一种含有GTF活性提取物的药物组合物及其制备工艺 【技术领域】
本发明涉及一种药物组合物和制备工艺及其作用新用途，特别涉及一种含有GTF活性提取物(葡萄糖耐量因子活性提取物)的药物组合物及其制备工艺。
背景技术
GTF活性提取物是一种从特种啤酒酵母中分离制得的具有促进机体葡萄糖利用的活性组分。截至目前为止的大量研究表明，GTF活性提取物在调节机体的糖和脂肪代谢方面有重要的作用，对于糖尿病和高脂血症的治疗具有潜在的临床价值。本研究是在这些研究的基础上，进一步改进GTF活性提取物的提取工艺，并采用了其它高分子活性物质组合形成性的GTF活性提取物组合物，用于糖耐量低下(IGT)、糖尿病和高脂血症地防治。
【发明内容】
本发明的一个目的在于公开一种含有GTF活性提取物药物组合物；本发明的另一个目的在于公开一种GTF活性提取物的提取方法；本发明的第三个目的在于公开该药物组合物的制备工艺；本发明的第四个目的是公开该药物组合物新用途。
本发明目的是通过如下技术方案实现的：
本发明药物组合物的原料组成为：GTF活性提取物10-50重量份、甲壳素30-60重量份、糊精20-35重量份。
本发明药物组合物的原料组成优选为：GTF活性提取物30-47重量份、甲壳素33-43重量份、糊精：20-27重量份。
本发明药物组合物的原料药组成优选为：GTF活性提取物47重量份、甲壳素33重量份、糊精20重量份。
本发明药物组合物的原料组成优选为：GTF活性提取物24-34重量份、甲壳素41-47重量份、糊精25-29重量份。
本发明药物组合物的原料药组成优选为：GTF活性提取物35重量份、甲壳素40重量份、糊精25重量份。
本发明药物组合物的原料组成优选为：GTF活性提取物12-17重量份、甲壳素53-55重量份、糊精30-33重量份。
本发明药物组合物的原料组成优选为：GTF活性提取物17重量份、甲壳素53重量份、糊精30重量份。
取上述药物组合物原料，按照常规工艺，制成临床接受的但并不限于片剂、颗粒剂、胶囊剂、口服液体制剂、滴丸、注射剂等制剂。
其中所述GTF活性提取物可以按照如下工艺方法制备：称取20-40重量份弱碱性离子交换树脂(可用DEAE-11、DEAE-22、DEAE-23、DEAE-32或DEAE51-53型号替换)干粉，先加入到130-170体积份的0.2-1NNaOH溶液中，边加边搅拌，放置烧杯中浸泡0.5-1.0小时后，用蒸馏水洗脱，洗至中性，再加入到130-170体积份的0.2-2NHCL溶液中，同样方法洗至中性；取强酸性阳离子树脂(可用Dowex50W-X2、X4、X8或X12型号替换)干粉20-40重量份，处理方法同弱碱性离子交换树脂干粉；
称取20-40重量份的富铬酵母粉，配制体积比为0.5-1.5∶0.5-1.5的正丁醇-水混合液400-800体积份，将酵母粉加入上述混合液中，搅拌2-4小时，静置12-20小时，取水相中的上清液在50℃-60℃下真空浓缩；将浓缩液加入2-4倍体积份的蒸馏水进行透析，合并透析液，真空浓缩；将浓缩后的透析液加入弱碱性离子交换树脂层析柱中过柱分离，并用蒸馏水洗脱，收集洗脱液直到紫外吸收峰在262nm处没有吸收为止，浓缩洗脱液；将浓缩液经过强酸性阳离子树脂柱分离，用0.25M NH4OH洗脱，收集洗脱液直到紫外吸收峰在262nm处没有吸收为止，将此洗脱液浓缩至剩余10-30体积份，冷冻干燥，得到GTF活性提取物。
上述所述的弱碱性离子交换树脂是指：DEAE纤维素-23(二乙基氨基乙基纤维素)，还可选择DEAE-11、DEAE-22、DEAE-23、DEAE-32或DEAE51-53型号替换；其中强酸性阳离子树脂是指：Dowex50WX8(732强酸性阳离子树脂)，还可选择Dowex50W-X2、X4、X8或X12型号替换。
上述所述的冷冻干燥的冷冻条件为：条件为-40℃到-35℃、12-15Pa、28-32h。
GTF活性提取物的制备工艺优选为：称取30重量份DEAE-23纤维素树脂干粉，加入到约150体积份的0.2NNaOH溶液中，边加边搅拌，放置烧杯中浸泡0.6小时后，用蒸馏水洗脱，直到洗到中性为止，再加入到150体积份的0.2NHCL溶液中，同样方法洗至中性；取Dowex50WX8强酸性阳离子树脂干粉20重量份，处理方法同DEAE-23纤维素树脂干粉；
称取30重量份的富铬酵母粉，配制体积比为1∶1的正丁醇-水混合物600体积份，将酵母粉加入上述混合液中，搅拌3小时，静置20h，取水相中的上清液在55℃下真空浓缩；将浓缩液分别加入2倍体积份的蒸馏水进行透析，合并透析液，真空浓缩；将透析液加入DEAE-23纤维素树脂层析柱中过柱分离，用蒸馏水洗脱，收集洗脱液直到紫外吸收峰在262nm处没有吸收为止，浓缩洗脱液；将浓缩液经过Dowex50WX8阳离子树脂柱分离，用0.25MNH4OH洗脱，收集洗脱液直到紫外吸收峰在262nm处没有吸收为止，将此洗脱液浓缩至剩余20体积份，放入真空冷冻干燥仪中冷冻干燥，条件为-40℃到-35℃、12-15Pa、28-32h，得到黄褐色稍有粘性的GTF活性提取物。
本发明所述的GTF活性提取物是指葡萄糖耐量因子，其中活性鉻含量不小于1360mg/Kg.
本发明所述的重量份与体积份的比例为g/ml。
本发明药物组合物用于制备治疗糖耐量低下(IGT)、糖尿病或高脂血症的药物。
附图说明：
图1：DEAE-23纤维素柱水洗脱图(随着洗脱瓶数的增加，吸光值随之下降)
图2：Dowex50WX8树脂氨水洗脱图(随着洗脱瓶数的增加，吸光值随之下降)
图3：GTF活性提取物的红外光谱图
本发明药物组合物经临床实验论证，具有促进酵母细胞的葡萄糖利用；调节血糖血脂；上调实验型糖尿病大鼠胰岛素受体基因表达，提高糖耐量；有效预防高脂肪饮食诱导的肥胖；调节由高脂饮食诱导的瘦素水平及其瘦素受体基因表达的功效。
下述实验和实施例用于进一步说明但不限于本发明。
实验例1葡萄糖耐量因子生物活性的测定
本实验采用啤酒酵母培养法对按本发明技术方案提取所得GTF活性提取物(本发明实施例7所制得)及GTF活性提取物的药物组合物组(本发明实施例1胶囊剂内容物)的活性进行测定，现报告如下：
1菌种的培养：配置培养基：葡萄糖60g、酵母粉10g、(NH4)2SO410g、MgSO41g、KH2PO42g、K2HPO42g。分装各200ml，高压灭菌20min，将啤酒酵母接种于液体培养基中，置培养箱中摇床培养48h(30℃)
2制备酵母静息细胞：将培养所得液体离心(4000r/min，15min)，弃去上清液，用灭菌水冲洗一遍，再次离心，得到酵母菌体。分别接种于灭菌水中置摇床中培养48h(30℃)，离心，弃去上清液，用灭菌水冲洗，离心。再重复这一步骤，得到酵母静息细胞。
3加样：取500ml锥形瓶，每只分装200ml蒸馏水，分别加入6g葡萄糖，高压灭菌20min。每支锥形瓶中接种5g酵母静息细胞。将上述锥形瓶分为四组：对照组(不加任何样品)、富铬酵母粉组、GTF活性提取物组及GTF活性提取物的药物组合物组均含铬离子浓度为70μg/ml)，均置于摇床中培养(30℃)。
4取样测定：分别于培养4h、6h、7h、8h、9h、10h、11h取样5ml，离心(4000r/min，15min)，取上清液，用葡萄糖氧化酶法测其中残余葡萄糖浓度，用来反应不同组之间葡萄糖代谢的程度。
(见表1)
表1不同时间反应体系中残余葡萄糖浓度的比较
4h 6h 7h 8h 9h 10h 11h 对照品 (空白) 富铬酵 母粉 GTF活性 提取物 GTF药物 组合物 88.37±0.56 87.73±1.36 88.19± 0.82 88.54± 0.54 78.58±1.64 80.36±1.35 76.27± 1.40***△△△ 73.86± 2.12***△△△# 73.59±1.73 73.32±1.34 68.45± 1.87***△△△ 66.34± 1.22***△△△# 74.75±1.85 65.56±1.46 49.57± 1.56***△△△ 47.18± 1.88***△△△# 43.88±1.23 50.12±1.59 28.09± 1.49***△△△ 26.04± 1.38***△△△# 33.82±1.67 34.34±1.89 13.95± 1.35***△△△ 13.15± 1.25***△△△# 21.65±1.38 24.42±1.59 6.55± 0.89***△△△ 2.43± 0.45***△△△#
与空白组比较*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001，与富铬酵母粉组比较△P＜0.05，△△P＜0.01，△△△P＜0.001，组合物与GTF组比较#P＜0.05
实验结果表明，由本实验制得的GTF活性提取物的药物组合物与GTF活性提取物均具有显著的促进酵母细胞葡萄糖利用的作用，与空白组、富铬酵母粉组比较，在第六小时之后，反应体系中残余葡萄糖浓度均有显著性差异(P＜0.001)。GTF活性提取物的药物组合物组与GTF活性提取物组比较有差异(P＜0.005)。
实验例2GTF活性提取物的药物组合物组对实验性小鼠空腹血糖及糖耐量的影响
将四氧嘧啶糖尿病小鼠分为模型组，模型加GTF活性提取物组(本发明实施例8所制得)，模型加甲壳素组，模型加含有GTF活性提取物的药物组合物组(本发明实施例2所制得)小、中、大剂量(相当于临床剂量的5、10、20倍)，模型加优降糖组(优降糖5mg/kg)，正常对照组和模型对照组灌胃给予等体积蒸馏水，每日1次，连续10天。分别进行血糖和糖耐量的测定
表2GTF活性提取物的药物组合物对四氧嘧啶小鼠空腹血糖的影响
组别 n 血糖值 0日 11日 正常对照组 模型组 阳性药组 GTF活性提取物组 甲壳素组 GTF药物组合物小剂量组 GTF药物组合物中剂量组 GTF药物组合物大剂量组 10 10 10 10 10 10 10 10 4.83±0.75 21.89±3.40*** 21.79±3.20*** 21.47±3.56*** 21.59±3.9*** 21.03±3.26*** 21.12±3.51*** 21.59±3.71*** 4.72±0.73 18.62±3.43*** 9.82+3.0△△△ 16.35±2.38△△ 16.89±2.67△△ 15.62±2.59△△ 14.88±2.30△△ 11.62±2.98△△
与正常对照组比较：***P＜0.001；与模型组比较：△△P＜0.001，△△△P＜0.001
表3GTF活性提取物的药物组合物对四氧嘧啶小鼠糖耐量的影响
组别 n 血糖值 0min 30min 60min 120min 正常对照组 模型组 GTF活性提取物组 甲壳素组 GTF药物组合物小剂量组 GTF药物组合物中剂量组 GTF药物组合物大剂量组 10 10 10 10 10 10 10 5.16±0.97 16.76±2.88*** 14.26±2.69△△ 15.60±2.78△ 12.03±2.36△△△ 12.90±2.50△△ 11.60±2.03△△△ 5.74±0.92 20.03±3.25*** 16.38±2.59△△ 17.69±2.68△ 14.78±2.16△△ 15.12±3.09△△ 14.36±1.85△△△ 5.27±0.82 17.37±2.55*** 15.49±2.37△△ 16.31±2.29△ 13.35±2.89△△ 13.21±3.15△△ 12.04±2.61△△△ 5.29±0.62 14.58±2.92*** 12.78±2.35△△ 13.36±2.95△ 11.27±2.30△△ 11.09±2.29△△ 11.36±1.96△△
与正常对照组比较：***P＜0.001；与模型组比较：△△△P＜0.001，△△P＜0.01，△P＜0.05
实验发现含有GTF活性提取物的药物组合物组、GTF活性提取物组、甲壳素组均能降低四氧嘧啶小鼠空腹血糖含量，与模型组比较有显著性差异(P＜0.01或P＜0.001)。同时能显著提高糖尿病小鼠的糖耐量水平，与模型组比较有显著性差异(P＜0.01或P＜0.001)，GTF活性提取物的药物组合物组的血糖值显著低于GTF活性提取物组、甲壳素组(P＜0.05，P＜0.01)。
实验例3GTF活性提取物的药物组合物组对实验性小鼠肝脏胰岛素受体基因表达的影响
将四氧嘧啶糖尿病小鼠分为模型组，模型加含有GTF活性提取物的药物组合物组((本发明实施例5所制得，相当于临床剂量20倍)，模型加GTF活性提取物组((本发明实施例9所制得)相当于临床剂量20倍)，模型加甲壳素组(相当于临床剂量20倍)，模型加优降糖组(相当于临床剂量20倍)，正常对照组和模型对照组灌胃给予等体积蒸馏水，每日1次，连续10天后，迅速取出动物肝脏组织，采用RT-PCR方法检测胰岛素受体基因表达的情况。
表4GTF活性提取物的药物组合物组对实验性小鼠肝脏胰岛素受体基因表达的影响
波峰体积 空白对照组 优降糖对照组 GTF药物组合物 GTF活性提取物 甲壳素组 正常组 β-actin(1) 胰岛素受体基因(2) (2)/(1) 54761 35648 0.65 59106 38817 0.66 56511 39137 0.69 57634 39191 0.68 58349 38510 0.66 56785 41548 0.73
表4显示，经PT-PCR，GDS-8000光密度扫描后与对照组比较，含有GTF活性提取物的药物组合组与GTF活性提取物组有明显提高糖尿病动物受损的胰岛素受体基因mRNA水平，而且含有GTF活性提取物的药物组合组优于GTF活性提取物组与优降糖组。
实验例4GTF活性提取物的药物组合物组对肥胖大鼠体重、血脂及胰岛素、瘦素水平的影响
动物购置后适应性喂养一周后，其中12只采用普通饲料，另外84只采用高脂饲料，制造肥胖大鼠模型。造模成功(正常组体重为283.75±23.37，肥胖模型组体重为377.17±21.52)肥胖大鼠体重平均为正常组大鼠体重1.3-1.4倍)后，将实验性肥胖大鼠随机分为7组，每组12只：模型组、阳性药(血脂康)组、GTF活性提取物的药物组合物组(本发明实施例3所制得)小剂量组、中剂量组、大剂量组(分别相当于成人临床剂量的5倍、10倍、20倍)、GTF活性提取物组(相当于成人临床剂量10倍)、甲壳素组(相当于成人临床剂量10倍)开始灌胃给药，正常组和模型组灌胃给以生理盐水。同时除正常组喂以普通饲料外，其余组仍喂养高脂饲料，连续4周，每周测体重，于末次给药后禁食12h，次日上午，乙醚麻醉下开胸心脏取血，静置分离血清，-20℃保存待测，酶法测定血清TC、TG、HDL-C、LDL-C，放射免疫法测定血清胰岛素、瘦素的含量。迅速开颅分离出下丘脑，置于Trizol中，-20℃保存待测。用荧光定量PCR方法检测下丘脑瘦素受体基因表达的情况。
(1)GTF活性提取物的药物组合物组对饮食诱导肥胖模型大鼠体重的影响(见表5)
表5饮食诱导肥胖模型大鼠体重的变化
组别 治疗前 治疗后 第一周 第二周 第三周 第四周 增长值 正常组 283.75±23.37* 292.92±34.21* 306.25±43.18* 305.42±34.67* 310.83±31.97* 27.08±16.3* 肥胖模型组 376.25±22.58 386.67±24.80 398.75±21.76 407.50±29.12 428.33±32.43 52.08±18.64 血脂康组 GTF活性提取物组 甲壳素组 375.42±22.71 378.37±20.57 379.56±18.06 382.92±19.71 385.78±20.61 385.08±19.37 388.75±21.96 389.36±20.56 397.57±21.08 394.17±22.85 396.77±21.34 405.68±22.08 405.42±18.88* 407.67±19.56* 427.37±22.78 30.00±13.31* 29.16±11.02* 49.37±10.89 GTF药物组合物小剂 量组 375.83±19.98 383.75±20.13 387.92±21.79 395.42±24.72 404.58±25.62* 28.75±9.32* GTF药物组合物中剂 量组 380.42±21.79 374.58±16.44 383.75±24.97 397.08±23.98 408.33±20.93 27.92±10.76* GTF药物组合物大剂 量组 377.92±23.78 400.00±24.40 400.83±22.95 401.67±21.25 406.25±23.37* 28.33±9.61*
与肥胖模型组比较*P＜0.05 **P＜0.01
表5可见，肥胖组和8个实验组的大鼠体重在治疗前没有差异，随着时间的推移，各组大鼠的体重增加，但实验组大鼠的增长趋势较肥胖组与甲壳素组缓慢。在第4周时，GTF活性提取物的药物组合物组小剂量组与大剂量组的体重显著低于肥胖组(P＜005)，治疗后GTF活性提取物的药物组合物各剂量组与GTF活性提取物组体重的增长值与肥胖组有显著差异(P＜005)。
(2)GTF活性提取物的药物组合物组对血脂的影响(见表6)
表6GTF活性提取物的药物组合物组对血脂的影响(X±SD，mmol/L)
组别 TG TC HDL-C LDL-C 正常组 肥胖模型组 血脂康组 GTF活性提取物组 甲壳素组 GTF药物组合物小剂量组 GTF药物组合物中剂量组 GTF药物组合物大剂量组 1.10±0.56△ 1.43±0.82* 1.08±0.21△ 1.01±0.18△△ 1.16±0.19△ 0.94±0.17△△ 0.84±0.14△△△ 0.82±0.30△△△ 1.33±0.15△ 1.57±0.21* 1.44±0.11 1.40±0.18△ 1.47±0.27 1.38±0.30△ 1.48±0.11 1.43±0.29 0.52±0.14△ 0.38±0.06* 0.55±0.14△△ 0.48±0.08△ 0.45±0.15 0.50±0.15△ 0.63±0.09△△△ 0.50±0.13△ 0.43±0.20 0.55±0.21 0.47±0.22 0.45±0.18 0.47±0.15 0.43±0.17 0.49±0.17 0.40±0.26
与正常组比较*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001，与肥胖模型组相比△P＜0.05，△△P＜0.01，△△△P＜0.00
见表6，GTF活性提取物的药物组合物组各剂量组、GTF活性提取物组、甲壳素组均能显著降低TG水平，与模型组比较有显著性差异(P＜0.01，P＜0.001)，GTF活性提取物的药物组合物组小剂量组与GTF活性提取物组可以降低TC水平，与模型组比较有差异(P＜0.05)，中大剂量组有降低趋势。GTF活性提取物的药物组合物组各剂量组与GTF活性提取物组对HDL-C有明显的提高作用，与模型组比较均有差异(P＜0.05，P＜0.001)。各组之间LDL-C水平无明显差异。GTF活性提取物的药物组合物组各剂量组在降脂方面均优于GTF活性提取物组、甲壳素组。
(3)GTF活性提取物的药物组合物组对血清胰岛素、瘦素含量的影响(见表7)
表7GTF活性提取物的药物组合物对血清胰岛素、瘦素含量的影响(X±SD)
组别 胰岛素(uIU/ml) 瘦素(ng/ml) 正常组 肥胖模型组 血脂康组 GTF活性提取物 甲壳素组 GTF药物组合物小剂量组 GTF药物组合物中剂量组 GTF药物组合物大剂量组 13.21±4.74△ 16.83±4.30* 15.39±4.25 15.47±3.78 16.78±4.16* 15.34±2.16 14.21±2.06 13.78±1.90△ 0.83±0.37△ 1.17±0.25* 0.99±0.40 0.96±0.35 1.18±0.37* 0.86±0.22△ 1.04±0.38 1.08±0.52
与正常组比较*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001，与肥胖模型组相比△P＜0.05，△△P＜0.01，△△△P＜0.001
高脂饮食诱导的肥胖大鼠血清胰岛素、瘦素水平与正常组比较均有差异。表7显示，GTF活性提取物的药物组合物可以改善肥胖大鼠高胰岛素血症及高瘦素血症。
(4)GTF活性提取物的药物组合物组对饮食诱导肥胖模型大鼠下丘脑OB-R基因表达的影响(见表8)
表8实验各组下丘脑O B-R基因表达水平的比较
组别 -ΔΔCt值 正常组 肥胖模型组 血脂康组 GTF活性提取物 甲壳素组 GTF药物组合物小剂量组 GTF药物组合物中剂量组 GTF药物组合物大剂量组 0.313±0.651** -0.750±0.677 -0.682±0.815 -0.109±0.378 -0.698±0.534 -0.045±1.011* -0.100±0.615 -0.300±0.587
与肥胖模型组比较*P＜0.05**P＜0.01
表8可见，肥胖模型组下丘脑OB-R基因表达相对定量值减少，与正常组比P＜001，差异有非常显著性意义，GTF活性提取物的药物组合物组小剂量组下丘脑OB-R基因表达相对定量值增加，与对照组比P＜005，差异亦有显著性意义。
下述实施例均能实现上述试验例的效果
【具体实施方式】
实施例1：胶囊剂的制备
取GTF活性提取物47g分别与甲壳素33g、糊精20g混合，即得到100g含有GTF活性提取物活性成分的干药粉，将制得的药粉按照常规方法制成胶囊每粒0.2g，每日一次，每次一粒；
其中所述GTF活性提取物的制备工艺为：称取30g DEAE-23纤维素树脂(二乙基氨基乙基纤维素)干粉，加入到约150ml的0.2NNaOH溶液中，边加边搅拌，放置烧杯中浸泡0.6小时后，用蒸馏水洗脱，直到洗到中性为止，再加入到150体积份的0.2NHCL溶液中用同样方法洗到中性；取Dowex50WX8树脂(732强酸性阳离子树脂)的处理同DEAE-23纤维素树脂；称取30g的富铬酵母粉，配制体积比为1∶1的正丁醇-水混合物600ml，将酵母粉加入上述混合液中，搅拌3小时，静置20h，取水相中的上清液在55℃下真空浓缩；将浓缩液分别加入2倍体积份的蒸馏水中进行透析，合并透析液，真空浓缩；将透析液加入DEAE-23纤维素层析柱中过柱分离，用蒸馏水洗脱，收集洗脱液直到紫外吸收峰在262nm处没有吸收为止，浓缩洗脱液；将浓缩液经过Dowex50WX8树脂柱分离，用0.25MNH4OH洗脱，收集洗脱液直到紫外吸收峰在262nm处没有吸收为止，将此洗脱液浓缩至粘稠状(剩余20体积份)，放入真空冷冻干燥仪中冷冻干燥，条件为-40℃到-35℃、12-15Pa、28-32h，得到黄褐色稍有粘性的物质GTF活性提取物。
实施例2：片剂的制备
取GTF活性提取物17g分别与甲壳素53g、糊精30g混合，即得到100g含GTF活性提取物活性成分的干药粉，将制得的药粉按照常规方法制成片剂。每片0.5g，每日一次，每次一片；
其中所述GTF活性提取物的制备工艺为：称取30g DEAE-23纤维素树脂(二乙基氨基乙基纤维素)干粉，加入到约160ml的0.2NNaOH溶液中，边加边搅拌，放置烧杯中浸泡0.6小时后，用蒸馏水洗脱，直到洗到中性为止，再加入到160体积份的0.2NHCL溶液中，用同样方法洗到中性；取Dowex50WX8树脂(732强酸性阳离子树脂)的处理同DEAE-23纤维素树脂；称取20g的富铬酵母粉，配制体积比为1.∶1的正丁醇-水混合物400ml，将酵母粉加入上述混合液中，搅拌3小时，静置20h，取水相中的上清液在60℃下真空浓缩；将浓缩液分别加入2倍体积份的蒸馏水中进行透析，合并透析液，真空浓缩；将透析液加入DEAE-23纤维素层析柱中过柱分离，用蒸馏水洗脱，收集洗脱液直到紫外吸收峰在262nm处没有吸收为止，浓缩洗脱液；将浓缩液经过Dowex50WX8树脂柱分离，用0.25MNH4OH洗脱，收集洗脱液直到紫外吸收峰在262nm处没有吸收为止，将此洗脱液浓缩至粘稠状(剩余10体积份)，放入真空冷冻干燥仪中冷冻干燥，条件为-40℃到-35℃、12-15Pa、28-32h，得到黄褐色稍有粘性的物质GTF活性提取物。
实施例3：口服液的制备
取GTF活性提取物0.9g，溶解在91ml纯净水中，按照常规方法制成口服液，每支10ml，每日一次，每次一支；
其中所述GTF活性提取物的制备工艺为：称取30g DEAE-23纤维素树脂(二乙基氨基乙基纤维素)干粉，加入到约140ml的0.2NNaOH和0.2NHCL溶液中，边加边搅拌，放置烧杯中浸泡0.5小时后，用蒸馏水洗脱，直到洗到中性为止，再加入到140体积份的0.2NHCL溶液中，用同样方法洗到中性；取Dowex50WX8树脂(732强酸性阳离子树脂)的处理同DEAE-23纤维素树脂；称取40g的富铬酵母粉，配制体积比为1∶1的正丁醇-水混合物800ml，将酵母粉加入上述混合液中，搅拌4小时，静置20h，取水相中的上清液在50℃下真空浓缩；将浓缩液分别加入2倍体积份的蒸馏水中进行透析，合并透析液，真空浓缩；将透析液加入DEAE-23纤维素层析柱中过柱分离，用蒸馏水洗脱，收集洗脱液直到紫外吸收峰在262nm处没有吸收为止，浓缩洗脱液；将浓缩液经过Dowex50WX8树脂柱分离，用0.25MNH4OH洗脱，收集洗脱液直到紫外吸收峰在262nm处没有吸收为止，将此洗脱液浓缩至粘稠状(剩余30体积份)，放入真空冷冻干燥仪中冷冻干燥，条件为-40℃到-35℃、12-15Pa、28-32h，得到黄褐色稍有粘性的物质GTF活性提取物。
实施例4：滴丸的制备
取GTF活性提取物47g分别与甲壳素33g、糊精20g混合，即得到100g含有GTF活性提取物活性成分的干药粉，将制得的药粉按照常规方法制成滴丸；
其中所述GTF活性提取物的制备工艺为：称取30g DEAE-23纤维素树脂(二乙基氨基乙基纤维素，可用DEAE-11、DEAE-22、DEAE-23、DEAE-32、DEAE51-53型号替换)干粉，加入到约150ml的0.2NNaOH溶液中，边加边搅拌，放置烧杯中浸泡0.6小时后，用蒸馏水洗脱，直到洗到中性为止，再加入到150体积份的0.2NHCL溶液中，用同样方法洗到中性；取Dowex50WX8树脂(732强酸性阳离子树脂，可用Dowex50W-X2、X4、X8、X12型号替换)的处理同DEAE-23纤维素树脂；称取30g的富铬酵母粉，配制体积比为1∶1的正丁醇-水混合物600ml，将酵母粉加入上述混合液中，搅拌3小时，静置20h，取水相中的上清液在55℃下真空浓缩；将浓缩液分别加入2倍体积份的蒸馏水中进行透析，合并透析液，真空浓缩；将透析液加入DEAE-23纤维素层析柱中过柱分离，用蒸馏水洗脱，收集洗脱液直到紫外吸收峰在262nm处没有吸收为止，浓缩洗脱液；将浓缩液经过Dowex50WX8树脂柱分离，用0.25MNH4OH洗脱，收集洗脱液直到紫外吸收峰在262nm处没有吸收为止，将此洗脱液浓缩至粘稠状(剩余20体积份)，放入真空冷冻干燥仪中冷冻干燥，条件为-40℃到-35℃、12-15Pa、28-32h，得到黄褐色稍有粘性的物质GTF活性提取物。
实施例5：颗粒剂的制备
取GTF活性提取物25g分别与甲壳素45g、糊精25g混合，即得到95g含GTF活性提取物活性成分的干药粉，将制得的药粉按照常规方法制成颗粒剂；
其中所述GTF活性提取物的制备工艺为：称取30g DEAE-23纤维素树脂(二乙基氨基乙基纤维素，可用DEAE-11、DEAE-22、DEAE-23、DEAE-32、DEAE51-53型号替换)干粉，加入到约140ml的0.2NNaOH溶液中，边加边搅拌，放置烧杯中浸泡0.8小时后，用蒸馏水洗脱，直到洗到中性为止，再加入到140体积份的0.2NHCL溶液中，用同样方法洗到中性；取Dowex50WX8树脂(732强酸性阳离子树脂，可用Dowex50W-X2、X4、X8、X12型号替换)的处理同DEAE-23纤维素树脂；称取20g的富铬酵母粉，配制体积比为1∶1的正丁醇-水混合物400ml，将酵母粉加入上述混合液中，搅拌3小时，静置20h，取水相中的上清液在60℃下真空浓缩；将浓缩液分别加入2倍体积份的蒸馏水中进行透析，合并透析液，真空浓缩；将透析液加入DEAE-23纤维素层析柱中过柱分离，用蒸馏水洗脱，收集洗脱液直到紫外吸收峰在262nm处没有吸收为止，浓缩洗脱液；将浓缩液经过Dowex50WX8树脂柱分离，用0.25MNH4OH洗脱，收集洗脱液直到紫外吸收峰在262nm处没有吸收为止，将此洗脱液浓缩至粘稠状(剩余10体积份)，放入真空冷冻干燥仪中冷冻干燥，条件为-40℃到-35℃、12-15Pa、28-32h，得到黄褐色稍有粘性的物质GTF活性提取物。
实施例6：注射剂的制备
取GTF活性提取物0.9g，溶解在91ml纯净水中，将制得的药粉按照常规方法制成注射剂；
其中所述GTF活性提取物的制备工艺为：称取30g DEAE-23纤维素树脂(二乙基氨基乙基纤维素)干粉，加入到约160ml的0.2NNaOH溶液中，边加边搅拌，放置烧杯中浸泡0.5小时后，用蒸馏水洗脱，直到洗到中性为止，再加入到160体积份的0.2NHCL溶液中，用同样方法洗到中性；取Dowex50WX8树脂(732强酸性阳离子树脂)的处理同DEAE-23纤维素树脂；称取40g的富铬酵母粉，配制体积比为1∶1的正丁醇-水混合物800ml，将酵母粉加入上述混合液中，搅拌4小时，静置20h，取水相中的上清液在50℃下真空浓缩；将浓缩液分别加入2倍体积份的蒸馏水中透析，合并透析液，真空浓缩；将透析液加入DEAE-23纤维素层析柱中过柱分离，用蒸馏水洗脱，收集洗脱液直到紫外吸收峰在262nm处没有吸收为止，浓缩洗脱液；将浓缩液经过Dowex50WX8树脂柱分离，用0.25MNH4OH洗脱，收集洗脱液直到紫外吸收峰在262nm处没有吸收为止，将此洗脱液浓缩至粘稠状(剩余30体积份)，放入真空冷冻干燥仪中冷冻干燥，条件为-40℃到-35℃、12-15Pa、28-32h，得到黄褐色稍有粘性的物质GTF活性提取物。
实施例7：GTF活性提取物的制备
GTF活性提取物的制备工艺为：称取30g DEAE-23纤维素树脂(二乙基氨基乙基纤维素)干粉，加入到约150ml的0.2NNaOH溶液中，边加边搅拌，放置烧杯中浸泡0.6小时后，用蒸馏水洗脱，直到洗到中性为止，再加入到150体积份的0.2NHCL溶液中，用同样方法洗到中性；取Dowex50WX8树脂(732强酸性阳离子树脂)的处理同DEAE-23纤维素树脂；称取30g的富铬酵母粉，配制体积比为1∶1的正丁醇-水混合物600ml，将酵母粉加入上述混合液中，搅拌3小时，静置20h，取水相中的上清液在55℃下真空浓缩；将浓缩液分别加入2倍体积份的蒸馏水中进行透析，合并透析液，真空浓缩；将透析液加入DEAE-23纤维素层析柱中过柱分离，用蒸馏水洗脱，收集洗脱液直到紫外吸收峰在262nm处没有吸收为止，浓缩洗脱液；将浓缩液经过Dowex50WX8树脂柱分离，用0.25MNH4OH洗脱，收集洗脱液直到紫外吸收峰在262nm处没有吸收为止，将此洗脱液浓缩至粘稠状(剩余20体积份)，放入真空冷冻干燥仪中冷冻干燥，条件为-40℃到-35℃、12-15Pa、28-32h，得到黄褐色稍有粘性的物质GTF活性提取物。
实施例8：GTF活性提取物的制备
称取30g DEAE-23纤维素树脂(二乙基氨基乙基纤维素)干粉，加入到约160ml的0.2NNaOH溶液中，边加边搅拌，放置烧杯中浸泡0.6小时后，用蒸馏水洗脱，直到洗到中性为止，再加入到160体积份的0.2NHCL溶液中，用同样方法洗到中性；取Dowex50WX8树脂(732强酸性阳离子树脂)的处理同DEAE-23纤维素树脂；称取20g的富铬酵母粉，配制体积比为1∶1的正丁醇-水混合物400ml，将酵母粉加入上述混合液中，搅拌3小时，静置20h，取水相中的上清液在60℃下真空浓缩；将浓缩液分别加入2倍体积份的蒸馏水中进行透析，合并透析液，真空浓缩；将透析液加入DEAE-23纤维素层析柱中过柱分离，用蒸馏水洗脱，收集洗脱液直到紫外吸收峰在262nm处没有吸收为止，浓缩洗脱液；将浓缩液经过Dowex50WX8树脂柱分离，用0.25MNH4OH洗脱，收集洗脱液直到紫外吸收峰在262nm处没有吸收为止，将此洗脱液浓缩至粘稠状(剩余10体积份)，放入真空冷冻干燥仪中冷冻干燥，条件为-40℃到-35℃、12-15Pa、28-32h，得到黄褐色稍有粘性的物质GTF活性提取物。
实施例9：GTF活性提取物的制备
GTF活性提取物的制备工艺为：称取30g DEAE-23纤维素树脂(二乙基氨基乙基纤维素)干粉，加入到约140ml的0.2NNaOH溶液中，边加边搅拌，放置烧杯中浸泡0.5小时后，用蒸馏水洗脱，直到洗到中性为止，再加入到140体积份的0.2NHCL溶液中，用同样方法洗到中性；取Dowex50WX8树脂(732强酸性阳离子树脂)的处理同DEAE纤维素-23；称取40g的富铬酵母粉，配制体积比为1∶1的正丁醇-水混合物800ml，将酵母粉加入上述混合液中，搅拌4小时，静置20h，取水相中的上清液在50℃下真空浓缩；将浓缩液分别加入2倍体积份的蒸馏水中进行透析，合并透析液，真空浓缩；将透析液加入DEAE-23纤维素层析柱中过柱分离，用蒸馏水洗脱，收集洗脱液直到紫外吸收峰在262nm处没有吸收为止，浓缩洗脱液；将浓缩液经过Dowex50WX8树脂柱分离，用0.25MNH4OOH洗脱，收集洗脱液直到紫外吸收峰在262nm处没有吸收为止，将此洗脱液浓缩至粘稠状(剩余30体积份)，放入真空冷冻干燥仪中冷冻干燥，条件为-40℃到-35℃、12-15Pa、28-32h，得到黄褐色稍有粘性的物质GTF活性提取物。
实施例10：胶囊剂的制备
取GTF活性提取物47g分别与甲壳素33g、糊精20g混合，即得到100g含有GTF活性提取物活性成分的干药粉，将制得的药粉按照常规方法制成胶囊每粒0.2g，每日一次，每次一粒。
实施例11：片剂的制备
取GTF活性提取物17g分别与甲壳素53g、糊精30g混合，即得到100g含GTF活性提取物活性成分的干药粉，将制得的药粉按照常规方法制成片剂。每片0.5g，每日一次，每次一片。
实施例12：口服液的制备
取GTF活性提取物0.9g，溶解在91ml纯净水中，按照常规方法制成口服液，每支10ml，每日一次，每次一支。
实施例13：滴丸的制备
取GTF活性提取物47g分别与甲壳素33g、糊精20g混合，即得到100g含有GTF活性提取物活性成分的干药粉，将制得的药粉按照常规方法制成滴丸。