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1、(10)申请公布号 CN 102671034 A (43)申请公布日 2012.09.19 CN 102671034 A *CN102671034A* (21)申请号 201210177450.9 (22)申请日 2012.05.31 A61K 36/899(2006.01) A61P 29/00(2006.01) A61K 125/00(2006.01) (71)申请人 上海和黄药业有限公司 地址 200331 上海市普陀区真南路 2098 号 (72)发明人 丁丽丽 刘轩 杨莉 王峥涛 詹常森 沈丹萍 黄昕明 张正光 (74)专利代理机构 上海光华专利事务所 31219 代理人 张艳 (5。
2、4) 发明名称 白茅根水段提取物及其应用 (57) 摘要 本发明提供一种白茅根提水段取物， 由下述 方法获得 ： 1）将白茅根粗粉用 50-90wt% 的乙醇 水溶液回流提取， 所得提取液浓缩后得浸膏 ； 2） 向步骤 1） 所得浸膏中加入水混悬， 再依次用石油 醚、 乙酸乙酯和正丁醇分别进行萃取， 将所得萃余 液蒸发并干燥后， 即得本发明中所述的白茅根水 段提取物。 本发明通过对白茅根进行分段提取， 筛 选出其中的有效抗炎部位， 得到了上述的白茅根 水段提取物。该提取物在白茅根的所有分段提取 物中对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀炎症的抑制效果 最为明显， 有望用于抗炎以作为消炎药物使用。 (51)I。
3、nt.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 5 页 附图 1 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 5 页 附图 1 页 1/1 页 2 1. 一种白茅根提取物， 由下述方法获得 ： 1） 将白茅根粗粉用 50-90wt% 的乙醇水溶液回流提取， 所得提取液浓缩后得浸膏 ； 2） 向步骤 1） 所得浸膏中加入水混悬， 再依次用石油醚、 乙酸乙酯和正丁醇分别进行萃 取， 将所得萃余液蒸发并干燥后， 即得所述的白茅根提取物。 2. 根据权利要求 1 所述的白茅根提取物， 其特征在于 ： 所述乙醇水溶液与白茅根粗粉 的重量比为 8-12 1。 3.。
4、 根据权利要求 1 所述的白茅根提取物， 其特征在于 ： 步骤 1） 中， 所述回流提取的提 取温度为 80-82。 4. 根据权利要求 1 所述的白茅根提取物， 其特征在于 ： 步骤 1） 中， 所述回流提取的蒸 汽压力控制在小于 0.15MPa。 5. 根据权利要求 1 所述的白茅根提取物， 其特征在于 ： 步骤 1） 中， 所述回流提取分两 次进行 ； 第一次提取时， 所用乙醇水溶液与白茅根粗粉的重量比为5-71 ； 第二次提取时， 所用乙醇水溶液与白茅根粗粉的重量比为 3-5 1。 6.根据权利要求5所述的白茅根提取物， 其特征在于 ： 每次回流提取所用的时间为1-2 小时。 7. 根。
5、据权利要求 1 所述的白茅根提取物， 其特征在于 ： 步骤 2） 中， 所述水与浸膏的重 量比为 3-4 1。 8. 根据权利要求 1 所述的白茅根提取物， 其特征在于 ： 步骤 2） 中， 所述用石油醚萃取 次数为 4-5 次， 用乙酸乙酯萃取的次数为 8-10 次， 用正丁醇萃取的次数为 13-15 次。 9. 根据权利要求 8 所述的白茅根提取物， 其特征在于 ： 所述用石油醚萃取时， 每次使用 的石油醚的量与所述水的体积比为 0.4-0.6 1 ； 所述用乙酸乙酯萃取时， 每次使用的乙酸 乙酯的量与所述水的体积比为 0.3-0.4 1 ； 所述用正丁醇萃取时， 每次使用的正丁醇的量 与。
6、所述水的体积比为 0.9-1.1 1。 10. 根据权利要求 1-9 任一所述的白茅根提取物的用途， 其特征在于 ： 所述白茅根提取 物用于制备抗炎药物。 权 利 要 求 书 CN 102671034 A 2 1/5 页 3 白茅根水段提取物及其应用 技术领域 0001 本发明涉及一种白茅根提取物， 特别是涉及一种具有抗炎作用的白茅根水段提取 物及其在抗炎方面的应用。 背景技术 0002 白茅根， 始载于 神农本草经 ， 为禾本科植物白茅 Imperata cylindrica Beauv. var.major (Nees)C.E.Hubb. 的根茎。其英文名称为 rhizome of Lal。
7、ang Grass， 拉丁名 称为Rhizoma Imperatae cylindricae， 异名较多， 如 ： 茅根、 兰根、 茹根 （ 神农本草经 ） ， 地 菅、 地筋 （ 名医别录 ） ， 白花茅根 （ 日华子本草 ） ， 地节根 （ 青海药材 ） ， 茅草根 （ 江苏植 药志 ） ， 甜草根 （ 河北药材 ） ， 丝毛草根 （ 中药志 ） 。 0003 白茅根全国大部分地区均产， 以华北地区产量较多。其味甘、 性寒。主治黄疸、 水 肿、 口渴、 出血、 肺热咳嗽、 胃热呕吐、 热病、 原发性肾小球肾炎、 淋证、 喘证等疾病。具有止 血、 促凝血、 利尿、 免疫调节、 抗炎之功效。 。
8、药理学研究表明 ： 白茅根煎剂和水浸剂灌胃， 对正 常家兔有利尿作用， 煎剂灌胃对水负荷小鼠亦有明显的利尿作用 ； 此外， 白茅根粉能显著缩 短兔血浆复钙时间， 具有促凝血作用。白茅根还能增强免疫功能， 白茅根水煎剂 5.0g/kg、 10.0g/kg 给小鼠灌胃， 连续 20d， 能显著提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能， 明显增加吞噬 率和吞噬指数、 辅助性细胞 （TH） 数目， 并促进白细胞介素 2（IL-2） 的产生， 而对小鼠体液 免疫功能及抑制性 T 细胞 （TS） 数目无明显影响。 0004 临床上， 将白茅根用于治疗急性肾炎具有较好的效果， 可以缩短病程。 据数十例的 观察， 服药。
9、后通常在15天内小便即显著增多， 每日可达15003000毫升左右， 随之水肿 即渐消失， 高血压及尿检变化亦渐好转而趋正常。将其用于慢性肾炎亦有利尿消肿及一定 的降压作用， 但疗效较差。 而对肝脏病引起的腹水及心力衰竭所致的水肿， 白茅根则无利尿 消肿作用或作用不显著。 临床上， 白茅根还可用于治疗急性传染性肝炎， 用白茅根(干品)2 两， 水煎， 每日两次分服。治疗 28 例， 结果临床治愈 (45 天内主要症状、 体征消失， 肝功能恢 复正常)21例， 好转(临床症状好转， 45天内各项肝功能的数值下降超过半数， 或45天后完 全恢复正常 )7 例。治疗后， 主要症状大多在 10 天内消。
10、失， 肝脾肿大在 20 天左右消失 ； 谷丙 转氨酶经 45 天后有 80% 的患者降至正常， 黄疸指数平均 20.15 天全转正常。此外， 白茅根 还曾用于治疗高血压病， 配合仙鹤草治疗上消化道出血， 均有一定效果。 含有白茅根的中药 复方制剂也较多， 如胆宁片的主要成分为大黄、 虎杖、 青皮、 陈皮、 郁金、 山楂和白茅根， 主要 用于肝郁气滞， 湿热未清所致右上腹隐隐作痛、 食入作胀、 胃纳不香、 嗳气、 便秘及慢性胆囊 炎见上述症候者。 0005 目前， 对白茅根在抗炎方面的作用机理研究的还比较少， 文献 白茅根抗炎的药理 作用 针对白茅根的抗炎作用方面进行了实验， 实验结果表明 ： 。
11、白茅根水煎液能减轻二甲苯 所致小鼠耳廓肿胀， 能减轻角叉菜胶所致大鼠后足跖的肿胀， 能明显抑制冰醋酸所致小鼠 腹腔毛细血管通透性的增加， 能有效对抗酵母多糖 A 所致大鼠足趾肿胀 ； 但对制霉菌所致 的小鼠足趾炎症模型无明显作用。 但是， 上述研究并未寻找白茅根的抗炎有效部位， 也尚未 说 明 书 CN 102671034 A 3 2/5 页 4 见其他文献有相关报道。 发明内容 0006 鉴于以上所述现有技术的缺点， 本发明的目的在于提供一种白茅根水段提取物及 其应用， 以进一步提高白茅根的抗炎作用药效。 0007 为实现上述目的， 本发明提供一种白茅根提取物， 该白茅根提取物是通过下述方 。
12、法获得的 ： 0008 1） 将白茅根粗粉用 50-90wt% 的乙醇水溶液回流提取， 所得提取液浓缩后得浸膏 ； 0009 2） 向步骤 1） 所得浸膏中加入水混悬， 再依次用石油醚、 乙酸乙酯和正丁醇分别进 行萃取， 将所得萃余液 （水层） 蒸发并干燥后， 即得本发明中所述的白茅根水段提取物。 0010 本发明中， 所述白茅根为禾本科植物白茅 Imperata cylindrica Beauv.var. major(Nees)C.E.Hubb. 的根茎。所述白茅根粗粉， 是将所述白茅根直接粉碎获得。 0011 优选地， 步骤 1） 中， 所述乙醇水溶液与白茅根粗粉的重量比为 8-12 1。。
13、 0012 优选地， 步骤 1） 中， 所述回流提取的提取温度为 80-82。 0013 优选地， 步骤 1） 中， 所述回流提取的蒸汽压力控制在小于 0.15MPa， 最佳控制在 0.050.1MPa。 0014 优选地， 步骤 1） 中， 所述回流提取分两次进行 ； 第一次提取时， 所用乙醇水溶液与 白茅根粗粉的重量比为 5-7 1 ； 第二次提取时， 所用乙醇水溶液与白茅根粗粉的重量比为 3-5 1。 0015 优选地， 步骤 1） 中， 每次回流提取所用的时间为 1-2 小时。 0016 步骤 2） 中， 所述依次用石油醚、 乙酸乙酯和正丁醇分别进行萃取是指， 将浸膏用水 混悬后先用石。
14、油醚进行萃取， 萃取所得水相 （萃余液） 再用乙酸乙酯萃取， 乙酸乙酯萃取后 所得的水相 （萃余液） 再用正丁醇萃取 ； 最后， 将正丁醇萃取后所得的水相 （萃余液） 蒸干， 即 得到本发明中所述的白茅根水段提取物。 0017 步骤 2） 中， 所述用石油醚萃取次数为 4-5 次， 用乙酸乙酯萃取的次数为 8-10 次， 用正丁醇萃取的次数为 13-15 次。 0018 优选地， 所述用石油醚萃取时， 每次使用的石油醚的量与所述水的体积比为 0.4-0.6 1 ； 所述用乙酸乙酯萃取时， 每次使用的乙酸乙酯的量与所述水的体积比 为 0.3-0.4 1 ； 所述用正丁醇萃取时， 每次使用的正丁醇。
15、的量与所述水的体积比为 0.9-1.1 1。 0019 优选地， 步骤 2） 中， 所述水与浸膏的重量比为 3-4 1。 0020 优选地， 步骤 2） 中， 所述水的温度为 50-60。所述用石油醚、 乙酸乙酯和正丁醇 分别进行萃取时的萃取温度均为室温。 0021 本发明还提供了一种上述白茅根提取物的用途， 即白茅根提取物用于制备抗炎药 物。 0022 本发明通过对白茅根进行分段提取， 筛选出其中的有效抗炎部位， 得到了上述的 白茅根水段提取物。 该提取物在白茅根的所有分段提取物中对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀炎 症的抑制效果最为明显， 有望用于抗炎以作为消炎药物使用。 说 明 书 CN 1026。
16、71034 A 4 3/5 页 5 附图说明 0023 图 1 各组小鼠耳肿胀度数据图。 具体实施方式 0024 下面通过实施例对本发明进行更完整的阐述， 本发明提供的优选实施例， 仅用来 举例说明本发明， 而不对本发明的范围作任何限制， 任何熟悉此项技术的人员可以轻易实 现的修改和变化均包括在本发明及所附权利要求的范围内。 0025 实验材料与试剂 ： 0026 动物 Wistar 大鼠 (25020)g， 雄性， SPF 级， 96 只 ； 昆明种小鼠 (202)g， 雄性， SPF 级， 156 只。均由上海中医药大学实验动物中心提供。 0027 实验材料 药品 : 白茅根 （湖北， 上。
17、海和黄药业有限公司提供） ； 其他试剂均为色谱 纯或分析纯。 0028 实验仪器全自动生化分析仪 ( 美国 Beckman 公司 )， KQ-500B 型超声波清洗器 ( 昆 山市超声仪器有限公司 )， SENCO R205 旋转蒸发器， SEN-CO W201 恒温水浴锅 ( 上海申生科 技有限公司 )， SH-Q4 耳肿打孔器 （8mm） 等。 0029 实施例 1 0030 取白茅根粗粉 13.5Kg， 用 70wt% 的乙醇水溶液回流提取 2 次 （第一次溶剂消耗 81Kg， 第二次溶剂消耗 54Kg） ， 每次一小时， 蒸汽压力控制在 0.050.1MPa， 提取液减压浓缩 后得浸膏。
18、 760g。取浸膏 580g， 再用热水 （50-60） 2Kg 混悬， 然后， 先用石油醚进行萃取， 萃 取所得水相 （萃余液） 再用乙酸乙酯萃取， 乙酸乙酯萃取后所得的水相 （萃余液） 再用正丁醇 萃取。 使用石油醚、 乙酸乙酯和正丁醇分别萃取时， 每种萃取剂萃取的次数一般以萃取液颜 色未发生变化为准。本实施例中， 使用石油醚萃取 4 次， 用乙酸乙酯萃取 10 次， 用正丁醇萃 取的次数为 14 次 ； 每次使用石油醚 1L、 乙酸乙酯 700ml 和正丁醇 2L。萃取完成后， 将有机 溶剂蒸干， 分别得到石油醚段、 乙酸乙酯段和正丁醇段。将萃后剩余的水相部分蒸干， 即得 到本发明中所述。
19、的白茅根水段提取物。 0031 将上述得到的石油醚段、 乙酸乙酯段和正丁醇段以及白茅根水段提取物， 溶于溶 媒 0.5%CMC-Na 中， 进行下面的抗炎实验。 0032 实施例 2 0033 取白茅根粗粉 13.5Kg， 用 50wt% 的乙醇水溶液回流提取 2 次 （第一次溶剂消耗 65Kg， 第二次溶剂消耗 43Kg） ， 每次一小时， 蒸汽压力控制在 0.050.1MPa， 提取液减压浓缩 后得浸膏 760g。取浸膏 580g， 再用热水 （50-60） 1.74Kg 混悬， 然后， 先用石油醚进行萃 取， 萃取所得水相 （萃余液） 再用乙酸乙酯萃取， 乙酸乙酯萃取后所得的水相 （萃余。
20、液） 再用 正丁醇萃取。 使用石油醚、 乙酸乙酯和正丁醇分别萃取时， 每种萃取剂萃取的次数一般以萃 取液颜色未发生变化为准。本实施例中， 使用石油醚萃取 5 次， 用乙酸乙酯萃取 8 次， 用正 丁醇萃取的次数为 13 次 ； 每次使用石油醚 0.8L、 乙酸乙酯 800ml 和正丁醇 1.8L。萃取完成 后， 将有机溶剂蒸干， 分别得到石油醚段、 乙酸乙酯段和正丁醇段。将萃后剩余的水相部分 蒸干， 即得到本发明中所述的白茅根水段提取物。 0034 实施例 3 0035 取白茅根粗粉 13.5Kg， 用 90wt% 的乙醇水溶液回流提取 2 次 （第一次溶剂消耗 说 明 书 CN 102671。
21、034 A 5 4/5 页 6 97Kg， 第二次溶剂消耗 65Kg） ， 每次一小时， 蒸汽压力控制在 0.050.1MPa， 提取液减压浓缩 后得浸膏 760g。取浸膏 580g， 再用热水 （50-60） 2.9Kg 混悬， 然后， 先用石油醚进行萃取， 萃取所得水相 （萃余液） 再用乙酸乙酯萃取， 乙酸乙酯萃取后所得的水相 （萃余液） 再用正丁 醇萃取。 使用石油醚、 乙酸乙酯和正丁醇分别萃取时， 每种萃取剂萃取的次数一般以萃取液 颜色未发生变化为准。本实施例中， 使用石油醚萃取 4 次， 用乙酸乙酯萃取 10 次， 用正丁醇 萃取的次数为 15 次 ； 每次使用石油醚 1.2L、 乙。
22、酸乙酯 600ml 和正丁醇 2.2L。萃取完成后， 将有机溶剂蒸干， 分别得到石油醚段、 乙酸乙酯段和正丁醇段。将萃后剩余的水相部分蒸 干， 即得到本发明中所述的白茅根水段提取物。 0036 实施例 4 抗炎实验 0037 抗炎实验设计 ： 0038 昆明种小鼠 156 只， 随机分为空白组 （0.5%CMC-Na） ， 阳性对照组 （阿司匹林 0.5%CMC-Na） ， 白茅根石油醚段 （高剂量组 10g/kg ； 低剂量组 5g/kg） ， 白茅根乙酸乙酯段 （高 剂量组 10g/kg ； 低剂量组 5g/kg） ， 白茅根水饱和正丁醇段 （高剂量组 10g/kg ； 低剂量组 5g/ 。
23、kg） ， 白茅根水段 （高剂量组 10g/kg ； 低剂量组 5g/kg） ， 每日灌胃给药一次， 按 0.2ml/10g 剂 量给药， 连续 7 天， 第六次灌胃后禁食不禁水。末次给药后 30 分钟， 将 0.03mL 对二甲苯涂 于各小鼠右耳两面致炎， 致炎后1小时处死小鼠， 以8mm打孔器在小鼠左右耳廓相同部位打 下耳片， 电子分析天平称重， 左右耳片重量之差即为肿胀度。将给药组与对照组作比较， 并 计算各药物组的耳廓肿胀抑制率。 0039 白茅根对小鼠耳肿胀度和抑制率的影响 ： 0040 给药组和空白对照组比较， 发现阳性组、 白茅根水段高剂量组有显著差异 (P 0.01) ； 白茅。
24、根石油醚段低剂量组， 白茅根乙酸乙酯段高剂量组， 白茅根水段低剂量组有 差异 (P 0.05) ； 其他组没有明显差异。在各不同极性部位给药组可以看到， 白茅根水段 抑制小鼠耳肿胀的效果最为明显。具体数据见表 1。 0041 表 1 各组小鼠耳肿胀度和抑制率水平比较 0042 说 明 书 CN 102671034 A 6 5/5 页 7 0043 上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效， 而非用于限制本发明。任何熟 悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下， 对上述实施例进行修饰或改变。因 此， 举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完 成的一切等效修饰或改变， 仍应由本发明的权利要求所涵盖。 说 明 书 CN 102671034 A 7 1/1 页 8 图 1 说 明 书 附 图 CN 102671034 A 8 。