一种水剂药物组合物及其制备方法与应用.pdf

本发明公开了一种水剂药物组合物，由如下组分制成：板蓝根17～23g、金银花17～23g、黄芩18～22g、野菊花18～22g，蒸馏水500～550ml，鸡胚尿液400～450ml；其中板蓝根、金银花、黄芩、野菊花的有效成份≥60％。本发明的水剂药物组合物具有能够诱导机体产生内源性干扰素，增强巨噬细胞的吞噬功能，调节T、B淋巴细胞，激活特异性和非特异性免疫功能，实现直接破坏或杀伤肿瘤细胞的作用。本发明的药物属中药制剂，为中药与灭活病毒联合体，用药途径简单方便，副作用小，成本低，便于临床大面积推广，可广泛应用于家庭病床，符合低成本医疗卫生发展方向。预计每年可创效益约计200万元。

权利要求书
1.  一种水剂药物组合物，由如下组分制成：
板蓝根17～23g、金银花17～23g、黄芩18～22g、野菊花18～22g，蒸馏水500～550ml，鸡胚尿液400～450ml；其中板蓝根、金银花、黄芩、野菊花的有效成份≥60％。

2.  如权利要求1所述的水剂药物组合物，其特征在于：所述水剂药物组合物由如下组分制成：
板蓝根20、金银花20g、黄芩20、野菊花20，蒸馏水500ml，鸡胚尿液400ml；其中板蓝根、金银花、黄芩、野菊花的有效成份≥75％。

3.  如权利要求1或2所述的水剂药物组合物，其特征在于：所述水剂药物组合物的各组分用量能以给出的计量单位按比例关系放大或缩小。

4.  如权利要求1或2所述的水剂药物组合物，其特征在于：所述鸡胚尿液是指无菌操作抽取的孵育9～10天的鸡胚尿囊腔中的尿液。

5.  权利要求1所述水剂药物组合物的制备方法，步骤是：
按组分量称取板蓝根、金银花、黄芩、野菊花，加水1600～2000ml煎煮1.5～2小时滤过备用，药渣中再加入1600～2000ml水同法煎煮1～1.5小时滤过与第一次煎液合并浓缩至500ml，加3倍体计量的无水乙醇沉淀72～75小时，取上清液回收乙醇，加蒸馏水稀释沉淀至1000ml，过滤为澄清液，灭菌后备用；取孵育9～10天的鸡胚以无菌操作抽取尿囊腔中尿液，置无菌瓶备用；按体积比3～5∶10的比例将鸡胚尿液与上述中药提取液混合、分装、封口、-20℃保存。

6.  如权利要求5所述水剂药物组合物的制备方法，其特征在于：所述鸡胚尿液与上述中药提取液混合的体积比是4∶10。

7.  权利要求1或2所述的水剂药物组合物在制备治疗恶性肿瘤药物中的应用。

8.  如权利要求7所述的应用，其特征在于：所述水剂药物组合物在制备治疗恶性肿瘤生物反应调节剂中的应用。

说明书一种水剂药物组合物及其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及一种生物制剂及其制备方法与应用，尤其涉及一种生物制剂类的经鼻粘膜吸收的水剂药物组合物及其制备方法与其作为药物在恶性肿瘤生物治疗中的应用。
背景技术
肿瘤作为一种常见病、多发病，严重损害着人们的健康。据统计全世界每年新发癌症患者800多万，死亡600多万。在我国，癌症的发病率和死亡率也在逐年上升。从70年代到90年代的20年中，我国癌症发病率由每年90万人上升到160万人，死亡数由每年70万人上升到130万人。当前癌症的治疗方式主要有以下几种：手术、放疗、化疗、生物免疫治疗、中医治疗。手术治疗：肿瘤常用的治疗方式，适合各期的肿瘤治疗，如术前化疗、术中化疗、术后化疗、化疗合并放疗、单纯化疗等。免疫治疗：肿瘤的辅助治疗方式。化疗是肿瘤治疗的最常用的治疗方法，且经过多年的研究取得了很大的成绩，但就目前研究的发展趋势来说，化疗仍有很多不如人意之处。由于单一治疗方法有其局限性，不能达到更高的疗效。现在往往采取合理、有计划的综合治疗，且在相当多的肿瘤中取得较好的疗效。近几年来综合治疗已经取代传统的单一治疗方式，在许多的肿瘤中取得较高的治愈率。综合治疗的特点是取长补短，彼此协调，多管齐下，全面调理。目前研究显示通过中药治疗增强或调整机体抗病能力可在一定程度上提高治愈率，中药制剂主要通过机体免疫功能提高来改善机体自愈能力，同时增强机体抗放、化疗的毒副作用的能力，提高放、化疗的效能，增强机体的耐受能力，从而提高治愈率。中西医结合治疗肿瘤是中国防治肿瘤的特色之一。中医药学有几千年的历史，有丰富的临床经验，而且以古代哲学思想为理论基础去指导临床实践，形成了独特的医疗体系。随着中医药学的发展，在大量的中医药学书籍中记载着有关肿瘤的丰富内容。中国的医药学者不断运用现代科学和西医学去深入探索，取得不少成绩，积累了很多治疗经验，并在临床及基础实验研究中有所发展和有所创新。中医治疗肿瘤主要有四大法则，包括扶正培本法，活血化淤法，清热解毒法，软坚散结法。这些法则的运用往往需要相互结合。扶正培本不仅是扶助机体正气不足，还要协调阴阳气血之平衡，达到治疗的目的，扶正培本是当前中医治疗肿瘤的最大特色，临床与实验研究证明中药之所以能延缓肿瘤发展或抑制肿瘤，主要是通过提高机体的机能状况，如提高免疫机能，激活机体固有的抗癌因素的活性去控制或抑制肿瘤，而直接去杀死癌细胞的不多，或其杀伤(直接)作用于当前毒性化疗相差很远。热与毒的来源有很多，外邪直接侵犯体表，诸邪侵入，郁久化热；七情不舒，郁结成块等形成热邪。热邪郁久而化毒，热毒内蕴可形成肿瘤，烁热炼液，凝结成块。与此同时，肿瘤自身也可生热成毒，继而形成恶性循环。所以清热解毒法在治疗肿瘤中其重要的作用。这一点已得到公认，中医药学在肿瘤的综合治疗中占重要的地位，其成绩已被临床医生认可。中医治疗作为综合治疗的一部分，与手术治疗、放疗、化疗等同用，可以减轻放疗、化疗的不良反应，使患者较顺利地完成疗程。在手术治疗、放疗、化疗之后应用中药，可以提高远期疗效。对不适合手术治疗、放疗、化疗的患者，中药作为主要的治疗方法，可以控制肿瘤，同时改善症状和提高生存质量、尤其对某些终末期肿瘤患者，使用中药可以减轻症状，在一定程度上改善生存质量。
近年，肿瘤细胞生物学的发展确立了大量与肿瘤发生发展密切关联的关键分子，成为治疗肿瘤的分子靶点，针对其研制调控基因特异性拮抗剂成为药物研发的新趋势。于是开发生物反应调节剂，特别是能够诱导机体产生内源性干扰素(Interferon，IFN)，增强巨噬细胞的吞噬功能，调节T、B淋巴细胞，激活特异性和非特异性免疫功能，最终实现对肿瘤、病毒感染及其它免疫性疾病的生物免疫治疗的生物反应调节剂成为临床治疗肿瘤的迫切需求。
发明内容
针对临床治疗肿瘤的迫切需求，本发明的目的是提供一种生物反应调节剂(Biological Response Modifider-BRM)，即生物制剂类的经鼻粘膜吸收的水剂药物组合物及其制备方法与其作为药物在恶性肿瘤生物治疗中的应用。
本发明提供的水剂药物组合物命名为“博得克”(BRM)，是一种生物反应调节剂。
本发明所述水剂药物组合物，由如下组分制成：
板蓝根17～23g、金银花17～23g、黄芩18～22g、野菊花18～22g，蒸馏水500～550ml，鸡胚尿液400～450ml；其中板蓝根、金银花、黄芩、野菊花的有效成份≥60％。
进一步优选的：所述水剂药物组合物由如下组分制成：
板蓝根20、金银花20g、黄芩20、野菊花20，蒸馏水500ml，鸡胚尿液400ml；其中板蓝根、金银花、黄芩、野菊花的有效成份≥75％。
其中：所述水剂药物组合物的各组分用量能以给出的计量单位按比例关系放大或缩小。所述鸡胚尿液是指无菌操作抽取的孵育9～10天的鸡胚尿囊腔中的尿液。
本发明所述水剂药物组合物的制备方法，步骤是：
按组分量称取板蓝根、金银花、黄芩、野菊花，加水1600～2000ml煎煮1.5～2小时滤过备用，药渣中再加入1600～2000ml水同法煎煮1～1.5小时滤过与第一次煎液合并浓缩至500ml，加3倍体计量的无水乙醇沉淀72～75小时，取上清液回收乙醇，加蒸馏水稀释沉淀至1000ml，过滤为澄清液，灭菌后备用；取孵育9～10天的鸡胚以无菌操作抽取尿囊腔中尿液，置无菌瓶备用；按体积比3～5∶10的比例将鸡胚尿液与上述中药提取液混合、分装、封口、-20℃保存。
其中：所述鸡胚尿液与上述中药提取液混合的体积比优选4∶10。
本发明所述水剂药物组合物在制备治疗恶性肿瘤药物中的应用。
进一步优选的：所述水剂药物组合物在制备治疗恶性肿瘤生物反应调节剂中的应用。
本发明所述水剂药物通过鼻肺粘膜吸收和呼吸进人血液交换，达到提高患者免疫力，增加免疫细胞的吞噬能力，或直接杀伤肿瘤细胞，达到抑制肿瘤细胞生长的目的。使用方法：每次0.5ml滴鼻，每日2次，连续使用30天。
本发明所述水剂药物组合物中：板蓝根，性寒，味苦，功能主治：清热解毒，凉血利咽。金银花是清热解毒功效显著的名贵中药材；性味甘、寒，入肺、胃、心经，主要用于热毒疮痈，具有解毒散痈，清热凉血功效，还可以清肿明目、疏风散寒，用于各种热性病。黄芩，性寒，味苦；功能主治：消热燥湿，泻火解毒，止血，安胎。野菊花功效：疏风清热、解毒消肿、疏肝破血。
以上四味中药经药理学研究证实具有抗病毒、抗感染、抗肿瘤作用。以特种灭活病毒与鸡胚尿液相结合佐以上述四味中药清热解毒、扶正培本制成了本发明所述的水剂药物组合物“博得克”。
经过一系列动物实验，并在动物实验的基础上，经过数百例患者的临床应用，证明本发明所述水剂药物组合物“博得克”疗效是显著的，为最终攻克癌症奠定了一定的理论和实践基础。
相关研究结果如下：
1.动物实验表明：“博得克”具有直接破坏肿瘤细胞的作用，单用“博得克”对小鼠S180腹水瘤有明显的治疗效果，对实体瘤荷瘤小鼠具有明显的抑制肿瘤的作用，如联合CTX疗效能显著提高。“博得克”有效调动了机体的非特异和特异免疫系统的反应，增强了对肿瘤细胞杀伤能力，实验证明，环磷酰胺与“博得克”联合给药对抑制肿瘤生长有减毒增效作用。
2.治疗组腹水瘤细胞膜上有“博得克”的芽生体和病毒的颗粒；间接荧光抗体法观察到腹水瘤细胞表面具有较强的荧光显示。“博得克”治疗肿瘤是改变或增强肿瘤的抗原性，进入带瘤小鼠体内能迅速吸咐，在细胞内生物合成，诱发并增强了肿瘤细胞抗原性，形成了较强的肿瘤相关抗原，从而刺激体内的免疫系统对增强了的肿瘤抗原进行免疫反应，杀伤肿瘤细胞，达到免疫治疗的目的。
3.临床应用：临床研究证实常规化疗配合“博得克”治疗恶性肿瘤患者，其生活质量明显提高。kanofsky计分与治疗前相比平均提高30多分，癌症患者生存率明显提高，患者免疫力明显好转，病人生活质量得到明显改善，未见明显毒副作用。“博得克”还具有减轻化疗的胃肠道反应及骨髓抑制的作用。证实该药可减毒增效，提高机体免疫力。
本发明所述药物组合物“博得克”以独特的中药方剂经独特工艺处理，形成经鼻粘膜吸收的水剂药物，具有“能够诱导机体产生内源性干扰素(Interferon，IFN)，增强巨噬细胞的吞噬功能，调节T、B淋巴细胞，激活特异性和非特异性免疫功能，实现直接破坏肿瘤细胞、刺激体内的免疫系统对肿瘤抗原进行较强的免疫反应，杀伤肿瘤细胞，达到免疫治疗目的”的作用。本药属中药制剂，为中药与灭活病毒联合体，用药途径简单方便，副作用小，成本低，便于临床大面积推广，可广泛应用于家庭病床，符合低成本医疗卫生发展方向。预计每年可创效益约计200万元。
具体实施方式
实施例1
组方：板蓝根20、金银花20g、黄芩20、野菊花20，蒸馏水500ml，鸡胚尿液400ml；
按组分量称取板蓝根、金银花、黄芩、野菊花，加水2000ml煎煮2小时滤过备用，药渣中再加入2000ml水同法煎煮1.5小时滤过与第一次煎液合并浓缩至500ml，加3倍体计量的无水乙醇沉淀72小时，取上清液回收乙醇，加蒸馏水稀释沉淀至1000ml，过滤为澄清液，灭菌后备用；取孵育9～10天的鸡胚以无菌操作抽取尿囊腔中尿液，置无菌瓶备用；按体积比4∶10的比例将鸡胚尿液与上述中药提取液混合、分装、封口，制得治疗恶性肿瘤生物反应调节剂——“博得克”，-20℃保存。
实施例2
“博得克”药理作用研究——动物实验
1抗癌活性的实验研究(动物体内抗肿瘤活性)：
1.1药品和材料：“博得克滴鼻液”、碘酊、酒精、2ml无菌空针。肝素。0.2％台盼蓝生理盐水溶液。环磷酰胺(为江苏恒瑞医药股份有限公司产品，批号05122521)。2.5％戊二醛溶液。
1.2实验器材：扭力天平
1.3实验瘤株：肉瘤S180种鼠引自山东省医学科学院药物所。
1.4实验动物：健康昆明种小白鼠购于山东省防疫站实验动物中心，雌雄各半，5-6周龄，体重18-22g。
1.5小鼠肉瘤和腹水瘤模型的制备及接种
选择腹腔接种肉瘤S180后8日健康较好的种鼠，将抽出的腹水细胞数调整至每毫升4×107个活细胞接种小鼠腹腔(腹水瘤)或腋下(实体瘤)一次性注射0.2ml。
1.6博得克滴鼻液对小鼠S180腹水瘤生长的影响
将腹水瘤或实体瘤小鼠随机分为8组，每组20只，雌雄各半，分笼饲养。于接种次日开始，第一组未治疗作为对照组，第二组为治疗组，给博得克滴鼻液每次每鼠0.5ml灌胃，每日三次，疗程为40天。于治疗后次日称体重，逐日记录，自接瘤之日起，记录生存天数，观察小鼠存活率。其它三组对照组单用环磷酰胺(Cy)其剂量分别为50mg，100mg，200mg，对照组在其基础上加用博得克每次每鼠0.4ml灌胃，每日3次。观察其生存率。
1.7疗效评价：
1.71腹水型肿瘤疗效评价以生命延长率表示。生命延长率％＝(T/C-1)×100％。T是治疗组平均生存天数，C是对照组平均生存天数。
1.72实体瘤组：与荷瘤接种后14日处死动物，先称体重，后解剖皮下瘤块，称重。实体瘤的疗效以瘤重抑制百分率表示：瘤重抑制率％＝(1-T/C)×100％。；T是治疗组平均瘤重，C是对照组平均瘤重。
1.8结果---治疗小白鼠腹水瘤的实验
1.8.1治疗小鼠S180腹水瘤结果：
  平均死亡天数  存活率  对照组  17.4±2.1  20.6  治疗组  32.1±2.4*  64.1*
采用X2检验法，结果治疗组均明显高于对照组(*p＜0.01)。
其结果显示：“博得克”对小鼠S180腹水瘤有明显的治疗效果。其平均生命延长率84.5％，存活率为64.1％，均明显提高。具有统计学意义。
1.8.2“博得克”滴鼻液对实体瘤荷瘤小鼠组的抑瘤率结果：
  治疗组  对照组  实体瘤重X±S  0.575±0.38*  1.45±0.28  抑瘤率％  46.0*  -10.6
结果治疗组均明显高于对照组(*p＜0.01)
以上实验结果表明：“博得克”滴鼻液对实体瘤荷瘤小鼠具有明显的抑制肿瘤的作用。实体瘤明显缩小。
1.8.3三种环磷酰胺(Cy)剂量与“博得克”(V)(给药剂量如前)联合治疗S180鼠的实验结果：
  给药  生存率  生存率  Cy剂量  Cy  V+Cy  50  31.7  69.4*  100  68.1  78.1*  150  69.5  78.4*
从上结果看“博得克”联合环磷酰胺治疗小鼠生存率明显高于单用环磷酰胺(*P＜0.01，且环磷酰胺100mg时配合“博得克”每次每鼠0.5ml灌胃每日3次，其生存率78.1％，加量环磷酰胺其生存率无明显提高(P＞0.05)。
2免疫实验
2.1动物18～22g健康雄性ICR小鼠，每个试验项目40只。
2.2仪器与试剂
“博得克”滴鼻液，其它试剂为通用药理试验试剂。动物天平、分析天平、洁净工作台、离心机、恒温水浴、酶标仪、显微镜、无菌手术器械、游标卡尺(精密度0.01mm)、微量注射器(25μl)、细胞计数器、24孔和96孔平底细胞培养板、96孔U型细胞培养板、玻璃平皿、纱布、试管、玻片架、200目筛网、计时器、血色素吸管、载玻片、绵羊红细胞(SRBC)、0.9％生理盐水、Hank’s液(pH＝7.12～7.14)、RPMI1640培养液、小牛血清、刀豆蛋白A(ConA)、1％冰醋酸、1mol/L的HCl溶液、酸性异丙醇(96ml异丙醇加4ml剂量为1mol/L的HCl溶液)、MTT、PBS缓冲液(pH＝712～714)、补体(豚鼠血清)、SA缓冲液、YAC-1细胞、乳酸钠、氧化型辅酶I、012mol/LTris-HCl缓冲液(pH8.12)、1％NP40、印度墨汁、011％Na2CO3、Giemsa染液等。
2.3实验方法
2.3.1二硝基氟苯诱导小鼠迟发性变态反应(DTH)
将小鼠按体重随机分入33.3、333.3和1000mg/kgb.w.3个剂量组和1个对照组，每组10只。样品用双蒸水配制，每日经口灌胃，灌胃容积为20mL/kgb.w.对照组灌双蒸水。15d后，小鼠腹部去毛，1％二硝基氟苯(DNFB)丙酮麻油溶液50μL涂抹致敏。致敏后5d，小鼠右耳均匀涂抹1％DNFB丙酮麻油溶液10μL进行攻击，左耳涂抹丙酮麻油溶液作对照，攻击后24h处死小鼠，剪下左右耳壳，于同一部位取直径8mm的耳片称重，左右耳片重量之差作为肿胀度。同时取小鼠的胸腺及脾脏，以每10g小鼠的脾重(mg)和胸腺重(mg)作为脾脏/体重比值和胸腺/体重比值。
2.3.2血清溶血素测定(半数溶血值(HC50)测定法)
动物分组和剂量和处理同DTH试验。连续灌胃15d后每鼠腹腔注射2％(v/v)压积SRBC0.2mL致敏。免疫5天后，小鼠摘眼球采血，取血清溶血反应，另设不加血清(以SA缓冲液代替)的对照管为比色空白，于540nm分别测定各管光密度值。按下式计算各鼠的样品HC50：
样品HC50＝样品光密度值SRBC半数溶血时的光密度值×200
2.3.3“博得克”滴鼻液诱导的小鼠淋巴细胞转化实验(MTT)法
动物分组和给药方法同前。给药15天后，无菌取脾，置于盛有适量无菌Hank’s液洗3次，每次离心10min(1000rpm)。然后将细胞悬于2ml的完全培养液中，计数活细胞数，调整细胞浓度为2×106个/ml。再将细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔1ml，在其中一孔加50ulConA液(相当于5ug/ml)，另一孔作为对照，置5％CO2，37℃培养72h。培养结束前4h，每孔轻轻吸去上清液0.17ml，加入0.17ml不含小牛血清的RPMI1640培养液，同时加入MTT(5mg/ml)50μl/孔，继续培养4h。培养结束后，每孔加入1ml酸性异丙醇，吹打混匀，使紫色结晶完全溶解。然后分装到96孔酶标板中，每个孔分装3个平行孔，在酶标仪上以570nm波长测定光密度值。淋巴细胞的增值能力用加ConA孔的光密度值减去不加ConA孔的光密度值表示。
2.3.4NK细胞活性测定(乳酸脱氢酶测定法)
动物分组和给药方法同前。给药20天后取小鼠脾脏，制成5×106个/ml的细胞悬液，取100μl脾细胞悬液与100μl的YAC-1细胞悬液(1×106个/ml)混合于96孔板内，置37℃温箱孵育4小时后，取上清液100μl加入另一培养板并与LDH基质液(100μl)反应3分钟，加入30μl盐酸(1mmol/L)显色，并用酶标仪(波长492nm处)测定光密度并计算NK细胞活性。
2.4结果---治疗小鼠H22腹水瘤观察
  对照组  实验组  淋巴细胞转化(％)  18.0±5.2  40.5±4.9*  NK细胞活性(OD)  0.0105±0.0052  0.0375±0.008*  PEC(OD)  0.386±0.121  0.566±0.092  Ea花环(％)  25.25±4.2  30.91±3.6  巨噬细胞吞噬率  32.8±4.3  94±3.1*  吞噬指数  0.84±0.09  3.72±0.31*
实验组与对照组：*P＜0.01。
2.5动物实验结论
2.5.1以上实验说明“博得克”具有直接破坏肿瘤细胞的作用，单用“博得克”对S180腹水瘤小鼠有明显的治疗效果，对实体瘤荷瘤小鼠具有明显的抑制肿瘤的作用。如联合CTX可提高疗效，增强了对肿瘤细胞杀伤能力。实验证明，环磷酰胺与“博得克”联合给药对抑制肿瘤生长有减毒增效作用。
2.5.2治疗组腹水瘤细胞膜上有“博得克”的芽生体和病毒的颗粒，间接荧光抗体法观察到腹水瘤细胞表面具有较强的荧光显示，“博得克”治疗肿瘤是改变或增强肿瘤的抗原性，进入带瘤小鼠体内能迅速吸咐，在细胞内生物合成，诱发并增强了肿瘤细胞抗原性，形成了较强的肿瘤相关抗原，从而刺激体内的免疫系统对增强了的肿瘤抗原进行免疫反应，杀伤肿瘤细胞，达到免疫治疗的目的。
3毒理学安全性及过敏反映评价：
在动物实验过程中及临床观察均未见急性毒性实验及过敏试验。
实施例3
“博得克”抗癌活性研究——临床实验
一、病例收集
1纳入标准：
1.1.全部病例为门诊或住院病例，均经组织学或细胞学诊断明确的恶性肿瘤。全部病人200例按1∶1随机分为实验组和对照组。治疗组100例，男53例，女47例。年龄16岁-86岁，平均年龄为63.2岁。初治30例、复治70例。肺癌8例，胃癌25例、大肠癌16例、食管癌19例、肝癌8例、乳腺癌5例、鼻咽癌3例、唇癌1例、卵巢癌9例、子宫癌3例、胰腺癌1例、膀胱癌2例。对照组100例，男48例，女52例。年龄17岁-82岁，平均年龄为65.1岁。初治28例、复治72例。肺癌10例，胃癌21例、大肠癌17例、食管癌20例、肝癌6例、卵巢癌7例、直肠癌7例、乳腺癌4例、子宫癌2例、胰腺癌1例、膀胱癌2例、鼻咽癌1例、甲状腺癌1例、慢性粒细胞白血病1例。两组性别、年龄、病种经统计学检验无意义(P＞0.05)。
2排除标准：
1.晚期患者或预期生存期少于6个月者；
2.合并有心、肝、肾和造血系统等严重疾病；
3.孕妇、儿童和精神病患者。
3剔除标准：
资料不全患者。
二、给药方法
1实验组在常规治疗的基础上给予“博得克”滴鼻液每人(成人)第1-5天每次0.5ml博得克滴鼻，每天一次，第六天起每次1ml滴鼻，连用30天。连用2～4个疗程。
2对照组在常规治疗的基础上同时应用0.9％生理盐水滴鼻。每日2次，连续使用25天为1疗程，连用2～4个疗程。
3疗程结束后进行评价。
三、观察指标
1安全性观测
1.1一般体检项目
1.2血、尿、便常规检查
1.3心、肝、肾功能检查
2疗效性观测
2.1肿瘤症状变化、生活质量状况(按Karnofsky评分为标准，在疗程前后均评分)、体重变化
2.2T淋巴细胞亚群变化
3疗效评定
3.1客观疗效评定
客观疗效
按WHO1981年制定的实体瘤疗效评价标准分为：完全缓解(CR)、部分缓解(PR)、稳定(SD)、进展(PD)，治愈为显效，CR+PR为有效、SD+PD为无效。
3.5、统计方法：有效率的比较用卡方检验
3.6疗效结果：
  对照组  治疗组  显效  33(16.5％)  47(23.5％)*  有效  68(34.0％)  99(49.5％)*  无效  99(49.5％)  54(27.0％)*
经统计学检验，对照组与治疗组*P＜0.01。
按Karnofsky评分为标准，两组病例生存质量改善情况(％)
  项目  对照组  治疗组  体重  35.37  41.58  食欲  10.05  29.01*  睡眠  4.39  39.5*  精神状况  15.68  29.68  日常活动  22.10  29.58  与人交往  16.24  40.26*  Karnofsky评分  33.62  69.98*
注：与对照组比较：*P＜0.01
T淋巴细胞亚群变化：
  对照组  治疗组  NK  19.23±6.36  26.35±7.36*  CD3  58.41±6.26  70.56±7.63*  CD4  34.56±5.36  51.68±8.26*  CD8  32.15±6.32  33.86±7.30  CD4/CD8  1.07±0.26  1.53±0.29*
注：与对照组比较：*P＜0.01。
临床实验结论：
“博得克”对肿瘤病人具有显著的疗效：提高患者生存率，能提高患者免疫力，明显改善病人生活质量，提高患者生存期，临床观察中未见明显副作用。