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1、(10)申请公布号 CN 102277405 A (43)申请公布日 2011.12.14 CN 102277405 A *CN102277405A* (21)申请号 201110225073.7 (22)申请日 2011.08.02 C12P 21/06(2006.01) C07K 2/00(2006.01) C07K 1/34(2006.01) (71)申请人 唐作安 地址 264000 山东省烟台市芝罘区南海大院 1-15 号 (72)发明人 唐作安 (54) 发明名称 一种蛇皮活性肽的制备方法 (57) 摘要 本发明涉及一种蛇皮活性肽的制备方法， 具 体涉及以乌梢蛇、 蝮蛇、 赤练蛇、。
2、 银环蛇、 眼镜蛇、 大王蛇、 五步蛇、 松花蛇、 虎尾蛇、 中国水蛇等蛇 类的鲜蛇皮为原料， 经清洗绞碎磨浆调整 物料浓度调整物料温度加入蛋白酶酶解离 心过滤灭酶纳滤脱盐浓缩超滤提纯冷 冻干燥等工艺流程， 得到蛇皮活性肽。产品分子 量 90以上分布于 200-5000Dalton 之间， 其中 200-2000Dalton(2-10 肽 ) 占 75以上， 还含有 二十二碳六烯酸 (DHA) 和二十碳五烯酸 (EPA) 等 营养成分， 具有良好的水溶性， 优良的吸湿保湿功 能， 较好的酸、 热稳定性。可用于医药领域和保健 食品生产领域。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识。
3、产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 2 页 CN 102277408 A1/1 页 2 1. 一种蛇皮活性肽的制备方法， 其特征在于利用生物蛋白酶水解蛇皮蛋白， 再用纳滤 技术脱盐浓缩， 用超滤技术提纯， 经冷冻干燥即得蛇皮活性肽粉。 2. 一种实现权利要求 1 所述的蛇皮活性肽的制备方法， 其特征在于包括以下步骤和方 法 ： (1) 以乌梢蛇、 蝮蛇、 赤练蛇、 银环蛇、 眼镜蛇、 大王蛇、 五步蛇、 松花蛇、 虎尾蛇、 中国水 蛇等蛇类的鲜蛇皮为原料， 用清水洗净 ； 用绞肉机绞碎， 绞碎程度由 6-10mm 不锈钢孔板 控制 ； 用超微磨磨浆至细度 10-30m， 。
4、所得即蛇皮浆。 (2) 蛇皮浆置发酵罐内， 以 1 1 比例加入纯净水， 加温至 50-65， 加入 537 酸性 蛋白酶、 Alcalase 碱性蛋白酶、 Protamex 复合蛋白酶， 酶解 2-12 小时， 控制水解度 DH 为 10-40， 灭酶 ； 离心过滤 ； 即得酶解液。 (3) 酶解液用纳滤膜进行纳滤脱盐、 浓缩， 纳滤膜可选用聚酰胺纳滤膜、 聚醚砜纳滤膜、 醋酸纤维素纳滤膜、 聚乙烯醇纳滤膜等， 截留分子量采用 100-250Dalton ； 用超滤膜过滤， 截留分子量采用 100-5000Dalton ； 所得即蛇皮活性肽溶液。 (4) 蛇皮活性肽溶液经 -10-40冷冻干。
5、燥， 即得蛇皮活性肽冻干粉。 3. 一种实现权利要求 1、 2 所述的蛇皮活性肽的制备方法， 其特征在于所得产品分子量 90以上分布于 200-5000Dalton 之间， 其中 200-2000Dalton(2-10 肽 ) 占 75以上， 还含 有二十二碳六烯酸 (DHA) 和二十碳五烯酸 (EPA) 等营养成分。作为药品、 保健食品的功效 成分进行开发利用， 具有十分广泛的前景。 权 利 要 求 书 CN 102277405 A CN 102277408 A1/2 页 3 一种蛇皮活性肽的制备方法 技术领域 0001 本发明涉及一种蛇皮活性肽的制备方法， 具体涉及利用生物蛋白酶水解蛇皮蛋。
6、 白， 再纳滤脱盐浓缩， 超滤提纯， 冷冻干燥。属于生物技术领域。 背景技术 0002 蛇皮通常被用来制作二胡、 京胡等乐器， 制作提包、 背包、 腰带、 皮鞋等日用品， 制 作高档工艺品， 也被制作成美味食品、 保健食品等。 0003 蛇皮中含有非常丰富的胶原蛋白、 优质脂肪、 多种矿物质、 多种维生素等营 养成分， 具有修复皮肤、 粘膜、 血管、 韧带、 骨骼的作用。由于胶原蛋白的分子量达 30000-200000Dalton， 甚至更大， 因此很难被消化吸收、 充分利用。极大地限制了蛇皮的利 用效率和应用范围， 浪费了大量的优质资源。 0004 随着现代生物技术和膜分离技术的飞速发展和日。
7、益成熟， 利用这些技术制备蛇皮 活性肽就成为可能。 本发明旨在探索对蛇皮实现生物酶水解、 膜技术分离， 确定可工业化生 产的工艺流程。 发明内容 0005 本发明是探索提供一种采用生物蛋白酶水解纳滤脱盐浓缩超滤提纯冷冻 干燥等工艺流程制备蛇皮活性肽的方法， 以期望得到一条可工业化的生产工艺路线。 0006 本发明的技术方案 ： 涉及一种蛇皮活性肽的制备方法， 具体涉及以乌梢蛇、 蝮蛇、 赤练蛇、 银环蛇、 眼镜蛇、 大王蛇、 五步蛇、 松花蛇、 虎尾蛇、 中国水蛇等蛇类的鲜蛇皮为原 料， 经清洗绞碎磨浆调整物料浓度调整物料温度加入蛋白酶酶解离心过滤 灭酶纳滤脱盐浓缩超滤提纯冷冻干燥等工艺流程，。
8、 得到蛇皮活性肽。产品分子量 90以上分布于 200-5000Dalton 之间， 其中 200-2000Dalton(2-10 肽 ) 占 75以上， 还含 有二十二碳六烯酸(DHA)和二十碳五烯酸(EPA)等营养成分， 具有良好的水溶性， 优良的吸 湿保 湿功能， 较好的酸、 热稳定性。可用于医药领域和保健食品生产领域。 具体实施方式 0007 实施例 1 0008 水解度 (DH) 15的蛇皮活性肽粉的制备 0009 选用乌梢蛇、 赤练蛇、 大王蛇、 松花蛇、 虎尾蛇的鲜蛇皮各 5Kg， 清水洗净 ； 用绞肉 机绞碎， 绞碎程度由10mm不锈钢孔板控制 ； 用超微磨磨浆至细度20-30m。
9、 ； 置发酵罐内， 以 1 1 比例加入纯净水， 加温至 45-55， 加入 537 酸性蛋白酶在 PH4.0-5.0、 45-50条 件下进行酶解反应， 采用TNBS法控制水解度在15， 反应结束后离心过滤 ； 加温至90、 保 持 10 分钟灭酶 ； 用聚酰胺纳滤膜进行纳滤脱盐、 浓缩， 截留分子量采用 150Dalton ； 用超滤 膜过滤， 截留分子量采用 100-5000Dalton ； 经 -10-35冷冻干燥， 即得到蛇皮活性肽冻干 粉。 说 明 书 CN 102277405 A CN 102277408 A2/2 页 4 0010 实施例 2 0011 水解度 (DH) 25的。
10、蛇皮活性肽粉的制备 0012 选用乌梢蛇、 松花蛇、 大王蛇、 五步蛇、 虎尾蛇的鲜蛇皮各 5Kg， 清水洗净 ； 用绞肉 机绞碎， 绞碎程度由 8mm 不锈钢孔板控制 ； 用超微磨磨浆至细度 15-25m ； 置发酵罐 内， 以 1 1 比例加入纯净水， 加温至 50-60， 加入 Alcalase 碱性蛋白酶在 PH8.0-9.0、 50-55条件下进行酶解反应， 采用 TNBS 法控制水解度在 25， 反应结束后离心过滤 ； 加温至 95、 保持 8 分钟灭酶 ； 用聚乙烯醇纳滤膜进行纳滤脱盐、 浓缩， 截留分子量采用 300Dalton ； 用超滤膜过滤， 截留分子量采用 300-5000Dalton ； 经 -10-35冷冻干燥， 即得 到蛇皮活性肽冻干粉。 说 明 书 CN 102277405 A 。