一种受体介导量子点示踪靶向给药系统及其制备方法和应用技术领域
本发明涉及药品领域，具体涉及一种受体介导量子点示踪靶向给药系统及其制备方法和应
用。
背景技术
恶性肿瘤已经成为威胁人类健康和生命最主要的疾病之一。目前对恶性肿瘤多采用手术
与化疗相结合的综合治疗为主，其中化疗是必须使用的治疗手段，因其药力强大、可快速杀
伤或杀死肿瘤细胞，在临床治疗中发挥着重要作用。但化疗药物普遍存在细胞选择性差、毒
副作用大、不良反应严重、易产生严重不良反应和多药耐药（Multi-drug resistance，MDR），
致使化疗效果不理想。因此，如何提高药物的组织或细胞选择性，将药物准确输送到肿瘤组
织或细胞并在靶部位定向释放发挥治疗作用，已成为肿瘤治疗亟待解决的关键问题之一。
随着医学和材料科学新的研究成果不断涌现，药物制剂理论与实践获得了迅速发展，为
提高肿瘤的治疗效果、降低毒副作用、逆转MDR等发挥了重要作用。尤其是“靶向给药”
理论与实践研究的成果，将化疗药物选择性导向特定肿瘤细胞、解决化疗药物制剂普遍存在
的选择性差等共性问题提供了新的思路，化疗药物的靶向给药有望成为治疗恶性肿瘤的新途
径。靶向给药系统(Targeting Drug Delivery System,TDDS)能将药物准确送到病灶部位，提高
病灶部位的药物浓度，从而提高药物治疗效果，避免或减轻药物毒副作用。靶向性分为主动
靶向性和被动靶向性。主动靶向性是指该系统具有主动识别靶细胞并进入靶细胞的能力，如
受体靶向给药系统等。被动靶向能力与系统的尺寸大小有关，100纳米以下的颗粒易透过肿
瘤组织的血管，使药物或基因等效应分子浓集于肿瘤细胞周围并产生作用。
CD44是一种跨膜受体糖蛋白，能与透明质酸(Hyaluronan acid，HA)等多种配体结合，最
近的研究表明，HA与其特异性受体CD44之间的相互作用可以作为HA靶向治疗恶性瘤的
研究基础，CD44在多种恶性瘤细胞表面都有过表达，所以利用HA作为载体，将小分子药物
搭载其上，可以在增强药物选择性的同时降低药物对于正常细胞的杀伤作用，并且，与HA
连接后药物的溶解性和稳定性会大大提高。因此利用HA作为药物的靶向基团连接到药物或
其载体表面，可以通过受体介导作用将药物导入细胞中杀伤或抑制肿瘤细胞，达到靶向治疗
的目的。但HA易溶于水，易被吸收，在组织中停留时间短，降解速度快，这就限制了他在
医学领域的应用。
聚乙二醇（PEG）为低毒性线性分子，无抗原性，具有水溶性、免疫学惰性，其生物相容
性已得到美国食品和药物管理局FDA认证。PEG末端的羟基是化学反应的功能基团，但化学
性质不活泼，须在较激烈的条件下才能与其它基团发生反应，为使HA能在较温和条件下以
较高速率与PEG键合，只有通过特定的活化剂与PEG反应使之活化，用活化的PEG羧基与
HA乙酰化处理的氨基发生反应形成酯链或醚链连接的二元共轭物。在作为药物传输用途时，
酯链型连接在体内适宜条件下，能被逐渐水解打开。
透明质酸(Hyaluronan acid，HA)是由重复二糖结构单元β-D-葡萄糖醛酸和N-乙酰氨基葡
萄糖相互交替连接构成的线性黏多糖，具有低免疫原性、生物可降解性，是一种理想的生物
医用高分子材料。有文献报道,以HA作为药物载体的前药具有良好的主动及被动靶向性，将
抗肿瘤药物与HA偶合能提高药物的溶解性、稳定性、控释性；并使药物的毒性降低,达到靶
向治疗肿瘤的目的。CD44是细胞表面最重要的HA受体，其N端与HA非共价结合,结合部
位可以延伸至HA的数个重复二糖单位，且其在恶性肿瘤细胞表面高度表达，因而HA适合
用作恶性肿瘤靶向给药系统的主动靶向因子。
量子点（quantum dots，QDs，又称为半导体纳米晶）作为一种具有独特光学和化学性质
的新型荧光探针，在细胞、活体的荧光成像以及生物活性物质的定性、定量方面都有较好的
应用前景，与传统的有机荧光原料相比，具有不可比拟的优点：激发光谱宽，可用单一激发
波长同时激发不同颜色的量子点；发射光谱窄而对称，可减少检测中的光谱重叠，提高检测
的灵敏度；荧光发射波长可由量子点大小和组成元素调控；发光强度比传统荧光物质强10
倍以上，荧光寿命强。虽然组成量子点的化学成分Cd和Se等元素对细胞和组织是有毒害的，
但经亲水性和功能化处理的量子点则表现出良好的生物相容性(biocompatibility)。对标记了量
子点的培养细胞和注射了量子点的活体动物的长期跟踪观察表明，量子点对实验细胞和动物
体未造成生理损害并能够保持量子点理化性质。迄今为止，已有国内外学者将不同材料的
QDs与生物分子偶联代替传统的有机荧光染料分子，广泛用于生物活性分子检测，肿瘤细胞
检测与肿瘤影像以及生物活体成像等方面。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种受体介导量子点示踪靶向给药系统及其制备方法
和应用。该给药系统用于淋巴瘤、乳腺癌、卵巢癌、精原细胞瘤、多发性骨髓瘤和甲状腺癌
化疗具有明显的优势，特别在杀伤高表达CD44受体的乳腺癌，卵巢癌，宫颈癌肿瘤细胞，
对正常组织的毒性较低，且该靶向给药系统在活体内实时阅读药物与细胞以及细胞的多生物
分子相互作用的信息，可研究药物的转运过程及动态监测药物多靶点过程。
本发明解决上述技术问题所采用的技术方案：一种受体介导量子点示踪美法仑靶向给药
系统，它是聚乙二醇-透明质酸-量子点-美法仑复合物，简写为PEG-HA-QDs-MEL，由PEG与
HA酰胺脱水缩合连接，并且在HA接入水溶性CdTe/CdS量子点，最后与药物MEL酰胺脱水缩
合制备得到，其中，PEG-HA-QDs-MEL的组分含量按重量份数计如下，每一重量份为1毫克：
美法仑（MEL）30-100份，聚乙二醇（PEG）600-1500份，透明质酸（HA）200-500
份，CdTe/CdS量子点5-50份，N，N'二环己基碳二亚胺（DCC）20-50份，4-二甲氨基吡啶
（DMAP）1-10份，丁二酸酐100-500份，N-羟基硫代琥珀酰亚胺（NHS）20-50份,1-(3-二
甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺（EDC）20-50份，亚硫酸氢钠10-100份,苯甲醇（BA）50-200份。
本发明的受体介导量子点示踪美法仑靶向给药系统的制备方法，包括以下步骤，下述每
一重量份为1毫克：
1）端羧基聚乙二醇的合成及纯化
将600-1500重量份聚乙二醇（PEG）置于带有冷凝管、搅拌器和温度计的三口烧瓶中，
加入氯仿溶解，待溶解完毕后加入100-500重量份丁二酸酐，加热溶解，同时加入干燥的吡啶，
搅拌下回流反应2-10小时，停止反应后冷却至室温，反应所得混合物减压蒸发至呈粘稠状，
再加入无水乙醚沉淀得到白色产物，抽滤，再用二氯甲烷溶解产物，滤去不溶物，加入无水
乙醚沉淀得到白色产物，重复2次以上，抽滤后真空干燥至恒重，得到纯化的端羧基聚乙二醇；
2）PEG-HA的制备
将步骤1）得到的端羧基聚乙二醇溶解于200－500重量份透明质酸的水解液中，倒入装有
分馏柱和搅拌器的三口烧瓶，加入催化剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺10-50重量份和
4-二甲氨基吡啶0.5-5重量份，在60-140℃下反应2-10小时后，收集100℃馏分，反应结束后
冷却；加入无水乙醇至无沉淀生成，过滤收集沉淀，洗涤沉淀，干燥沉淀物即得PEG-HA；
3）水溶性CdTe/CdS量子点的制备
将5-20重量份碲粉和2-10重量份硼氢化钠加入水中，在氮气保护条件下，常温下磁力搅拌
2-5h，得到暗红色含Te的NaHTe前驱液；称取2-10重量份CdCl2溶于蒸馏水中,加入2-10
重量份巯基丙酸,用浓度1mol/L-2mol/L的NaOH溶液调节溶液的pH值到8-10；把溶液加入
三颈瓶中,把新制备的NaHTe加入到氮气保护下的CdCl2溶液中,溶液的颜色变成透明橙黄色,
室温搅拌,然后转入到90℃的恒温水浴中反应0.5-2h后,以0.1ml/min速度滴入浓度
1μmol/L-20μmol/L Na2S的溶液1ml-15ml,得到CdTe/CdS核壳量子点；全部反应在氮气保护
下完成，反应终止后,加入乙醇,在5000r/min下离心分离10-15min,弃去上层清液,加水使沉淀
重新悬浮,重复此过程2次,得到的固体在室温下自然晾干，研磨得到CdTe/CdS量子点固体粉
末，简写为QDs；
4）PEG-HA-QDs的制备
称取5-50重量份QDs溶于水中，室温避光磁力搅拌至QDs全部溶解，加入5-50重量份
N-羟基硫代琥珀酰亚胺（NHS）与5-50重量份1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺（EDC）。
在室温避光磁力搅拌1h后将步骤2）制备的0.1g/ml-1g/ml的PEG-HA的水溶液20ml，加入
上述混合液中，室温避光磁力搅拌12h，所得产物混合液在pH为7.4的磷酸盐缓冲液以透
析袋透析，冷冻干燥得PEG-HA-QDs复合物；
5）美法伦苄酯（BA-MEL）的制备
在装有温度计、分水器的三颈烧瓶中加入美法仑30-100重量份，亚硫酸氢钠10-100重量
份和过量苯甲醇在磁力搅拌下进行反应，将反应后所得的混合液依次用蒸馏水、饱和碳酸氢
钠和蒸馏水洗涤，得到油状物，将洗涤后的油状物用旋转蒸发仪进行蒸发，除去未反应苯甲
醇，设定旋转蒸发的温度为30-60℃，蒸发直到无馏出物为止，蒸发得到的物质用乙醇-乙醚
进行重结晶，其乙醇与乙醚体积比为1:2，得到乳白色的固体BA-MEL；
6）PEG-HA-QDs-MEL的制备
将步骤4）得到的100-500重量份PEG-HA-QDs复合物、10-50重量份N，N'二环己基碳二
亚胺和0.5-5重量份4-二甲氨基吡啶溶于无水二甲基亚砜中，室温避光磁力搅拌至
PEG-HA-QDs全部溶解，加入步骤5）所得的pH4.7的10-50重量份BA-MEL水溶液，室温避
光磁力搅拌12h，将其在叔丁醇中通过碳载钯0.5wt%—15wt%催化剂氢化脱除苯甲醇，然后
用pH为7.4的磷酸盐缓冲液透析24-72h，再用双蒸水透析24-72h，冷冻干燥得反应物粉末，
即PEG-HA-QDs-MEL产物。
本发明的的制备工艺如下：
本靶向给药系统，应用于制备抗肿瘤药物。
本发明的有益效果在于：
1）本系统有优良的主动靶向性和较好的逆转耐药作用
CD44是一种高效内吞HA受体，该系统中的HA可特异识别受体并与之结合，使药物高
效主动靶向肿瘤细胞；同时通过控制粒子的粒径，可实现系统的被动靶向性，有效提高肿瘤
细胞内的药物浓度，具有较好的逆转耐药作用。
2）本系统有优良的血液稳定性。
HA在体内主要被透明质酸酶降解，透明质酸酶为一种β-1-4内切葡糖胺酸酶，其活性受环
境酸碱度影响较大，人血清、尿、肝脏及肿瘤组织中的透明质酸酶为酸性型透明质酸酶，其
最适pH值为3.5-4.0。在血液中，较高的pH值（7.35-7.45）使得酸性型透明质酸酶失活，HA
不被降解，MEL、PEG与HA相连接的化学键均稳定，可保障给药系统在血液循环过程中药物
不被释放。
3）有良好的隐形性、释药性和控释性能。
该系统偶联了PEG可避免网状内皮系统的吞噬而具有较好的隐形性。酸性型透明质酸酶
仅在肿瘤组织中或其周围有活性。该系统进入肿瘤细胞后，在透明质酸酶作用下，HA被降
解，同时，较低的pH值也使PEG-HA酯键被水解断开，引发药物释放。
4）有良好的体内示踪功能。量子点具有肿瘤成像功能，能动态观察药物载体是否达到肿
瘤细胞和发挥疗效。该给药系统有望解决氨基芳基氮芥类药物制剂在治疗肿瘤方面存在的细
胞选择性差、不良反应严重、有效治疗浓度低和耐药等问题。
5）本系统的广泛适用性
本发明的靶向给药系统通过HA活性基团连接含-NH2或-COOH反应基团的不同活性物
质，如抗肿瘤单抗、抗肿瘤化疗药和吸附基因等，从而进一步扩大其运用范围，具有广泛适
用性。
具体实施方式
为了更好地理解本发明，下面结合实施例进一步阐明本发明的内容，但本发明的内容不
仅仅局限于下面的实施例。下述实施例中每一重量份为1毫克。
实施例1
1．PEG-HA-QDs-MEL组分的制备
（1）端羧基聚乙二醇的合成及纯化
将10g（5mmol）PEG-1500置于250mL带有冷凝管、搅拌器和温度计的三口烧瓶中，加
入100mL氯仿（CaH2存在下蒸出）溶解，待溶解完毕后加入2.5g（25mmol）丁二酸酐,加
热溶解，同时加入2mL干燥吡啶，搅拌下回流反应6小时，停止反应后冷却至室温，反应所
得混合物减压蒸发至呈粘稠状，残余物加入大量无水乙醚，析出白色沉淀产物，抽滤得滤饼，
滤饼用30mL二氯甲烷溶解产物，滤去不溶物，再加入无水乙醚沉淀，析出白色沉淀产物，
抽滤得滤饼，再用二氯甲烷溶解产物，重复上述操作3次，抽滤后真空干燥至恒重，得端羧
基聚乙二醇(PEG-SA-NHS)，称重；
（2）PEG-HA的制备
取3.0g透明质酸与15mL浓度20wt%的NaOH水溶液在常温下机械搅拌反应12小时，脱去乙
酰基；溶液在蒸馏水中透析2天，冷冻干燥得到脱乙酰化的透明质酸冻干粉末；将步骤（1）
得到的0.500g端羧基聚乙二醇溶解于透明质酸水解液中，倒入装有分馏柱和搅拌器的100mL
三口烧瓶中，加入EDC催化剂0.250g、DMAP0.020g，100℃水浴下反应6小时，收集100℃馏
分，反应结束，溶液呈棕色，冷却，加入无水乙醇至无沉淀生成；过滤收集沉淀，洗涤，干
燥即得PEG-HA；
（3）水溶性CdTe/CdS量子点的制备
水溶性CdTe/CdS核壳型纳米量子点的合成主要分为两个步骤：首先合成CdTe核纳米
溶胶；然后再在CdTe外包覆CdS壳层。将0.1200g碲粉和0.0700g硼氢化钠加入5mL
的水溶液中，氮气保护的条件下，常温下磁力搅拌3h，得到暗红色的含Te的前驱液。称取
CdCl20.040g,溶于15mL蒸馏水中,加入50μL巯基丙酸,用浓度1mol/L的NaOH溶液调节溶液的
pH值到8-10；将溶液加入100mL三颈瓶中,通氮气20min后,把新制备的NaHTe加入到氮气保护
下的CdCl2溶液中,溶液的颜色变成透明橙黄色,室温搅拌20min,然后转入到90℃的恒温水浴中,
反应0.5h后,以0.1mL/min的速度滴入5μmol/L的Na2S溶液1ml,得到CdTe/CdS核壳量子点；
全部反应在氮气保护下完成，反应终止后,加入10mL的乙醇,在5000r/min下离心分离10min,
弃去上层清液,加10mL水使沉淀重新悬浮,重复此过程2次,得到的固体在室温下自然晾干，并
用坩埚研磨得到CdTe/CdS量子点（QDs）固体粉末；
（4）PEG-HA-QDs的制备
称取0.100g QDs溶于水中，室温避光磁力搅拌至QDs全部溶解，加入0.25g NHS与0.15g
EDC，在室温避光磁力搅拌1h后将步骤2）所制备的0.1g/ml的PEG-HA的水溶液20ml，室温
避光磁力搅拌12h，所得产物混合液在pH为7.4的磷酸盐缓冲液以透析袋透析，冷冻干燥得
PEG-HA-QDs复合物；
（5）BA-MEL的制备
在装有温度计、分水器的三颈烧瓶中加入美法仑0.600g，苯甲醇10ml，亚硫酸氢钠0.394g
在磁力搅拌下进行反应；将反应后的混合液依次用蒸馏水、饱和碳酸氢钠、蒸馏水洗涤，得
到油状物；将洗涤后的油状物用旋转蒸发仪进行蒸发，除去混合物中未反应的苯甲醇，设定
旋转蒸发的温度为60℃，蒸发直到无馏出物为止，得到的物质用乙醇-乙醚进行重结晶，其乙
醇与乙醚体积比为1:2，得到乳白色的固体BA-MEL；
（6）PEG-HA-QDs-MEL的制备
将步骤（2）得到的PEG-HA-QDs300mg，取260mg DCC，0.05mmol4-二甲氨基吡
啶（DMAP）溶于15mL无水二甲基亚砜中，室温避光磁力搅拌至PEG-HA-QDs全部溶解
（约1小时），加入5mg/mL的BA-MEL水溶液（pH4.7）30mL，室温避光磁力搅拌12h，将
其于叔丁醇中通过碳载钯5wt%氢催化剂脱除苯甲醇，pH为7.4的磷酸盐缓冲液透析3天，再
用双蒸水透析3天。冷冻干燥得反应物粉末，即得产物PEG-HA-QDs-MEL。
2.受体介导量子点示踪靶向给药系统的MTT实验（卵巢癌SKOV3细胞）
（1）将对数生长期的细胞用胰蛋白酶消化后配制成为浓度为2-10×104个/ml的细胞悬浮
液，经过准确细胞技术后按500个细胞／孔接种于96孔板，每孔加100μl。
（2）将平板置37℃、含体积浓度5%CO2及饱和湿度条件下24小时后，加入各个细胞样
品对应的药物血清、生理盐水血清、以及已稀释好的药物，每个样品浓度设平行的三个孔，
对照组加不含样品的培养液100μl，再放入培养箱中孵育72小时。
（3）每孔加入按5mg/ml新配制的MTT溶液50μl，温育4小时，使MTT还原为甲瓒，当在
倒置显微镜下看到孔板内的细胞周围出现丝状紫色结晶体时倒掉上清液，每孔加二甲基亚砜
220μl，用平板摇床摇匀后，使用酶标仪测定光密度值（OD）（检测波长570nm），以溶剂对
照处理细胞为对照组，按公式计算化合物对细胞的抑制率。
MTT实验结果
3.该给药系统应用范围
美法仑还叫米尔法兰、马尔法兰、左旋溶肉瘤素，英文名：Melphalan或Alkeran
Melphalanum，对恶性淋巴瘤、乳腺癌、卵巢癌、精原细胞瘤、慢性白血病、真性红细胞增多
症、儿童晚期神经母细胞瘤、甲状腺癌有较好疗效，动脉灌注还可以治疗肢体恶性肿瘤，如
恶性黑色素瘤、骨肉瘤及软组织肉瘤等。
实施例2
1．PEG-HA-QDs-MEL组分的制备
（1）端羧基聚乙二醇的合成及纯化
将40g（5mmol）PEG-1500置于500mL带有冷凝管、搅拌器和温度计的三口烧瓶中，加
入200mL氯仿（CaH2存在下蒸出）溶解，待溶解完毕后加入5.0g（25mmol）丁二酸酐,加
热溶解，同时加入8mL干燥吡啶，搅拌下回流反应6小时，停止反应后冷却至室温，反应所
得混合物减压蒸发至呈粘稠状，残余物加入大量无水乙醚，析出白色沉淀产物，抽滤，用120mL
二氯甲烷溶解产物，滤去不溶物，再加入无水乙醚沉淀，析出白色沉淀产物，抽滤，重复上
述操作3次，抽滤后真空干燥至恒重，得端羧基聚乙二醇(PEG-SA-NHS)，称重；
（2）PEG-HA的制备
取12.0g透明质酸与30mL浓度20wt%的NaOH水溶液在常温下机械搅拌反应12小时，脱去
乙酰基；溶液在蒸馏水中透析2天，冷冻干燥得到脱乙酰化的透明质酸冻干粉末；将步骤（1）
得到的2.000g端羧基聚乙二醇溶解于透明质酸水解液中，倒入装有分馏柱和搅拌器的100mL
三口烧瓶中，加入1.000g催化剂EDC、0.080g DMAP，100℃水浴下反应6小时，收集100℃馏
分，反应结束，溶液呈棕色，冷却，加入无水乙醇至无沉淀生成；过滤收集沉淀，洗涤，干
燥即得PEG-HA；
（3）水溶性CdTe/CdS量子点的制备
水溶性CdTe/CdS核壳型纳米量子点的合成主要分为两个步骤：首先合成CdTe核纳米
溶胶；然后再在CdTe外包覆CdS壳层;将0.4800g碲粉和0.2800g硼氢化钠加入20mL的
水溶液中，氮气保护的条件下，常温下磁力搅拌3h，得到暗红色的含Te的前驱液;称取CdCl2
0.160g,溶于40mL蒸馏水中,加入200μL巯基丙酸,用浓度1mol/L的NaOH溶液调节溶液的pH
值到8-10；将溶液加入100mL三颈瓶中,通氮气20min后,把新制备的NaHTe加入到氮气保护下
的CdCl2溶液中,溶液的颜色变成透明橙黄色,室温搅拌20min,然后转入到90℃的恒温水浴中,
反应0.5h后,以0.1mL/min的速度滴入5μmol/L的Na2S溶液2ml,得到CdTe/CdS核壳量子点；
全部反应在氮气保护下完成；反应终止后,加入15mL的乙醇,在5000r/min下离心分离10min,
弃去上层清液,加10mL水使沉淀重新悬浮,重复此过程2次,得到的固体在室温下自然晾干，并
用坩埚研磨得到CdTe/CdS量子点（QDs）固体粉末；
（4）PEG-HA-QDs的制备
称取0.400gQDs溶于水中，室温避光磁力搅拌至QDs全部溶解，加入1.0g NHS与0.60g
EDC，1h后加入步骤（2）制备的0.2g/ml的PEG-HA的水溶液20ml，室温避光磁力搅拌12h,所
得产物混合液在pH为7.4的磷酸盐缓冲液以透析袋透析，冷冻干燥得PEG-HA-QDs复合物；
（5）BA-MEL的制备
在装有温度计、分水器的三颈烧瓶中加入美法仑2.400g，苯甲醇10ml，亚硫酸氢钠1.600g
在磁力搅拌下进行反应；将反应后的混合液依次用蒸馏水、饱和碳酸氢钠、蒸馏水洗涤，得
到油状物；将洗涤后的油状物用旋转蒸发仪进行蒸发，除去混合物中未反应的苯甲醇，设定
旋转蒸发的温度为60℃，蒸发直到无馏出物为止，得到的物质用乙醇-乙醚进行重结晶，其乙
醇与乙醚体积比为1:2，其乙醇与乙醚体积比为1:2，得到乳白色的固体BA-MEL；
（6）PEG-HA-QDs-MEL的制备
将步骤（2）得到的PEG-HA-QDs1200mg、1040mg DCC和0.20mmol DMAP溶于无
水二甲基亚砜40mL中，室温避光磁力搅拌至PEG-HA-QDs全部溶解（约1小时）；加入
20mg/mL BA-MEL水溶液（pH4.7）30mL，室温避光磁力搅拌过夜，加入40ml叔丁醇，通过
5wt%钯碳氢催化脱除苯甲醇，用pH为7.4的磷酸盐缓冲液透析3天，再用双蒸水透析3天；冷
冻干燥得反应物粉末，即得产物PEG-HA-QDs-MEL。
2.受体介导量子点示踪靶向给药系统的MTT实验（卵巢癌SKOV3细胞）
（1）将对数生长期的细胞用胰蛋白酶消化后配制成为浓度为2-10×104个/ml的细胞悬浮
液，经过准确细胞技术后按500个细胞／孔接种于96孔板，每孔加100μl。
（2）将平板置37℃、含体积浓度5%CO2及饱和湿度条件下24小时后，加入各个细胞样
品对应的药物血清、生理盐水血清、以及已稀释好的药物，每个样本浓度设平行的三个孔，
对照组加不含样本的培养液100μl，再放入培养箱中孵育72小时。
（3）每孔加入用按5mg/ml新鲜配制的MTT溶液50μl，温育4小时，使MTT还原为甲瓒，
当在倒置显微镜下看到孔板内的细胞周围出现丝状紫色结晶体时倒掉上清液，每孔加二甲基
亚砜（DMSO）220μl，用平板摇床摇匀后，使用酶标仪测定光密度值（OD）（检测波长570nm），
以溶剂对照处理细胞为对照组，按公式计算化合物对细胞的抑制率。
MTT实验结果
3.该给药系统应用范围
美法仑还叫米尔法兰、马尔法兰、左旋溶肉瘤素，英文名：Melphalan或Alkeran
Melphalanum，对恶性淋巴瘤、乳腺癌、卵巢癌、精原细胞瘤、慢性白血病、真性红细胞增多
症、儿童晚期神经母细胞瘤、甲状腺癌有较好疗效，动脉灌注还可以治疗肢体恶性肿瘤，如
恶性黑色素瘤、骨肉瘤及软组织肉瘤等。
实施例3
1．PEG-HA-QDs-MEL组分的制备
（1）端羧基聚乙二醇的合成及纯化
将20g（5mmol）PEG-1500置于250mL带有冷凝管、搅拌器和温度计的三口烧瓶中，加
入100mL氯仿（CaH2存在下蒸出）溶解，待溶解完毕后加入5.0g（25mmol）丁二酸酐,加
热溶解，同时加入4mL干燥的吡啶，搅拌下回流反应6小时，停止反应后冷却至室温，反应
所得混合物减压蒸发至呈粘稠状，残余物加入大量无水乙醚，析出白色沉淀产物，抽滤，用
60mL二氯甲烷溶解产物，滤去不溶物，再加入无水乙醚沉淀，析出白色沉淀产物，抽滤，重
复上述操作3次，抽滤后真空干燥至恒重，得端羧基聚乙二醇(PEG-SA-NHS)，称重；
（2）PEG-HA的制备
取6.0g透明质酸与30mL浓度20wt%的NaOH水溶液在常温下机械搅拌反应12小时，脱去乙
酰基；溶液在蒸馏水中透析2天，冷冻干燥得到脱乙酰化的透明质酸冻干粉末；将步骤（1）
得到的1.000g端羧基聚乙二醇溶解于透明质酸水解液中，倒入装有分馏柱和搅拌器的100mL
三口烧瓶中，加入0.500g催化剂EDC、0.040g DMAP，100℃水浴下反应6小时，收集100℃
馏分，反应结束，溶液呈棕色，冷却，加入无水乙醇至无沉淀生成；过滤收集沉淀，洗涤，
干燥即得PEG-HA；
（3）水溶性CdTe/CdS量子点的制备
水溶性CdTe/CdS核壳型纳米量子点的合成主要分为两个步骤：首先合成CdTe核纳米
溶胶；然后再在CdTe外包覆CdS壳层；将0.2400g碲粉和0.1400g硼氢化钠加入10mL
的水溶液中，氮气保护的条件下，常温下磁力搅拌3h，得到暗红色的含Te的前驱液；称取
0.080g CdCl2溶于30mL蒸馏水中,加入100μL巯基丙酸,用浓度1mol/L的NaOH溶液调节溶液的
pH值到8-10；将溶液加入100mL三颈瓶中,通氮气20min后,把新制备的NaHTe加入到氮气保护
下的CdCl2溶液中,溶液的颜色变成透明橙黄色,室温搅拌20min,然后转入到90℃的恒温水浴中,
反应0.5h后,以0.1mL/min的速度滴入5μmol/L的Na2S溶液3ml,得到CdTe/CdS核壳量子点；
全部反应在氮气保护下完成；反应终止后,加入15mL的乙醇,在5000r/min下离心分离10min,
弃去上层清液,加10mL水使沉淀重新悬浮,重复此过程2次,得到的固体在室温下自然晾干，并
用坩埚研磨得到CdTe/CdS量子点（QDs）固体粉末；
（4）PEG-HA-QDs的制备
称取0.200g QDs溶于水中，室温避光磁力搅拌至QDs全部溶解，加入0.50g NHS与0.30g
EDC，1h后加入步骤（2）制备的0.3g/ml的PEG-HA的水溶液20ml，室温避光磁力搅拌12h;所
得产物混合液在pH为7.4的磷酸盐缓冲液以透析袋透析，冷冻干燥得PEG-HA-QDs复合物；
（5）BA-MEL的制备
在装有温度计、分水器的三颈烧瓶中加入美法仑1.200g，苯甲醇10ml，亚硫酸氢钠0.800g
在磁力搅拌下进行反应；将反应后的混合液依次用蒸馏水、饱和碳酸氢钠、蒸馏水洗涤，得
到油状物；将洗涤后的油状物用旋转蒸发仪进行蒸发，除去混合物中未反应的苯甲醇1，设定
旋转蒸发的温度为60℃，蒸发直到无馏出物为止，得到的物质用乙醇-乙醚进行重结晶，其乙
醇与乙醚体积比为1:2，得到乳白色的固体BA-MEL；
（6）PEG-HA-QDs-MEL的制备
将步骤（2）得到的PEG-HA-QDs600mg、DCC520mg和0.30mmol4-二甲氨基吡啶
（DMAP）溶于30mL无水二甲基亚砜中，室温避光磁力搅拌至PEG-HA-QDs全部溶解（约
1小时）；加入10mg/mL BA-MEL水溶液（pH4.7）30mL，室温避光磁力搅拌过夜，加入40ml
叔丁醇，通过5wt%钯碳氢催化脱除苯甲醇；用pH为7.4的磷酸盐缓冲液透析3天，再用双蒸
水透析3天；冷冻干燥得反应物粉末，即得产物PEG-HA-QDs-MEL。
2.受体介导量子点示踪靶向给药系统的MTT实验（卵巢癌SKOV3细胞）
（1）将对数生长期的细胞用胰蛋白酶消化后配制成为浓度为2-10×104个/ml的细胞悬浮
液，经过准确细胞技术后按500个细胞／孔接种于96孔板，每孔加100μl。
（2）将平板置37℃、含体积浓度5%CO2及饱和湿度条件下24小时后，加入各个细胞样
品对应的药物血清、生理盐水血清、以及已稀释好的药物，每个样本浓度设平行的三个孔，
对照组加不含样本的培养液100μl，再放入培养箱中孵育72小时。
（3）每孔加入用按5mg/ml新鲜配制的MTT溶液50μl，温育4小时，使MTT还原为甲瓒，
当在倒置显微镜下看到孔板内的细胞周围出现丝状紫色结晶体时倒掉上清液，每孔加二甲基
亚砜（DMSO）220μl，用平板摇床摇匀后，使用酶标仪测定光密度值（OD）（检测波长570nm），
以溶剂对照处理细胞为对照组，按公式计算化合物对细胞的抑制率。
MTT实验结果
3.该给药系统应用范围
美法仑还叫米尔法兰、马尔法兰、左旋溶肉瘤素，英文名：Melphalan或Alkeran
Melphalanum，对恶性淋巴瘤、乳腺癌、卵巢癌、精原细胞瘤、慢性白血病、真性红细胞增多
症、儿童晚期神经母细胞瘤、甲状腺癌有较好疗效，动脉灌注还可以治疗肢体恶性肿瘤，如
恶性黑色素瘤、骨肉瘤及软组织肉瘤等。
实施例4
1．PEG-HA-QDs-MEL组分的制备
（1）端羧基聚乙二醇的合成及纯化
将60g（5mmol）PEG-1500置于500mL带有冷凝管、搅拌器和温度计的三口烧瓶中，加
入300mL氯仿（CaH2存在下蒸出）溶解，待溶解完毕后加入7.5g（25mmol）丁二酸酐,加
热溶解，同时加入12mL干燥吡啶，搅拌下回流反应6小时，停止反应后冷却至室温，反应
所得混合物减压蒸发至呈粘稠状，残余物加入大量无水乙醚，析出白色沉淀产物，抽滤，用
180mL二氯甲烷溶解产物，滤去不溶物，再加入无水乙醚沉淀，析出白色沉淀产物，抽滤，
重复上述操作3次，抽滤后真空干燥至恒重，得端羧基聚乙二醇(PEG-SA-NHS)，称重；
（2）PEG-HA的制备
取18.0g透明质酸与40mL浓度20wt%的NaOH水溶液在常温下机械搅拌反应12小时，脱去
乙酰基；溶液在蒸馏水中透析2天，冷冻干燥得到脱乙酰化的透明质酸冻干粉末；将步骤（1）
得到的3.000g端羧基聚乙二醇溶解于透明质酸水解液中，倒入装有分馏柱和搅拌器的100mL
三口烧瓶中，加入催化剂EDC1.500g、DMAP0.120g，100℃水浴下反应6小时，收集100℃馏
分，反应结束，溶液呈棕色，冷却，加入无水乙醇至无沉淀生成；过滤收集沉淀，洗涤，干
燥即得PEG-HA；
（3）水溶性CdTe/CdS量子点的制备
水溶性CdTe/CdS核壳型纳米量子点的合成主要分为两个步骤：首先合成CdTe核纳米
溶胶；然后再在CdTe外包覆CdS壳层；将0.7200g碲粉和0.4200g硼氢化钠加入20mL
的水溶液中，氮气保护的条件下，常温下磁力搅拌3h，得到暗红色的含Te的前驱液；称取
0.240g CdCl2,溶于40mL蒸馏水中,加入250μL巯基丙酸,用浓度1mol/L的NaOH溶液调节溶液
的pH值到8-10；将溶液加入100mL三颈瓶中,通氮气20min后,把新制备的NaHTe加入到氮气保
护下的CdCl2溶液中,溶液的颜色变成透明橙黄色,室温搅拌20min,然后转入到90℃的恒温水浴
中,反应0.5h后,以0.1mL/min的速度滴入5μmol/L的Na2S溶液4ml,得到CdTe/CdS核壳量子点；
全部反应在氮气保护下完成；反应终止后,加入15mL的乙醇,在5000r/min下离心分离10min,
弃去上层清液,加10mL水使沉淀重新悬浮,重复此过程2次,得到的固体在室温下自然晾干，并
用坩埚研磨得到CdTe/CdS量子点固体粉末；
（4）PEG-HA-QDs的制备
称取0.500g QDs溶于水中，室温避光磁力搅拌至QDs全部溶解,加入1.25g NHS与0.80g
EDC，1h后加入步骤（2）制备的0.4g/mll的PEG-HA的水溶液20ml，室温避光磁力搅拌12h,
所得产物混合液在pH为7.4的磷酸盐缓冲液以透析袋透析，冷冻干燥得PEG-HA-QDs复合物；
（5）BA-MEL的制备
在装有温度计、分水器的三颈烧瓶中加入美法仑3.000g，苯甲醇10ml，亚硫酸氢钠1.600g
在磁力搅拌下进行反应；将反应后的混合液依次用蒸馏水、饱和碳酸氢钠、蒸馏水洗涤，得
到油状物；将洗涤后的油状物用旋转蒸发仪进行蒸发，除去混合物中未反应的苯甲醇1，设定
旋转蒸发的温度为60℃，蒸发直到无馏出物为止，得到的物质用乙醇-乙醚进行重结晶，其乙
醇与乙醚体积比为1:2，得到乳白色的固体BA-MEL；
（6）PEG-HA-QDs-MEL的制备
将步骤（2）得到的PEG-HA-QDs1800mg、DCC1560mg，0.35mmol4-二甲氨基吡
啶溶于无水二甲基亚砜50mL中，室温避光磁力搅拌至PEG-HA-QDs全部溶解（约1小时），
加入20mg/mL BA-MEL水溶液（pH4.7）30mL，室温避光磁力搅拌过夜，加入40ml叔丁醇，
通过5wt%钯碳氢催化脱除苯甲醇；用pH为7.4的磷酸盐缓冲液透析3天，再用双蒸水透析3天；
冷冻干燥得反应物粉末，即得产物PEG-HA-QDs-MEL；
2.受体介导量子点示踪靶向给药系统的MTT实验（卵巢癌SKOV3细胞）
（1）将对数生长期的细胞用胰蛋白酶消化后配制成为浓度为2-10×104个/ml的细胞悬浮
液，经过准确细胞技术后按500个细胞／孔接种于96孔板，每孔加100μl。
（2）将平板置37℃、含体积浓度5%CO2及饱和湿度条件下24小时后，加入各个细胞样
品对应的药物血清、生理盐水血清、以及已稀释好的药物，每个样本浓度设平行的三个孔，
对照组加不含样本的培养液100μl，再放入培养箱中孵育72小时。
（3）每孔加入用按5mg/ml新鲜配制的MTT溶液50μl，温育4小时，使MTT还原为甲瓒，
当在倒置显微镜下看到孔板内的细胞周围出现丝状紫色结晶体时倒掉上清液，每孔加二甲基
亚砜（DMSO）220μl，用平板摇床摇匀后，使用酶标仪测定光密度值（OD）（检测波长570nm），
以溶剂对照处理细胞为对照组，按公式计算化合物对细胞的抑制率。
MTT实验结果
3.该给药系统应用范围
美法仑还叫米尔法兰、马尔法兰、左旋溶肉瘤素，英文名：Melphalan或Alkeran
Melphalanum，对恶性淋巴瘤、乳腺癌、卵巢癌、精原细胞瘤、慢性白血病、真性红细胞增多
症、儿童晚期神经母细胞瘤、甲状腺癌有较好疗效，动脉灌注还可以治疗肢体恶性肿瘤，如
恶性黑色素瘤、骨肉瘤及软组织肉瘤等。
实施例5
1．PEG-HA-QDs-MEL组分的制备
（1）端羧基聚乙二醇的合成及纯化
将120g（5mmol）PEG-1500置于500mL带有冷凝管、搅拌器和温度计的三口烧瓶中，
加入350mL氯仿（CaH2存在下蒸出）溶解，待溶解完毕后加入7.5g（25mmol）丁二酸酐,
加热溶解，同时加入24mL干燥的吡啶，搅拌下回流反应6小时，停止反应后冷却至室温，
反应所得混合物减压蒸发至呈粘稠状，残余物加入大量无水乙醚，析出白色沉淀产物，抽滤，
用,270mL二氯甲烷溶解产物，滤去不溶物，再加入无水乙醚沉淀，析出白色沉淀产物，抽滤，
重复上述操作3次，抽滤后真空干燥至恒重，得端羧基聚乙二醇(PEG-SA-NHS)，称重；
（2）PEG-HA的制备
取36.0g透明质酸与80mL浓度20wt%的NaOH水溶液在常温下机械搅拌反应12小时，脱去
乙酰基；溶液在蒸馏水中透析2天，冷冻干燥得到脱乙酰化的透明质酸冻干粉末。将步骤（1）
得到的6.000g端羧基聚乙二醇溶解于透明质酸水解液中，倒入装有刺形分馏柱和搅拌器的
100mL三口烧瓶中，加入催化剂EDC3.000g、DMAP0.240g，100℃水浴下反应6小时，收集
100℃馏分，反应结束，溶液呈棕色，冷却，加入无水乙醇至无沉淀生成；过滤收集沉淀，洗
涤，干燥即得PEG-HA；
（3）水溶性CdTe/CdS量子点的制备
水溶性CdTe/CdS核壳型纳米量子点的合成主要分为两个步骤：首先合成CdTe核纳米
溶胶；然后再在CdTe外包覆CdS壳层。将1.400g碲粉和0.8400g硼氢化钠加入30mL的
水溶液中，氮气保护的条件下，常温下磁力搅拌3h，得到暗红色的含Te的前驱液；称取CdCl2
0.480g,溶于80mL蒸馏水中,加入250μL巯基丙酸,用浓度1mol/L的NaOH溶液调节溶液的pH值
到8-10；将溶液加入250mL三颈瓶中,通氮气20min后,把新制备的NaHTe加入到氮气保护下的
CdCl2溶液中,溶液的颜色变成透明橙黄色,室温搅拌20min,然后转入到90℃的恒温水浴中,反
应0.5h后,以0.1mL/min的速度滴入5μmol/L的Na2S溶液5ml,得到CdTe/CdS核壳量子点；全部
反应在氮气保护下完成；反应终止后,加入20mL的乙醇,在5000r/min下离心分离10min,弃去
上层清液,加20mL水使沉淀重新悬浮,重复此过程2次,得到的固体在室温下自然晾干，并用坩
埚研磨得到CdTe/CdS量子点固体粉末；
（4）PEG-HA-QDs的制备
称取1.000g QDs溶于水中，室温避光磁力搅拌至QDs全部溶解,加入2.5.g NHS与1.60g
EDC，1h后加入步骤（2）制备的0.5g/ml的PEG-HA的水溶液20ml，室温避光磁力搅拌12h,所
得产物混合液在pH为7.4的磷酸盐缓冲液以透析袋透析，冷冻干燥得PEG-HA-QDs复合物；
（5）BA-MEL的制备
在装有温度计、分水器的三颈烧瓶中加入美法仑6.000g，苯甲醇20ml，亚硫酸氢钠3.200g
在磁力搅拌下进行反应；将反应后的混合液依次用蒸馏水、饱和碳酸氢钠、蒸馏水洗涤，得
到油状物；将洗涤后的油状物用旋转蒸发仪进行蒸发，除去混合物中未反应的苯甲醇1，设定
旋转蒸发的温度为60℃，蒸发直到无馏出物为止，得到的物质用乙醇-乙醚进行重结晶，其乙
醇与乙醚体积比为1:2，得到乳白色的固体BA-MEL；
（6）PEG-HA-QDs-MEL的制备
将步骤（2）得到的PEG-HA-QDs3.60g、3.02g DCC和0.70mmol 4-二甲氨基吡啶
（DMAP）溶于50mL无水二甲基亚砜中，室温避光磁力搅拌至PEG-HA-QDs全部溶解（约
1小时），加入20mg/mL BA-MEL水溶液（pH4.7）30mL，室温避光磁力搅拌过夜，加入40ml
叔丁醇，通过5wt%钯碳氢催化脱除苯甲醇；用pH为7.4的磷酸盐缓冲液透析3天，再用双蒸
水透析3天；冷冻干燥得反应物粉末，即得产物PEG-HA-QDs-MEL。
2.受体介导量子点示踪靶向给药系统的MTT实验（卵巢癌SKOV3细胞）
（1）将对数生长期的细胞用胰蛋白酶消化后配制成为浓度为2-10×104个/ml的细胞悬浮
液，经过准确细胞技术后按500个细胞／孔接种于96孔板，每孔加100μl。
（2）将平板置37℃、含体积浓度5%CO2及饱和湿度条件下24小时后，加入各个细胞样
品对应的药物血清、生理盐水血清、以及已稀释好的药物，每个样本浓度设平行的三个孔，
对照组加不含样本的培养液100μl，再放入培养箱中孵育72小时。
（3）每孔加入用按5mg/ml新鲜配制的MTT溶液50μl，温育4小时，使MTT还原为甲瓒，
当在倒置显微镜下看到孔板内的细胞周围出现丝状紫色结晶体时倒掉上清液，每孔加DMSO
（二甲基亚砜）220μl，用平板摇床摇匀后，使用酶标仪测定光密度值（OD）（检测波长570nm），
以溶剂对照处理细胞为对照组，按公式计算化合物对细胞的抑制率。
MTT实验结果
3.该给药系统应用范围
美法仑还叫米尔法兰、马尔法兰、左旋溶肉瘤素，英文名：Melphalan或Alkeran
Melphalanum，对恶性淋巴瘤、乳腺癌、卵巢癌、精原细胞瘤、慢性白血病、真性红细胞增多
症、儿童晚期神经母细胞瘤、甲状腺癌有较好疗效，动脉灌注还可以治疗肢体恶性肿瘤，如
恶性黑色素瘤、骨肉瘤及软组织肉瘤等。