抗美尼尔氏病药青阳参、用途和制备方法 本发明涉及青阳参在制药领域中的用途，具体地，涉及青阳参在制备抗美尼尔氏病的药物中的应用，用青阳参作为原料制成的治疗美尼尔氏的药物和制备该药物的方法。
美尼尔氏病是一种常见的多发病，患病率为总人口的0.5％，我世界约有2500-3000万美尼耳氏病人，中年女性居多数。此病是一种突发性的疾病，其症状包括发作性的眩晕、恶心呕吐、眼球呆视或震颤，有些不有波动性耳聋、耳鸣和耳胀满感，少数病人(约20％的患者)留下到残性眩晕和丧失听力。此症病因目前尚无确切的病理研究，因此没有对症有效的药物。美尼耳病又称美尼耳氏综合症(Menier′syndrome)，是一种病因不确切又无有效药物的危害人类健康的疑难病症。目前世界临床上从东茛菪碱、晕海宁、山茛菪碱、盐酸异丙嗪、阿托品、抗眩啶(betahistine)、敏克静(mecligine)等药物中选择若于种药进行试探性治疗，效果不能令人满意。但上述药物大都有较大的毒副作用，长期药物治疗会有不可逆转的毒副作用，如耳聋和经常性的耳鸣等。因此研制疗效高、毒副作用小的治疗美尼尔病药物已成急需解决的问题。从萝摩科植物青阳参中提取药用成分制成的片剂，在八十年代临床功用仅用于清热镇惊，用于治疗癫痫病。迄今没有青阳参在制备抗美尼尔氏病炎药物中的应用的报道。此外，抗癫痫药青阳参药效成分的提取方法复杂、得率低，该药仅为片剂一种剂型。
本发明的目地在于提供青阳参在制药领域中的一种新用途，即青阳参在制备抗美尼尔氏病药物中的应用，提供新的提取青阳参药效成分的方法和常规制剂方法结合制得的抗美尼尔氏病药物片剂、口服液、胶囊，具药源广、药效高、毒性低、稳定性好、生物吸收利用度高的优点；同时提供该药物的制备方法。
本发明提供的技术方案如下：
一种抗美尼尔氏病的药物，以青阳参为原料，先以下述方法制得药效部位，再按常规制剂方法制成的青阳参片剂或口服液或胶囊：
取青阳参，用氯仿或乙酸乙酯在60-70℃热提取2-3次，回收溶剂后的粘稠物用石油醚回流脱脂，底物即为药效部位。
制备本发明治疗美尼尔氏病药物片剂的一种方法，取青阳参，用氯仿在60-70℃热提取2-3次，回收溶剂后的粘稠物用石油醚回流脱脂，底物即为药效部位，按药效部位与赋形剂重量比为1∶2-1∶4的比例加入赋形剂，制成片剂。
制备本发明治疗美尼尔氏病药物胶囊的一种方法，取青阳参，用氯仿在60-70℃热提取2-3次，回收溶剂后的粘稠物用石油醚回流脱脂，底物即为药效部位，压制成粉后装入药用胶囊制得青阳参胶囊。
制备本发明治疗美尼尔氏病药物口服液的一种方法，取青阳参，用氯仿在60-70℃热提取2-3次，回收溶剂后的粘稠物用石油醚回流脱脂，底物即为药效部位，按常规制剂方法，将药效部位制成浓度0.1g-0.5g/10ml一支的糖浆口服液。
制备本发明治疗美尼尔氏病药物片剂的另一种方法，取青阳参，用乙酸乙酯在60-70℃热提取2-3次，回收溶剂后的粘稠物用石油醚回流脱脂，底物即为药效部位，按药效部位与赋形剂重量比为1∶2-1∶4的比例加入赋形剂，制成片剂。
制备本发明治疗美尼尔氏病药物胶囊的另一种方法，取青阳参，用乙酸乙酯在60-70℃热提取2-3次，回收溶剂后的粘稠物用石油醚回流脱脂，底物即为药效部位，压制成粉后装入药用胶囊制得青阳参胶囊。
制备本发明治疗美尼尔氏病药物口服液的另一种方法，取青阳参，用乙酸乙酯在60-70℃热提取2-3次，回收溶剂后的粘稠物用石油醚回流脱脂，底物即为药效部位，按常规制剂方法，将药效部位制成浓度0.1g-0.5g/10ml一支的糖浆口服液。
本发明同时提供了青阳参在制备抗美尼尔氏病的药物中的应用。
为了更好地理解本发明的实质，下面用抗美尼尔氏药青阳参的免疫药理、毒性来说明青阳参抗美尼尔氏病的新用途及其有益效果。
采用本发明的实施例制得的青阳参片剂、胶囊、口服液用于下述实验：
一、急性毒性：
实验用昆明种小鼠，体重18-24克，大鼠，体重200-250克，雌雄皆用，实验前12小时禁食不禁水(下同)，均腹空注射不同剂量的青阳参，动物分成4组，每组10只，小鼠以24小时，大鼠以72小时的死亡为指标，以Weil’s氏法计算LD50，结果：小鼠＝496.2(427.3-576.1)mg/kg，大鼠＝349.0-451.7mg/kg。
二、抗惊厥作用：
1、抗超强电休克发作(MES)作用：
选用18-24克雄小鼠随分组，每组10只，分别雌雄(ip)，本品40.80mg/kg，4h后实验，结果证明，对WES无效，另取16组小鼠，每组5只，其中8组分别ip苯巴比妥钠，另4组ip苯妥英纳，lh后测其ED50，另外组分别ip本品青阳参80mg/kg，3h后4组即不同剂量的苯巴比妥钠，另外4组ip不同剂量的苯妥英，再过1h测其抗MES的ED50。结果可见，本品单用对MES无效，但能加强苯巴比妥和苯妥英钠的作用，结果如表1。
药物 ED501、青阳参 40-80mg/kg2、苯巴比妥钠 13.0(9.7-17.4)3、苯巴比妥钠＋青阳参(800g/kg) 2.4(1.5-3.91)(1.5-3.91)4、苯荽英钠 4.8(3.4-6.7)5、苯妥英钠＋青阳参(80mg/kg) 2.0(1.8-3.4)
2、抗听源性发作作用：
实验用听源性发作敏感的Pπ-PMc大鼠，雌雄皆用，随机分组，每组10只，本重200-270克，首先测定发作敏感性，连续3日，反应恒定者用于实验，而后分组ip本品青阳参，4小时后再测其抗惊厥效应，以完全防止发作为指标，计算其ED50，结果证明其ED50为18.8mg/kg，用量在12.5mg/kg时已使发作明显减轻(P＜0.01)。
3、对点燃效应发作的影响：
将点燃效应(KE)5-6级的大鼠分成2组，一组口服本品100mg/kg，在给药后4.6小时和12小实验，另一组口服60mg/kg，连用2日，每次组药后4.6和12小时实验，以完全对抗为指标，结果无效。
三、抗美尼尔氏综合症实验(Meniere′s Disease)：
实验用240-300克的豚鼠雌雄皆用，随机分组，实验前12小时禁食不禁水，对照组10只腹腔注射(ip)等容量的2％吐温80，药物组每组5只，第一组ip本品青阳参60mg/kg，第二组ip60mg/kg一周后再给60mg/kg，第三组ip120mg/kg，均在给药后4小时实验，第4组ip盐酸地芬尼多(眩晕停)100mg/kg，90分钟后实验。
将20μL三氯甲烷用微量注射器通过一细塑管准确的注入外耳道深部，一般在给药后10分钟左右出现临床症状：全身迅速向给药侧旋转，常在给三氯甲烷后15-20分钟出现，而后时停时旋转，约在60-80分钟停止，这是最严重的症状；眼球震颤和头向左右摇摆，为次要症状，后两种指标在给三甲烷后20、40、60、80、100和120分各记数一次，取组间均值为指标。结果证明：青阳参在60mg/kg，可使旋转明显减少，部分动物完全消失(P＜0.001)，但对眼球震颤和头左右摇摆影响较轻，对症状持续时间也无影响，而60mg/kg一周后再给60mg/kg组，效果更好，旋转完全消失，眼球震颤和头左右摇摆明显减少(P＜0.01)，症状维持时间也明显缩短。120mg/kg给药一次组旋转基本消失，眼球震颤和头左右摇摆次数明显减少，症状持续时间缩短，一周后再约120mg/kg，效果与一次药相似。眩晕停100g/kg也可使旋转基本消失，眼球震颤和头左右摇摆总人数明显减少，持续时间明显缩短，结果见表2：
表2 青阳参药物对三氯甲烷引起的豚鼠美尼尔氏病的影响药物 对照组 青阳参 一周后再给 120 一周后再给 眩晕停(mg/kg) 60 60 120 100旋转2h 123.7＋27.4 10.8＋3.9** 0** 3.1＋2.3** 0** 9.4＋6.4**眼 20 150＋17.5 133.2＋4.2 45.6＋8.9 110＋11.2 88＋17.5 87.6＋24.2*
40 130＋23.2 110＋10.1 32＋14.8* 76.8＋20.4* 46＋16.7* 40.8＋17*球 60 109＋6.7 95＋11.2 11.2＋11.2* 58.4＋158* 29.6＋12.3* 40＋14.3*
80 78.4＋4.5 96.2＋22.3 0 18.6＋8.9* 6.0＋6.0* 18＋8.4*震 100 66.9＋24.4 75.2＋10.6 0 3.0＋3.0* 0 0颤 120 10.7＋5.6 30.4＋16.3 0 0 0 0头 20 111＋28.6 99.6＋45 20＋20** 56＋16.4* 28.6＋18.2* 54.4＋23.1*左 40 104＋20 78.4＋3.9 0 28.8＋14.8* 9.6＋9.6* 40.8＋17.0*右 60 95.9＋7.2 62.4＋6.6 0 18.6＋8.9 6.4＋6.4* 29.6＋13.2*摇 80 60.6＋23.8 52.8＋23.7 0 18.6＋8.9* 0 3.2＋3.2摆 100 29.4＋10.1 43.2＋9.4 0 3.0＋3.0 0 0
120 22.3＋10.1 20＋13.8 0 0 0 0
注：x＋Sx **P＞0.001 *P＞0.01
由以上结果可见青阳参对美尼尔氏病病理模型有很好的治疗作用，疗效近似眩晕停，60mg/kg一次给药巳使严重症状基本消失，60mg/kg一周内2次给药效果更好，与120mg/kg一次给药的效果近似，也与100mg/kg的眩晕停效果近似。
三、免疫药理作用：
将动物(小鼠体重18-22克)随机分组，每组10只，青阳参加环磷酰胺组(简称青阳参组)，溶剂聚乙二醇(PEG)加环磷酰胺组(简称CP组)，空白对照组每日注射生理盐水0.2ml/只。青阳参组按1/4LD50(70mg/kg)每日肌肉注射，环磷酰胺于10日按100mg/kg皮下注射一次，于实验第1，14，17，24，31日由尾静脉采血测定白细胞总数，淋巴细胞百分比，ANAE阳性淋巴细胞百分比，淋巴细胞DNA含量(按计分法)：
1、对ANAE阳性淋巴细胞的影响：
于给CP后第4日，CP组ANAE阳性淋巴细胞百分比改变不大，但其绝对数明显下降，在注射CP后第7日降到最低水平，然后逐渐恢复正常；青阳参级ANAE阳性淋巴细胞在注射CP后第4天下降不显著，也在第7日下降到最低点，但下降程度较单用CP组明显为轻。
2、青阳参对淋巴细胞DNA的保护作用：
CP组淋巴细胞DNA的含量于第4日开始下降，第7日下降到最低水平。青阳参组也是第4日开始下降，到7日下降到最低点，但均显著高于CP组。淋巴细胞DAN的动态变化来看，CP组的DNA值的下降急剧，而且持续一段时间；青阳参组的DNA含量虽有下降，但急剧下降的时间发 生较冕，维持下降的最低点的时间短，就开始回升。CP组和PEG组淋巴细胞核内DNA着色区均出现大量空泡，而青阳参组未观察到这一现象，可见青阳参对淋巴细胞DNA有保护作用。
3、对血浆及尿液影响：44例治疗前后白细胞总数、分类、血小板计数，出凝血时间无明显改变；尿常规检查也无异常发现。
综观以上实验结果，本发明的有益效果在于：
本发明的青阳参片剂、胶囊、口服液具药源广、药效高、毒性低、稳定性好、生物吸收利用度高的优点：
本发明的青阳参具有免疫活性，对氯仿注入豚鼠外耳道深部造成的美尼尔氏病病理模型(豚鼠眩晕旋转、眼球震颤、头左右摇摆)有很好的治疗作用。有效率为85-90％，与对照组有明显差异；青阳参片剂、胶囊、口服液三种剂型副作用小，口服方便，是一个有效低毒的抗美尼尔氏药。青阳参用乙酸乙酯或氯仿提取物，经石油醚脱脂后的产物为青阳参药效部位，简称为青阳参总甙，它不同于一般免疫药物的单一免疫活性，它对免疫系统—中枢神经—内分泌同时起作用，这表现在药理和临床效果上，。用药理实验确认其免疫活性成分，结果证明该植物活性成分是C21-甾体酯甙类，进一步分离提纯证实单体为该类化合物。临床用青阳参总甙，腹腔注射有效剂量60mg/kg，其安全比为12-16倍，显示此药安全方便。综合上述化学、药理和临床的结果，证实青阳参的C21-甾体成分具有免疫调节和增强作用，同时对美尼尔氏病有治疗作用，而且青阳参抗美尼尔氏药毒副作用小，其他类药物大都有较大的毒副作用。
实施例一：
取萝摩科鹅绒藤属植物青阳参(Cynanchum otophyllum Schneid)根10kg，用氯仿在70℃热提取2次，回收溶剂后的粘稠物用石油醚回流脱脂，得底物即药效部位块状物200g，按药效部位与赋形剂重量比为1∶2的比例加入赋形剂淀粉400g，制成2000片片剂。
实施例二：
取萝摩科鹅绒藤属植物青阳参(Cynanchum otophyllum Schneid)根10kg，用氯仿在70℃热提取3次，回收溶剂后的粘稠物用石油醚回流脱脂，得底物即药效部位块状物300g，压制成粉后装入药用胶囊制得3000个青阳参胶囊。
实施例三：
取萝摩科鹅绒藤属植物青阳参(Cynanchum otophyllum Schneid)根10kg，用氯仿在65℃热提取3次，回收溶剂后的粘稠物用石油醚回流脱脂，得底物即为药效部位块状物250g，按常规制剂方法，将药效部位制成浓度0.5g/10ml一支的糖浆口服液。
实施例四：
取萝摩科鹅绒藤属植物青阳参(Cynanchum otophyllum Schneid)根10kg，用乙酸乙酯在65℃热提取2次，回收溶剂后的粘稠物用石油醚回流脱脂，得底物即药效部位块状物300g，按药效部位与赋形剂重量比为1∶4的比例加入赋形剂淀粉，制成片剂。
实施例五：
取萝摩科鹅绒藤属植物青阳参(Cynanchum otophyllum Schneid)根10kg，用乙酸乙酯在70℃热提取3次，回收溶剂后的粘稠物用石油醚回流脱脂，得底物即药效部位块状物300g，压制成粉后装入药用胶囊制得青阳参胶囊。
实施例六：
取萝摩科鹅绒藤属植物青阳参(Cynanchum otophyllum Schneid)根10kg，用乙酸乙酯在60℃热提取3次，回收溶剂后的粘稠物用石油醚回流脱脂，得底物即药效部位块状物，按常规制剂方法，将药效部位块状物制成浓度0.2g/ml一支的糖浆口服液。