用于治疗中风的中药胶囊剂及其制法和质量控制方法.pdf

本发明涉及一种用于治疗中风的中药胶囊剂及其制法和质量控制方法；该中药胶囊剂由黄芪、鸡血藤、当归、川芎、桂枝、钩滕、牛膝、红花、地龙、水蛭、僵蚕、全蝎制成；该中药胶囊剂的质量控制方法包括：僵蚕、全蝎、地龙、水蛭、氨基酸、蛋白质、挥发油、牛膝、桂枝、黄芪的鉴别，黄芪的含量测定。

权利要求书
1.  一种用于治疗中风的中药胶囊剂，其特征在于它是由以下方法制备而成：黄芪200g、鸡血藤100g、当归50g、川芎25g、桂枝25g、钩滕25g、牛膝25g、红花25g、地龙75g、水蛭75g、僵蚕25g、全蝎17g；水蛭、地龙、僵蚕、全蝎粉碎成细粉；当归、川芎、桂枝蒸馏提取挥发油，滤取蒸馏液，另器保存，药渣与水煎部分第2、3次混合煎煮；黄芪、红花等加水煎煮三次，每次各1.5小时，三次煎液合并滤过与上述蒸馏液混合，减压浓缩至65℃热测时相对密度为1.25-1.30的清膏，60℃鼓风干燥，粉碎成细粉；取挥发油加入其3倍量的β-环糊精和2倍量的蒸馏水，研磨40分钟至糊状，50℃低温干燥，研成细粉，取上述细粉混合均匀，装入胶囊，制成1000粒，即得。

2.  如权利要求1所述的治疗中风的中药胶囊剂的制法，其特征在于：黄芪200g、鸡血藤100g、当归50g、川芎25g、桂枝25g、钩滕25g、牛膝25g、红花25g、地龙75g、水蛭75g、僵蚕25g、全蝎17g；水蛭、地龙、僵蚕、全蝎粉碎成细粉；当归、川芎、桂枝蒸馏提取挥发油，滤取蒸馏液，另器保存，药渣与水煎部分第2、3次混合煎煮；黄芪、红花等加水煎煮三次，每次各1.5小时，三次煎液合并滤过与上述蒸馏液混合，减压浓缩至65℃热测时相对密度为1.25-1.30的清膏，60℃鼓风干燥，粉碎成细粉；取挥发油加入其3倍量的β-环糊精和2倍量的蒸馏水，研磨40分钟至糊状，50℃低温干燥，研成细粉，取上述细粉混合均匀，装入胶囊，制成1000粒，即得。

3.  如权利要求1所述的治疗中风的中药胶囊剂的鉴别方法，其特征在于该方法中包括如下方法中的一种或几种的组合：
(1)僵蚕、全蝎、地龙、水蛭的纤维鉴别：取本发明，置显微镜下观察：菌丝体存在于体壁或淡棕色、半透明结晶块中，菌丝近无色，细长，直径1-5μm，相互盘缠交织；刚毛黄棕色，多碎断，先端锐尖或钝圆，基部稍窄，色淡，中段直径4-8μm，具纵直纹理，髓腔细窄，腔壁较平直；斜纹肌纤维无色，少数淡棕色，肌纤维易散离或相互绞结，大多弯曲或稍平直，直径4-36μm，边缘不平整，有的局部膨大，明暗相间纹量不明显；基本组织细胞较大，呈类圆形或类椭圆形，壁薄，无色，单个散离或数个成团块；
(2)氨基酸、蛋白质的鉴别：取本发明内容物0.5g，加水10ml，振摇数分钟，放置30分钟，滤过，取滤液适量点滴于滤纸上，晾干，于斑点上滴加茚三酮试液，105℃烘数分钟，斑点呈篮紫色；
(3)挥发油的鉴别：取本发明内容物1g，置具塞瓶中，加乙醚10ml，振摇，放置10分钟，滤过，滤液置蒸发皿中挥干，于残留物上滴加5％香草醛硫酸溶液，边缘呈紫色；
(4)牛膝的薄层鉴别：取本发明内容物4g，加乙醇30ml，水浴加热回流40分钟，放冷，滤过，取滤液，加盐酸3ml，水浴加热回流1小时后浓缩至约5ml，加水10ml，置分液漏斗中，用沸点60℃-90℃的石油醚30ml提取，提取液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取齐墩果酸对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照《中国药典》薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一含羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶H薄层板上，以氯仿-乙醚＝1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％磷钼酸乙醇试液，110℃烘约10分钟，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(5)桂枝的薄层鉴别：取本发明内容物6g，置具塞三角瓶中，加乙醚20ml，密塞，冷浸30分钟，时时振摇，滤过，滤液挥干，残留物加乙醚1ml使溶解，作为供试品溶液；另取桂皮醛对照品，加乙醇制成每1ml含1μl的溶液，作为对照品溶液；照《中国药典》薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以沸点60℃-90℃石油醚-醋酸乙酯＝17∶3为展开剂，展开，取出，晾干，喷以二硝基苯肼乙醇试液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙红色斑点；
(6)黄芪的薄层鉴别：取本发明内容物6g，加甲醇30ml，置水浴上加热回流1小时，滤过，滤液加于已处理好的条件为100-120目，5g，内径10-15mm的中性氧化铝柱上，用40％甲醇100ml洗脱，收集洗脱液，置水浴上蒸干，残渣加水30ml使溶解，用水饱和的正丁醇提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，用水洗涤2次，每次30ml，弃去水液；正丁醇液置水浴上蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液，照《中国药典》薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水＝13∶7∶2的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃烘约5分钟，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的棕褐色斑点。

4.  如权利要求1所述的治疗中风的中药胶囊剂的含量测定方法，其特征在于：取本发明20粒，倾出内容物，精密称定后，研细，精密称取内容物约3g，置磨口瓶中，用水数滴湿润后，加正丁醇20ml，回流提取2小时；趁热滤过，滤液用1％NaOH溶液洗3次，每次20ml，弃去碱液，正丁醇液再用正丁醇饱和的水洗至中性，分出正丁醇层在水浴上蒸干，残渣用甲醇溶解并定容至2ml，作为供试品溶液，精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液，照《中国药典》薄层色谱法试验，吸取对照品溶液10μl，供试品溶液15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水＝6∶4∶1 10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸的乙醇溶液，在105℃下烘5-7分钟，至斑点显色清晰，取出，在薄层板上覆盖相同大小的玻璃板，周围用胶布固定；照《中国药典》薄层色谱法进行扫描，波长λs＝530nm，λR＝700nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，本发明每粒含黄芪以黄芪甲苷、分子式为C44H66O4计，不得少于0.01mg。

说明书用于治疗中风的中药胶囊剂及其制法和质量控制方法
技术领域
本发明涉及一种中药制剂，特别是一种用于治疗中风的中药胶囊剂及其制法和质量控制方法。
背景技术
中风属于脑血管疾病，具有发病急、病情重、变化快、可多次发病及病死率高等特点，严重危害着人类身体健康特别是老年人的身体健康，给社会、家庭及患者个人均带来极为沉重的负担。本申请人曾于2004年向国家专利局提交了申请号为：200410045439.2、名称为“一种用于治疗中风的中成药及其制备方法”的申请，该申请公开了发明的处方组成和各种剂型的简单制备方法，本发明就是在申请号为200410045439.2申请的基础上，对其工艺条件进行了细化，并将其质量控制方法公开，使该发明得以完善。
发明内容
本发明的目的在于：提供一种治疗中风的中药胶囊剂及其制法和质量控制方法。
本发明是这样实现的：
一、处方：
黄芪200g、鸡血藤100g、当归50g、川芎25g、桂枝25g、钩滕25g、牛膝25g、红花25g、地龙75g、水蛭75g、僵蚕25g、全蝎17g。
二、制法：
水蛭、地龙、僵蚕、全蝎粉碎成细粉；当归、川芎、桂枝蒸馏提取挥发油，滤取蒸馏液，另器保存，药渣与水煎部分第2、3次混合煎煮；黄芪、红花等加水煎煮三次，每次各1.5小时，三次煎液合并滤过与上述蒸馏液混合，减压浓缩至65℃热测时相对密度为1.25-1.30的清膏，60℃鼓风干燥，粉碎成细粉；取挥发油加入其3倍量的β-环糊精和2倍量的蒸馏水，研磨40分钟至糊状，50℃低温干燥，研成细粉，取上述细粉混合均匀，装入胶囊，制成1000粒。
三、性状：
本发明为胶囊剂，内容物为淡黄棕色粉末，气微腥，味微成，微苦辛。
四、鉴别：
(1)取本发明，置显微镜下观察：菌丝体存在于体壁或淡棕色、半透明结晶块中，菌丝近无色，细长，直径1-5μm，相互盘缠交织；刚毛黄棕色，多碎断，先端锐尖或钝圆，基部稍窄，色淡，中段直径4-8μm，具纵直纹理，髓腔细窄，腔壁较平直；斜纹肌纤维无色，少数淡棕色，肌纤维易散离或相互绞结，大多弯曲或稍平直，直径4-36μm，边缘不平整，有的局部膨大，明暗相间纹量不明显；基本组织细胞较大，呈类圆形或类椭圆形，壁薄，无色，单个散离或数个成团块。
(2)取本发明内容物0.5g，加水10ml，振摇数分钟，放置30分钟，滤过，取滤液适量点滴于滤纸上，晾干，于斑点上滴加茚三酮试液，105℃烘数分钟，斑点呈篮紫色。
(3)取本发明内容物1g，置具塞瓶中，加乙醚10ml，振摇，放置10分钟，滤过，滤液置蒸发皿中挥干，于残留物上滴加5％香草醛硫酸溶液，边缘呈紫色。
(4)取本发明内容物4g，加乙醇30ml，水浴加热回流40分钟，放冷，滤过，取滤液，加盐酸3ml，水浴加热回流1小时后浓缩至约5ml，加水10ml，置分液漏斗中，用沸点60℃-90℃的石油醚30ml提取，提取液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取齐墩果酸对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照《中国药典》薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一含羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶H薄层板上，以氯仿-乙醚＝1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％磷钼酸乙醇试液，110℃烘约10分钟，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(5)取本发明内容物6g，置具塞三角瓶中，加乙醚20ml，密塞，冷浸30分钟，时时振摇，滤过，滤液挥干，残留物加乙醚1ml使溶解，作为供试品溶液；另取桂皮醛对照品，加乙醇制成每1ml含1μl的溶液，作为对照品溶液；照《中国药典》薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以沸点60℃-90℃石油醚-醋酸乙酯＝17∶3为展开剂，展开，取出，晾干，喷以二硝基苯肼乙醇试液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙红色斑点。
(6)取本发明内容物6g，加甲醇30ml，置水浴上加热回流1小时，滤过，滤液加于已处理好的条件为100-120目，5g，内径10-15mm的中性氧化铝柱上，用40％甲醇100ml洗脱，收集洗脱液，置水浴上蒸干，残渣加水30ml使溶解，用水饱和的正丁醇提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，用水洗涤2次，每次30ml，弃去水液；正丁醇液置水浴上蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液，照《中国药典》薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同-硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水＝13∶7∶2的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃烘约5分钟，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的棕褐色斑点。
五、检查：应符合《中国药典》胶囊剂项下有关的各项规定。
六、含量测定：
取本发明20粒，倾出内容物，精密称定后，研细，精密称取内容物约3g，置磨口瓶中，用水数滴湿润后，加正丁醇20ml，回流提取2小时；趁热滤过，滤液用1％NaOH溶液洗3次，每次20ml，弃去碱液，正丁醇液再用正丁醇饱和的水洗至中性，分出正丁醇层在水浴上蒸干，残渣用甲醇溶解并定容至2ml，作为供试品溶液，精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液，照《中国药典》薄层色谱法试验，吸取对照品溶液10μl，供试品溶液15μl，分别点于同-硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水＝6∶4∶1 10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸的乙醇溶液，在105℃下烘5-7分钟，至斑点显色清晰，取出，在薄层板上覆盖相同大小的玻璃板，周围用胶布固定；照《中国药典》薄层色谱法进行扫描，波长λS＝530nm，λR＝700nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，本发明每粒含黄芪以黄芪甲苷、分子式为C44H66O4计，不得少于0.01mg。
七、功能与主治：
益气养血、祛风痰活血络。适用于中风病中经络所见的气虚血瘀症、风痰瘀血痹阻络脉症的患者，尤其适用于恢复期病人，临床表现可见：半身不遂、偏身麻木、言语蹇涩、口舌歪斜或头晕目眩、或手足肿胀、或肢体枸挛、或肢体痿软等症。
八、用法用量：
口服，每粒0.27g，一次4-6粒，一日3次。
药效学试验结果：为了进一步说明本发明的优越性，将本发明产品进行了一系列的药效学试验，将试验结果总结如下：
l.本发明胶囊对大鼠局灶性脑缺血(急性期)的影响
本试验采用电凝法阻断大鼠脑中动脉，并结扎同侧颈总动脉，造成局灶性脑缺血模型，观察了本发明胶囊治疗性给药对脑中动脉阻断后急性期的神经症状、脑梗塞范围、血清MDA含量、SOD活性及病理学检查等指标的影响。结果表明：造成大鼠局灶性脑缺血模型后，可见神经行为障碍，大脑冠状切片经TTC(氯化三苯四氮唑)染色可见脑梗塞灶，24h血清MDA含量明显增高，SOD活性明显降低，病理学光镜检查可见神经细胞坏死，胞浆增厚，染色变浅，间质水肿明显。动物经十二指肠给予本发明胶囊进行治疗性给药后，动物神经症状明显改善，血清MDA含量明显下降，SOD活性明显增加，脑梗塞范围亦有一定减小，病理学检查可见间质水肿程度，神经细胞坏死程度较模型组有所改善。提示：本发明胶囊对缺血性中风(急性期)有良好的治疗作用。
2.本发明胶囊对大鼠局灶性脑缺血(恢复期)的影响
本实验用电凝法阻断大鼠脑中动脉及结扎同侧颈总动脉，造成大鼠局灶性脑缺血模型，连续给药7天，观察了本发明胶囊对此模型恢复期的治疗作用。试验结果表明，造成大鼠局灶性脑缺血模型后，可见神经行为障碍，镜下明显可见脑梗塞灶(淡染区)，病理学检查可见淡染区内神经细胞坏死，胞核呈细窄三角形或无结构状态，核仁消失。给予本发明胶囊7天后，动物神经症状有明显改善，脑梗塞范围明显减少，病理学检查可见神经细胞坏死程度较模型组明显改善。提示：本发明对缺血性中风恢复期有良好治疗作用。
3.本发明胶囊对大鼠实验性脑缺血的影响
本实验结扎大鼠双侧颈总经脉，造成急性实验性不完全性脑缺血模型，于实验前一天上、下午及实验手术前2小时各灌胃给药一次，双侧颈总动脉结扎3小时后，断头，开颅取脑，称湿重，计算脑指数；然后在烘箱中100℃烘至恒重，测干重计算脑含水量。缺血模型组和各用药组在结扎双侧颈总经脉前5min股静脉注射伊文思兰，结扎3小时后，断头取脑称重，分别浸入甲酰胺溶液中，在45℃温浸72小时，将组织中的色素全部浸出，取浸泡液用721分光光度计比色，计算脑组织内伊文思兰的含量，从而测定毛细血管通透性。结果表明，本发明对大鼠实验性脑缺血具有明显的保护作用，明显改善脑缺血所致脑血管通透性及脑含水量增加等病理改变。
4.本发明胶囊对麻醉犬脑血流量的影响
本实验对实验动物静脉麻醉后，分离左侧颈内、颈外动脉，将电磁流量计探头置于左侧颈内动脉，结扎颈外动脉。所测颈内动脉血流量，反映脑血流量的变化，并计算脑血管阻力。分离左侧股动脉，插管，连接压力换能器，经载波放大器测动脉血压。放置心电图肢体导联电极，经心电放大器，标测标准II导心电图并计算心率。所有指标均记录于多道生理记录仪。施腹部手术，分离十二指肠中段，插管，以备给予所试药物。手术完毕，待所观察指标稳定后，记录药前值，经十二指肠给入所试药物，并于药后5、10、15、20、30、45、60、90、120分钟进行记录。将各项观察指标进行统计学处理后，观察不同时间的实测值与给药前进行自身比较，其变化百分率进行组间比较，以判断其显著性。结果表明：本发明胶囊可显著增加麻醉犬脑血流量，降低脑血管阻力；对动脉血压、心率、标准II导心电图等指标无明显影响。
5.本发明胶囊对大鼠动脉血栓的溶解作用
本实验以电极刺激大鼠颈总动脉，造成血管内壁损伤，引起血小板聚集而形成血栓。经灌胃治疗性给药，观察本发明对血栓溶解作用。结果表明：本发明对动脉血栓有明显溶解作用。
6.本发明胶囊对大鼠动脉血栓形成的影响
本实验分离一侧颈总动脉约15mm，将实验性体内血栓形成测定仪的刺激电极和温度传感器钩于动脉上，对照组于静脉注射生理盐水或肝素后3min，本实验胶囊于实验前灌胃给药，每天一次，连续7天，于末次给药后1小时，用1.5mA直流电刺激血管壁7min，同时由温度传感器监测血管表面温度变化，记录血栓形成时间。结果表明，本发明胶囊具有明显延缓血栓形成时间的作用。
7.本发明胶囊对大鼠动-静脉旁路血栓形成的影响
本实验动物连续给药4日，于第五日ip肝素，在给肝素30min后，本实验给药组和阳性对照(中风回春丸)组60min后，取一特制聚乙烯导管，内置5cm长丝线一条，导管两端分别插入右颈总动脉和左颈外静脉，血液经导管循环15min后，小心取下导管，并细心取出丝线，用分析天平准确称重，并减去丝线原来已准确称重的重量，即为血栓重。结果表明，本发明能明显抑制大鼠血栓形成，减轻血栓湿重，且本发明对大鼠血栓形成的抑制作用有一定的量效关系。
8.本发明胶囊对ADP诱导大鼠血小板聚集的影响
本实验给大鼠灌胃给药，每日一次，连续用药15天，于末次用药后60min，断尾取血。每只大鼠常法制备富血小板血浆(PRP)和贫血小板血浆(PPP)，用(PPP)调(PRP)至血小板为1.5×105个/mm3，取PRP与PPP各200μl，分别置于两个比浊杯中，加入10μl生理盐水，混合后置37℃保温2min，PRP杯搅匀后调零点，分别加入5.0μlADP至最终浓度为0.93μmol/L，用PAM-2型血小板聚集仪测血小板最大聚集率(PA)，最大聚集速率(Vmax)和自加入ADP开始至50％最大聚集时间(TE50)，并进行各组间比较。实验结果表明，本发明能明显降低血小板聚集，延长血小板聚集时间的作用。
9.本发明胶囊对小鼠凝血时间的影响
本实验每只小鼠灌胃给药，连续用药15天后，在末次给药60min后，眼眶放血，用破片法测凝血时间。结果表明，本发明胶囊药物可明显延长小鼠凝血时间。