在韩国专利号10-0255270中所公开的DO-stat补料分批培养方法进行表达。
更具体地，将PTH(1-84)以融合蛋白的形式表达为大肠杆菌中的内含体，其中所述融合蛋白由磷酸核酮糖激酶片段和PTH(1-84)(磷酸核酮糖激酶片段通过尿激酶切割位点与PTH(1-84)连接，其中磷酸核酮糖激酶是融合蛋白的氨基末端片段)组成。对表达诱导的细胞进行细胞裂解，从而收集内含体。随后，将所收集到的内含体溶解于尿素后，通过利用透析或Sephadex G25(Sigma)进行凝胶过滤去除尿素，从而使融合蛋白重新折叠。用尿激酶以最佳比例(融合蛋白∶尿激酶＝100∶1)处理该融合蛋白，从而去除磷酸核酮糖激酶片段，并且，然后，利用阳离子交换层析和反相层析完全分离该PTH(1-84)。
为了选择稳定的PTH组合物的pH值，制备并加入了根据pH值的有代表性的缓冲剂溶液，从而将PTH(1-84)转变为100ug/ml，然后再在50℃保持7天。通过利用RP HPLC分析保存下来的完整的PTH(1-84)的量来根据pHs比较所述组合物的稳定性。
RP HPLC分析条件如下：用含有0.1％的TFA的35％的乙腈缓冲溶液平衡C18HPLC柱(0.46×25cm)，向其中注射待分析的目标组合物，并通过逐渐增加乙腈的比率至45％来进行洗脱。这里，在214nm处测量其吸光度且其流速为0.8ml/分钟。保存下来的完整PTH(1-84)的量以基于100％的初始PTH峰面积的各个测试溶液的峰面积的％表示。
表1是这样的实验的结果，该实验显示所测试的缓冲剂的种类和浓度以及经保持7天后保存下来的完整的PTH(1-84)的量。
表1
PH 稳定的PTH(％) PH4.0(20mM的柠檬酸盐) 75 PH5.0(20mM的柠檬酸盐) 84 PH6.0(20mM的柠檬酸盐) 80 PH6.0(20mM的磷酸盐) 75 PH7.0(20mM的磷酸盐) 50 PH8.0(20mM的磷酸盐) 20
基于上述测试结果，确定了适合于制备稳定的PTH组合物的pH值为5.0。
实施例2：选择适合于制备稳定的PTH(1-84)组合物的缓冲剂
基于上述实施例1的结果，将pH值设定为5.0，通过改变所使用的缓冲剂的种类来选择适合的缓冲剂。这里，液体PTH(1-84)的浓度为100μg/ml，所使用的缓冲剂的种类和浓度以及经过在50℃保持7天后保存下来完整的PTH(1-84)的量描述于表2中。以相同于实施例1中的方式分析稳定的PTH组合物。
比较例1
除了缓冲剂的种类外实验的其他条件与实施例2中的条件一致。
表2
基于上述测试结果，确定了适合于制备稳定的PTH组合物的缓冲剂为琥珀酸、苹果酸或组氨酸。
实施例3：选择适合于制备稳定的PTH(1-84)组合物的稳定剂
基于上述实施例2的结果，将缓冲剂的种类固定为琥珀酸、苹果酸或组氨酸，从而通过改变所使用的稳定剂的种类选择适当的稳定剂。这里，液体PTH(1-84)的浓度为100μg/ml，将所使用的稳定剂的种类和浓度以及经过在40℃保持7天后保存下来完整的PTH(1-84)的量描述于表3中。以相同于实施例1中的方式分析稳定的PTH组合物。
比较例2
除了稳定剂的种类外实验的其他条件与实施例3中的条件一致。
比较例3
除了缓冲剂的种类外实验的其他条件与实施例3中的条件一致。
表3
基于上述测试结果，确定了适合于制备稳定的PTH组合物的稳定剂为山梨糖醇或甘露醇。另外，从上述测试结果证实了本发明的PTH组合物具有比利用柠檬酸盐作为缓冲剂的PTH组合物更高的功效。
实施例4：确认冷冻干燥后由蒸馏水水合的PTH组合物的稳定性
冷冻干燥后，将包含100μg/ml的PTH(1-84)、缓冲剂和稳定剂的液体PTH(1-84)组合物，或包含100μg/ml的PTH(1-84)、碳酸氢铵和稳定剂的液体PTH(1-84)组合物保存在4℃。利用蒸馏水或缓冲溶液水合该冷冻干燥的组合物，从而用于注射给药，并在50℃保存3天。随后，测定该组合物的稳定性。
表4是这样的实验的结果，该实验显示冷冻干燥的PTH(1-84)的成分以及保存下来的完整的PTH(1-84)的量。以相同于实施例1中的方式分析稳定的PTH组合物。
比较例4
除了缓冲剂的种类外实验的其他条件与实施例4中的条件一致。
表4
如表4所示，已明白根据本发明的经冷冻干燥和与蒸馏水水合的PTH组合物是非常稳定的，因为所测量到的保存下来的PTH为90％或更多，且包含碳酸氢铵作为缓冲剂，山梨糖醇或甘露醇作为稳定剂的PTH组合物，经冷冻干燥和与含有琥珀酸、苹果酸或组氨酸的缓冲溶液水合后，非常稳定，因为所测量到的保存下来的PTH为90％或更多。
本领域中的那些技术人员将意识到在以上描述中所公开的概念和具体的实施方案可以很容易地作为修改或设计其他实施方案的基础而使用，从而实现与本发明相同的目的。本领域中的那些技术人员还将意识到这些等价的实施方案不违反后附的权利要求所阐明的本发明的精神和范围。
工业适用性
根据本发明的包含缓冲剂和稳定剂的稳定的甲状旁腺激素(PTH)组合物是由全长PTH(1-84)稳定配制的，所述全长PTH(1-84)经过大量化学变性且，更特别地，包含碳酸氢铵的冷冻干燥的组合物甚至在水合后仍具有优秀的稳定性，其中所述碳酸氢铵在冷冻干燥过程中挥发，因此该组合物有效地作为稳定的PTH药物使用。
【序列表】
PTH(1-84)
Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn
1 5 10 15
Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His
20 25 30
Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser
35 40 45
Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu Val Glu Ser His Glu
50 55 60
Lys Ser Leu Gly Glu Ala Asp Lys Ala Asp Val Asn Val Leu Thr Lys
65 70 75 80
Ala Lys Ser Gln
<110>财团法人牧岩生命工学研究所
<120>包含甲状旁腺激素、缓冲剂和稳定剂的稳定的甲状旁腺激素组合物
<160>1
<170>Kopatentln 1.71
<210>1
<211>84
<212>PRT
<213>PTH(1-84)
<400>1
Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn
1 5 10 15
Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His
20 25 30
Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser
35 40 45
Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu Val Glu Ser His Glu
50 55 60
Lys Ser Leu Gly Glu Ala Asp Lys Ala Asp Val Asn Val Leu Thr Lys
65 70 75 80
Ala Lys Ser Gln