用于治疗眼后节病症和疾病的化合物.pdf

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1、(10)申请公布号 CN 102985084 A (43)申请公布日 2013.03.20 CN 102985084 A *CN102985084A* (21)申请号 201180031837.7 (22)申请日 2011.06.24 61/361,003 2010.07.02 US A61K 31/17(2006.01) A61K 31/416(2006.01) A61K 31/4162(2006.01) A61K 31/4365(2006.01) A61K 31/519(2006.01) A61K 9/00(2006.01) A61P 27/02(2006.01) (71)申请人 爱尔康研。

2、究有限公司 地址 美国德克萨斯州 (72)发明人 JA梅 DP宾加曼 C罗马诺 (74)专利代理机构 北京市中咨律师事务所 11247 代理人 陈润杰 黄革生 (54) 发明名称 用于治疗眼后节病症和疾病的化合物 (57) 摘要 本发明公开了用于治疗与病理性眼部血管生 成和 / 或新血管形成相关的视网膜病症的某些脲 化合物的用途。 (30)优先权数据 (85)PCT申请进入国家阶段日 2012.12.27 (86)PCT申请的申请数据 PCT/US2011/041784 2011.06.24 (87)PCT申请的公布数据 WO2012/003141 EN 2012.01.05 (51)Int.。

3、Cl. 权利要求书 1 页 说明书 14 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 14 页 1/1 页 2 1. 治疗患者的眼后节新血管形成、 AMD、 DR 和 / 或视网膜水肿的方法， 所述方法包括向 需要这种治疗的患者施用包含治疗有效量的至少一种化合物的眼科组合物， 所述化合物选 自 1-4-(3- 氨基 -1H- 吡唑并 3,4-c 吡啶 -4- 基 )- 苯基 -3- 间甲苯基 - 脲 1-4-(4- 氨基 - 噻吩并 2,3-d 嘧啶 -5- 基 )- 苯基 -3- 间甲苯基 - 脲 1-4-(3- 氨基 -1H- 吲唑 -4- 。

4、基 )- 苯基 -3-(3- 羟基 -5- 甲基 - 苯基 )- 脲 1-4-3- 氨基 -7-(2- 甲氧基 - 乙氧基 )-1H- 吲唑 -4- 基 - 苯基 -3- 间甲苯基 - 脲 1-4-(4- 氨基 - 噻吩并 3,2-c 吡啶 -3- 基 )- 苯基 -3- 间甲苯基 - 脲 1-4-(4-氨基-7-吡啶-4-基-噻吩并3,2-c吡啶-3-基)-苯基-3-间甲苯基-脲 1-4-(4- 氨基 -7- 吡啶 -3- 基 - 噻吩并 3,2-c 吡啶 -3- 基 )- 苯基 -3- 间甲苯 基 - 脲， 及其药学上可接受的盐。 2. 权利要求 1 的方法， 其中所述化合物为 1-4-(。

5、4- 氨基 - 噻吩并 2,3-d 嘧 啶 -5- 基 )- 苯基 -3- 间甲苯基 - 脲。 3. 权利要求 1 的方法， 其中所述眼科组合物中所述化合物的浓度为 0.001% 至 10%。 4. 权利要求 3 的方法， 其中所述眼科组合物中所述化合物的浓度为 1%。 5. 权利要求 1 的方法， 其中所述眼科组合物通过选自以下的途径施用 ： 局部、 结膜下施 用、 眼周施用、 眼球后施用、 筋膜下施用、 眼房内注射、 玻璃体内注射、 眼内注射、 视网膜下施 用、 脉络膜上施用和后节近巩膜施用。 6. 权利要求 5 的方法， 其中所述眼科组合物通过玻璃体内注射施用。 7. 引起眼部新血管形成。

6、消退的方法， 所述方法包括向需要其的患者施用包含治疗有效 量的至少一种化合物的眼科组合物， 所述化合物选自 1-4-(3- 氨基 -1H- 吡唑并 3， 4-c 吡啶 -4- 基 )- 苯基 -3- 间甲苯基 - 脲 1-4-(4- 氨基 - 噻吩并 2， 3-d 嘧啶 -5- 基 )- 苯基 -3- 间甲苯基 - 脲 1-4-(3- 氨基 -1H- 吲唑 -4- 基 )- 苯基 -3-(3- 羟基 -5- 甲基 - 苯基 )- 脲 1-4-3- 氨基 -7-(2- 甲氧基 - 乙氧基 )-1H- 吲唑 -4- 基 - 苯基 -3- 间甲苯基 - 脲 1-4-(4- 氨基 - 噻吩并 3， 2。

7、-c 吡啶 -3- 基 )- 苯基 -3- 间甲苯基 - 脲 1-4-(4-氨基-7-吡啶-4-基-噻吩并3， 2-c吡啶-3-基)-苯基-3-间甲苯基-脲 1-4-(4- 氨基 -7- 吡啶 -3- 基 - 噻吩并 3， 2-c 吡啶 -3- 基 )- 苯基 -3- 间甲苯 基 - 脲， 及其药学上可接受的盐。 8. 权利要求 7 的方法， 其中所述化合物为 1-4-(4- 氨基 - 噻吩并 2， 3-d 嘧 啶 -5- 基 )- 苯基 -3- 间甲苯基 - 脲。 9. 权利要求 7 的方法， 其中所述眼科组合物中所述化合物的浓度为 0.001至 10。 10. 权利要求 9 的方法， 其中。

8、所述眼科组合物中所述化合物的浓度为 1。 11. 权利要求 7 的方法， 其中所述眼科组合物通过选自以下的途径施用 ： 局部、 结膜下 施用、 眼周施用、 眼球后施用、 筋膜下注射、 眼房内施用、 玻璃体内注射、 眼内注射、 视网膜下 施用、 脉络膜上施用和后节近巩膜施用。 12. 权利要求 11 的方法， 其中所述眼科组合物通过玻璃体内注射施用。 权 利 要 求 书 CN 102985084 A 2 1/14 页 3 用于治疗眼后节病症和疾病的化合物 0001 本申请根据美国法典第 35 篇第 119 条要求 2010 年 7 月 2 日提交的美国临时专利 申请 No.61/361,003 。

9、的优先权， 该临时专利申请的全部内容通过引用并入本文。 0002 本发明涉及化合物用于治疗渗出性与非渗出性老年黄斑变性、 糖尿病性视网膜病 变和视网膜水肿以及涉及病理性眼部血管生成和 / 或血管通透性的其它疾病的用途。 0003 发明背景 0004 AMD 是工业化国家中年龄超过 50 岁个体中功能性失明的最常见原因， 并且是全世 界不可避免的失明的常见原因。与 AMD 相关的视力丧失通常仅在疾病的最晚期发生， 此时 患者从非渗出性 (“干性” )AMD 向有脉络膜新血管形成 (CNV) 的渗出性 AMD 发展或者向地 图样萎缩发展。尽管所有非渗出 AMD 患者中仅 10至 20会发展为渗出性。

10、 AMD， 但这一形 式的 AMD 是 80-90与该病症相关的功能性视力丧失的原因。渗出性 AMD， 亦称为新生血管 性AMD或湿性AMD， 以病理性CNV生长至视网膜下腔为特征。 CNV有渗漏血液及体液的趋势， 造成例如暗点和视物变形等症状， 并且通常伴有纤维组织的增殖。该纤维血管膜侵入黄斑 可诱发光受体变性， 导致渐进性的、 严重且不可逆的视力丧失。如不进行治疗， 大多数受累 的眼睛在 2 年内将具有较差的中心视力 ( 20/200)。 0005 另一种称为增生性糖尿病性视网膜病变 (PDR) 的暗点视网膜病症 (blinding retinal disorder) 同样以病理性眼后节新。

11、血管形成 (PSNV) 为特征。PDR 是糖尿病患者中 法定(legal)失明的最常见原因并且以病理性视网膜前NV为特征。 此外， 在糖尿病患者中， 糖尿病性黄斑水肿 (DME) 是总体视力损害的主要原因。糖尿病以持续的高血糖症为特征， 在各种器官的微血管系统产生可逆和不可逆的病理改变。所以， 糖尿病性视网膜病变 (DR) 是视网膜微血管疾病， 表现为一连串伴有严重性水平增加和视力预后恶化的阶段。 0006 非增生性糖尿病视网膜病变 (NPDR) 和继后的黄斑水肿与由于持续高血糖诱导的 视网膜微血管疾病导致的视网膜缺血部分相关。NPDR 包括一系列临床亚类， 其包括初始阶 段的 “初步 (ba。

12、ckground)” DR， 此阶段在视网膜内可观察到小的多灶改变 ( 如微动脉瘤、“圆 斑” (dot-blot) 性出血和神经纤维层梗塞 )， 经过增生前期 DR， 立即发展成 PNV。NPDR 的组 织病理学标志是视网膜微动脉瘤、 毛细管基底膜加厚、 内皮细胞和周细胞缺失和最终导致 局部缺血的毛细管堵塞。由动物模型和人类经验研究所积累的数据表明， 视网膜缺血通常 与促炎性和 / 或促血管生成性生长因子和细胞因子的局部水平增加有关， 例如血管内皮生 长因子 (VEGF)、 前列腺素 E2、 胰岛素样生长因子 (IGF-1)、 促血管生成素 (Angiopoietin)2 等。在 NPDR 。

13、或 PDR 期间均可见到糖尿病性黄斑水肿。然而， 糖尿病性黄斑水肿经常在 NPDR 晚期阶段可以观察到， 所以它成为向最严重的阶段 (PDR) 发展的预兆指标， 其中术语 “增生 性” 是指存在如前所述的视网膜前新血管生成。 0007 已知包括 PSNV 的病理性眼部血管发生是作为从最初刺激开始到形成异常新毛细 血管的一连串事件发生的。渗出性 AMD 和 PDR 中的 PSNV 的具体促成起因仍是未知的， 但是 各种促血管生成的生长因子似乎是常见的刺激源。 已在病理性眼部血管发生患者中移取的 组织与体液中发现例如血管内皮生长因子 (VEGF)、 血小板衍生的生长因子 (PDGF)、 碱性成 纤。

14、维细胞生长因子(bFGF或FGF-2)、 胰岛素样生长因子(IGF-1)、 促血管生成素等可溶性生 说 明 书 CN 102985084 A 3 2/14 页 4 长因子。 随着血管生成级联的开始， 毛细血管基底膜和细胞外基质发生退化， 继而发生毛细 管内皮细胞增生与迁移。 内皮抽芽融合形成管， 伴以随后的腔形成。 新毛细血管由于屏障功 能不成熟， 通常血管通透性或渗漏程度增加， 这可导致组织水肿。 由连续的基底膜及在其他 内皮细胞和血管支持细胞 ( 称为周细胞 ) 之间的正常内皮结点的存在， 表明已分化成为成 熟的毛细管 ； 但是， 在病理性条件期间这一分化过程常常受损。更具体地， 升高水平。

15、的 PDGF 似乎通过充当周细胞的存活因子在新血管的成熟中发挥作用。 0008 直到最近， 患有威胁视力的 PSNV 的患者具有有限的治疗选择。许多已批准的治疗 如对中心凹外型 CNV 的焦点激光凝固术和用于渗出性 AMD 的的光动力疗法， 通常是治标的并且与威胁视力的并发症自身相关。例如， 格栅样或全视网膜激光凝固术和 外科手术干预如玻璃体切割术和视网膜前膜摘除， 是当前 PDR 患者能够使用的唯一选择， 然而， 玻璃体内抗 VEGF 治疗的批准彻底改革了病理性 PSNV、 特别是渗出性 AMD 的治疗。 0009 实质性证据表明 ： 可溶性生长因子血管内皮生长因子 -A(VEGF-A) 在。

16、 PSNV 的发病 机理中起关键作用。VEGF(VEGF-A、 -B、 -C、 -D、 -E 和胎盘生长因子 P1GF) 是以不同的亲和 力与其细胞表面受体 (VEGF 受体 1(VEGFR1)、 VEGFR2 和 VEGFR3) 结合的同型二聚体的糖蛋 白家族。VEGF-A， 通常称为 VEGF， 是具有 N 端信号序列和肝素结合域的二聚体 36-46kDa 糖 化蛋白。已经鉴别了 VEGF 的 6 种不同的促血管生成剪接变体 ； 这些氨基酸个数不同的变体 包括 VEGF206、 VEGF189、 VEGF183、 VEGF165、 VEGF145 和 VEGF121。更短的形式扩散更自由，。

17、 例如 VEGF121 完全没有肝素结合域， 而 VEGF165 是这些低分子量变体最丰富的。较大的变 体 VEGF206 和 VEGF189 是基质结合的并且不大可能与内皮细胞受体结合。 0010 VEGF 是 VEGFR-1 和 VEGFR-2 最具广泛表征的配体， 它是主要位于血管内皮细胞表 面的细胞膜受体， 并在配体结合后呈现内在的酪氨酸激酶活性。这两种 VEGF 受体酪氨酸激 酶 (RTK) 通过两种主要机制对血管形态形成和病理性新血管形成有主要贡献 ： (1) 刺激新 血管生长 ( 血管发生和 / 或血管形成 ) 和 (2) 增加血管超通透性。VEGF、 VEGFR1 和 VEGF。

18、R2 已经被定位于从新血管AMD和糖尿病性视网膜病变患者获得的眼液(ocularfluid)和新血 管膜中 ； 或许更重要的是， 这些蛋白的存在与疾病严重程度的加重相关。 0011 已经被批准用于新血管 AMD 治疗的抗 VEGF 剂为核糖核酸适体 ： 与 VEGF-A165 特 定结合的( 培加尼布， Eyetech/OSI/Pfizer)， 以及与 VEGF-A 所有亚型结合的 人源化单克隆抗体的 Fab 片段 -( 雷珠单抗， Genentech/Novartis)。尽管于 2004年批准了但是在三期临床研究中用玻璃体内治疗的患者在 治疗的第一年期间持续经历视力丧失， 尽管治疗组中的视力。

19、下降速率低于假 治疗组中的速率。在治疗的第二年期间，的疗效比在第一年期间差， 证明在这 两项中心研究中仅一项有益处。 0012 与此相反， 于 2006 年批准的玻璃体内在三期临床试验中以 4 周间隔 施用， 在95的被治疗患者中保持最佳校正视力(BCVA)， 并且在24至40的被治疗患者中 将 BCVA 提高了 15 或更多个字母。当每个月注射 Lucentis 时， 这些显著的益处维持了 24 个月的治疗持续时间。然而， 当在三个最初每月负荷剂量之后以 12 周间隔在渗出性 AMD 患 者中施用并继续 12 个月时，治疗保持但不会提高视力。尽管玻璃 体内表现出新血管AMD患者的治疗结果的显。

20、著提高， 但是当使用少于每月1次 说 明 书 CN 102985084 A 4 3/14 页 5 注射的给药频率时， 这些结果和其它不太有利的结果表明 ： 当前的抗 VEGF 治疗主要的未得 到满足的医疗需求是作用持续时间。 0013 在渗出性 AMD 和 / 或 DME 的人临床试验中正在研究或是已经研究了许多其 它抗 VEGF 策略， 如玻璃体内( 贝伐珠单抗， Genentech)- 一种抗 VEGF-A 的 全长人源化单克隆抗体， 于 2004 年被批准用于结直肠癌的静脉内治疗 ； 玻璃体内 VEGF TrapR1R2(Regeneron)-一种110kDa的重组嵌合蛋白， 包含人VE。

21、GFR1和VEGFR2的细胞外、 配 体 - 结合域部分， 与人 IgG 的 Fc 部分融合并且与 VEGF-A 以及胎盘生长因子 (P1GF) 的所有 亚型结合 ； 玻璃体内+ 抗 PDGF 适体 (Ophthotech) 组合治疗， 试图通过活性 EC 和周细胞的同时阻断来诱导 NV 消退 ； 以及各种受体酪氨酸激酶抑制剂 (RTKi s) 的局部或 全身递送。 0014 受体酪氨酸激酶抑制剂 (RTKi s) 是一种更新类别的抗血管形成化合物， 其通过 抑制细胞膜受体的内在酪氨酸磷酸化来阻断 VEGF 信号传导。对于眼科和非眼科适应症两 者， RTKi 正进行临床评价。RTKi 用于血管。

22、形成依赖性疾病的治疗的显著优势是其通过阻断 来自多种配体的受体激活而提供 VEGF 信号传导的更完全阻断的潜能。此外， 因为最有效的 RTKi 同时阻断多种信号通路， 预期这些 RTKi 将提供与当前针对孤立性生长因子的治疗相 比疗效上的优势。当与生物大分子如抗体或大肽对比时， RTKi 作为小分子 ( 500Da) 具 有促进细胞间和细胞内分布的潜能并且更适于制剂在持续递送装置中。 0015 关于眼科适应症， 越来越多的科学证据表明 ： RTKi 可能在病理性 PSNV 和 / 或视网 膜水肿的治疗中提供实质性优势。PKC412(CGP41251， Novartis)， 一种选择性抗 PKC。

23、 亚型以 及 VEGFR 和 PDGFR 的 RTKi， 可使增加的中心凹厚度部分降低， 如通过 OCT 所测量， 并且在既 有 DME 的患者中口服施用后使视力提高。然而， 胃肠不良事件如腹泻、 恶心和呕吐以及转氨 酶活性增加都是剂量限制性的。另一种 RTKi-PTK787( 瓦他拉尼， Novartis and Schering AG) 的口服施用， 已经在新血管 AMD 患者中经过临床研究。与 PKC412 相比， PTK787 是一种 更有选择性的 VEGFR 抑制剂， 并且已经显示其在啮齿动物模型中提供 PSNV 的显著抑制。尽 管来自一期 / 二期临床新血管 AMD 研究的结果尚未。

24、被披露， 由已公开的使用 PTK787 的口 服每日给药的一期 / 二期临床肿瘤学研究报告的最常见的不良事件为疲劳、 恶心、 眩晕、 呕 吐、 厌食和腹泻。最近， RTKi-Pazopanib(GlaxoSmithKline) 已经进入使用局部眼部施用的 渗出性 AMD 的临床试验。 0016 通过抑制和 / 或消退血管形成和抑制血管通透性增加， 针对病理性眼部血管生 成、 PSNV、 渗出性 AMD、 DME、 视网膜 / 黄斑水肿、 DR 和视网膜缺血的有效的局部递送的选择 性 RTKi 将给患者提供实质性的益处， 从而显著地保持或改善视力。这些疾病的有效治疗将 改善患者的生活质量和社会生。

25、产力。而且， 与给视力损伤者提供援助和卫生保健相关的社 会成本可大大降低。 0017 发明概述 0018 本申请涉及某些脲化合物治疗患有与病理性眼部血管生成/新血管形成和/或视 网膜水肿相关的眼后节病症的患者的用途， 包括渗出性与非渗出性 AMD、 糖尿病性视网膜病 变， 其包括增生前期糖尿病性视网膜病变 ( 总称 DR)、 DME， 以及 PDR、 视网膜或黄斑水肿、 视 网膜中央或分支静脉阻塞和缺血性视网膜病变。 0019 发明详述 说 明 书 CN 102985084 A 5 4/14 页 6 0020 对于发达国家中获得性失明的两个最常见原因 ： 渗出性老年性黄斑变性 (AMD) 和 。

26、增生性糖尿病性视网膜病变 (PDR)， 眼后节新血管形成是应负主要责任的威胁视力的病理 学因素。 0021 糖尿病患者中的高血糖症诱导视网膜微血管系统的改变， 导致黄斑水肿， 除此以 外， 新血管膜的增殖同样与血管渗漏和视网膜的水肿相关。其中水肿包括黄斑、 视力恶化。 在糖尿病性视网膜病变中， 黄斑水肿是视力丧失的主要原因。 与血管生成病症一样， 用激光 凝固术来稳定或消除水肿病症。尽管能减少水肿进一步发展， 但激光凝固术是一种细胞破 坏性方法， 不幸的是， 将会改变被治疗眼睛的视野。 0022 对于眼部 NV 和水肿的有效的药理学疗法将会给患者提供实质性的疗效， 从而在 很多疾病中避免损伤性。

27、手术或损伤性激光方法。 NV和水肿的有效治疗将改善患者的生活质 量和社会生产力。而且， 与给盲人提供援助和卫生保健相关的社会成本可大大降低。 0023 本发明部分基于以下发现 ： 抑制受体酪氨酸激酶的某些脲化合物可用于 AMD、 DR、 DME、 视网膜 / 黄斑水肿、 缺血性视网膜病变， 以及与眼后节新血管形成 (PSNV) 相关的疾病 的治疗。通过抑制和 / 或消退血管形成以及抑制血管通透性增加， 有效的局部递送的选择 性 RTKi 将会给患者提供实质性的益处， 从而显著地保持或改善视力。考虑到与肿瘤学中全 身抗 VEGF 治疗相关的不良副作用的充分描述的列表， 例如高血压、 肾病综合征、。

28、 血栓事件、 出血、 胃肠穿孔、 嗓音改变、 粘膜毒性、 手足综合征、 疲劳、 神经学并发症 ( 例如可逆性后部 白质脑病综合征 )、 骨髓抑制， 以及转氨酶升高， 结合在早期眼科试验中在抗 VEGF 化合物全 身给药后观察到一些这些不良反应， 选择性 RTKi 的局部眼部递送可以为使人衰弱的眼后 节疾病的患者提供安全性和疗效两方面独特的治疗优势。此外， 已经显示这些化合物在动 物模型中提供PSNV的消退， 当使用仅阻断VEGF途径的抑制剂如玻璃体内时未 发现该药理学特征。因此， 本发明可在三个主要方面提供一种或多种临床益处 ： 增加疗效、 增加作用持续时间， 以及减少全身副作用。 0024 。

29、本发明方法中使用的优选化合物为如下列出的化合物 I-VII ： 0025 说 明 书 CN 102985084 A 6 5/14 页 7 0026 化合物 I-VII 的化学名称列于如下的表 1 ： 0027 说 明 书 CN 102985084 A 7 6/14 页 8 0028 本发明的化合物 I-VII 是已知的， 这些化合物的合成公开于美国申请系 列 No.2006/0178378( 化 合 物 I)、 美 国 申 请 系 列 No.2003/0181468( 化 合 物 II)、 美 国 专 利 No.7,297,709( 化 合 物 III 和 IV)， 以 及 美 国 申 请 系。

30、 列 No.2005/0020619 和 2005/0026944( 化合物 V-VII)， 其各自以引用的方式并入本文。此外， 其它两个相关的 脲化合物 (VIII 和 IX) 是已知的 ( 参见下面所示结构 ) 并且其合成公开于美国专利 No.7,297,709 并且已经在以下药理学研究中显示是无效的。 0029 0030 还考虑化合物 I 至 VII 的任一种的药学上可接受的盐以及化合物 I-VII 的任何组 合可用于本发明的方法中。 0031 本文使用的术语 “药学上可接受的盐” 意指化合物 I-VII 的任何阴离子， 其将适 于通过任何常规方式治疗施用于患者， 而没有显著危害性的健康。

31、后果。优选药学上可接受 的阴离子或盐的实例包括氯化物、 溴化物、 乙酸盐、 苯甲酸盐、 马来酸盐、 富马酸盐和琥珀酸 盐。 0032 依照本领域技术人员已知的制剂技术， 本文公开的化合物可以包含在各种类型 说 明 书 CN 102985084 A 8 7/14 页 9 的药物组合物中。含有本文描述的化合物的药物组合物可通过任何适合的递送方法或途 径施用， 但是， 优选局部施用于眼。还考虑可以使用所有用于眼睛的局部途径， 包括局部、 结膜下、 眼周、 眼球后、 筋膜下 (subtenon)、 眼房内 (intravitreal)、 玻璃体内、 眼内、 视网 膜下和脉络膜上施用。全身或胃肠外施用是。

32、可行的， 包括但不限于静脉、 皮下和口服递 送。最优选的施用方法是溶液或混悬液的玻璃体内或筋膜下注射， 或生物溶蚀或非生物溶 蚀装置的玻璃体内或筋膜下放置， 或溶液或混悬液的局部眼部施用， 或凝胶剂的眼后节近 巩膜 (posterior juxtascleral) 施用。递送的其他优选方法是通过例如美国申请公开 No.2007/0060887 中描述的装置施用的生物溶蚀植入剂的玻璃体内施用。 0033 本发明还涉及提供适于视网膜和视神经头组织 (optic nerve headtissue) 的治 疗的组合物。本发明的眼科组合物包括一种或多种所描述的化合物 I-VII 以及药学上可接 受的媒介。

33、物。 可使用各种类型的媒介物。 媒介物通常实际上是含水的。 基于制剂容易， 以及 患者能够通过将一至两滴溶液滴入受累眼睛中的方式容易地施用这类组合物， 通常优选水 溶液。然而， 本发明中使用的化合物同样可以容易地并入其它类型的组合物， 例如混悬液、 粘性或半粘性凝胶或其它类型的固体或半固体组合物。 混悬液可能优选用于相对不溶于水 的化合物。本发明的眼科组合物还可以包括各种其它成分， 例如缓冲剂、 防腐剂、 共溶剂和 增粘剂。 0034 可以加入适当的缓冲体系 ( 例如磷酸钠、 乙酸钠或硼酸钠 ) 来防止贮藏条件下的 pH 变化。 0035 眼科产品通常以多剂量形式包装。因此需要用防腐剂来预防使。

34、用期间的微生物 污染。合适的防腐剂包括 ： 苯扎氯铵、 硫柳汞、 三氯叔丁醇、 对羟基苯甲酸甲酯、 对羟基苯甲 酸丙酯、 苯乙醇、 依地酸二钠、 山梨酸、 聚季铵盐 -1， 或本领域已知的其它活性剂。通常以 0.001 至 1.0重量 / 体积 (“ w/v” ) 的水平使用这类防腐剂。 0036 施用途径(例如局部、 眼部注射、 胃肠外或口服)和剂量方案将由有技能的临床医 生根据以下因素确定， 例如被治疗病症的确切性质、 病症的严重程度， 以及患者的年龄和一 般身体状况。 0037 总之， 用于以上描述目的的剂量是可变的， 但将会是预防或治疗 AMD、 DR 和视网膜 水肿的有效量。本文使用。

35、的术语 “药学有效量 “是指将有效地在人类患者中治疗 AMD、 DR 和 / 或视网膜水肿的一种或多种本文描述的化合物的量。用于任何上述目的的剂量通常为每 千克体重约0.01至约100毫克(mg/kg)， 每天施用一次至四次。 当组合物局部给药时， 通常 以 0.001至约 10 w/v 的浓度范围， 每天施用 1-4 次， 每次 1-2 滴。 0038 本文使用的术语 “药学上可接受的载体 “是指安全的且提供有效量的至少一种本 发明化合物的期望施用途径的适当递送的任何制剂。 0039 将下列实施例包括在内以说明本发明的优选实施方案。本领域技术人员可以理 解， 下面的实施例中公开的技术代表本发。

36、明人发现的用于实施本发明的运行良好的技术， 所以被认为是实施本发明的优选方式。然而， 本领域技术人员可以理解的是， 根据本发明 公开的内容， 在公开的具体实施方案中可以进行许多改变但仍然可以获得相同或相似的结 果， 而不背离本发明的精神和范围。 0040 本发明基于以下发现 ： 阻断酪氨酸自磷酸化作用的脲化合物可通过使用一系列疗 效药理学测定而选自各种种类， 以说明这些化合物的以下内在能力 ： (1) 抑制视网膜和脉 说 明 书 CN 102985084 A 9 8/14 页 10 络膜新血管形成 ； (2)引起视网膜和脉络膜新血管形成的消退 ； 以及(3)阻断视网膜血管通 透性。此外， 使用。

37、相同的药理学测定来显示来自相同种类的其它脲化合物不具有相同的内 在疗效性质。因此， 所发现的这些脲分子的药理学性质是之前未知的。下表中总结了在所 选择测定中各种脲化合物的结果。发明人亲自参与了下述所有研究的设计和分析。 0041 实施例 1 0042 KDR 测定 0043 方法 ： 使用 Biomek 3000 全自动工作站、 以 96 孔板格式进行 7- 点 HTRF( 均相时间 分辨荧光)激酶测定法， 以测定受试化合物对KDR(VEGFR2)激酶的IC50值， 使用来自CisBio 的KinEASE-TK试剂盒。 该试剂盒是用于酪氨酸激酶、 包括KDR激酶的通用试剂盒。 KDR激酶 购自。

38、 Cell SignalingTechnology。该测定分两步运行。在第 1 步中， 通过在 KDR 激酶 ( 在 50ml 反应混合物中 5ng) 的存在下加入 ATP(10mM) 来启动生物素标记的通用肽底物 (2mM) 的磷酸化作用， 在第2步中， 在室温孵育30min后， 通过加入含有两种HTRF检测试剂和EDTA 的混合物来终止反应。用由 CisBio 提供的缓冲液来配制底物、 酶和 ATP 稀释液。用 5 DMSO 或 10 10(DMSO 乙醇 ) 配制化合物稀释液， 以配制 4X 工作储备液。HTRF 检测试剂 是用 Eu(K)(HTRF 供体 ) 和链霉抗生物素 -XL66。

39、5(HTRF 受体 ) 标记的磷酸酪氨酸抗体。使 用Tecan HTRF平板读数仪测量所得到的HTRF信号(665nm/620nm比例)， 并使用非线性、 迭 代、 S 拟合计算机程序 (OriginPro8.0) 来分析数据， 以得到受试化合物的抑制常数。 0044 结果 ： 7 种独特的、 结构上不同的、 受体酪氨酸激酶的小分子抑制剂 (RTKi)( 化合 物 I-VII) 在两种体外测定中显示实质性的效价， 包括对细胞测定中 VEGF 诱导的增殖的显 著疗效。具体来说， 如本文所描述 ( 表 2)， 在基于酶的测定中测试对 KDR( 人 VEGFR2) 的活 性时， 所有RTKi显示IC。

40、501nM。 此外， 与化合物I-VII相比， 两个其它相关脲化合物(VIII 和 IX， 表 2) 显示对 KDR 基本无活性。 0045 表 2. 0046 说 明 书 CN 102985084 A 10 9/14 页 11 0047 实施例 2 0048 BREC 测定 0049 方法 ： 由于其能够强效地抑制 VEGFR2， 评价各化合物 I-VII 对 VEGF 诱导的牛视网 膜内皮细胞 (BREC) 增殖的活性。在纤连蛋白包被的 96 孔板中含 10 FBS 的 MCDB-131 生 长培养基中以 3000-7000 细胞 / 孔接种牛视网膜内皮细胞。24 小时后， 生长培养基用补。

41、充 有 1 FBS、 谷氨酰胺、 肝素、 氢化可的松和抗生素的 MCDB-131 培养基代替。再过 22-24 小 时， 在存在或不存在 50ng/ml VEGF 培养基和 1 FBS 培养基中的受试化合物下处理细胞。 30 小时后， 加入 BrdU 用于最后的 16 小时孵育。然后固定所有细胞， 用比色 BrdU ELISA 试 剂盒测定。 0050 结果 ： 所有化合物 (I-VII) 显示对 VEGF 诱导的增殖的强力和有效的抑制， 其中所 有 7 种化合物提供 EC50 2nM， 并且 7 种化合物中的 6 种具有 EC50 0.5nM( 表 2)。此外， 所有 7 种化合物显示相对效。

42、价 0.5 的参比标准 RTKi， 已知该参比标准 RTKi 在眼后节疾 病的动物模型中提供可重现的疗效 ( 表 2)。此外， 与化合物 I-VII 相比， 其它两种相关脲 化合物 (VIII 和 IX， 表 2) 显示对 VEGF 诱导的增殖完全无活性。由于其在 KDR 测定和 BREC 增殖测定中均无活性， 化合物 VIII 和 IX 未继续进行体内试验。 0051 实施例 3 0052 化合物 I-VII 的玻璃体内递送， 抑制大鼠中 VEGF 诱导的视网膜血管通透性 0053 方法 ： 用肌肉内氯胺酮 / 甲苯噻嗪麻醉成年 Sprague-Dawley 大鼠， 用局部睫状肌 麻痹剂使其。

43、瞳孔扩散。 将大鼠随机分配到化合物I-VII的0、 0.3、 1.0和3.0制剂的 玻璃体内注射组和阳性对照组。 在各治疗眼中玻璃体内注射10L各化合物(n56只 动物 / 组 )。首次玻璃体内注射后 3 天， 所有动物两只眼睛进行玻璃体内注射 10L 500ng hr VEGF。VEGF 注射后 24 小时， 在所有动物中进行 3伊文思蓝的静脉内输注， 其中在全身 麻醉期间通过侧尾静脉注射 50mg/kg 伊文思蓝。染料循环 90 分钟后， 将大鼠安乐死。然后 将大鼠用平衡盐溶液全身灌注， 然后立即摘除每只大鼠的两只眼睛， 采集视网膜 ( 使用手 术显微镜)。 测量视网膜湿重后， 通过将视网。

44、膜置于0.2ml甲酰胺(Sigma)中来萃取伊文思 蓝， 然后均化并超速离心。将血液样品离心并将血浆在甲酰胺中稀释 100 倍。对于视网膜 和血浆样品， 均使用 60l 上清液在 620/740nm 测量伊文思蓝吸光度 (ABS)。血液 - 视网 膜屏障破坏以及随后的视网膜血管通透性， 如通过染料吸光度所测量， 计算为净 ABS/ 湿重 / 血浆 ABS 的平均值 +/-s.e.m。使用单向 ANOVA 来测定治疗方法之间的整体差异。进行治 疗组之间的成对比较的测试或 Man-Whitney 秩和检验， 其中 P 0.05 被认为显著。 0054 结果 ： 在大鼠VEGF模型中， 最初使用0.。

45、1或1混悬液的单次ivt注射测试各化 合物。与注射媒介物的对照相比， 在一个或多个剂量下， 7 种化合物中的 6 种显示抑制 VEGF 诱导的 RVP 的能力， 其中 6 种化合物中的 5 种提供 70抑制 ( P 0.05)( 表 3)。然 后使用单次 ivt 注射以剂量 - 响应方式测试各化合物 ( 表 4)。 0055 表 3 说 明 书 CN 102985084 A 11 10/14 页 12 0056 0057 表 4 0058 0059 化合物与参比标准等效， 因为 95置信限 (CL) 包括 1.0(LL I.0 UL) 0060 实施例 4 0061 在氧诱导的视网膜病变大鼠模。

46、型中玻璃体内递送化合物 I-VII 后视网膜前新血 管形成的预防和消退 0062 方法 ： 接收已经怀孕 14 天的 Sprague-DAwley 大鼠， 大鼠在妊娠第 221 天分娩。 分娩完成后， 立即把幼仔汇总， 随机分组 (n 17 只幼仔 / 组 )， 置于氧气输送室内的单独 鞋盒笼中， 并从出生后 0 到 14 天均暴露在氧环境中。在第 14/0 天到第 14/6 天 ( 出生后 第 14-20 天 )， 把幼仔均置于空气房间中。对于预防研究， 在第 14/0 天， 将每只幼仔随机分 配到各种不同的治疗组。对于随机分配到注射治疗组的幼仔 ： 一只眼睛接受玻璃体内注射 5l0.01 。

47、-1的 RTKi， 而对侧眼睛接受玻璃体内注射 5l 媒介物。在第 14/6 天 ( 出生 后第20天)， 将所有动物安乐死。 对于消退研究， 在第18/0天， 将每只幼仔随机分配到氧暴 露对照组或是各种不同的治疗组。对于随机分配到注射治疗组的幼仔 ： 一只眼睛接受玻璃 说 明 书 CN 102985084 A 12 11/14 页 13 体内注射 5l 0.01 -1的 RTKi， 同时对侧眼睛接受玻璃体内注射 5l 媒介物。在第 14/7 天 ( 出生后第 21 天 )， 将所有动物安乐死。 0063 在安乐死后， 立即采集所有大鼠幼仔的视网膜， 置于 10中性缓冲福尔马林中固 定 24 。

48、小时， 用 ADPase 染色， 并封固做成载片。获得各个所制备的视网膜平面载片的数码图 片。应用计算机化影像分析， 从每个可读样本中获得 NV 时钟得分。对每个视网膜共 12 个 时钟得分中的每一个评估是否存在视网膜前 NV。在非参数分析中， 使用来自每个治疗组的 NV 时钟的中值得分进行统计比较。用每只非注射幼仔通过取两只眼睛的平均值来代表一 个 NV 得分， 然后与每个剂量组进行比较对照。因为幼仔是随机分配的， 未观察到所有组氧 暴露对照幼仔之间的差异， 合并所有治疗组的 NV 得分。P 0.05 视为统计学显著。 0064 结果 ： 在大鼠 OIR 模型中， 最初使用预防范例 (par。

49、adigm) 中 0.1或 1混悬液 的单次 ivt 注射来测试各化合物。当与媒介物对比时， 7 种化合物中的 6 种在 1剂量提供 100抑制 (P 0.05)( 表 5)。随后的使用混悬液的单次 ivt 注射的剂量 - 响应预防研究 显示 ： 所有 7 种化合物比之于已知可在大鼠 OIR 模型中提供可重现疗效的参比标准 RTKi， 对视网膜前新血管形成的疗效更强约 2x( 表 6)。此外， 在剂量 - 响应消退 ( 即干预 ) 研 究中测试了 7 种化合物中的 4 种， 使用混悬液的单次 ivt 注射， 显示 ： 所有 4 种化合物在消 退视网膜前新血管形成的疗效相比之于参比 RTKi 更强接近 2x( 表 7)。 0065 表 5 006。