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1、(10)申请公布号 CN 102697767 A (43)申请公布日 2012.10.03 CN 102697767 A *CN102697767A* (21)申请号 201210116422.6 (22)申请日 2012.04.20 A61K 31/352(2006.01) A61P 3/10(2006.01) A61P 1/16(2006.01) (71)申请人 南京大学 地址 210093 江苏省南京市汉口路 22 号 (72)发明人 徐强 孙洋 张琦 李万帅 吴雪丰 龚方苑 尹业 (54) 发明名称 棕矢车菊素在制备防治胰岛素抵抗非酒精性 脂肪肝及其它 II 型糖尿病相关疾病药物中应用。
2、 (57) 摘要 本发明属于制药技术领域。 如本发明所述， 棕 矢车菊素 (Jaceosidin) 可显著改善高脂饮食诱 导的小鼠胰岛素抵抗， 进而改善 II 型糖尿病模型 小鼠的症状， 并能明显改善高脂饮食引发的非酒 精性脂肪肝与慢性肝损伤。棕矢车菊素作为一种 新型胰岛素抵抗治疗药物， 具有良好的控制血糖 和改善胰岛素敏感性等活性， 同时可用于治疗非 酒精性脂肪肝， 能有效降低肝脏的脂肪病变与慢 性肝损伤。 故棕矢车菊素可用于胰岛素抵抗、 非酒 精性脂肪肝及其他 II 型糖尿病相关疾病的治疗 并制备相应的治疗药物。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 5 页 附图 4 页 (。
3、19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 5 页 附图 4 页 1/1 页 2 1. 棕矢车菊素在防治胰岛素抵抗、 非酒精性脂肪肝及其它 II 型糖尿病相关疾病药物 中的应用。 2.根据权利要求1所述棕矢车菊素在防治胰岛素抵抗、 非酒精性脂肪肝及其它II型糖 尿病相关疾病药物中的应用， 其特征在于所述胰岛素抵抗为 II 型糖尿病。 3.根据权利要求1所述棕矢车菊素在防治胰岛素抵抗、 非酒精性脂肪肝及其它II型糖 尿病相关疾病药物中的应用， 其特征在于其它 II 型糖尿病相关疾病包括代谢综合征、 糖尿 病并发神经病变、 糖尿病并发肾病、 糖尿病并发眼病。
4、、 糖尿病并发动脉硬化。 权 利 要 求 书 CN 102697767 A 2 1/5 页 3 棕矢车菊素在制备防治胰岛素抵抗非酒精性脂肪肝及其它 II 型糖尿病相关疾病药物中应用 一、 技术领域 0001 本发明属于制药技术领域， 属于药物用途专利。 二、 背景技术 0002 棕矢车菊素 (Jaceosidin) 的化学结构自被报道以来， 对该化合物的研究甚少， 关 于其药理活性方面， 尤其是治疗与胰岛素抵抗有关的 II 型糖尿病以及非酒精性脂肪肝相 关疾病的作用等， 迄今未见报道。本发明主要发现了棕矢车菊素对胰岛素抵抗、 II 型糖尿 病与非酒精性脂肪肝模型具有显著的改善作用。 0003 。
5、棕矢车菊素 (Jaceosidin)， 其结构式如下 ： 0004 三、 发明内容 0005 本发明的目的是研究棕矢车菊素在防治胰岛素抵抗、 非酒精性脂肪肝及其它 II 型糖尿病相关疾病药物中的应用。 0006 所述胰岛素抵抗包括 II 型糖尿病以胰岛素抵抗为特征的代谢性疾病。 0007 所述其它 II 型糖尿病相关疾病包括代谢综合征、 糖尿病并发神经病变、 糖尿病并 发肾病、 糖尿病并发眼病、 糖尿病并发动脉硬化。 0008 具体来说 ： 0009 1、 棕矢车菊素的药理实验 0010 高脂饮食诱导的小鼠胰岛素抵抗 II 型糖尿病模型与非酒精性脂肪肝模型 1， 2 0011 取 BALB/c。
6、 雄性小鼠， 6-8 周龄， 18-22 克， 饲养于 SPF 级动物房， 212， 自由饮水 取食， 12h 昼夜交替。随机分为两组， 普通对照组 (normal chow diet， NCD) 以普通饲料喂 养， 高脂模型组 (high fat diet， HFD) 以高脂饲料 (60kcal Fat) 喂养。 0012 饲养 16 周后， 将高脂模型组随机分为 4 组， 其中 3 组分别按 0.1ml/20g 体重经腹 腔注射给予棕矢车菊素 2mg/kg、 4mg/kg 和吡格列酮 (Pioglitatone)4mg/kg， 模型组和正常 组给予等量 PBS， 连续 14 天。 0013。
7、 其后检测小鼠基础血糖值、 基础胰岛素水平、 HOMA-IR 指数， 葡萄糖耐受 (glucose 说 明 书 CN 102697767 A 3 2/5 页 4 tolerance tast， GTT) 与胰岛素耐受 (insulin tolerance test， ITT)， 血清丙氨酸氨基转 移酶 (ALT) 与天门冬氨酸氨基转移酶 (AST) 活力， 肝脏病理切片及肝脏中甘油三酯 (TG) 的 含量。 0014 模型参考文献 ： 0015 1.IG Obrosova， O Ilnytska， VV Lyzogubov， IA Pavlov， N Mashtalir， JL Nadler，。
8、 VR Drel.High-fat diet-induced neuropathy of pre-diabetes and obesity ： effects ofhealthydiet and aldose reductase inhibition.Diabetes 2007 ； 56 ： 2598-2608. 0016 2.R Kohli， M Kirby， SA Xanthakos， S Softic， AE Feldstein， V Saxena， PH Tang， L Miles， MV Miles， WF Balistreri， SC Woods， RJ Seeley.High-f。
9、ructose， medium chain trans fat diet induces liver fibrosis and elevates plasma coenzyme Q9in a novel murine model of obesity and nonalcoholic steatohepatitis.Hepatology 2010 ； 52 ： 934-944. 0017 2、 棕矢车菊素药理实验结果分析 0018 1) 棕矢车菊素对高脂饮食诱导的小鼠胰岛素抵抗 II 型糖尿病模型的影响 0019 如图 1 所示， 与正常组 (NCD) 相比， 模型组 (HFD) 基础血糖值、。
10、 基础胰岛素水平与 HOMA-IR指数显著上升。 棕矢车菊素2mg/kg、 4mg/kg均能显著抑制基础血糖值、 基础胰岛素 水平与HOMA-IR指数， 作用呈剂量依赖性 ； 吡格列酮4mg/kg也能降低基础血糖值、 基础胰岛 素水平与 HOMA-IR 指数。 0020 如图 2 所示， 与正常组相比， 模型组 GTT、 ITT 显著上升。棕矢车菊素 4mg/kg 能显 著抑制 GTT、 ITT， 2mg/kg 有一定的抑制作用 ； 吡格列酮 4mg/kg 也能在一定程度上降低 GTT、 ITT。 0021 2) 棕矢车菊素对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝的影响 0022 如图 3 所示， 与正。
11、常组相比， 模型组 ALT 和 AST 活力显著上升。棕矢车菊素 4mg/ kg能显著抑制ALT、 AST活力， 2mg/kg也有一定的抑制作用 ； 吡格列酮4mg/kg也能显著降低 ALT、 AST 活力。 0023 如图 4 所示， 与正常组相比， 模型组肝细胞中出现大量脂滴空泡， TG 含量显著上 升， 表现严重的脂肪病变。 而棕矢车菊素能显著减少肝细胞中的脂滴空泡， 同时剂量依赖性 地降低 TG 的含量 ； 吡格列酮 4mg/kg 也能一定程度上减少脂滴空泡与 TG。 0024 本发明所述， 棕矢车菊素可用于胰岛素抵抗、 非酒精性脂肪肝及其他 II 型糖尿病 相关疾病的防治并制备相应的。
12、药物。 0025 注 ： 棕矢车菊素购自上海奥博生物医药技术有限公司， 纯度大于 99。 0026 有益效果 0027 1、 对高脂饮食诱导的胰岛素抵抗 II 型糖尿病模型小鼠， 腹腔注射棕矢车菊素 2mg/kg、 4mg/kg 即能显著抑制高脂饮食引起的基础血糖值、 基础胰岛素水平与 HOMA-IR 指 数上升， 作用呈剂量依赖性。 0028 2、 对高脂饮食诱导的胰岛素抵抗 II 型糖尿病模型小鼠， 腹腔注射棕矢车菊素 4mg/kg 能显著抑制高脂饮食造成的 GTT 与 ITT 的上升， 2mg/kg 棕矢车菊素也有一定的抑制 作用。 0029 3、 对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝模型小鼠。
13、， 棕矢车菊素 4mg/kg 能显著抑制 说 明 书 CN 102697767 A 4 3/5 页 5 高脂饮食引起的 ALT、 AST 活力上升， 2mg/kg 也表现一定的抑制作用。 0030 4、 对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝模型小鼠， 棕矢车菊素能显著减少肝细胞中 的脂滴空泡， 降低肝脏的脂肪病变程度， 同时剂量依赖性地降低肝脏中 TG 的含量。 0031 以上结果提示， 棕矢车菊素能改善不健康饮食引起的胰岛素抵抗， 也能改善非酒 精性脂肪肝， 故其可作为胰岛素抵抗、 非酒精性脂肪肝及其它 II 型糖尿病相关疾病的防治 药物中得到应用。 附图说明 0032 图1棕矢车菊素对高脂饮食诱。
14、导的胰岛素抵抗II型糖尿病小鼠模型基础血糖值、 基础胰岛素水平与 HOMA-IR 指数的影响。其中 BALB/c 雄性小鼠随机分为两组， 普通对照组 (NCD) 以普通饲料喂养， 高脂模型组 (HFD) 以高脂饲料 (60kcal Fat) 喂养。16 周后， 将高 脂模型组随机分为 4 组， 其中 3 组分别按 0.1ml/20g 体重经腹腔注射给予棕矢车菊素 2mg/ kg、 4mg/kg 和吡格列酮 (Pioglitatone)4mg/kg， 模型组和正常组给予等量 PBS， 连续 14 天。 其后检测小鼠基础血糖值、 基础胰岛素水平， 并计算HOMA-IR指数。 结果以XS表示。 # 。
15、： P0.001 vs NCD ； *： P0.05， * ： P0.01， * ： P0.001 vs HFD(Student s-t test) ； 其中 A 为基础胰岛素水平， B 为基础血糖值， C 为 HOMA-IR 指数 0033 图 2 棕矢车菊素对高脂饮食诱导的胰岛素抵抗 II 型糖尿病模型小鼠 GTT、 ITT 的影响， 其中 BALB/c 雄性小鼠随机分为两组， 普通对照组 (NCD) 以普通饲料喂养， 高脂模 型组 (HFD) 以高脂饲料 (60kcal Fat) 喂养。16 周后， 将高脂模型组随机分为 4 组， 其 中 3 组分别按 0.1ml/20g 体重经腹腔注射。
16、给予棕矢车菊素 2mg/kg、 4mg/kg 和吡格列酮 (Pioglitatone)4mg/kg， 模型组和正常组给予等量PBS， 连续14天。 其后检测小鼠GTT、 ITT， 并计算曲线下面积 (AUC)。结果以 表示。#： P 0.05， # ： P 0.01， # ： P 0.001 vs NCD ； * ： P 0.05， *： P 0.01 vs HFD(Student s-t test) ； 0034 其中 A 为 GTT 时程曲线， B 为 GTT 实验的 AUC， C 为 ITT 时程曲线， D 为 ITT 实验的 AUC 0035 图 3 棕矢车菊素对非酒精性脂肪肝模型小鼠。
17、 ALT、 AST 活力的影响， 其中 BALB/c 雄 性小鼠随机分为两组， 普通对照组 (NCD) 以普通饲料喂养， 高脂模型组 (HFD) 以高脂饲料 (60kcal Fat) 喂养。16 周后， 将高脂模型组随机分为 4 组， 其中 3 组分别按 0.1ml/20g 体 重经腹腔注射给予棕矢车菊素 2mg/kg、 4mg/kg 和吡格列酮 (Pioglitatone)4mg/kg， 模型组 和正常组给予等量 PBS， 连续 14 天。其后检测小鼠血清中 ALT、 AST 活力。结果以 表 示。#： P 0.05， #： P 0.01 vs NCD ； * ： P 0.05 vs HFD。
18、(Student s-t test) ； 0036 其中 A 为 ALT 活力结果， B 为 AST 活力结果 0037 图 4 棕矢车菊素对非酒精性脂肪肝模型小鼠肝脏的脂肪病变与 TG 的影响， 其中 BALB/c 雄性小鼠随机分为两组， 普通对照组 (NCD) 以普通饲料喂养， 高脂模型 组 (HFD) 以高脂饲料 (60kcal Fat) 喂养。16 周后， 将高脂模型组随机分为 4 组， 其 中 3 组分别按 0.1ml/20g 体重经腹腔注射给予棕矢车菊素 2mg/kg、 4mg/kg 和吡格列酮 (Pioglitatone)4mg/kg， 模型组和正常组给予等量 PBS， 连续 1。
19、4 天。其后取小鼠肝脏制备 石蜡切片， HE 染色， 观察其脂肪病变， 并检测肝匀浆中 TG 含量。结果以 表示。#： P 0.05， # ： P 0.01 vs NCD ； * ： P 0.05 vs HFD(Student s-t test)。 说 明 书 CN 102697767 A 5 4/5 页 6 0038 其中 A 为肝脏 HE 染色结果， B 为肝匀浆中 TG 含量。 具体实施方式 0039 实施例 1 0040 1、 棕矢车菊素的药理实验 0041 高脂饮食诱导的小鼠胰岛素抵抗 II 型糖尿病模型与非酒精性脂肪肝模型 1， 2 0042 取 BALB/c 雄性小鼠， 6-8 。
20、周龄， 18-22 克， 饲养于 SPF 级动物房， 212， 自由饮水 取食， 12h 昼夜交替。随机分为两组， 普通对照组 (normal chow diet， NCD) 以普通饲料喂 养， 高脂模型组 (high fat diet， HFD) 以高脂饲料 (60kcal Fat) 喂养。 0043 饲养 16 周后， 将高脂模型组随机分为 4 组， 其中 3 组分别按 0.1ml/20g 体重经腹 腔注射给予棕矢车菊素 2mg/kg、 4mg/kg 和吡格列酮 (Pioglitatone)4mg/kg， 模型组和正常 组给予等量 PBS， 连续 14 天。 0044 其后检测小鼠基础血糖。
21、值、 基础胰岛素水平、 HOMA-IR 指数， 葡萄糖耐受 (glucose tolerance tast， GTT) 与胰岛素耐受 (insulin tolerance test， ITT)， 血清丙氨酸氨基转 移酶 (ALT) 与天门冬氨酸氨基转移酶 (AST) 活力， 肝脏病理切片及肝脏中甘油三酯 (TG) 的 含量。 0045 注本模型作为经典模型， 同时可以评价小鼠胰岛素抵抗 II 型糖尿病模型与非酒 精性脂肪肝， 具体详见参考文献。 0046 模型参考文献 ： 0047 1.IG Obrosova， O Ilnytska， VV Lyzogubov， IA Pavlov， N Ma。
22、shtalir， JL Nadler， VR Drel.High-fat diet-induced neuropathy of pre-diabetes and obesity ： effects ofhealthydiet and aldose reductase inhibition.Diabetes 2007 ； 56 ： 2598-2608. 0048 2.R Kohli， M Kirby， SA Xanthakos， S Softic， AE Feldstein， V Saxena， PH Tang， L Miles， MV Miles， WF Balistreri， SC Wood。
23、s， RJ Seeley.High-fructose， medium chain trans fat diet induces liver fibrosis and elevates plasma coenzyme Q9in a novel murine model of obesity and nonalcoholic steatohepatitis.Hepatology 2010 ； 52 ： 934-944. 0049 2、 棕矢车菊素药理实验结果分析 0050 1) 棕矢车菊素对高脂饮食诱导的小鼠胰岛素抵抗 II 型糖尿病模型的影响 0051 如图 1 所示， 与正常组 (NCD) 相。
24、比， 模型组 (HFD) 基础血糖值、 基础胰 岛素水平与 HOMA-IR指数显著上升。 棕矢车菊素2mg/kg、 4mg/kg均能显著抑制基础血糖值、 基础胰岛素 水平与HOMA-IR指数， 作用呈剂量依赖性 ； 吡格列酮4mg/kg也能降低基础血糖值、 基础胰岛 素水平与 HOMA-IR 指数。 0052 如图 2 所示， 与正常组相比， 模型组 GTT、 ITT 显著上升。棕矢车菊素 4mg/kg 能显 著抑制 GTT、 ITT， 2mg/kg 有一定的抑制作用 ； 吡格列酮 4mg/kg 也能在一定程度上降低 GTT、 ITT。 0053 2) 棕矢车菊素对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝。
25、的影响 0054 如图 3 所示， 与正常组相比， 模型组 ALT 和 AST 活力显著上升。棕矢车菊素 4mg/ kg能显著抑制ALT、 AST活力， 2mg/kg也有一定的抑制作用 ； 吡格列酮4mg/kg也能显著降低 说 明 书 CN 102697767 A 6 5/5 页 7 ALT、 AST 活力。 0055 如图 4 所示， 与正常组相比， 模型组肝细胞中出现大量脂滴空泡， TG 含量显著上 升， 表现严重的脂肪病变。 而棕矢车菊素能显著减少肝细胞中的脂滴空泡， 同时剂量依赖性 地降低 TG 的含量 ； 吡格列酮 4mg/kg 也能一定程度上减少脂滴空泡与 TG。 说 明 书 CN 102697767 A 7 1/4 页 8 图 1 说 明 书 附 图 CN 102697767 A 8 2/4 页 9 图 2 说 明 书 附 图 CN 102697767 A 9 3/4 页 10 图 3 说 明 书 附 图 CN 102697767 A 10 4/4 页 11 图 4 说 明 书 附 图 CN 102697767 A 11 。