一种脱落细胞保存液.pdf

一种脱落细胞保存液，其特征在于包括pH缓冲剂、渗透压维持剂、防腐保鲜剂、用于维持细胞形态的固定剂、抗凝剂、黏液软化剂、蛋白酶K及破坏红细胞的成分。与现有技术相比，本发明的优点在于：细胞保存率高，常温下可保存时间长；能充分溶解粘液和部分破坏红细胞；制片效果具有细胞分布非常均匀，细胞形态完好，胞浆与细胞核分界清楚、层次分明，胞浆与细胞核透亮性非常好，核质非常清晰细胞的形态结构和数量。

权利要求书
1、  一种脱落细胞保存液，其特征在于包括pH缓冲剂、渗透压维持剂、防腐保鲜剂、用于维持细胞形态的固定剂、抗凝剂、黏液软化剂、保湿剂及破坏红细胞的成分。

2、  根据权利要求1所述的脱落细胞保存液，其特征在于所述的pH缓冲剂pH值为6.5～7.4。

3、  根据权利要求2所述的脱落细胞保存液，其特征在于
所述的pH缓冲剂为的PBS、Tris HCl或PIPES中的至少一种；
所述的渗透压维持剂为氯化钠溶液；
所述的防腐保鲜剂为苯甲酸钠盐、苯甲酸钾盐中的至少一种；
所述的固定剂为无水乙醇、甲醇、多聚甲醛、丙酮、香豆素中的至少一种；
所述的抗凝剂为乙二胺四乙酸二纳、乙二胺四乙酸二钾、肝素中的至少一种；
所述的黏液软化剂为蛋白酶K；
所述的保湿剂为石炭酸；
所述的破坏红细胞的成分为碳酸氢钠、磷酸三钠中的至少一种。

4、  根据权利要求3所述的脱落细胞保存液，其特征在于包括如下组分和重量百分比：
氯化钠     0.5％～0.9％
碳酸氢钠   0.1％～0.5％
磷酸三钠   0.1％～0.5％
抗凝剂     5％～10％
防腐保鲜剂 1％
蛋白酶K：  0.1～0.5％
多聚甲醛   1％～4％
香豆素     1％～4％
石碳酸     1％～5％，
还添加有如下组分和体积百分比比：
pH缓冲剂   50％～70％
无水乙醇   12％～20％
甲醇       10％～15％
丙酮       1％～4％，
其中，所述的抗凝剂为乙二胺四乙酸二纳、乙二胺四乙酸二钾、肝素中的一种，所述的防腐保鲜剂为苯甲酸钠盐、苯甲酸钾盐中的一种，所述的pH缓冲剂为PBS、Tris HCl或PIPES中的一种。

说明书一种脱落细胞保存液
技术领域
本发明涉及一种脱落细胞保存液。
背景技术
活细胞具有生理功能、生物学活性和固有的细胞形态及结构，在很多方面具有应用价值。但若将其脱离原来的生存环境放置，细胞的生理功能、生物学活性及固有的细胞形态及结构就会发生改变，常规的方法就是对脱落的细胞进行冷冻保存，而冷冻保存需要专门的冷冻设备，比较昂贵，而且，由于冷冻、解冻过程中存在对细胞损伤的危害，从而导致细胞变异或变形，影响后续工作。
由此，市场上出现了专门用于脱落细胞保存的溶液，如美国新柏氏(Tinpreper TCT)生产的保存液(PresetverCytTM)，该保存液是与机器Tinpreper—2000配套使用的试剂，价格昂贵。为降低应用成本，研究人员开发了一种新的保存液配方，参考申请号为200610017591.9的中国发明申请公开《脱落细胞保存液》(公开号：CN1834233A)，该申请的保存液由以下成分组成，按体积份计：甲醇或乙醇40份～60份、磷酸盐缓冲液或三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲液20份～40份、甲醛或丙酮5份～10份、乙二胺四乙酸二钾或乙二胺四乙酸二钠5份～10份。
该技术领域的专利文献又可以参考申请号为200680042980.5的中国发明申请公开《细胞保存用水溶液》(公开号：CN101310009A)，该水溶液包括增稠剂、防冷冻剂、糖，但不含天然动物源组分，如血清和基础培养基等。还可以参考申请号为200710050463.9的中国发明申请公开《脱落细胞保存固定液及细胞薄层涂片的制作方法》(公开号：CN101182506A)，脱落细胞保存液包括下述配比以体积份计的组分：甲醇10-15份；乙醇10-15份；丙三醇1-2份；聚乙二醇1-2份；甲醛10-12份；冰醋酸0.5-1份；质量浓度为0.85-0.9％的氯化钠10-20份；磷酸缓冲液33-68.5份。该保存液具有细胞固有效果好、细胞粘片率高的特点。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对上述的技术现状而提供一种细胞保存率高、保存时间长的脱落细胞保存液。
本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种脱落细胞保存液，其特征在于包括pH缓冲剂、渗透压维持剂、防腐保鲜剂、用于维持细胞形态的固定剂、抗凝剂、黏液软化剂、保湿剂及破坏红细胞的成分。
作为优选，所述的pH缓冲剂pH值为6.5～7.4。
作为优选，所述的pH缓冲剂为的PBS、Tris HCl或PIPES中的至少一种；
所述的渗透压维持剂为氯化钠溶液；
所述的防腐保鲜剂为苯甲酸钠盐、苯甲酸钾盐中的至少一种；
所述的固定剂为无水乙醇、甲醇、多聚甲醛、丙酮、香豆素中的至少一种；
所述的抗凝剂为乙二胺四乙酸二纳、乙二胺四乙酸二钾、肝素中的至少一种；
所述的黏液软化剂为蛋白酶K；
所述的保湿剂为石炭酸；
所述的破坏红细胞的成分为碳酸氢钠、磷酸三钠中的至少一种。
作为优选，包括如下组分和重量百分比：
氯化钠        0.5％～0.9％
碳酸氢钠      0.1％～0.5％
磷酸三钠      0.1％～0.5％
抗凝剂        5％～10％
防腐保鲜剂    1％
蛋白酶K：     0.1～0.5％
多聚甲醛      1％～4％
香豆素        1％～4％
石碳酸        1％～5％，
还添加有如下组分和体积百分比比：
pH缓冲剂      50％～70％
无水乙醇      12％～20％
甲醇          10％～15％
丙酮          1％～4％，
其中，所述的抗凝剂为乙二胺四乙酸二纳、乙二胺四乙酸二钾、肝素中的一种，所述的防腐保鲜剂为苯甲酸钠盐、苯甲酸钾盐中的一种，所述的pH缓冲剂为PBS、Tris HCl或PIPES中的一种。
与现有技术相比，本发明的优点在于：保存液中各个组分合理配比，相互协同，使得细胞保存率高，常温下可保存长，最长能达到2年；能充分溶解粘液和部分破坏红细胞；制片效果具有细胞分布非常均匀，细胞形态完好，胞浆与细胞核分界清楚、层次分明，胞浆与细胞核透亮性非常好，核质非常清晰细胞的形态结构和数量，可同时用于HPV-DNA、衣原体及免疫组化测试；可提供用于其他部位细胞学检查的专用液基；同一标本可重复制片多次，并具有同一性；细胞保存液无毒无害无污染，确保操作人员健康安全；充分保留了有诊断意义的细胞成分；配置成本较低，易于推广。
具体实施方式
以下结合附图实施例对本发明作进一步详细描述。
实施例1：本实施例中的脱落细胞保存液包括如下：
重量百分比的组分：0.7％氯化钠，0.25％磷酸三钠，7.5％乙二胺四乙酸二纳、乙二胺四乙酸二钾、肝素中之一，1％苯甲酸纳盐(或钾盐)，3％多聚甲醛、3％香豆素、0.1％蛋白酶K，0.3％碳酸氢钠，2.5％石碳酸，。
体积百分比的组分：60％pH缓冲剂(pH7)，16％无水乙醇，12.5％甲醇，3％丙酮，其中，pH缓冲剂为PBS、Tris HCl、PIPES中的一种。
实施例2：本实施例中的脱落细胞保存液包括如下：
重量百分比的组分：0.9％氯化钠，0.1％磷酸三钠，10％乙二胺四乙酸二纳、乙二胺四乙酸二钾、肝素中之一，1％苯甲酸纳盐(或钾盐)，4％多聚甲醛，4％香豆素，0.5％蛋白酶K，0.5％碳酸氢钠，1％石碳酸。
体积百分比的组分：50％pH缓冲剂(pH6.5)，20％无水乙醇，15％甲醇，4％丙酮，其中，pH缓冲剂为PBS、Tris HCl、PIPES中的一种。
实施例3：本实施例中的脱落细胞保存液包括如下：
重量百分比的组分：0.5％氯化钠，0.5％磷酸三钠，5％乙二胺四乙酸二纳、乙二胺四乙酸二钾、肝素中之一，1％苯甲酸纳盐(或钾盐)，1％多聚甲醛，4％香豆素，0.3％蛋白酶K，0.1％碳酸氢钠，5％石碳酸。
体积百分比的组分：70％pH缓冲剂(pH7.4)，12％无水乙醇，10％甲醇，2％丙酮，其中，pH缓冲剂为PBS、Tris HCl、PIPES中的一种。
试验结果表明，实施例1、实施例2及实施例3的脱落细胞保存液细胞保存率高、保存时间长，常温下能保存2年。