说明书治疗或预防黄病毒科感染的组合物和方法
相关申请的交叉参考
本申请请求2005年2月9日提交的美国临时专利申请号US60/651,910；2005年3月21日提交的美国临时专利申请号US60/664,297和2005年11月12日提交的美国临时专利申请号US60/735,464的利益，将所有这些文献完整性地引入本文作为参考。
技术领域
本说明书一般涉及治疗感染性疾病的方法，且更具体地说，本发明涉及粟精胺或其衍生物与额外的抗病毒化合物和/或治疗分子的联合用药在治疗或预防因黄病毒科(Flaviviridae)导致或与之相关的感染，特别是因丙型肝炎病毒(HCV)导致或与之相关的感染中的应用。
背景技术
黄病毒科包含黄病毒属(Flavivirus)、瘟病毒属(Pestivirus)和丙型肝炎病毒属(Hepacivirus)。黄病毒科的一个主要成员为丙型肝炎病毒(HCV)。HCV在1989年得到首次鉴定并且为急性肝炎的主要原因，它是导致输血后非甲非乙型肝炎的大部分病例的原因。认为HCV是慢性肝疾病，包括肝硬化和肝癌的主要原因(Hoofnagle，Hepatology 26：15S，1997)。世界卫生组织(World HealthOrganization)估计全世界有接近1亿7千万人(即占世界人口的3％)长期感染HCV(Global surveillance and control of hepatitis C.Report of a WHO Consultation organized in collaboration withthe Viral Hepatitis Prevention Board，Antwerp，Belgium.J ViralHepat.6：35，1999)。仅在美国，就有270万人长期感染HCV，其中具估计每年死亡8,000-10,000人(Alter等，N.Engl J，Med.341：556，1999)。每年约有3-4百万人新近感染，并且这些受感染的人中有80-85％发生慢性感染，其中这些患者中有约20-30％发展成肝硬化和晚期肝病，通常并发肝细胞癌(HCC)(例如，参见Kolykhalov等，J.Virol.74：2046，2000)。
到目前为止，干扰素-α(IFN-α)单一疗法为唯一的经证实对治疗HCV感染有益的疗法。就基因型1HCV感染而言，仅约50％的患者表现出对使用IFN-α治疗的初步反应(即存在半数无反应者)，并且这种反应在大部分患者中不可持续。此外，患者因IFN-α治疗而存在明显的副作用，包括流感-样症状、不适、皮肤干燥、抑郁症、白细胞减少、血小板减少和甲状腺机能障碍。目前治疗HCV感染的标准为给予聚乙二醇化的IFN-α(与聚乙二醇PEG轭合的IFN-α)与广谱核苷类似物利巴韦林。令人遗憾的是，如果人感染了基因型1HCV(在美国和欧洲最常见的基因型)，具有高HCV病毒载量(大于2百万个拷贝)，已经长期感染了HCV，具有中度到重度疾病，为男性并且为老龄，那么使用IFN-α或IFN-α与利巴韦林治疗并非特别有效。
测试了与干扰素-α联合疗法的其它药物，诸如组胺二盐酸盐和胸腺肽-α-1的合成形式，即刺激T-细胞和天然杀伤细胞的激素。已经在与干扰素和利巴韦林的联合用药中研究了用于治疗流感A的抗病毒药金刚烷胺。令人遗憾的是，金刚烷胺表现出某些明显的副作用并且迄今为止进行的联合用药研究令人失望(例如，参见Khalili等，Am.J.Gastroenterol.98：1284-9，2000；Brillanti等，Itdl.J.Gastroenterol.Hepatol.31：130，1999)。在目前的研究中还有能够阻断HCV病毒复制的HCV解旋酶抑制剂、HCV蛋白酶抑制剂(包括丝氨酸蛋白酶抑制剂)和RNA-依赖性RNA HCV基因组聚合酶抑制剂。总之，HCV且尤其是基因型1因缺乏良好的常规治疗选择而成为一种难以控制的疾病。
因此，对鉴定和研发与目前治疗方案(诸如那些用于治疗HCV的方案)相比具有改善的抗病毒活性和降低的毒性的抗黄病毒科疗法存在需求。本发明满足了这类需求并且进一步提供了其它相关优点。
概述
本发明一般提供了包含葡糖苷酶抑制剂和其它抗黄病毒科化合物的联合用药的组合物，所述的其它抗黄病毒科化合物诸如改变免疫功能的活性剂或改变黄病毒科功能的活性剂。典型的葡糖苷酶抑制剂包括粟精胺或其衍生物，诸如西戈斯韦；改变免疫功能的活性剂包括干扰素；和改变黄病毒科复制的活性剂包括核苷抑制剂，诸如利巴韦林或2′-C-甲基胞苷(NM-107)。这类化合物的联合用药或其组合物用于治疗或预防，例如黄病毒科病毒感染，诸如那些因丙型肝炎病毒(HCV)导致的感染。特别地，本说明书提供了粟精胺或其衍生物(诸如西戈斯韦)与两种其它抗黄病毒科化合物的联合用药，从而提供了令人意外的对HCV的高或协同抑制活性和令人意外的已知抗黄病毒化合物(诸如干扰素和利巴韦林)的细胞毒性下降。
本说明书在一个方面中提供了包含葡糖苷酶抑制剂、改变免疫功能的活性剂和改变黄病毒科复制的活性剂的组合物。在某些实施方案中，所述的葡糖苷酶抑制剂具有如下结构式(I)：
其中R、R1和R2独立为：氢、C1-14烷酰基、C2-14烯酰基、环己烷羰基、C1-8烷氧基乙酰基、
、任选被甲基或卤素取代的萘羰基；苯基(C2-6烷酰基)，其中苯基任选被甲基或卤素取代；肉桂酰基；任选被甲基或卤素取代的吡啶羰基；任选被C1-10烷基取代的二氢吡啶羰基；任选被甲基或卤素取代的噻吩羰基；或任选被甲基或卤素取代的呋喃羰基；Y为氢、C1-4烷基、C1-4烷氧基、卤素、三氟甲基、C1-4烷基磺酰基、C1-4烷基巯基、氰基或二甲氨基；Y’为氢、C1-4烷基、C1-4烷氧基、卤素或其与Y合并成3，4-亚甲二氧基；Y″为氢、C1-4烷基、C1-4烷氧基或卤素；及其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，所述的葡糖苷酶抑制剂具有上述结构式，其中以这类方式选择R、R1和R2，使得它们中的至少一个但不超过两个为氢；或其药学上可接受的盐或衍生物。在相关实施方案中，所述的葡糖苷酶抑制剂可以为：(a)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-吲嗪四醇6-苯甲酸酯；(b)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-吲嗪四醇7-苯甲酸酯；(c)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-吲嗪四醇6-(4-甲基苯甲酸酯)；(d)[1S-(1α，6β，7α，8β，8a β)]-八氢-1，6，7，8-吲嗪四醇7-(4溴苯甲酸酯)；(e)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-吲嗪四醇6，8-二丁酸酯；(f)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-吲嗪四醇6-丁酸酯；(g)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-吲嗪四醇6-(2-呋喃甲酸酯(呋喃carbonxylate))；(h)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-吲嗪四醇7-(2，4-二氯苯甲酸酯)；(i)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-吲嗪四醇6-(3-己烯酸酯)；(j)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-吲嗪四醇6-辛酸酯；(k)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-吲嗪四醇6-戊酸酯；(l)O-新戊酰酯；(m)2-乙基-丁酰酯；(n)3，3-二甲基丁酰酯；(o)环丙酰酯；(p)4-甲氧基苯甲酸酯；(q)2-氨基苯甲酸酯；(r)粟精胺；或(s)(a)-(r)中至少两种的混合物。在其它实施方案中，改变免疫功能的活性剂可以为干扰素，诸如干扰素-α或聚乙二醇化干扰素-α。在其它实施方案中，改变病毒复制的活性剂可以为核苷类似物，诸如利巴韦林。
附图简述
附图1A和1B分别例示了粟精胺和IFN-α双重组合协同作用体积的3-D和2-D视图。
附图2为粟精胺和IFN-α的双重组合的等效线图解。
附图3A和3B分别例示了西戈斯韦和IFN-α双重组合协同作用体积的3-D和2-D视图。
附图4为西戈斯韦和IFN-α的双重组合的等效线图解。
附图5A和5B分别例示了粟精胺和利巴韦林双重组合协同作用体积的3-D和2-D视图。
附图6为粟精胺和利巴韦林的双重组合的等效线图解。
附图7A和7B分别例示了西戈斯韦和利巴韦林双重组合协同作用体积的3-D和2-D视图。
附图8为西戈斯韦和利巴韦林的双重组合的等效线图解。
附图9A和9B分别例示了粟精胺和NM 107双重组合协同作用体积的3-D和2-D视图。
附图10为粟精胺和NM107的双重组合的等效线图解。
附图11A和11B分别例示了西戈斯韦和NM 107双重组合协同作用体积的3-D和2-D视图。
附图12为西戈斯韦和NM107的双重组合的等效线图解。
附图13A和13B分别例示了IFN-α和利巴韦林双重组合协同作用体积的3-D和2-D视图。
附图14为IFN-α和利巴韦林的双重组合的等效线图解。
附图15A和15B分别例示了粟精胺和Peg-IFN-α2b双重组合的Fa-CI示意图和等效线图解。
附图16A和16B分别例示了西戈斯韦和Peg-IFN-α2b双重组合的Fa-CI示意图和等效线图解。
附图17A和17B分别例示了西戈斯韦和IFN-αcon-1双重组合的Fa-CI示意图和等效线图解。
附图18A和18B分别例示了西戈斯韦和IFN-α-n3双重组合的Fa-CI示意图和等效线图解。
附图19A-19F分别例示了西戈斯韦和IFN-α与不同浓度的利巴韦林组合协同作用体积的3-D和2-D视图。
附图20A-20F分别例示了粟精胺和IFN-α与不同浓度的利巴韦林组合协同作用体积的3-D和2-D视图。
附图21例示了西戈斯韦、IFN-λ1和NM107三重组合的Fa-CI示意图。
附图22A和22B分别例示了西戈斯韦和利巴韦林双重组合和西戈斯韦、利巴韦林和IFN-α2b三重组合的Fa-CI示意图。
附图23A和23B分别例示了西戈斯韦和IFN-α组合拮抗作用体积的3-D和2-D视图。
附图24A和24B分别例示了西戈斯韦和利巴韦林组合拮抗作用体积的3-D和2-D视图。
附图25A和25B分别例示了粟精胺和IFN-α组合拮抗作用体积的3-D和2-D视图。
附图26A和26B分别例示了粟精胺和利巴韦林组合拮抗作用体积的3-D和2-D视图。
附图27例示了线性示意图中的协同作用数据。
附图28A-28C图示了止泻药对口服给予的西戈斯韦的药代动力学(PK)的作用。这些示意图表示粟精胺的血浆浓度与不同组大鼠时间点如所示的关系。
详细描述
本说明书提供了使用粟精胺或其衍生物(诸如西戈斯韦)与其它抗病毒化合物的联合用药治疗或预防感染性疾病的组合物和方法。特别地，这些组合物用于治疗或预防病毒感染，诸如丙型肝炎病毒(HCV)感染。因此，本发明一般涉及令人意外的发现，即与其它治疗化合物，诸如干扰素-α(IFN-α、干扰素-α、α-干扰素或α-干扰素)或利巴韦林联合给予粟精胺或其衍生物(例如酯衍生物)具有令人意外的对黄病毒科，诸如HCV的高活性。此外，粟精胺与IFN-α或粟精胺与利巴韦林的双重组合分别导致IFN-α和利巴韦林的细胞毒性令人意外的降低。此外，这些联合疗法可以与其它减轻或缓解相关副作用的治疗辅助剂，诸如止泻药联用。因此，例如，本说明书的组合物用于治疗HCV感染和HCV-相关疾病。此外，本文提供的化合物和组合物用作体外和基于细胞的试验的研究工具以便研究例如HCV感染的生物学机理{例如复制和传播}。
作为背景技术，按照糖与蛋白质氨基酸之间的键将糖蛋白分成两个主要类型。最常见的是蛋白质的天冬酰胺与寡糖的N-乙酰基-D-葡糖胺残基之间的N-糖苷键。N-连接的寡糖在与多肽主链结合后被内质网(ER)中的一系列特异性酶加工并且这种加工途径已经得到充分表征。
在ER中，α-葡糖苷酶I导致末端α-1，2葡萄糖残基从前体寡糖中除去，并且和α-葡糖苷酶II在甘露糖苷酶或涉及各种转移酶的额外加工反应除去甘露糖残基前除去了两个剩余的α-1，3连接的葡萄糖残基。这些寡糖″修整″反应能够使糖蛋白正确折叠并且与伴侣蛋白，诸如钙联接蛋白和钙网织蛋白发生相互作用以便通过高尔基体转运。
这种生物合成途径中的关键酶抑制剂，特别是那些阻断α-葡糖苷酶和α-甘露糖苷酶的抑制剂防止几种有包膜病毒复制。这类抑制剂可以通过干扰病毒包膜糖蛋白折叠起作用，由此防止起始病毒-宿主细胞相互作用或随后的融合。这些抑制剂还可以通过防止完成病毒膜所需适当糖蛋白构建预防病毒复制。
例如，非特异性糖基化抑制剂2-脱氧-D-葡萄糖和β-羟基-正缬氨酸抑制HIV糖蛋白表达并且阻断合胞体形成(Blough等，Biochem.Biophys.Res.Commun.141：33，1986)。使用这些活性剂治疗HIV-感染细胞的病毒繁殖停止了，据推定是因病毒膜形成所需糖蛋白无法利用所致。糖基化抑制剂2-脱氧-2-氟-D-甘露糖通过防止病毒膜蛋白糖基化表现出对流感感染细胞的抗病毒活性(McDowell等，Biochemistry，24：8145，1985)。Lu等提出了N-连接的糖蛋白对乙型肝炎病毒分泌而言必不可少的证据(Virology 213：660，1995)，并且Block等证实人乙型肝炎病毒分泌受亚氨基糖N-丁基脱氧野艽霉素的抑制(Proc.Natl.Acad Sci.USA 91：2235，1994；另外，例如，还参见WO9929321)。
在本说明书中，除非另作陈述，否则应理解任何浓度范围、百分比范围、整数范围或比例范围包括所述范围内的任意整数值，并且如果合适，包括其分数(诸如整数的十分之一和百分之一)，本文所用的″约″或″主要包含″意指±15％。可选择的应用(例如″或″)应理解为意指可以在供选者的一种、两者或其任意组合中选择。此外，应理解本申请中披露了来源于本文所述的结构和取代基的不同组合的各个化合物或化合物组，其披露程度与将各化合物或化合物组合分别列出相同。因此，特定结构或特定取代基的选择属于本发明范围内。
本文所用的术语″烷基″意指通过从母体烷、烯或炔的单一碳原子中除去1个氢原子衍生的饱和或不饱和支链、直链或环状一价烃基。烷基包括：甲基；乙基类，诸如乙烷基、乙烯基、乙炔基；丙基类，诸如丙-1-基、丙-2-基、环丙-1-基、丙-1-烯-1-基、丙-1-烯-2-基、丙-2-烯-1-基(烯丙基)、环丙-1-烯-1-基；环丙-2-烯-1-基、丙-1-炔-1-基、丙-2-炔-1-基等；丁基类，诸如丁-1-基、丁-2-基、2-甲基-丙-1-基、2-甲基-丙-2-基、环丁-1-基、丁-1-烯-1-基、丁-1-烯-2-基、2-甲基-丙-1-烯-1-基、丁-2-烯-1-基、丁-2-烯-2-基、丁-1，3-二烯-1-基、丁-1，3-二烯-2-基、环丁-1-烯-1-基、环丁-1-烯-3-基、环丁-1，3-二烯-1-基、丁-1-炔-1-基、丁-1-炔-3-基、丁-3-炔-1-基等；等。
术语″烷基″特别用以包括带有1-25个碳原子或5-20个或10-18个或1-5个碳原子的直链或支链烃。烷基可以具有任意的饱和度或水平，即仅带有单一碳-碳键的基团；带有一个或多个碳-碳双键的基团；带有一个或多个碳-碳三键的基团；和带有碳-碳单、双和三键混合物的基团。当指具体饱和水平时，使用表达方式″烷基″、″链烯基″和″炔基″。表达方式″低级烷基″意指包含1-8个碳原子的烷基。烷基可以被取代或未被取代。
″烷基″意指饱和支链、直链或环状烷基。烷基包括甲基；乙基；丙基类，诸如丙-1-基、丙-2-基(异丙基)、环丙-1-基等；丁基类，诸如丁-1-基、丁-2-基(仲丁基)、2-甲基-丙-1-基(异丁基)、2-甲基-丙-2-基(叔丁基)、环丁-1-基等；等。
″链烯基″意指通过从母体烯的单一碳原子上除去一个氢原子衍生的带有至少一个碳-碳双键的不饱和支链、直链、环状烷基或其组合。该基团就双键而言可以为顺式或反式构象。链烯基包括乙烯基；丙烯基类，诸如丙-1-烯-1-基、丙-1-烯-2-基、丙-2-烯-1-基(烯丙基)、丙-2-烯-2-基、环丙-1-烯-1-基；环丙-2-烯-1-基；丁烯基类，诸如丁-1-烯-1-基、丁-1-烯-2-基、2-甲基-丙-1-烯-1-基、丁-2-烯-1-基、丁-2-烯-1-基、丁-2-烯-2-基、丁-1，3-二烯-1-基、丁-1，3-二烯-2-基、环丁-1-烯-1-基、环丁-1-烯-3-基、环丁-1，3-二烯-1-基等；等。链烯基可以被取代或未被取代。
″炔基″意指通过从母体炔的单一碳原子上除去一个氢原子衍生的带有至少一个碳-碳三键的不饱和支链、直链、环状烷基或其组合。炔基可以包括乙炔基；丙炔基类，诸如丙-1-炔-1-基、丙-2-炔-1-基等；丁炔基类，诸如丁-1-炔-1-基、丁-1-炔-3-基、丁-3-炔-1-基等；等。
″烷二基″意指通过从母体烷、烯或炔的两个不同碳原子上各自除去一个氢原子或通过从母体烷烯或炔的单一碳原子上除去两个氢原子衍生的饱和或不饱和支链、直链或环状二价烃基。两个一价基团中心或二价基团中心的每个化合价可以与相同或不同原子形成键。典型烷基二基包括甲二基；乙二基类，诸如乙-1，1-二基、乙-1，2-二基、乙烯-1，1-二基、乙烯-1，2-二基；丙二基类，诸如丙-1，1一二基、丙-1，2-二基、丙-2，2-二基、丙-1，3-二基、环丙-1，1-二基、环丙-1，2-二基、丙-1-烯-1，1-二基、丙-1-烯-1，2-二基、丙-2-烯-1，2-二基、丙-1-烯-1，3-二基，环丙-1-烯-1，2-二基，环丙-2-烯-1，2-二基，环丙-2-烯-1，1-二基、丙-1-炔-1，3-二基等；丁二基类，诸如丁-1，1-二基、丁-1，2-二基、丁-1，3-二基、丁-1，4-二基、丁-2，2-二基、2-甲基-丙-1，1-二基、2-甲基-丙-1，2-二基、环丁-1，1-二基；环丁-1，2-二基、环丁-1，3-二基、丁-1-烯-1，1-二基、丁-1-烯-1，2-二基、丁-1-烯-1，3-二基、丁-1-烯-1，4-二基、2-甲基-丙-1-烯-1，1-二基、2-亚甲基-丙-1，1-二基、丁-1，3-二烯-1，1-二基、丁-1，3-二烯-1，2-二基、丁-1，3-二烯-1，3-二基、丁-1，3-二烯-1，4-二基、环丁-1-烯-1，2-二基、环丁-1-烯-1，3-二基、环丁-2-烯-1，2-二基、环丁-1，3-二烯-1，2-二基、环丁-1，3-二烯-1，3-二基、丁-1-炔-1，3-二基、丁-1-炔-1，4-二基、丁-1，3-二炔-1，4-二基等；等。当指定具体的饱和水平时，使用命名法烷二基、链烯二基或炔二基。在某些实施方案中，烷基二基为(C1-C4)烷基二基。其它实施方案可以包括饱和非环状烷二基，其中基团中心位于末端碳上，例如甲二基(桥亚甲基)；乙-1，2-二基(桥亚乙基)；丙-1，3-二基(桥亚丙基)；丁-1，4-二基(桥亚丁基)等(也称作下文定义的亚烯基)。
″亚烷基(Alkyleno)″意指通过从直链母体烷、烯或炔的两个末端碳原子上各自除去一个氢原子衍生的带有两个末端一价基团中心的直链烷二基。亚烷基包括桥亚甲基；亚乙基类，诸如桥亚乙基、亚乙烯基、亚乙炔基；亚丙基类，诸如桥亚丙基、亚丙[1]烯基、亚丙[1，2]二烯基、亚丙[1]炔基等；亚丁烯基类，诸如桥亚丁基、亚丁[1]烯基、亚丁[2]烯基，亚丁[1，3]二烯基、亚丁[1]炔基、亚丁[2]炔基、亚丁[1，3]二炔基等；等。当指定具体的饱和水平时，使用命名法亚烷基、亚烯基或亚炔基。在某些实施方案中，亚烷基为(C1-C6)或(C1-C4)亚烷基。其它实施方案可以包括直链饱和桥亚烷基，例如桥亚甲基、桥亚乙基、桥亚丙基、桥亚丁基等。
″杂烷基、杂烷基杂烯基、杂炔基、杂烷二基和杂亚烷基″分别意指烷基、烷基、链烯基、炔基、烷基二基和亚烷基，其中碳原子中的一个或多个(和任意连接的氢原子)各自独立地被相同或不同的杂原子或杂芳族基团取代。可以在这些基团中包括的杂原子或杂芳族基团包括-O-、-S-、-Se-、-O-O-、-S-S-、-O-S-、-O-S-O-、-O-NR′-、-NR′-、-NR′-NR′-、＝N-N＝、-N＝N-、-N＝N-NR′-、-PH-、-P(O)2-、-O-P(O)2-、-SH2-、-S(O)2-、-SnH2-等及其组合，包括-NR′-S(O)2-，其中R′各自独立地选自如本文定义的氢、烷基、烷基、链烯基、炔基、芳基、芳基烷基、杂芳基和杂芳基烷基。
″芳基″意指通过从母体芳族环系的单一碳原子上除去一个氢原子衍生的一价芳族烃基。芳基包括来源于aceanthrylene、苊烯、acephenanthrylene、蒽、薁、苯、屈、六苯并苯、荧蒽、芴、并六苯、己芬、hexalene、as-indacene、s-indacene、茚满、茚、萘、octacene、并八苯(octaphene)、氯甲桥萘、卵苯、戊-2，4-二烯、并五苯、并环戊二烯、二苯并菲、二萘嵌苯、phenalene、菲、苉、七曜烯、芘、皮蒽、玉红省、苯并菲、联三萘等。在某些实施方案中，芳基可以为(C5-C14)芳基或更具体地说可以为(C5-C10)。某些实施方案可以包括为环戊二烯基、苯基和萘基的芳基。芳基可以被取代或未被取代。
″芳基烷基″意指与碳原子，一般为末端或sp3碳原子结合的氢原子之一被芳基取代的无环烷基。芳基烷基包括苄基、2-苯基乙-1-基、2-苯基乙烯-1-基、萘甲基、2-萘基乙-1-基、2-萘基乙烯-1-基、萘并苄基、2-萘并苯基乙-1-基等。当指定具体的烷基部分时，使用命名法芳基烷基、芳基链烯基或芳基炔基。在某些实施方案中，芳基烷基可以为(C6-C20)芳基烷基，例如芳基烷基的烷基、链烯基或炔基部分为(C1-C6)且芳基部分为(C5-C14)。在其它实施方案中，芳基烷基可以为(C6-C13)，例如芳基烷基的烷基、链烯基或炔基部分为(C1-C3)且芳基部分为(C5-C10)。
″杂芳基″意指通过从母体杂芳族环系的单一原子上除去一个氢原子衍生的一价杂芳族基团，所述的环系可以为单环或稠合环(即共有相邻原子对的环)。杂芳基包括来源于吖啶、砷杂萘、咔唑、β-咔啉、色满、色烯、噌啉、呋喃、咪唑、吲唑、吲哚、二氢吲哚、吲嗪、异苯并呋喃、异色烯、异吲哚、异二氢吲哚、异喹啉、异噻唑、异噁唑、萘啶、噁二唑、噁唑、萘嵌间二氮杂苯、菲啶、菲咯啉、吩嗪、酞嗪、蝶啶、嘌呤、呲喃、呲嗪、呲唑、哒嗪、呲啶、嘧啶、呲咯、pyrrolizine、喹唑啉、喹啉、喹嗪、喹喔啉、四唑、噻二唑、噻唑、噻吩、三唑、呫吨等的基团。在某些实施方案中，杂芳基为5-14元杂芳基或5-10元杂芳基。其它实施方案可以包括来源于噻吩、吡咯、苯并噻吩、苯并呋喃、吲哚、吡啶、喹啉、咪唑、噁唑和吡唑的杂芳基。杂芳基可以被取代或未被取代。
″杂脂环族基团″意指在环上带有一个或多个选自例如氮、氧和硫的原子的单环或稠合环基团。这些环还可以带有一个或多个双键。然而，这些环不一定带有完全共轭的π-电子系统。杂脂环族环可以被取代或未被取代。当被取代时，取代的基团可以独立地选自烷基、芳基、卤代烷基、卤代、羟基、烷氧基、巯基、氰基、磺酰氨基、氨基磺酰基、酰基、酰氧基、硝基和取代的氨基。
″杂芳基烷基″意指与碳原子，诸如末端或sp3碳原子结合的氢原子之一被杂芳基取代的无环烷基。当指定一个或多个基团的烷基部分时，使用命名法杂芳基烷基、杂芳基烯基(heteroarylakenyl)或杂芳基炔基(heterorylalkynyl)。在某些实施方案中，杂芳基烷基为6-20元杂芳基烷基，例如杂芳基烷基的烷基、链烯基或炔基部分为1-6个成员并且杂芳基部分可以为5-14-元杂芳基。在其它实施方案中，杂芳基烷基可以为6-13元杂芳烷基，例如烷基、链烯基或炔基部分为1-3个成员并且杂芳基部分可以为5-10元杂芳基。
本文涉及的各种萘羰基、吡啶羰基、噻吩羰基和呋喃羰基包括各种位置异构体并且它们可以为萘-1-羰基、萘-2-羰基、烟酰基、异烟酰基、N-甲基-二氢-吡啶-3-羰基、噻吩-2-羰基、噻吩-3-羰基、呋喃-2-羰基和呋喃-3-羰基。萘、吡啶、噻吩和呋喃基团可以任选如本文所示的进一步被取代。
″卤素(halogen)″或″卤素(halo)″意指氟(F)、氯(Cl)、溴(Br)、碘(I)。本文所用的-X独立地指任意的卤素。
″酰基″意指C(O)-R″基团，其中R″可以选自氢、羟基、烷基、卤代烷基、环烷基、任选被一个或多个烷基、卤代烷基、烷氧基、卤素和取代的氨基取代的芳基、任选被一个或多个烷基、卤代烷基、烷氧基、卤素和取代的氨基取代的杂芳基(通过环碳结合)和任选被一个或多个烷基、卤代烷基、烷氧基、卤素和取代的氨基取代的杂脂环族基团(通过环碳结合)。酰基包括醛类、酮类、酸类、酰基卤、酯类和酰胺类。某些典型的酰基可以为羧基，例如酸和酯类。酯类包括氨基酸酯衍生物。酰基可以与酰基任一端上的化合物主链结合，即通过C或R″。当酰基通过R″连接时，C可以带有另一个取代基，诸如氢、烷基等。
″取代的″意指一个或多个氢原子各自独立地被相同或不同的取代基取代的基团。取代基可以包括-X、-R13、-O-、＝O、-OR、-SR13、-S-、＝S、-NR13R13、＝NR13、CX3、-CF3、-CN、-OCN、-SCN、-NO、NO2、＝N2、-N3、-S(O)2O-、-S(O)2OH、-S(O)2R13、-OS(O2)O-、-OS(O)2OH、-OS(O)2R13、-P(O)(O-)2、-P(O)(OH)(O-)、-OP(O)2(O-)、-C(O)R13、-C(S)R13、-C(O)OR13、-C(O)O-、-C(S)OR13和-C(NR13)NR13R13，其中X各自独立为卤素；R13可以各自独立为氢、卤素、烷基、芳基、芳基烷基、芳基芳基、芳基杂烷基、杂芳基、杂芳基烷基NR14R14、-C(O)R14和-S(O)2R14；并且R14可以独立为氢、烷基、烷基、炔基、芳基、芳基烷基、芳基杂烷基、芳基芳基、杂芳基或杂芳基烷基。
本文中的″前体药物″意指在体内被转化成母体化合物或其代谢物的化合物。在某些情况中，前体药物通常因其易于比母体化合物给药而有用。例如，前体药物可以通过口服给药比母体化合物更易于为生物所利用或细胞摄取。前体药物还可以在药物组合物中具有超过母体化合物的改善的溶解度或延长的体内半衰期。前体药物的实例可以为如本文所述的化合物，例如其作为酯(″前体药物″)给药以便有利于通过细胞膜传送(此时水溶性对通过诸如膜运动不利)。在某些实施方案中，前体药物化合物可以为无活性的(或活性较低)，直到它们被转化成母体化合物、其代谢物或其进一步活化的代谢物为止。
″药学上可接受的盐″意指药学上可接受的并且具有所需的药理学{例如抗病毒}活性的本发明化合物的盐。这类盐包括下列盐：(1)与诸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等这类无机酸形成的酸加成盐；或与有机酸形成的酸加成盐，所述的有机酸诸如乙酸、丙酸、己酸、环戊烷丙酸、乙醇酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、3-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、1，2-乙-二磺酸、2-羟基乙磺酸、苯磺酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟脑磺酸、4-甲基双环[2.2.2]-辛-2-烯-1-羧酸、葡庚糖酸、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、十二烷基硫酸、葡糖酸、谷氨酸、羟基萘酸、水杨酸、硬脂酸、粘康酸等；或(2)在存在于母体化合物上的酸性质子被金属离子，例如碱金属离子、碱土金属离子或铝离子取代时形成的盐；或与有机碱，诸如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、N-甲基葡糖胺形成的配位化合物等。
粟精胺及其衍生物
如上所述，本发明提供了葡糖苷酶抑制剂，诸如粟精胺或其衍生物及其药学上可接受的盐和用于联合疗法的这类化合物的组合物。例如本文披露的组合物包含葡糖苷酶抑制剂(例如粟精胺或其衍生物)与病毒复制抑制剂(例如利巴韦林或2′-C-甲基胞苷或valopicitabine)和改变免疫功能或应答的化合物(例如干扰素或聚乙二醇化干扰素)的联合用药，这些联合用药具有令人意外的高抗病毒活性且特别是高抗-HCV活性以及降低的病毒复制抑制剂和改变免疫功能的活性剂的细胞毒性。此外，这类组合物可以任选与其它辅助疗法，诸如止泻药联用。
典型的葡糖苷酶抑制剂包括粟精胺和某些亚氨基糖类，诸如脱氧野尻霉素(DNJ)，它们为有效抑制糖蛋白加工早期阶段的ERα-葡糖苷酶抑制剂(例如，参见Ruprecht等，J.Acquir.Immune Defic.Syndr.2：149，1989；另外，例如，参见Whitby等，Antiviral Chem.Chemother.15：141，2004；Branza-Nichita等，J.Virol.75：3527，2001；Courageot等，J.Virol.75：564，2000；Choukhi等，J.Virol.72：3851，1998；WO 99/29321；WO 02/089780)。然而，这些抑制剂的作用主要根据其所施用的系统的不同而改变，并且可以展示出十分不同的特异性-粟精胺显然对α-葡糖苷酶I具有相对特异性。
粟精胺为来源于黑豆或Moreton chestnut tree(Castanospermumaustrale)的天然生物碱(Hohenschutz等，Phytochemistry20：811-14(1981))。粟精胺为水溶性的且由此容易按照本领域中实施的操作步骤分离(例如，参见Alexis Platform，San Diego，CA)。在种子和种子豆荚中发现了最高浓度的该化合物(Pan等，Arch.Biochem.Biophys.303：134，1993)。除抑制α-葡糖苷酶I的酶促活性外，粟精胺还抑制肠葡糖苷酶，诸如麦芽糖酶和蔗糖酶，它可能产生胃肠副作用，诸如气体、肠胃气胀或腹泻(Saul等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 82：93，1985)。通过将受试者的膳食改变成不含淀粉高葡萄糖膳食可以使接受粟精胺的受试者的这类副作用减轻、减少至最低限度或防止它们(例如，参见Saul等，文献同上)。或者，如本文提供的，粟精胺或其衍生物可以任选与减轻这类胃肠副作用的辅助疗法，诸如止泻药联用。
粟精胺具下式：
其中R、R1和R2为氢。可以按照几种方式对该化合物进行系统命名：[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-吲嗪四醇或[1S-(1S，6S，7R，8R，8aR)]-1，6，7，8-四羟基吲哚里西啶或1，2，4，8-四脱氧-1，4，8-次氨基-L-甘油基-D-半乳-octitol。在本文中使用术语粟精胺或第一种系统命。
可以通过使粟精胺与合适的酰氯或酸酐在惰性溶剂中反应制备本说明书的粟精胺的酯类(例如，参见美国专利US 4,970,317；US5,017,563；US 5,959,111)。卤化物可以为氯化物或溴化物，并且酸酐可以包括混合酸酐类。所用酰基卤或酸酐的相对量，溶剂的相对量，温度和反应时间均可以得到控制，以便将会酰化的羟基的数量减少到最低限度。因此，仅可以使用有限过量的酸衍生物，即约达3倍过量的酰化试剂。
相对大量的溶剂的应用用于稀释反应剂并且抑制形成的高级酰化产物的量。在某些实施方案中，使用可以溶解反应剂，但不与之反应的溶剂。
在某些实施方案中，有利的是在有叔胺存在下进行反应，叔胺可以与反应过程中形成的酸反应并且将其除去。可以将叔胺加入到混合物中或可以将其作为自身过量使用并且用作溶剂。例如，可以使用吡啶。本文所述的时间和温度可以同样受控，以便限制进行酰化的量。在某些实施方案中，该反应可以通过使用冷却浴冷却进行约16小时期限以便一般获得一酯类，或可以使反应时间延长至较长期限，诸如7天，只要更多的二酯类是需要的。该反应实际上可以在高温下进行，并且可以使用加热，只要涉及的各种因素适当受到控制。
当如本文所述进行该反应时，最终的反应混合物可能仍然包含相当大量的未反应的粟精胺。可以从反应混合物中回收这种未反应的物质并且使其在随后的反应中再循环，且由此增加粟精胺转化成酯的总量。这种再循环在反应在有利于分离一酯类的条件下进行使特别有用。如本文所述的操作步骤一般可以产生6-或7-一酯类或6，7-或6，8-二酯类。可以通过适当使用封端基获得其它异构体。例如，可以使粟精胺与2-(二溴甲基)苯甲酰氯反应而得到6，7-二酯。然后使该二酯与合适的酰基卤或酸酐反应而得到相应的8-酯。然后易于通过将两个二溴甲基转化成甲酰基(使用在含水丙酮中的高氯酸银和2，4，6-可力丁)除去两个保护基，随后水解使用吗啉和氢氧化物离子获得的甲酰基苯甲酸酯。可以按照类似方式使用所示的操作步骤而得到二酯异构体。
使用1，8-O-亚异丙基粟精胺或1，8-环亚己基粟精胺与酰基氯在标准酯化操作步骤中反应有利于几乎仅形成6-酯。然后可以通过用酸，诸如4-甲苯磺酸处理除去亚异丙基或环亚己基。起始酮缩醇化合物自身获自粟精胺6，7-二苯甲酸酯。然后可以使这种二苯甲酸酯与2-甲氧基丙烯或1-甲氧基环己烯和酸反应以便引入1，8-O-亚异丙基或1，8-O-环亚己基并且通过用碱，诸如氢氧化钠水解或通过使用醇钠或醇钾作为催化剂进行转酯化除去两个苯甲酸酯基。
在某些实施方案中，本说明书提供了治疗或预防黄病毒科感染的组合物和方法，所述的方法包含对受试者给予该组合物。本说明书的组合物包括葡糖苷酶抑制剂、病毒复制抑制剂和改变免疫功能的活性剂，其中所述的葡糖苷酶抑制剂具有如下结构式(I)：
其中R、R1和R2独立为：氢、C1-14烷酰基、C2-14烯酰基、环己烷羰基、C1-8烷氧基乙酰基、
、任选被甲基或卤素取代的萘羰基；苯基(C2-6烷酰基)，其中苯基任选被甲基或卤素取代；肉桂酰基；任选被甲基或卤素取代的吡啶羰基；任选被C1-10烷基取代的二氢吡啶羰基；任选被甲基或卤素取代的噻吩羰基；或任选被甲基或卤素取代的呋喃羰基；Y为氢、C1-4烷基、C1-4烷氧基、卤素、三氟甲基、C1-4烷基磺酰基、C1-4烷基巯基、氰基或二甲氨基；Y′为氢、C1-4烷基、C1-4烷氧基、卤素或其与Y合并成3，4-亚甲二氧基；Y″为氢、C1-4烷基、C1-4烷氧基或卤素；或其药学上可接受的盐或衍生物。在另一个实施方案中，所述的葡糖苷酶抑制剂结构式(I)具有如下的立体化学：
在某些实施方案中，如本文所述的葡糖苷酶抑制剂结构式(I)具有以这类方式选择的R、R1和R2，即它们中的至少一个，但不超过两个为氢。在其它实施方案中，粟精胺酯具有如表1中所示的结构。
表1
*在MDL 29270中，R1为在所有其它结构中，R1为H。
在某些实施方案中，提供了结构式(I)的粟精胺酯类，其中R1可以为C1-8烷酰基、C2-10烯酰基、C1-8烷氧基乙酰基或任选被烷基或卤素基团取代的苯甲酰基。在其它实施方案中，R1可以为C1-8烷酰基、C2-8烯酰基、C1-8烷氧基乙酰基或任选被甲基、溴、氯、或氟基团取代的苯甲酰基。
在其它实施方案中，所述的葡糖苷酶抑制剂可以为：(a)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-吲嗪四醇6-苯甲酸酯；(b)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-吲嗪四醇7-苯甲酸酯；(c)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-吲嗪四醇6-(4-甲基苯甲酸酯)；(d)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-吲嗪四醇7-(4溴苯甲酸酯)；(e)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-吲嗪四醇6，8-二丁酸酯；(f)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-吲嗪四醇6-丁酸酯；(g)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-吲嗪四醇6-(2-呋喃甲酸酯(furancarbonxylate))；(h)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-吲嗪四醇7-(2，4-二氯苯甲酸酯)；(i)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-吲嗪四醇6-(3-己烯酸酯)；(j)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-吲嗪四醇6-辛酸酯；(k)[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-吲嗪四醇6-戊酸酯；(l)O-新戊酰酯；(m)2-乙基-丁酰酯；(n)3，3-二甲基丁酰酯；(o)环丙烯酰酯；(p)4-甲氧基苯甲酸酯；(q)2-氨基苯甲酸酯；(r)粟精胺；或(s)(a)-(r)中至少两种的混合物。在优选的实施方案中，所述的葡糖苷酶抑制剂为粟精胺或[1S-(1α，6β，7α，8β，8aβ)]-八氢-1，6，7，8-吲嗪四醇6-丁酸酯(也称作西戈斯韦)。
结构纯的化合物意指化合物组成各自包含相同数量和类型的彼此按照相同顺序和使用相同的键结合的原子，在所述的化合物组成中，包含该组成的各分子占较大百分比，例如约95％-100％的并且可以在约95％，96％，97％，98％，99％或99％以上。本文所用的术语″结构纯″并不意指彼此区分不同的几何异构体或不同的旋光异构体。例如，认为顺式-和反式-丁-2，3-烯混合物为结构纯的，因为其为外消旋混合物。当指定组合物包括较大百分比的单一几何异构体或旋光异构体时，分别使用术语″几何纯的″和″光学或对映体纯的″。
术语″结构纯″也并非指定区分分子的不同互变形式或离子化状态或因平衡现象或其它可逆互变产生的分子的其它形式。因此，例如，尽管某些羧基可以为质子化状态(COOH)且其它可以为去质子化状态(COO-)，但是有机酸的组成为结构纯的。同样，除非另作陈述，否则认为包含酮基烯醇互变体的混合物的组成为结构纯的。
联合疗法和使用方法
如本文所述，葡糖苷酶抑制剂{例如粟精胺及其衍生物}与改变免疫功能的活性剂和改变病毒复制或感染性的活性剂的联合用药以协同方式起作用以便抑制病毒感染或病毒复制。在某些实施方案中，按照统计学可测定的标准，本文所述的联合用药能够在临床相关浓度下抑制黄病毒科病毒，优选HCV的复制。葡糖苷酶抑制剂，诸如粟精胺或其衍生物(例如西戈斯韦)与至少两种其它治疗剂的联合用药作为治疗的应用包括本说明书中的治疗或预防性施用；即对已知可能(处于风险中)或认为感染了黄病毒科，诸如HCV的受试者给予所述的联合用药。本文还关注葡糖苷酶抑制剂{例如粟精胺或其衍生物}改变宿主免疫功能的活性剂(例如干扰素或聚乙二醇化干扰素，诸如干扰素-α)，改变病毒复制的活性剂(例如利巴韦林或2′-C-甲基胞苷或valopicitabine)或合并了改变免疫功能的活性剂和改变病毒复制的活性剂两者的联合用药，其中任何具体实施的联合用药均以具有统计学显著性和协同作用方式增加所述活性剂在治疗黄病毒科感染，诸如HCV感染中的有效性(功效)。在其它实施方案中，这些组合物中的任一种可以进一步任选包含额外的辅助治疗剂，诸如止泻药等。
治疗还包括预防或预防性给予本文所述的任意联合用药。黄病毒科感染的有效治疗可以包括治愈感染(即从宿主或宿主组织中根除病毒)；持续反应，其中在完成治疗方案后6个月在受试者血液中不再检测到HCV RNA(治疗持续反应可以等同于良好的预后并且等同于治愈)；减缓或减轻肝瘢痕形成(纤维化)；减缓或减少病毒产生；减轻、缓解或根除受试者症状；或防止症状或感染加重或发展。因此，本文所述的组合物可以用于达到如下目的中的一种或多种：(1)消除黄病毒科感染，诸如HCV感染的感染性感染和潜在的传播至其他受试者；(2)阻止肝病发展并且改善临床预后；(3)预防肝硬化和HCC发生；(4)在同时联用治疗分子或用药方式时改善临床有益性；或(5)改善宿主对HCV感染的免疫应答。迄今为止，足以治疗或预防HCV感染，诸如基因型1和任意相关疾病，但无严重副作用的治疗剂仍然难以得到。
在某些实施方案中，疗法或预防可以如本文所述用于治疗或预防与病毒，诸如黄病毒科感染相关的疾病。例如该疗法或预防可以治疗或预防选自下列的疾病：丙型肝炎、黄热病、登革热、日本脑炎、墨累山谷脑炎、罗氏病毒感染、西尼罗热、圣路易脑炎、蜱传脑炎、羊跳跃病病毒感染、Powassan病毒感染、鄂木斯克出血热、库阿撒鲁尔森病、牛病毒性腹泻、经典型猪发烧、缘病和猪霍乱。病毒感染，诸如黄病毒科感染或HCV感染意指涉及居留在受试者或患者细胞或体内的黄病毒科的任何状态或情况{即因其导致、加剧或以此为特征}。患者或受试者可以为人、非人的灵长类、绵羊、牛、马、猪、狗、猫、大鼠或小鼠或其它哺乳动物。
HCV难以在细胞培养物中有效繁殖，这使得分析和鉴定潜在的抗-HCV剂变得困难。在没有能够支持人HCV复制和再感染体外细胞的合适的细胞培养系统存在下，使用的黄病毒科中的另一个成员牛病毒性腹泻病毒(BVDV)为本领域公认的用于细胞培养物模型的代用病毒(Buckwold等，Antiviral Res.60：1，2003；Stuyver等，Antimicrob.Agents Chemother.47：244，2003；Whitby等，文献同上)。HCV和BVDV共有明显程度的局部蛋白质同源性，常用的复制策略和可能相同的病毒发育的亚细胞位置。HCV和BVDV均具有单链基因组(分别约9,600和12,600个核苷酸)，它们编码9种功能类似的基因产物，包括E1和E2包膜糖蛋白(例如，参见Rice，Flaviviridae：The Viruses和Their Replication，in Fields Virology，3rd Ed.Philadelphia，Lippincott，931，1996)。本领域众所周知的其它测定法包括HCV假颗粒(例如，参见Bartosch等，J.Exp.Med.197：633，2003；Hsu等，Proc.Nat′l Acad.Sci.USA 100：7271，2003)和任意类型的HCV复制子，诸如表达E1和E2并且还抗IFN-α或利巴韦林的全长复制子(例如，参见美国专利US5,372,928；US 5,698,446；US 5,874,565；US 6,750,009)。
本文所述的化合物可以为体外和基于细胞的试验的研究工具以便研究病毒，诸如HCV感染、生长和复制的生物学机理。作为背景技术且不希望受到理论约束，HCV形态发生是复杂性的，其中认为预装配的病毒核心颗粒结合插入内质网(ER)膜的病毒包膜(表面)蛋白的胞质侧。在获得包膜后，病毒体萌发成ER腔且然后通过高尔基体转运至胞外液。从未成熟病毒糖蛋白中除去N-连接的葡萄糖残基(由例如细胞酶α-葡糖苷酶进行修整)可以在病毒糖蛋白从ER迁移至高尔基体过程中起作用。
在一个实施方案中，提供了鉴定抗病毒化合物的方法，包含使感染了病毒的宿主细胞与葡糖苷酶抑制剂(例如粟精胺或其衍生物)和至少一种额外的测试化合物或活性剂接触足以抑制病毒复制的条件和时间并且鉴定抑制(预防、减缓、消除、干扰)感染、病毒复制和/或病毒装配的候选活性剂。在某些实施方案中，本文所述的方法用于鉴定在与葡糖苷酶抑制剂，诸如粟精胺或其衍生物(例如西戈斯韦)联用时起协同作用的测试化合物。在另一种实施方案中，提供了鉴定怀疑存在病毒感染的细胞的方法，包含使怀疑感染了病毒的宿主细胞与葡糖苷酶抑制剂(例如粟精胺或其衍生物)和至少一种候选化合物或活性剂接触足以抑制感染、病毒复制和/或病毒装配的抑条件和时间并且鉴定感染了病毒的细胞。在某些实施方案中，病毒感染可以因HCV导致或与之相关。本文所述的测定法用于测定候选化合物或联合用药的治疗价值并且进一步测定有效治疗有此需要的受试者所必需的剂量参数。
在具体的实施方案中，将葡糖苷酶抑制剂(例如粟精胺或其衍生物)与辅助治疗剂共同给予或联合给药(即以混合物或共同包装或以这类方式给药，使得葡糖苷酶抑制剂诸如粟精胺或其衍生物，改变宿主免疫功能的活性剂和改变病毒复制的活性剂可有效性地起协同作用或使得所述联合用药在感染部位上以附加或协同作用方式起抗病毒作用)。在一个实施方案中，将粟精胺或其衍生物，诸如西戈斯韦与改变免疫功能的活性剂，诸如干扰素-α或聚乙二醇化干扰素-α和改变病毒复制的活性剂，例如核苷类似物，诸如利巴韦林或2′-C-甲基胞苷或valopicitabine联用。
有代表性的辅助治疗剂可以为具有抗病毒活性的化合物或分子，例如，它们可以抑制或预防细胞感染(诸如通过预防病毒与细胞结合或黏着)；抑制、减少或防止病毒复制或装配；抑制、减少或防止病毒RNA从病毒壳体中释放；或抑制、减少或干扰HCV基因产物的功能。另一种典型辅助治疗剂可以为改变免疫功能(以具有统计学显著性的方式或临床显著性的方式增加或减少)，增加或促进对感染病毒的免疫功能或免疫应答的化合物或分子。
在一个实施方案中，包含葡糖苷酶抑制剂、改变免疫功能的活性剂和改变病毒复制的活性剂的组合物在治疗受试者或患者的黄病毒科，诸如HCV感染中以协同方式起作用。两种或多种化合物以协同方式发生相互作用，使得化合物的联合作用大于在每种化合物在单独给药时单独作用的总和(例如，参见Berenbaum，Pharmacol.Rev.41：93，1989)。例如，可以通过各种机械和经验模型分析粟精胺或其衍生物与另一种活性剂或化合物的相互作用(例如，参见Ouzounov等，Antivir.Res.55：425，2002)。分析活性剂联合用药之间的相互作用的常用手段使用等效图的结构(等效曲线，也称作等效线图解)，其中活性剂的联合用药(da，db)由示意图上的点表示，其轴为各活性剂的剂量-轴(例如，参见Ouzounov等，文献同上；另外参见Tallarida，J.Pharmacol.Exp.Therap.298：865，2001)。
本领域中已知的另一种分析药物-药物相互作用(拮抗、加和、协同)的方法包括根据中位值作用原理测定联用指数(CI)，以便提供单独给予和联合给予的化合物的IC50值的估计值(例如，参见Chou.InSynergism和Antagonism Chemotherapy.Eds.Chou和Rideout.Academic Press，San Diego CA，61-102页，1991；CalcuSynTM软件)。小于1的CI值代表协同作用活性，等于1代表加和活性，而大于1代表拮抗作用。
另一种典型的方法为独立作用方法(Pritchard和Shipman，Antiviral Research 14：181，1990；Pritchard和Shipman，AntiviralTherapy 1：9，1996；MacSynergyTM II软件，University of Michigan，Ann Arbor，MI)。MacSynergyTM II软件能够通过比较计算的加和表面与测定的数据对化合物的相互作用进行三维(3-D)检验，以便生成差别图，这些图揭示了统计学上大于预计(协同作用)或小于预计(拮抗作用)的化合物相互作用的区(体积形式)。例如，认为包含葡糖苷酶抑制剂、改变免疫功能的活性剂和改变病毒复制的活性剂的组合物具有协同作用活性或具有协同作用，此时通过协同作用峰计算的产生的协同作用体积约大于加和作用(即每种单独的活性剂彼此加和的作用)15％或约大于加和作用2-倍至10-倍或约大于加和作用3-倍至5倍或以上。
在某些实施方案中，葡糖苷酶抑制剂(例如粟精胺或其衍生物，诸如西戈斯韦)与改变免疫功能的活性剂(例如干扰素)和改变病毒复制的活性剂(例如核苷类似物，诸如利巴韦林或valopicitabine)或本文所述的另一种活性剂或化合物的联合用药可以以协同作用方式起作用或具有协同作用，此时值约为25-50μM2％或μM(IU/mL)％(最低，但具有统计学意义)；约50-100μM2％或μM(IU/mL)％(中等协同作用，可以表示在体内具有显著的协同作用)；或大于约100μM2％或μM(IU/mL)％(强协同作用，能够表示在体内显著的协同作用)。Buckwold等报导利巴韦林和干扰素-α的组合(为目前治疗HCV感染的联合用药标准)具有的协同作用体积为66±25IU(μg)/mL2％(Antimicrob.Agents Chemother.47：2293，2003)。
如本文所述包含粟精胺或西戈斯韦和干扰素-α的双重组合的组合物表现出的协同作用体积在约96μM(IU/mL)％-约168μM(IU/mL)％，且如本文所述包含粟精胺或西戈斯韦、利巴韦林(0.37μM-3.3μM)和干扰素-α的三重组合的组合物表现出的协同作用体积分别在约145μM(IU/mL)％-约624μM(IU/mL)％和213μM(IU/mL)％-约460μM(IU/mL)％(例如，参见实施例6和附图19)。包含西戈斯韦与2′-C-甲基胞苷(NM-107，为其酯前体药物valopicitabine的活性组分)的双重组合也表现出协同相互作用(例如，参见实施例3，表5和附图11)。
在某些实施方案中，本说明书的组合物包含葡糖苷酶抑制剂(例如粟精胺或其衍生物诸如西戈斯韦)与抑制黄病毒科(例如HCV)结合或感染细胞的辅助治疗剂或化合物的联合用药。这类化合物的实例包括特异性结合一种或多种HCV基因产物(例如E1或E2蛋白)或HCV结合的细胞受体的抗体。抗体可以为单克隆或多克隆抗体或其抗原结合片段，包括遗传工程的嵌合、人源化、sFv或其它这类免疫球蛋白。防止病毒结合或感染细胞的其它化合物包括糖胺聚糖类(诸如硫酸乙酰肝素和苏拉明)。在其它实施方案中，将葡糖苷酶抑制剂与抑制黄病毒科结合或感染细胞的第一种辅助治疗剂或化合物的联合用药进一步与第二种辅助治疗剂联用，诸如第二种葡糖苷酶抑制剂，改变免疫功能的活性剂，改变黄病毒科复制的活性剂，抑制黄病毒科RNA从病毒壳体中释放的活性剂或抑制黄病毒科基因产物功能的活性剂，改变黄病毒科感染症状的活性剂，治疗与黄病毒科相关的感染的活性剂等。
在另一种实施方案中，本说明书的葡糖苷酶抑制剂(例如粟精胺或其衍生物诸如西戈斯韦)还可以与辅助治疗剂或化合物联用，这些辅助治疗剂或化合物抑制黄病毒科RNA从病毒壳体中释放或抑制HCV基因产物的功能，包括内部核糖体进入位点(IRES)抑制剂、蛋白酶抑制剂(例如丝氨酸蛋白酶抑制剂)、解旋酶抑制剂和病毒聚合酶/复制酶抑制剂(例如，参见Olsen等，Antimicrob.Agents Chemother.48：3944，2004；Stansfield等，Bioorg.Med.Chem.Lett.14：5085，2004)。IRES抑制剂包括：例如核苷酸序列特异性反义(例如，参见McCaffrey等，Hepatology 38：503，2003)；小酵母RNA(例如，参见Liang等，World J.Gastroenterol.9：1008，2003)；或抑制mRNA翻译的短干扰RNA分子(siRNA)；和氰钴铵素(CNCb1，维生素B12)(Takyar等，J.Mol.Biol.319：1，2002)。NS3丝氨酸蛋白酶(解旋酶)抑制剂包括来源于NS3底物的肽类并且起阻断酶活性的作用。命名为BILN 2061(例如，参见Lamarre等，Nature 426：186，2003)(Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd.，Quebec)、HCV-796(Wyeth/Viropharma)、SCH-503034(Schering-Plough)、ITMN-A(或ITMN-B)(Intermune)和VX-950(Vertex Pharmaceuticals，Inc.Cambridge，MA)的典型丝氨酸蛋白酶抑制剂可以与本说明书中的葡糖苷酶抑制剂联用或进一步与另外的辅助治疗剂联用，诸如那些改变免疫功能或改变黄病毒科复制的治疗剂。在相关实施方案中，将葡糖苷酶抑制剂和抑制黄病毒科RNA从病毒壳体中释放或抑制黄病毒科基因产物功能的第一种辅助治疗剂或化合物的联合用药进一步与第二种辅助治疗剂联用，诸如第二种葡糖苷酶抑制剂，改变免疫功能的活性剂，改变黄病毒科复制的活性剂，抑制黄病毒科结合到或感染细胞的活性剂，改变黄病毒科感染症状的活性剂，治疗与黄病毒科相关的感染的活性剂等。
在另一种实施方案中，本说明书中的葡糖苷酶抑制剂(例如粟精胺或其衍生物，诸如西戈斯韦)可以与间接干扰涉及或影响黄病毒科复制的细胞功能的化合物联用，诸如肌苷一磷酸脱氢酶抑制剂(例如利巴韦林、麦考酚酸和VX497(merimepodib，Vertex Pharmaceuticals))、Toll-类受体(例如TLR3、TLR4、TLR7、TLR9)及其激动剂(诸如TLR7激动剂艾沙托立宾或ANA975(艾沙托立宾的前体药物)和TLR9激动剂CPG-10101)、胱天蛋白酶抑制剂(诸如IDN-6556)或HCV p7抑制剂(例如DGJ和衍生物)。其它化合物为那些直接改变黄病毒科复制的化合物，包括糖蛋白加工的其它抑制剂(诸如亚氨基糖类，包括脱氧半乳野艽霉素(DGJ)和脱氧野尻霉素(DNJ)及其衍生物(例如N-丁基-DNJ、N-壬基-DNJ和长烷基链亚氨基糖类，诸如N7-氧杂壬基-DNJ、N7-氧杂壬基-DGJ))；RNA-依赖性RNA聚合酶抑制剂(RdRp抑制剂)，诸如非-核苷类似物(例如2-BAIP)或核苷类似物，包括2′-C-甲基胞苷(NM107，Idenix Pharmaceuticals)、valopicitabine(NM283，NM107的缬氨酸酯前体药物；Idenix Pharmaceuticals)等。NM107为基于细胞的试验中的活性种类并且可以作为前体药物NM283递送至受试者(例如人)。NM107可以活性的，因为它为或可以作为另一种活化代谢物的活性成分。也可以使用其它抗病毒化合物，诸如广谱化合物，包括金刚烷胺(Endo Pharamceuticals)、金刚乙胺(Forest Pharmaceuticals，Inc.)。
在其它实施方案中，将葡糖苷酶抑制剂和直接或间接改变黄病毒科复制的第一种辅助治疗剂或化合物的联合用药进一步与第二种辅助治疗剂联用，诸如第二种葡糖苷酶抑制剂，改变免疫功能的活性剂，抑制黄病毒科RNA从病毒壳体中释放的活性剂或抑制黄病毒科基因产物功能的活性剂，抑制黄病毒科结合到或感染细胞的活性剂，改变黄病毒科感染症状的活性剂，治疗与黄病毒科相关的感染的活性剂等。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、利巴韦林和干扰素或包含西戈斯韦、2′-C-甲基胞苷或valopicitabine和干扰素和任选的DGJ或DNJ。
在另一种实施方案中，本说明书中的葡糖苷酶抑制剂(例如粟精胺或其衍生物诸如西戈斯韦)可以与起改变免疫功能(以统计学显著性，临床显著性或生物学显著性方式增加或减少)，优选促进或刺激对黄病毒科感染的免疫功能或免疫应答的作用的化合物联用。例如，化合物可以刺激T细胞应答或促进特异性免疫应答(例如胸腺肽-α，诸如胸腺肽-α1(例如)，和干扰素，诸如α-干扰素和β-干扰素)或可以刺激或促进体液应答。在其它实施方案中，将葡糖苷酶抑制剂和第一种改变免疫功能的辅助治疗剂或化合物的联合用药进一步与第二种辅助治疗剂联用，诸如第二种葡糖苷酶抑制剂，改变黄病毒科复制的活性剂，抑制黄病毒科RNA从病毒壳体中释放的活性剂或抑制黄病毒科基因产物功能的活性剂，抑制黄病毒科结合或感染细胞的活性剂，改变黄病毒科感染症状的活性剂，治疗与黄病毒科相关的感染的活性剂等。
改变免疫功能的典型化合物包括：I型干扰素，诸如干扰素-α(例如，参见Nagata等，Nature 287：401，1980)、干扰素-β(例如，参见Tanigushi等，Nature 285：547，1980)和干扰素-ω(Adolf，J.Gen.Virol.68：1669，1987)；II型干扰素，诸如干扰素-γ(Belardelli，APMIS 103：161，1995)和干扰素-γ-1b(InterMune)；细胞因子-类干扰素，诸如干扰素-λ1(白细胞介素-29或IL-29)、干扰素-λ2(IL-28A)、干扰素-λ3(IL-28B)；其它未分类干扰素等。典型干扰素-α包括干扰素-α-2a(-A；Hoffman-La Roche)、干扰素-α-2b(Intron A，PBL Biomedical)，干扰素-α-con-1(InterMune)、干扰素-α-n3(Alferon或AlferonInterferon Sciences)、白蛋白干扰素-α(Albuferon-αTM，HumanGenome Sciences，Rockville，MD)和Veldona(Amarillo Biosciences，Inc.)。典型的干扰素-β包括干扰素-β-1a(Biogen Idec；或Serono Inc.)和干扰素-β-1b(Berlex)。
干扰素改变免疫功能并且还可以改变(抑制、预防、消除、减少或减缓)病毒，诸如HCV的复制。干扰素-α和干扰素-β在病毒感染的细胞中产生诱导对病毒复制的抗性，促进I类MHC表达，增加抗原呈递并且活化天然杀伤细胞(缺乏抗原特异性表面受体的淋巴细胞亚群)以便杀伤病毒感染的细胞(例如，参见Janeway等，Immunobiology，5thed.New York，London：Garland Publishing，2001)。因此，这些干扰素通过影响先天性和适应性免疫改变免疫功能。
在某些实施方案中，将粟精胺与干扰素或聚乙二醇化干扰素，诸如聚乙二醇化干扰素-α2a或聚乙二醇化干扰素-α2b联合给药。干扰素-α作为单一疗法或联合疗法已经用于治疗各种病毒感染(例如，参见Liang，New Engl.J.Med.339：1549，1998；Hulton等，J.Acquir.Immune Defic.Syndr.5：1084，1992；Johnson等，J.Infect.Dis.161：1059，1990)。干扰素-α结合细胞表面受体并且刺激导致抑制病毒复制的细胞酶活化的信号转导途径(例如分别抑制翻译起始并且降解病毒RNA的双链RNA-活化的蛋白激酶和RNase L)(例如，参见Samuel，Clin.Microbiol.Rev.14：778，2001；Kaufman，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 96：11693，1999)。HCV E2糖蛋白和NS5a可以阻断RNA-活化的蛋白激酶活性，使得某些HCV菌株更耐受干扰素-α；因此，干扰素-α和一种或多种其它化合物联合疗法对治疗持续性病毒感染而言是必不可少的(例如，参见Ouzounov等，文献同上其中引述的参考文献)。在某些实施方案中，聚乙二醇部分与干扰素-α连接(称作聚乙二醇化干扰素-α；peginterferon-α-2b(Peg-Schering-Plough)和peginterferon-α-2a(Hoffmann-LaRoche))，它们具有改善的药代动力学特性并且还表现出更少的不需要的副作用(例如，参见Zeuzem等，New Engl.J.Med.343：1666，2000；Heathcote等，New Engl.J.Med.343：1673，2000；Matthews等，Clin.Ther.26：991，2004)。
干扰素-α-2a(-A；Hoffman-La Roche)、干扰素-α-2b(Intron-A；Schering-Plough)和干扰素-α-con-1(InterMune)在美国被批准用作治疗患有慢性丙型肝炎的成年人的单一活性剂。用于治疗慢性丙型肝炎感染的干扰素-α-2b和-α-2a的推荐剂量为3,000,000单位，每周3次，通过皮下或肌内注射给药。将治疗给予6个月-2年。就干扰素-α-con-1而言，推荐剂量为9μg，首次治疗每周3次；并且针对患者无反应或复发，给予15μg，每周3次，再持续6个月。在使用这些重组干扰素中任意种的治疗期限过程中，必须监测患者的副作用，包括流感样症状、抑郁症、皮疹和异常血液计数。使用单独的干扰素-α治疗在具有基因型1感染的受试者中产生的持续反应低于15％，由此这些干扰素因这一低反应率而难以用作治疗患有慢性丙型肝炎感染的患者的单一疗法。
使用干扰素-α与利巴韦林的联合用药治疗HCV感染优于单一治疗并且该联合用药是目前的治疗标准。在三个大型双盲安慰剂对照的临床试验中研究了给药的有效性、剂量和频率(Reichard等，Lancet351：83，1998；Poynard等，Lancet 352：1426，1998；McHutchison等，New Engl.J.Med.339：1485，1998；另外，参见Buckwold等，Antimicrob.Agents Chemother.47：2293，2003；Buckhold，J.Antimicrob.Chemother.53：412，2004)。与利巴韦林相关的副作用包括异常胎儿发育。利巴韦林还在患有贫血、心脏病或肾病的患者中受到禁忌。因此，利巴韦林的治疗剂量可能随时间的推移而具有毒性。
在一个典型的实施方案中，本说明书提供了至少一种葡糖苷酶抑制剂(例如粟精胺或其衍生物，西戈斯韦)、改变免疫功能的活性剂(例如干扰素-α或聚乙二醇化干扰素-α)和改变黄病毒科复制的活性剂(例如利巴韦林或2′-C-甲基胞苷或valopicitabine)的三重组合。
在另一种实施方案中，可以将葡糖苷酶抑制剂，诸如粟精胺或其衍生物任选进一步与调节HCV感染症状(优选减少或减轻其严重程度或强度，减少其数量或根除它们)或效应的辅助活性剂或化合物(例如抗氧化剂，诸如类黄酮)联用。在另一种实施方案中，将葡糖苷酶抑制剂和第一种改变黄病毒科感染症状的辅助治疗剂或化合物的联合用药进一步与第二种辅助治疗剂联用，诸如第二种葡糖苷酶抑制剂，改变黄病毒科复制的活性剂，抑制黄病毒科RNA从病毒壳体中释放的活性剂或抑制黄病毒科基因产物功能的活性剂，抑制黄病毒科结合或感染细胞的活性剂，改变对黄病毒科的免疫功能的活性剂，治疗与黄病毒科相关的感染的活性剂等。
在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、干扰素-α2a和直接改变黄病毒科复制的活性剂。在其它实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、干扰素-α2b和直接改变黄病毒科复制的活性剂。在其它实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、peginterferon-α2a和直接改变黄病毒科复制的活性剂。在其它实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、peginterferon-α2b和直接改变黄病毒科复制的活性剂。在其它实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、干扰素-αcon-1和直接改变黄病毒科复制的活性剂。在其它实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、干扰素-α-n3和直接改变黄病毒科复制的活性剂。在其它实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、干扰素-ω和直接改变黄病毒科复制的活性剂。在其它实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、干扰素-β和直接改变黄病毒科复制的活性剂。在其它实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、干扰素-γ和直接改变黄病毒科复制的活性剂。在这些实施方案中的任意种中，直接改变黄病毒科复制的活性剂为RdRp抑制剂，诸如valopicitabine(NM283)或2′-C-甲基胞苷(NM107)。在这些实施方案中的任意种中，直接改变黄病毒科复制的活性剂为非-核苷类似物，诸如2-BAIP。
在另一个方面中，所述的联合用药包含粟精胺、干扰素-α2a和直接改变黄病毒科复制的活性剂。在其它实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、干扰素-α2b和直接改变黄病毒科复制的活性剂。在其它实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、peginterferon-α2a和直接改变黄病毒科复制的活性剂.在其它实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、peginterferon-α2b和直接改变黄病毒科复制的活性剂。在其它实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、干扰素-αcon-1和直接改变黄病毒科复制的活性剂。在其它实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、干扰素-α-n3和直接改变黄病毒科复制的活性剂。在其它实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、干扰素-ω和直接改变黄病毒科复制的活性剂。在其它实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、干扰素-β和直接改变黄病毒科复制的活性剂。在另一个实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、干扰素-γ和直接改变黄病毒科复制的活性剂。在这些实施方案中的任意种中，直接改变黄病毒科复制的活性剂为RdRp抑制剂，诸如valopicitabine(NM283)或2′-C-甲基胞苷(NM107)。在这些实施方案中的任意种中，直接改变黄病毒科复制的活性剂为非-核苷类似物，诸如2-BAIP。
在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、干扰素-α2a和间接改变黄病毒科复制的活性剂。在其它实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、干扰素-α2b和间接改变黄病毒科复制的活性剂。在其它实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、peginterferon-α2a和间接改变黄病毒科复制的活性剂。在其它实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、peginterferon-α2b和间接改变黄病毒科复制的活性剂。在其它实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、干扰素-αcon-1和间接改变黄病毒科复制的活性剂。在其它实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、干扰素-α-n3和间接改变黄病毒科复制的活性剂。在其它实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、干扰素-ω和间接改变黄病毒科复制的活性剂。在其它实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、干扰素-β和间接改变黄病毒科复制的活性剂。在另一个实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、干扰素-γ和间接改变黄病毒科复制的活性剂。在这些实施方案中的任意种中，间接改变黄病毒科复制的活性剂为利巴韦林或viramidine。
在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、干扰素-α2a和间接改变黄病毒科复制的活性剂。在其它实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、干扰素-α2b和间接改变黄病毒科复制的活性剂。在其它实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、peginterferon-α2a和间接改变黄病毒科复制的活性剂。在其它实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、peginterferon-α2b和间接改变黄病毒科复制的活性剂。在其它实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、干扰素-αcon-1和间接改变黄病毒科复制的活性剂。在其它实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、干扰素-α-n3和间接改变黄病毒科复制的活性剂。在其它实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、干扰素-ω和间接改变黄病毒科复制的活性剂。在其它实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、干扰素-β和间接改变黄病毒科复制的活性剂。在另一个实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、干扰素-γ和间接改变黄病毒科复制的活性剂。在这些实施方案中的任意种中，间接改变黄病毒科复制的活性剂为利巴韦林或viramidine。
辅助治疗剂可以包含用于治疗通常鉴定为共同感染感染了黄病毒科(例如HCV)的受试者的病原体的抗病毒化合物，诸如抗HBV或HIV的抗病毒化合物或药物。典型的共同感染通过HBV、人逆转录病毒，诸如HIV1和2或人T-淋巴细胞病毒(HTLV)1型或2型等进行。典型抗病毒化合物包括：核苷酸逆录酶(RT)抑制剂(例如拉米夫定(3TC)、齐多夫定、司他夫定、去羟肌苷、阿德福韦二匹伏酯和阿巴卡韦)；非-核苷RT抑制剂(例如奈韦拉平、依法韦仑)；和蛋白酶抑制剂(例如沙奎那韦、茚地那韦和利托那韦)。在相关的实施方案中，将葡糖苷酶抑制剂和第一种治疗与黄病毒科相关的感染的辅助治疗剂或化合物进一步与第二种辅助治疗剂联用，诸如第二种葡糖苷酶抑制剂，改变黄病毒科复制的活性剂，抑制黄病毒科RNA从病毒壳体中释放的活性剂或抑制黄病毒科基因产物功能的活性剂，抑制黄病毒科结合或感染细胞的活性剂，改变抗黄病毒科的免疫功能的活性剂，改变对黄病毒科感染症状的活性剂等。
辅助治疗剂可以任选包含止泻药，诸如抑制分泌药、抗运动剂，包括抗胆碱能药{例如增加肠运输时间，或换句话说减少蠕动的活性剂}，吸附剂，填充剂或其任意的组合。在某些实施方案中，止泻药可以为抑制分泌的，诸如次水杨酸铋。在另一个实施方案中，止泻药可以为抗运动剂，诸如盐酸洛哌丁胺、盐酸地芬诺酯、盐酸地芬诺辛、磷酸可待因或复方樟脑酊(鸦片樟脑酊)。在其它实施方案中，止泻药可以为吸附剂，诸如活性白土、高岭土或果胶。在其它实施方案中，止泻药可以为抗胆碱能药，诸如颠茄酊、硫酸阿托品或丙胺太林。在另一种实施方案中，止泻药可以为填充剂或增充剂，诸如聚卡波非钙。可以任选将这些止泻药中的任意一种或多种与粟精胺或其衍生物联用或与其它辅助疗法(诸如干扰素或利巴韦林或valopicitabine)和粟精胺或其衍生物联用。例如，可以将抗运动剂(诸如地芬诺酯或地芬诺辛)和抗胆碱能药(诸如硫酸阿托品)与葡糖苷酶抑制剂(例如粟精胺或其衍生物，诸如西戈斯韦)或与葡糖苷酶抑制剂(诸如粟精胺或其衍生物)、改变免疫功能的活性剂(诸如干扰素或聚乙二醇化干扰素)和改变黄病毒科复制的活性剂(诸如利巴韦林或2′-C-甲基胞苷或valopicitabine)的联合用药或其任意的组合联用。
在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、利巴韦林和干扰素。在其它实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、金刚烷胺和利巴韦林。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、金刚烷胺和2-BAIP。
在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、金刚烷胺和利巴韦林。在某些其它实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、金刚烷胺和viramidine。在其它实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、金刚烷胺和viramidine。在其它实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、金刚烷胺和NM-107。在更多实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、金刚烷胺和NM-107。在其它实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、金刚烷胺和NM-283。在其它实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、金刚烷胺和NM-283。在其它实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、金刚烷胺和2-BAIP。
在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、金刚烷胺和IFN-α2a。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、金刚烷胺和IFN-α2a。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、金刚烷胺和IFN-α2b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、金刚烷胺和IFN-α2b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、金刚烷胺和IFN-αcon-1，在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、金刚烷胺和IFN-αcon-1。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、金刚烷胺和IFN-α-n3。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、金刚烷胺和IFN-α-n3。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、金刚烷胺和IFN-β。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、金刚烷胺和IFN-β。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、金刚烷胺和peg-IFN-α2a。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、金刚烷胺和peg-IFN-α2a。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、金刚烷胺和peg-IFN-α2b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、金刚烷胺和peg-IFN-α2b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、金刚烷胺和IFN-ω。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺，金刚烷胺和IFN-ω。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、金刚烷胺和IFN-γ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、金刚烷胺和IFN-γ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、金刚烷胺和IFN-γ-1b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、金刚烷胺和IFN-γ-1b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、金刚烷胺和IFN-λ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、金刚烷胺和IFN-λ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、金刚烷胺和NB-DNJ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、金刚烷胺和NB-DNJ。
在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、利巴韦林和viramidine。在其它实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、利巴韦林和viramidine。在其它实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、利巴韦林和NM-107。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、利巴韦林和NM-107。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、利巴韦林和NM-283。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、利巴韦林和NM-283。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、利巴韦林和2-BAIP。在其它实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、利巴韦林和2-BAIP。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、利巴韦林和IFN-α2a。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、利巴韦林和IFN-α2a。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、利巴韦林和IFN-α2b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、利巴韦林和IFN-α2b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、利巴韦林和IFN-αcon-1。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、利巴韦林和IFN-αcon-1。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、利巴韦林和IFN-α-n3。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、利巴韦林和IFN-α-n3。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、利巴韦林和IFN-β。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、利巴韦林和IFN-β。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、利巴韦林和peg-IFN-α2a。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、利巴韦林和peg-IFN-α2a。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、利巴韦林和peg-IFN-α2b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、利巴韦林和peg-IFN-α2b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、利巴韦林和IFN-ω。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、利巴韦林和IFN-ω。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、利巴韦林和IFN-γ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺，利巴韦林和IFN-γ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、利巴韦林和IFN-γ-1b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、利巴韦林和IFN-γ-1b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、利巴韦林和IFN-λ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、利巴韦林和IFN-λ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、利巴韦林和NB-DNJ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、利巴韦林和NB-DNJ。
在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、viramidine和NM-107。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、viramidine和NM-107。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、viramidine和NM-283。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、viramidine和NM-283。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、viramidine和2-BAIP。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、viramidine和2-BAIP。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、viramidine和IFN-α2a。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、viramidine和IFN-α2a。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、viramidine和IFN-α2b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、viramidine和IFN-α2b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、viramidine和IFN-αcon-1。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、viramidine和IFN-αcon-1。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、viramidine和IFN-α-n3。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、viramidine和IFN-α-n3。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、viramidine和IFN-β。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、viramidine和IFN-β。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、viramidine和peg-IFN-α2a。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、viramidine和peg-IFN-α2a.在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、viramidine和peg-IFN-α2b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、viramidine和peg-IFN-α2b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、viramidine和IFN-ω。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、viramidine和IFN-ω。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、viramidine和IFN-γ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、viramidine和IFN-γ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、viramidine和IFN-γ-1b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、viramidine和IFN-γ-1b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、viramidine和IFN-λ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、viramidine和IFN-λ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、viramidine和NB-DNJ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、viramidine和NB-DNJ。
在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、NM-107和NM-283。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、NM-107和NM-283。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、NM-107和2-BAIP。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、NM-107和2-BAIP。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、NM-107和IFN-α2a。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、NM-107和IFN-α2a。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、NM-107和IFN-α2b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、NM-107和IFN-α2b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、NM-107和IFN-αcon-1。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、NM-107和IFN-αcon-1。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、NM-107和IFN-α-n3。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、NM-107和IFN-α-n3。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、NM-107和IFN-β。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、NM-107和IFN-β。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、NM-107和peg-IFN-α2a。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、NM-107和peg-IFN-α2a。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、NM-107和peg-IFN-α2b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、NM-107和peg-IFN-α2b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、NM-107和IFN-ω。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、NM-107和IFN-ω。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、NM-107和IFN-γ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、NM-107和IFN-γ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、NM-107和IFN-γ-1b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、NM-107和IFN-γ-1b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、NM-107和IFN-λ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、NM-107和IFN-λ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、NM-107和NB-DNJ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、NM-107和NB-DNJ。
在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、NM-283和2-BAIP。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、NM-283和2-BAIP。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、NM-283和IFN-α2a。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、NM-283和IFN-α2a。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、NM-283和IFN-α2b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、NM-283和IFN-α2b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、NM-283和IFN-αcon-1。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、NM-283和IFN-αcon-1。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、NM-283和IFN-α-n3。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、NM-283和IFN-α-n3。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、NM-283和IFN-β。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、NM-283和IFN-β。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、NM-283和peg-IFN-α2a。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、NM-283和peg-IFN-α2a。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、NM-283和peg-IFN-α2b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、NM-283和peg-IFN-α2b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、NM-283和IFN-ω。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、NM-283和IFN-ω。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、NM-283和IFN-γ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、NM-283和IFN-γ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、NM-283和IFN-γ-1b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、NM-283和IFN-γ-1b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、NM-283和IFN-λ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、NM-283和IFN-λ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、NM-283和NB-DNJ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、NM-283和NB-DNJ。
在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、2-BAIP和IFN-α2a。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、2-BAIP和IFN-α2a。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、2-BAIP和IFN-α2b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、2-BAIP和IFN-α2b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、2-BAIP和IFN-αcon-1。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、2-BAIP和IFN-αcon-1。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、2-BAIP和IFN-α-n3。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、2-BAIP和IFN-α-n3。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、2-BAIP和IFN-β。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、2-BAIP和IFN-β。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、2-BAIP和peg-IFN-α2a。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、2-BAIP和peg-IFN-α2a。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、2-BAIP和peg-IFN-α2b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、2-BAIP和peg-IFN-α2b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、2-BAIP和IFN-ω。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、2-BAIP和IFN-ω。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、2-BAIP和IFN-γ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、2-BAIP和IFN-γ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、2-BAIP和IFN-γ-1b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、2-BAIP和IFN-γ-1b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、2-BAIP和IFN-λ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、2-BAIP和IFN-λ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、2-BAIP和NB-DNJ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、2-BAIP和NB-DNJ。
在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、IFN-2a和IFN-α2b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、IFN-α2a和IFN-α2b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、IFN-α2a和IFN-αcon-1。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、IFN-α2a和IFN-αcon-1。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、IFN-α2a和IFN-α-n3。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、IFN-α2a和IFN-α-n3。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、IFN-α2a和IFN-β。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、IFN-α2a和IFN-β。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、IFN-α2a和peg-IFN-α2a。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、IFN-α2a和peg-IFN-α2a。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、IFN-α2a和peg-IFN-α2b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、IFN-α2a和peg-IFN-α2b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、IFN-α2a和IFN-ω。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、IFN-α2a和IFN-ω。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、IFN-α2a和IFN-γ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、IFN-α2a和IFN-γ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、IFN-α2a和IFN-γ-1b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、IFN-α2a和IFN-γ-1b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、IFN-α2a和IFN-λ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、IFN-α2a和IFN-λ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、IFN-α2a和NB-DNJ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、IFN-α2a和NB-DNJ。
在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、IFN-α2b和IFN-αcon-1。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、IFN-α2b和IFN-αcon-1。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、IFN-α2b和IFN-α-n3。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、IFN-α2b和IFN-α-n3。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、IFN-α2b和IFN-β。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、IFN-α2b和IFN-β。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、IFN-α2b和peg-IFN-α2a。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、IFN-α2b和peg-IFN-α2a。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、IFN-α2b和peg-IFN-α2b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、IFN-α2b和peg-IFN-α2b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、IFN-α2b和IFN-ω。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、IFN-α2b和IFN-ω。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、IFN-α2b和IFN-γ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、IFN-α2b和IFN-γ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、IFN-α2b和IFN-γ-1b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、IFN-α2b和IFN-γ-1b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、IFN-α2b和IFN-λ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、IFN-α2b和IFN-λ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、IFN-α2b和NB-DNJ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、IFN-α2b和NB-DNJ。
在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、IFN-αcon-1和IFN-α-n3。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、IFN-αcon-1和IFN-α-n3。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、IFN-αcon-1和IFN-β。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、IFN-αcon-1和IFN-β。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、IFN-αcon-1和peg-IFN-α2a。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、IFN-αcon-1和peg-IFN-α2a。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、IFN-αcon-1和peg-IFN-α2b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、IFN-αcon-1和peg-IFN-α2b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、IFN-αcon-1和IFN-ω。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、IFN-αcon-1和IFN-ω。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、IFN-αcon-1和IFN-γ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、IFN-αcon-1和IFN-γ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、IFN-αcon-1和IFN-γ-1b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、IFN-αcon-1和IFN-γ-1b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、IFN-αcon-1和IFN-λ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、IFN-αcon-1和IFN-λ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、IFN-αcon-1和NB-DNJ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、IFN-αcon-1和NB-DNJ。
在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、IFN-α-n3和IFN-β。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、IFN-α-n3和IFN-β。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、IFN-α-n3和peg-IFN-α2a。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、IFN-α-n3和peg-IFN-α2a。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、IFN-α-n3和peg-IFN-α2b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、IFN-α-n3和peg-IFN-α2b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、IFN-α-n3和IFN-ω。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、IFN-α-n3和IFN-ω。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、IFN-α-n3和IFN-γ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、IFN-α-n3和IFN-γ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、IFN-α-n3和IFN-γ-1b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、IFN-α-n3和IFN-γ-1b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、IFN-α-n3和IFN-λ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、IFN-α-n3和IFN-λ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、IFN-α-n3和NB-DNJ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、IFN-α-n3和NB-DNJ。
在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、IFN-β和peg-IFN-α2a。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、IFN-β和peg-IFN-α2a。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、IFN-β和peg-IFN-α2b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、IFN-β和peg-IFN-α2b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、IFN-β和IFN-ω。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、IFN-β和IFN-ω。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、IFN-β和IFN-γ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、IFN-β和IFN-γ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、IFN-β和IFN-γ-1b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、IFN-β和IFN-γ-1b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、IFN-β和IFN-λ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、IFN-β和IFN-λ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、IFN-β和NB-DNJ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、IFN-β和NB-DNJ。
在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、peg-IFN-α2a和peg-IFN-α2b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、peg-IFN-α2a和peg-IFN-α2b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、peg-IFN-α2a和IFN-ω。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、peg-IFN-α2a和IFN-ω。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、peg-IFN-α2a和IFN-γ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、peg-IFN-α2a和IFN-γ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、peg-IFN-α2a和IFN-γ-1b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、peg-IFN-α2a和IFN-γ-1b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、peg-IFN-α2a和IFN-λ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、peg-IFN-α2a和IFN-λ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、peg-IFN-α2a和NB-DNJ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、peg-IFN-α2a和NB-DNJ。
在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、peg-IFN-α2b和IFN-ω。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、peg-IFN-α2b和IFN-ω。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、peg-IFN-α2b和IFN-γ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、peg-IFN-α2b和IFN-γ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、peg-IFN-α2b和IFN-γ-1b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、peg-IFN-α2b和IFN-γ-1b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、peg-IFN-α2b和IFN-λ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、peg-IFN-α2b和IFN-λ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、peg-IFN-α2b和NB-DNJ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、peg-IFN-α2b和NB-DNJ。
在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、IFN-ω和IFN-γ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、IFN-ω和IFN-γ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、IFN-ω和IFN-γ-1b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、IFN-ω和IFN-γ-1b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、IFN-ω和IFN-λ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、IFN-ω和IFN-λ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、IFN-ω和NB-DNJ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、IFN-ω和NB-DNJ。
在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、IFN-γ和IFN-γ-1b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、IFN-γ和IFN-γ-1b。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、IFN-γ和IFN-λ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、IFN-γ和IFN-λ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、IFN-γ和NB-DNJ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、IFN-γ和NB-DNJ。
在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、IFN-γ-1b和IFN-λ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、IFN-γ-1b和IFN-λ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、IFN-γ-1b和NB-DNJ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、IFN-γ-1b和NB-DNJ。
在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、IFN-λ和NB-DNJ。在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、IFN-λ和NB-DNJ。
在某些实施方案中，可以同时给予彼此在相同的药学上可接受的载体中的化合物的联合用药或分别，(但同时)给予它们。在其它实施方案中，可以依次给予，并按照任意顺序或组合依次给予所述的葡糖苷酶抑制剂和辅助治疗剂。
本文披露的化合物的具体联合用药中的任意种可以具有协同作用并且可以用于治疗黄病毒科感染的方法中。
在某些实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、干扰素-α2a和直接改变黄病毒科复制的活性剂，其中通过口服给予西戈斯韦和直接改变黄病毒科复制的活性剂并且通过注射，诸如皮下注射给予干扰素-α2a。在其它实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、干扰素-α2b和直接改变黄病毒科复制的活性剂，其中通过口服给予西戈斯韦和直接改变黄病毒科复制的活性剂并且通过注射，诸如皮下注射给予干扰素-α2b。在其它实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、peginterferon-α2a和直接改变黄病毒科复制的活性剂，其中通过口服给予西戈斯韦和直接改变黄病毒科复制的活性剂和peginterferon-α2a通过注射，诸如皮下注射给予。在其它实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、peginterferon-α2b和直接改变黄病毒科复制的活性剂，其中通过口服给予西戈斯韦和直接改变黄病毒科复制的活性剂并且通过注射，诸如皮下注射给予peginterferon-α2b。在其它实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、干扰素-αcon-1和直接改变黄病毒科复制的活性剂，其中通过口服给予西戈斯韦和直接改变黄病毒科复制的活性剂并且通过注射，诸如皮下注射给予干扰素-αcon-1。在其它实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、干扰素-α-n3和直接改变黄病毒科复制的活性剂，其中通过口服给予西戈斯韦和直接改变黄病毒科复制的活性剂并且通过注射，诸如皮下注射给予干扰素-α-n3。在其它实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、干扰素-ω和直接改变黄病毒科复制的活性剂，其中通过口服给予西戈斯韦和直接改变黄病毒科复制的活性剂并且通过注射，诸如皮下注射给予干扰素-ω。在其它实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、干扰素-β和直接改变黄病毒科复制的活性剂，其中通过口服给予西戈斯韦和直接改变黄病毒科复制的活性剂并且通过注射，诸如皮下注射给予干扰素-β。在另一个实施方案中，所述的联合用药包含西戈斯韦、干扰素-γ和直接改变黄病毒科复制的活性剂，其中通过口服给予西戈斯韦和直接改变黄病毒科复制的活性剂并且通过注射，诸如皮下注射给予干扰素-γ。在这些实施方案中的任意种中，直接改变黄病毒科复制的活性剂为RdRp抑制剂，诸如valopicitabine(NM283)或2′-C-甲基胞苷(NM107)。在这些实施方案中的任意种中，直接改变黄病毒科复制的活性剂为非-核苷类似物，诸如2-BAIP。在这些实施方案中的任意种中，可以同时，依次或按照任意顺序或其组合给予所述化合物的联合用药。
在某些实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、干扰素-α2a和直接改变黄病毒科复制的活性剂，其中通过口服给予粟精胺和直接改变黄病毒科复制的活性剂并且通过注射，诸如皮下注射给予干扰素-α2a。在其它实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、干扰素-α2b和直接改变黄病毒科复制的活性剂，其中通过口服给予粟精胺和直接改变黄病毒科复制的活性剂并且通过注射，诸如皮下注射给予干扰素-α2b。在其它实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、peginterferon-α2a和直接改变黄病毒科复制的活性剂，其中通过口服给予粟精胺和直接改变黄病毒科复制的活性剂并且通过注射，诸如皮下注射给予peginterferon-α2a。在其它实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、peginterferon-α2b和直接改变黄病毒科复制的活性剂，其中通过口服给予粟精胺和直接改变黄病毒科复制的活性剂并且通过注射，诸如皮下注射给予peginterferon-α2b。在其它实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、干扰素-αcon-1和直接改变黄病毒科复制的活性剂，其中通过口服给予粟精胺和直接改变黄病毒科复制的活性剂并且通过注射，诸如皮下注射给予干扰素-αcon-1。在其它实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、干扰素-α-n3和直接改变黄病毒科复制的活性剂，其中通过口服给予粟精胺和直接改变黄病毒科复制的活性剂并且通过注射，诸如皮下注射给予干扰素-α-n3。在其它实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、干扰素-ω和直接改变黄病毒科复制的活性剂，其中通过口服给予粟精胺和直接改变黄病毒科复制的活性剂并且通过注射，诸如皮下注射给予干扰素-ω。在其它实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、干扰素-β和直接改变黄病毒科复制的活性剂，其中通过口服给予粟精胺和直接改变黄病毒科复制的活性剂并且通过注射，诸如皮下注射给予干扰素-β。在另一个实施方案中，所述的联合用药包含粟精胺、干扰素-γ和直接改变黄病毒科复制的活性剂，其中通过口服给予粟精胺和直接改变黄病毒科复制的活性剂并且通过注射，诸如皮下注射给予干扰素-γ。在这些实施方案中的任意种中，直接改变黄病毒科复制的活性剂为RdRp抑制剂，诸如valopicitabine(NM283)或2′-C-甲基胞苷(NM107)。在这些实施方案中的任意种中，直接改变黄病毒科复制的活性剂为非-核苷类似物，诸如2-BAIP。在这些实施方案中的任意种中，可以同时，依次或按照任意顺序或其组合给予所述化合物的联合用药。
可以通过本文所述和本领域技术人员通常实施的方法进行用于测定粟精胺或其衍生物和上述各辅助治疗剂的作用，即，例如，改变免疫应答、调节黄病毒科感染症状和作用或改变病毒复制(优选逆向影响、预防、减少或抑制病毒复制)的方法。
如本文所述，BVDV为本领域公认的用于细胞培养物模型的代用病毒(Buckwold等，文献同上；Stuyver等，文献同上；Whitby等，文献同上)。因此，使用牛细胞系，诸如牛肾细胞(MDBK)和牛鼻甲(BT)细胞，应用BVDV的致细胞病变菌株，诸如导致感染细胞细胞溶解的NADL菌株(购自ATCC，Manassas，VA)进行测定。可以为测定是单独的粟精胺或其衍生物，还是与另一种化合物、活性剂或分子联用可以用于治疗黄病毒科感染或抑制或预防黄病毒科感染进行的典型测定包括病毒噬斑形成测定、细胞毒性测定(例如，参见Buckwold等，Antimicrob.Agents Chemother.47：2293，2003；Whitby等，文献同上)、病毒释放测定、细胞增殖测定(例如非放射性MTS/PMS或MTT测定或放射性胸苷掺入测定)和本文所述和本领域技术人员公知和实施的其它测定法。可以如本文所述分析在分析将粟精胺与另一种化合物联用时来自这些测定的数据，诸如获自细胞毒性测定的数据，以便确定活性剂是否发生相互作用以提供加和的作用或协同作用。
本说明书还涉及包含葡糖苷酶抑制剂(例如粟精胺或其衍生物、诸如西戈斯韦)与一种或多种用于治疗或预防病毒感染(例如HCV)的化合物的联合的药物组合物。本说明书进一步涉及治疗或预防病毒感染的方法，通过对受试者给予粟精胺或其衍生物与至少两种其它活性剂或化合物的联合用药来进行，其中如本文所述以足以治疗或预防病毒感染的剂量给予各成分。粟精胺或其衍生物和这类化合物的联合用药或这些化合物混合物在用于本文所述的方法中时优选为药物组合物的组成部分。可以通过对受试者依次给予各化合物给予粟精胺或其衍生物(例如西戈斯韦)与本文所述的另一种化合物的联合用药，即可以在给予另一种化合物前，给予另一种化合物之后给予粟精胺或其衍生物；或者，可以同时给予粟精胺或其衍生物(诸如西戈斯韦)与另一种化合物。为了依次或同时给予本文所述联合用药中的各化合物(分子、活性剂)，可以根据化合物的特性，通过部分在本文中所述和确定的相同或不同途径，以相同或不同的制剂给予各化合物。
在一个实施方案中，本发明包含用于本文所述治疗方法的药物组合物，其包含如本文所述的葡糖苷酶抑制剂(或其药学上可接受的盐)与辅助疗法和药学上可接受的载体、媒介物或赋形剂和任选的添加剂(例如一种或多种粘合剂、着色剂、干燥剂、稳定剂、稀释剂、防腐剂或其它辅助治疗剂)。可以按照本领域中制备用于对受试者给药的这些化合物公知和实施的方法制备包含干扰素-α和利巴韦林的药物组合物。
如本文所述，粟精胺或其衍生物(例如西戈斯韦)和两种或多种辅助治疗化合物或活性剂可以以有效治疗或预防黄病毒感染，诸如HCV感染的用量包括在药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂中以便对有此需要的受试者给药。在一个典型的实施方案中，本说明书提供了在药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂中的葡糖苷酶抑制剂(例如粟精胺或其衍生物、西戈斯韦)、改变免疫功能的活性剂(例如干扰素-α或聚乙二醇化干扰素-α)和改变黄病毒科复制的活性剂(例如利巴韦林或valopicitabine或2′-C-甲基胞苷)。
在某些实施方案中，用于本文所述适应症的活性化合物剂量可以在约0.01mg/kg-约300mg/kg/天；优选约0.1mg/kg-约100mg/kg/天，更优选约0.5mg/kg-约25mg/kg接受者体重/天。在某些实施方案中，局部用剂量可以为在合适的载体中约0.01-3％wt/wt。可以按照已知和本领域中实施的给药方案给予在与粟精胺或其衍生物联合给药时的干扰素-α或利巴韦林(例如，参见Matthews等，文献同上；Foster，Semin.Liver Dis.24Suppl 2：97，2004；Craxi等，Semin.Liver Dis.23 Suppl 1：35，2003)。
此外，在与粟精胺或其衍生物一起给药时，可以远离标准调整一种或多种辅助治疗剂的剂量。例如，由于细胞毒性降低并且在将干扰素和/或利巴韦林与粟精胺或西戈斯韦联用时观察到协同作用(即产生了亚治疗剂量作用)，所以可以调整剂量以便可以安全地给予更多的IFN-α或利巴韦林。本文所用的″亚治疗剂量作用″意指与为治疗黄病毒科感染单独给予的治疗化合物的常用或典型剂量相同或高于它，但未表现出不良副作用增加乃至降低副作用或相关的不良反应(即模拟在亚治疗水平下观察到的作用)的治疗化合物(例如葡糖苷酶抑制剂、改变免疫功能的活性剂、直接或间接改变黄病毒科复制的活性剂或其任意的组合)的剂量。也可以调整粟精胺或其衍生物(例如西戈斯韦)。
或者，可以使用低(亚治疗)剂量的IFN-α或利巴韦林或将它们两者与粟精胺或西戈斯韦联用，其中有效性与高剂量的单独或共同给予的IFN-α或利巴韦林相同，但毒性较低。本文所用的″亚治疗剂量″意指低于为治疗黄病毒科感染单独给予治疗化合物时的常用或典型剂量的治疗化合物(例如葡糖苷酶抑制剂、改变免疫功能的活性剂、直接或间接改变黄病毒科复制的活性剂或其任意的组合)。
优选给予活性组分以便达到约0.001μM-约30μM且优选约0.01μM-约10μM的峰血浆浓度。例如，可以通过静脉内注射任选在盐水或其它含水介质中的粟精胺或其衍生物制剂的组合物来实现这一目的。在另一种实施方案中，将粟精胺作为大丸剂给药。可以通过口服或肌内、腹膜内、静脉内、皮下、透皮、通过气溶胶或通过吸入、直肠、阴道或局部(包括口含和舌下给药)给药用于本文所述治疗方法的粟精胺或其衍生物(例如西戈斯韦)和其它化合物。
活性化合物在药物组合物中的浓度依赖于该化合物的吸收、分布、失活(例如代谢)和排泄率以及本领域技术人员公知的其它因素。剂量也根据所缓解疾病的严重程度的不同而改变。可以根据受试者个体需要和给予或监控组合物给药的人员的职业判断随时间的推移调整具体的剂量方案(包括给药剂量的频率)。剂量水平和方案依赖于各种因素，包括年龄、体重、膳食、性别、一般健康状况、医疗史(包括受试者是否共同感染了另一种病毒，诸如HBV或HIV)。在某些实施方案中，单剂量可能足以获得所需的临床效果。因此，本文所述的浓度范围仅为典型的情况并且并不限制请求保护的组合物的范围或实施。例如，可以即刻给予活性组分或可以将其分成许多小剂量在不同时间间隔给药。
用作本文所述药物的组合物可以为各部分组成的试剂盒形式。该试剂盒可以包含：例如，葡糖苷酶抑制剂(例如粟精胺或其衍生物、诸如西戈斯韦)作为单位剂型的组合物中的一种成分，并且包含改变免疫功能的活性剂{例如干扰素或聚乙二醇化干扰素}且包含改变病毒复制的活性剂(诸如利巴韦林或valopicitabine或2′-C-甲基胞苷)，它们各自在相应的单位剂型中。该试剂盒可以包括使用的说明书和其它相关信息以及管理局需要的信息。
口服组合物一般包括惰性稀释剂或可食用的载体。可以将它们包封在明胶胶囊中，压制成片剂或制成其它口服剂型。就口服治疗给药目的而言，可以将活性化合物掺入赋形剂并且以片剂、药片或胶囊的形式使用。可以包括药学上相容性的粘合剂和/佐剂物质作为组合物的组成部分。片剂、丸剂、胶囊、药片等可以包含类似性质的下列组分或化合物中的任意种：粘合剂，诸如微晶纤维素、西黄蓍胶或明胶；赋形剂，诸如淀粉或乳糖；崩解剂，诸如藻酸、Primogel或玉米淀粉；润滑剂，诸如硬脂酸镁或Sterores；助流剂，诸如胶态二氧化硅；增甜剂，诸如蔗糖或糖精；或矫味剂，诸如薄荷、水杨酸甲酯或橙香料。当单位剂型为胶囊时，它除包含上述类型的物质外，还可以包含液体载体，诸如脂肪油。此外，单位剂型可以包含改变该剂型物理形式的各种其它物质，例如，糖、虫胶或肠溶衣剂涂层。一般参见″Remington′sPharmaceutical Sciences，″Mack Publishing Co.，Easton，PA。
可以将活性化合物或其药学上可接受的盐或衍生物作为酏剂、混悬液、糖浆剂、糯米纸囊剂、口香糖等中的成分给予。糖浆剂除包含活性化合物外，还可以包含蔗糖作为增甜剂和某些防腐剂、染料和着色剂和矫味剂。
本文所述的药物组合物优选包括药学上可接受的媒介物、载体、稀释剂或赋形剂中的至少一种以及在本文中详细描述的粟精胺或其衍生物和其它成分或活性组分(诸如其它抗-HCV药)，包括改变病毒复制或改变免疫功能或应答的活性剂或为抗-肝DNA病毒科(例如抗-HBV)的活性剂。本发明的组合物具有各种活性组分，诸如粟精胺或其衍生物或其药学上可接受的盐或与一种或多种止泻药、抗生素、抗真菌药、抗炎剂或本文所述的其它抗病毒化合物(包括抗胃肠运动剂、干扰素、细胞因子、核苷类似物等)的混合物或组合。
适用于组合物的药学上可接受的载体可以包括：例如，增稠剂、缓冲剂、溶剂、保湿剂、防腐剂、螯合剂、佐剂等及其组合。用于治疗应用的药学上可接受的载体为制药领域众所周知的并且如本文所述，且例如在Remington′s Pharmaceutical Sciences，MackPublishing Co.(A.R.Gennaro，ed.，18th Edition，1990)和CRCHandbook of Food，Drug，and Cosmetic Excipients，CRC Press LLC(S.C.Smolinski，ed.，1992)中。
用于非肠道、透皮、皮下或局部施用的溶液或混悬液可以包括下列成分：无菌稀释剂，诸如注射用水、盐溶液、固定油、聚乙二醇类、甘油、丙二醇或其它合成溶剂；抗菌剂，诸如苄醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂，诸如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂，诸如乙二胺四乙酸；缓冲剂，诸如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐和用于调整张力的试剂，诸如氯化钠或葡萄糖。可以将非肠道用制剂包封在由玻璃或塑料制成的安瓿、一次性注射器或多剂量小瓶中。如果通过静脉内给药，那么优选的载体为生理盐水或磷酸缓冲盐水(PBS)或佐剂。典型佐剂为明矾(氢氧化铝，)；磷酸铝；病毒小体，含有和不含脂质A的脂质体，Detox(Ribi/Corixa)；MF59；或其它油和水乳剂类佐剂，诸如纳米乳剂(例如，参见美国专利US5,716,637)和亚微米乳剂(例如，参见美国专利US5,961,970)和弗氏完全和不完全佐剂。在某些实施方案中，药物组合物为无菌的。
在某些实施方案中，使用防止化合物从体内快速消除的载体制备活性化合物，诸如控释制剂，包括植入物和微囊化递送系统。可以使用生物可降解的生物相容性聚合物，诸如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐类、聚乙醇酸、胶原蛋白、聚原酸酯类和聚乳酸。用于制备这类制剂的方法对本领域技术人员而言显而易见。例如，正如本领域技术人员公知的，这些物质中的某些可以商购自Alza Corporation(CA)和GilfordPharmaceuticals(Baltimore，Md.)。
脂质体混悬液也可以为药学上可接受的载体。可以按照本领域技术人员公知的方法制备它们(例如，美国专利US4,522,811；美国专利US 6,320,017；美国专利US5,595,756)。例如，可以通过将合适的脂质(诸如硬脂酰磷脂酰乙醇胺、硬脂酰磷脂酰胆碱、花生酰磷脂酰胆碱(arachadoyl phosphatidylcholine)和胆固醇)溶于随后蒸发的无机溶剂，在容器表面上遗留干燥的脂质薄层薄膜制备脂质体制剂。然后将活性化合物或其一磷酸盐、二磷酸盐或三磷酸盐衍生物的水溶液导入容器。然后用手涡旋该容器以使脂质物质从容器侧面上游离并且分散脂质聚集物，由此形成脂质体混悬液。能够将亲水性化合物，诸如粟精胺或其衍生物，如西戈斯韦加入脂质体的含水的内部。
将本说明书中参照的所有美国专利、美国专利申请公开文献、外国专利、外国专利申请和非专利出版物完整地引入本文作为参考。下列实施例用于解释，而不限定本发明。
实施例
实施例1
病毒从BVDV-感染的MDBK细胞中释放的体外抑制
将Madin-Darby牛肾细胞(MDBK)(美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection)(ATCC)，Manassas，VA；ATCC CCL22)以约2×104个细胞/孔的密度接种在96-孔平板的包含2％热灭活的马血清(HS，Sigma Aldrich)的Dulbecco改进的Eagles培养基(DMEM/F12；Gibco，Ontario，Canada)中。将细胞培养物在37℃，5％CO2下孵育约24小时以便细胞与组织培养板贴壁，此后感染并且用测试化合物处理。用足量的BVDV菌株NADL(ATCC VR-534)的噬斑形成单位(PFUs)感染细胞，将所述的菌株在包含1％HS和1mM MgCl2的无菌磷酸缓冲盐水(PBS)中稀释以便获得所需的感染复数(MOI)(约1个病毒/细胞)，在37℃，5％CO2下孵育约1-2小时且然后用PBS洗涤。然后将感染的细胞悬浮于单独的2％HS或包含不同浓度的测试化合物的细胞生长培养基中且然后在37℃，5％CO2下孵育24小时(即1个周期的BVDV复制)。使用下列测试化合物：(1)西戈斯韦；(2)粟精胺(Phytex，Australia)；(3)利巴韦林(Sigma)；和(4)干扰素-α2b(IFN-α2b；PBL Biomedical Laboratories，Piscataway，NJ)。然后以低速离心包含处理的细胞的96-孔平板以便沉降任何疏松的细胞或碎片，收集上清液并且连续稀释以便感染12-孔平板中的新的细胞单层。
然后用溶于包含2％HS的细胞生长培养基的0.5％琼脂糖覆盖新近感染的细胞单层，在37℃，5％CO2下孵育3-5天且然后使用150μL 5mg/mL 3-(4，5-二甲基-2-噻唑基)-2，5-二苯基-2H-四唑鎓溴化物溶液(MTT，Sigma-Aldrich)染色约2-3小时。MTT-染色的单层活细胞变成蓝/黑色，而被病毒杀伤的死亡细胞区形成可以计数的噬斑。手工计数病毒噬斑并且测定每种化合物的滴度。使用这些滴度计算每种化合物的EC50、EC90和CC50。EC50和EC90为与未处理的对照组相比分别抑制50％或90％的病毒释放入培养基的化合物浓度。CC50为测试化合物产生的细胞毒性的测量值(在没有病毒感染存在下)并且等于与未处理的细胞相比影响50％处理的细胞存活率的浓度。将数据列在表2中。
表2.病毒释放的抑制(MOI＝1)
化合物 EC50 EC90 CC50 TI＊＊
西戈斯韦 2.0±1.3μM 7.6±2.3μM ＞2000μM ＞1000
粟精胺 19.4±8.3μM 89±21μM ＞2000μM ＞100
干扰素-α2b 8.0±6.8IU*/mL 114±92IU/mL ＞1000IU/mL ＞200
利巴韦林 1.5±1μM 5.7±2.7μM 250μM ～166
*IU＝干扰素单位
**TI为治疗指数(CC50/EC50)
CC50结果表明所有这些测试化合物在接近其EC50或EC90值时均无细胞毒性并且表现出极为有利的治疗指数(即在治疗相关浓度下无细胞毒性)。EC50和EC90值表明测试化合物(西戈斯韦、粟精胺、干扰素、利巴韦林)各自具有直接的抗病毒作用，表明HCV也可以受到西戈斯韦、粟精胺、干扰素和利巴韦林直接抑制。
实施例2
测试化合物对BVDV-诱导的MDBK细胞的致细胞病变性的保护
使用非放射性细胞增殖MTS/PMS测定法进行细胞增殖测定。MTS为3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺基苯基)-2H-四唑鎓(Promega Corporation，Madison，WI))且PMS为吩嗪硫酸甲酯(Sigma Aldrich，St.Louis，MO)。将MDBK细胞以约2×104个细胞/孔的密度接种在96-孔平板中并且在37℃，5％CO2下孵育约24小时以便细胞与组织培养板贴壁，此后感染并且用测试化合物处理。用足量的在包含具有(PFU)的1％HS和1mM MgCl2的无菌磷酸缓冲盐水(PBS)中稀释的BVDV的噬斑形成单位感染细胞单层以便获得所需的MOI(约0.001-约0.1个病毒/细胞)，在37℃，5％CO2下孵育约1-约2小时且然后用PBS洗涤。将感染和洗涤的细胞悬浮于具有2％HS的细胞生长培养基或具有包含不同浓度的测试化合物的2％HS的细胞生长培养基中。还将未感染的细胞用作额外的对照组。所用测试化合物包括金刚烷胺、西戈斯韦、粟精胺、NM-107、干扰素α-2b、利巴韦林，peginterferonα-2a、peginterferonα-2b、N-丁基脱氧野尻霉素(NB-DNJ)、干扰素αcon-1、干扰素α-n3、干扰素ω和非-核苷化合物(L)-2-[(1-苄基-1H-吲哚-6-羰基)-氨基]-3-(1H-吲哚-3-基)-丙酸(2-BAIP)。对照组和处理组细胞按照一式三份进行并且在37℃，5％CO2下孵育约3-约4天。
在处理后，将细胞以333μg/ml MTS和25μM PMS的终浓度悬浮于MTS/PMS溶液中，在37℃下，5％CO2气体加湿中孵育1-4小时且然后使用分光光度计平板读出器测定490nm(OD490)处的吸收度。测定一式三份孔的各组的平均吸收度。将抗病毒活性(即BVDV致细胞病变减少)测定为相对于未感染和感染的非药物处理的细胞的转化率之差的MTS转化率。如下计算与抗病毒活性相关的测试化合物的每种浓度的致细胞病变作用(CPE)减少：
％CPE减少＝[(D-ND)/(NI-ND)]×100，
其中D为药物处理的细胞的吸收度；ND为非药物处理的感染细胞的吸收度；且NI为未感染细胞的吸收度。根据处理和感染细胞计算EC50，它代表防止50％细胞发生BVDV-诱导的致细胞病变性(50％CPE减少)的药物浓度。根据未处理和未感染细胞计算CC50，其为药物细胞毒性的测量值并且等于影响50％MDBK细胞存活率的药物浓度。将数据列在表3中。
测试化合物对BVDV-诱导的MDBK细胞的致细胞病变性和药物细胞毒性的预防
*MOI＝感染复数
+IU＝干扰素单位
NB-DNJ＝N-丁基脱氧野尻霉素
‖(L)-2-[(1-苄基-1H-吲哚-6-羰基)-氨基]-3-(1H-吲哚-3-基)-丙酸
CC50结果表明所有这些测试化合物在接近其EC50值与TIs(治疗指数)大于约10时均无细胞毒性(即在治疗相关浓度下可能无细胞毒性)，但除NB-DNJ和可能金刚烷胺外。EC50值表明至少三种测试化合物2-BAIP、干扰素-γ和干扰素-β-1a在测试浓度下无法防止MDBK细胞发生BVDV-诱导的致细胞病变性。其余所列化合物可以防止细胞发生病毒诱导的致细胞病变性，这表明HCV可以受到化合物，诸如西戈斯韦、粟精胺、干扰素-α2b、peginterferon-α2b、peginterferon-α2a、NM-107、利巴韦林等直接抑制。
实施例3
粟精胺或西戈斯韦与其它药物的联合用药的协同作用检查板手段
使用BVDV感染的MDBK细胞在如实施例2中所述的致细胞病变作用(CPE)抑制测定中进行双重组合测定。通过生成在微量滴定板的细胞单层上使用的″检查板″药物浓度测定双重药物组合，其中将一种药物水平滴定，而将另一种药物垂直滴定，并且至少将各双重组合测试两次。使用MacSynergyTM II软件程序(由Dr.Mark Prichard赠送，University of Alabama，Tuscaloosa，AL)分析合并的药物功效数据，以便确定所述的组合是否表现出协同作用活性(例如，参见Ouzounov等，文献同上；Buckwold等，Antimicrob.Agents Chemother.47：2293，2003)。
表4.用于双重组合治疗的浓度范围
将每种药物对致细胞病变作用(CPE)的抑制定为EC50，它表示提供50％对BVDV-诱导的致细胞病变性的保护作用的测试化合物浓度。将得自第一种测试化合物与第二种测试化合物联合的EC50值对第二种化合物的相应浓度绘图以便生成等效线(剂量对)。将所有的等效线绘制成等效线图，以便确定联用测试化合物存在的协同作用、拮抗作用或加和作用。在两种测试化合物(例如粟精胺和干扰素或粟精胺和利巴韦林或西戈斯韦和NM-107)各自单一疗法EC50值之间绘制直线。连接单一法EC50值的线表示两种化合物的理论加和作用。在加和线下绘制的联合疗法的等效线表示联用两种测试化合物时的协同作用(即该联合用药表现出优于化合物单独具有的活性)，而高于加和线的等效线表示拮抗作用(即该联合用药表现出低于化合物单独具有的活性)。参见附图2，4，6，8和13。
除生成等效线图外，还将检查板数据输入MacSynergyTM II软件以便对测试的双重组合图示观察到的协同(或加和或拮抗)作用体积。简言之，从实验测定的值中扣除计算的加和的相互作用以便揭示出观察到协同作用(由％正值表示)或拮抗作用(由％负值表示)的相应药物浓度。观察到的正值百分比的体积越大，则两种化合物之间的协同作用越大。更具体地说，认为小于约25μM2％或μM(IU/ml)％的值无意义；认为约25-50μM2％或μM(IU/ml)％的值最小，但有意义；认为50-100μM2％或μM(IU/ml)％的值表示中等的协同作用(可以表示体内显著的协同作用)；并且认为大于约100μM2％或μM(IU/ml)％的值表示强协同作用(能够表示在体内的显著协同作用)。相反，任何约为或小于-25μM2％或μM(IU/ml)％的值表示显著的拮抗作用。表5中列出的数据表示具有95％置信度的协同作用和拮抗作用体积。使用Bonferroni调整将置信水平计算为对数据进行统计学评价的保守显著性估计值。
表5.BVDV感染细胞的双重组合治疗的功效体积
粟精胺或西戈斯韦与干扰素-α2b的联合用药在所有测试浓度组合下的功效上均对BVDV-感染的MDBK细胞的显示出强协同作用(表5，分别为第1和7行)并且无显著的拮抗作用(即所有值均在0和-25μM(IU/mL)％之间)。协同作用峰位于25μM-33μM粟精胺或西戈斯韦浓度之间和10IU/mL干扰素-α2b浓度下(分别参见附图1和3)。使用等效线图分析组合数据证实对粟精胺或西戈斯韦与干扰素-α2b的联合用药观察到强协同作用。西戈斯韦与干扰素之间观察到的协同作用与本领域中已知的一致(例如，参见美国专利公开号US2004/0147549，2004年7月29日)。例如，在10IU/mL干扰素-α2b下，粟精胺的EC50被减少了7-倍以上，而如果相互作用仅为加和作用，那么预计减少2-倍以下(分别参见附图2和4)。
粟精胺与利巴韦林的联合用药对BVDV-感染的MDBK细胞在功效上显示出中等协同作用(表5，第2行)。协同作用峰位于10μM-50μM粟精胺和1μM-6μM利巴韦林浓度之间，其中最大协同作用百分比达到22％-31％(参见附图5)。在化合物的极高浓度下观察到了功效中的拮抗作用(参见附图5)-例如，拮抗峰出现在300μM粟精胺浓度和30μM利巴韦林浓度处，它们不可能与体内相关(即在治疗上)。达到的最大拮抗百分比约为-40％。粟精胺与利巴韦林联合用药的等效线图显示在这些化合物之间存在中等的协同相互作用。例如，在约2μM利巴韦林下，粟精胺的EC50被减少了约2-到3-倍，而如果相互作用仅为加和作用，那么预计减少2倍以下(参见附图6)。
西戈斯韦与利巴韦林的联合用药对BVDV-感染的MDBK细胞在功效上显示出中等协同作用(表5，第8行)。在这些化合物的极高浓度下观察到了功效中的拮抗作用-例如，拮抗峰出现在20μM西戈斯韦浓度和20μM利巴韦林浓度处(参见附图7)，它们不可能与体内相关(即在治疗上)。西戈斯韦与利巴韦林联合用药的等效线图显示在这些化合物之间存在中等的协同相互作用。例如，在2μM利巴韦林下，西戈斯韦的EC50被减少了约3倍，而如果相互作用仅为加和作用，那么预计仅减少约2倍(参见附图8)。
粟精胺与NM-107的联合用药仅表现出了中等的协同作用，而西戈斯韦与NM-107的联合用药对BVDV-感染的MDBK细胞在功效上显示出强协同作用(分别参见表5，第3和9行)。粟精胺或西戈斯韦与NM-107的联合用药在功效上的中等拮抗作用在两种药物的较高浓度下开始出现(分别参见表4，第3和9行)。拮抗峰在NM-107浓度大于约20μM且粟精胺浓度大于约100μM或西戈斯韦浓度大于约60μM时开始出现(参见附图9和11)。使用等效线图对粟精胺与NM-107联合用药揭示出这些药物之间的相互作用可能仅为轻度协同的加和作用(参见附图10)。相反，使用等效线图分析组合数据证实对西戈斯韦与NM-107的联合用药观察到了强协同作用。例如，在2.2μM NM-107下，西戈斯韦的EC50被减少了约8倍以上，而如果相互作用仅为加和作用，那么预计仅减少约3倍(参见附图12)。
粟精胺与金刚烷胺或NB-DNJ的联合用药对BVDV-感染的MDBK细胞在功效上表现出中等，但并不显著的协同作用(分别参见表5，第4和5行)。粟精胺在与金刚烷胺或NB-DNJ联用时在该联合用药的任何测试浓度下均未观察到显著的拮抗作用(分别参见表5，第4和5行)。相反，西戈斯韦与金刚烷胺或NB-DNJ的联合用药对BVDV-感染的MDBK细胞在功效上表现出强协同作用(分别参见表5，第10和11行)。较高浓度的西戈斯韦和金刚烷胺表现出中等拮抗相互作用(西戈斯韦浓度大于约20μM且金刚烷胺浓度大于约500μM；数据未显示和表4，第10行)。然而，当将西戈斯韦和NB-DNJ以任意该联合用药测试浓度下联用时，未观察到显著的拮抗作用(参见表5，第11行)。最终，粟精胺或西戈斯韦与非-核苷抑制剂2-BAIP的联合用药未表现出显著的协同作用(分别参见表5，第6和12行)。粟精胺与2-BAIP的联合用药未表现出显著的拮抗作用(参见表5，第6行)，而西戈斯韦与2-BAIP的联合用药表现出中等拮抗作用(参见表5，第12行)。
干扰素-α2b与利巴韦林的联合用药对BVDV-感染的MDBK细胞在功效上表现中等协同作用(参见表5，第13行)。Buckwold等，2003在文献和其中的讨论中报导了类似体积的协同作用。在高药物浓度下也观察到了功效上的拮抗作用，其中干扰素-α2b在大于约50IU/mL的浓度并且利巴韦林在大于约20μM的浓度下出现拮抗峰(附图13)。来源于干扰素-α2b与利巴韦林的联合用药的等效线图进一步证实在干扰素-α2b与利巴韦林之间存在协同作用。例如，在约10IU/mL干扰素-α2b下，利巴韦林的EC50被减少约达6倍，而如果相互作用为加和作用，那么预计减少约2倍(参见附图14)。
总之，与西戈斯韦的双重组合趋向于表现出强协同相互作用(协同作用体积大于约100(IU/mL)μM％)，而与粟精胺的双重组合趋向于表现出更为中等的协同作用(25-100(IU/mL)μM％)。因此，与粟精胺和其衍生物，诸如西戈斯韦的各种新的和已知的双重组合对黄病毒科感染令人意外地比基于这些单独化合物的功效更为有效。
实施例4
粟精胺或西戈斯韦与干扰素联合的协同作用
固定比例手段
将实施例2的致细胞病变作用(CPE)的抑制测定用于分析西戈斯韦或粟精胺与干扰素-α2b(PBL Biomedical Laboratories，Piscataway，NJ)、Peginterferonα-2a(International RxSpecialty Company，Bastrop，TX)、Peginterferon α-2b(International Rx Specialty Company，Bastrop，TX)、干扰素λ(PeproTech，Rocky Hill，NJ)、干扰素αcon-1(International RxSpecialty Company，Bastrop，TX)、干扰素α-n3(International RxSpecialty Company，Bastrop，TX)或干扰素ω(CedarlaneLaboratories，Hornby，ON)联用的相互作用。以固定摩尔比合并这些化合物并且在细胞生长培养基中顺序稀释2倍，以便检验6种固定比例的联合用药，包括那些与以亚最佳(例如亚治疗)水平使用一种测试化合物的联合用药具有等效抗病毒剂量的联合用药。在这些联合疗法中平行进行相应的单一疗法(表3中提供了单一疗法治疗的EC50值)。
对联用的测试化合物治疗预防MDBK细胞中BVDV-诱导的致细胞病变作用(MOI为0.01)进行定量并且使用CalcuSynTM程序(Version 2.0，Biosoft，Inc.，UK)分析测试化合物相互作用(协同、加和或拮抗)，以便生成组合指数(CI)值，其中CI值为1等于加和性。使用下列标准：CI值高于1.45表示强拮抗作用；CI值在1.2-1.45表示中等拮抗作用；值在1.10-1.20表示轻度拮抗作用；值在0.90-1.10为接近加和作用；值在0.85-0.90表示轻度协同作用；值在0.7-0.85表示中等协同作用；值在0.30-0.70表示良好协同作用；值在0.10-0.30表示强协同作用；且值低于0.10表示极强的协同作用。将这些值绘制在受影响的病毒级分与组合指数图上(Fa-CI图)，它们最常用于测定药物相互作用，因为Monte Carlo分析提供了具有统计学意义的测量值(即这些图具有三种线，它们表示中位值(中间线)和±1.96标准偏差(上部和下部线))。例如，参见附图15-18。
此外，生成等效线图，它提供了药物联用相互作用的极佳二次测量值。就这些图而言，将联合疗法的EC50、EC75和EC90值展示为单点。属于加和线(即作为单一疗法的各药物的EC值之间拉出的线)右侧(上)的值表示拮抗作用，属于加和线左侧(下)的值表示协同作用并且在线上或接近该线的值表示加和作用。
表6.各种西戈斯韦或粟精胺双重组合的组合指数(CIs)
化合物 比例 CI(EC50) CI(EC75) CI(EC90)
西戈斯韦+干扰素-α-con-1 25∶200 0.54 0.42 0.33
西戈斯韦+干扰素-α-con-1 25∶400 0.66 0.53 0.43
西戈斯韦+干扰素-α-n3 25∶40 0.57 0.57 0.59
西戈斯韦+干扰素-α-n3 25∶80 0.82 0.72 0.64
西戈斯韦+干扰素-λ1 20∶250 0.99 1.23 1.53
西戈斯韦+干扰素-λ1 25∶400 0.61 0.58 0.57
西戈斯韦+干扰素-λ1 25∶800 0.70 0.62 0.57
西戈斯韦+干扰素ω 25∶1200 0.70 0.65 0.61
西戈斯韦+干扰素ω 25∶600 0.54 0.55 0.57
西戈斯韦+Peg-干扰素-α2a 25∶20 0.87 0.86 0.85
西戈斯韦+Peg-干扰素-α2a 25∶100 0.94 0.67 0.49
西戈斯韦+Peg-干扰素-α2a 25∶40 0.56 0.42 0.32
西戈斯韦+Peg-干扰素-α2a 20∶200 1.00 0.84 0.70
西戈斯韦+Peg-干扰素-α2b 25∶20 0.60 0.50 0.42
西戈斯韦+Peg-干扰素-α2b 25∶20 0.70 0.59 0.52
西戈斯韦+Peg-干扰素-α2b 25∶40 0.55 0.38 0.26
西戈斯韦+Peg-干扰素-α2b 25∶40 0.69 0.58 0.50
西戈斯韦+干扰素-α2b 25∶30 0.56 0.56 0.56
西戈斯韦+干扰素-α2b 25∶60 0.67 0.67 0.68
粟精胺+Peg-干扰素α2a 300∶100 0.57 0.49 0.43
粟精胺+Peg-干扰素α2a 300∶200 0.71 0.64 0.57
正如从表6和附图15-18中表明的，西戈斯韦与不同干扰素(I型和其它)的联合用药在大部分比例下表现出可测定的协同作用。
实施例5
粟精胺或西戈斯韦与NM-107和利巴韦林的协同作用
固定比例手段
将实施例2的致细胞病变作用(CPE)的抑制测定用于分析西戈斯韦或粟精胺与NM-107(Toronto Research Chemicals，Canada)或利巴韦林(Sigma-Aldrich)联用的协同作用。测试和分析如实施例4中所述进行。
西戈斯韦与NM-107和或利巴韦林联用的组合指数
化合物 比例 CI(EC50) CI(EC75) CI(EC90)
西戈斯韦+NM-107 20∶2.22 0.81 0.83 0.86
西戈斯韦+NM-107 20∶6.67 0.55 0.59 0.62
西戈斯韦+NM-107 25∶10 1.01 0.86 0.73
西戈斯韦+NM-107 25∶5 1.14 1.05 0.97
西戈斯韦+利巴韦林 25∶3 0.93 0.81 0.73
西戈斯韦+利巴韦林 25∶6 1.00 1.00 1.06
西戈斯韦与NM-107的联合用药在NM-107以大于约5μM存在时表现出最佳协同作用，而与利巴韦林联用表现出与西戈斯韦加和作用轻度的协同作用。
实施例6
粟精胺或西戈斯韦在三重组合中的协同作用
检查板手段
将实施例2的致细胞病变作用(CPE)的抑制测定用于分析在有增加浓度的利巴韦林(0-约3.3μM)存在下西戈斯韦或粟精胺与干扰素-α2b的相互作用。各进行两次双重或三重组合。使用如本文所述的MacSynergyTM II软件分析组合功效数据。
表8.西戈斯韦或粟精胺与干扰素α和利巴韦林的三重组合的协同作用体积
*协同作用体积具有如MacSynergyTM II软件测定的95％置信水平。将数据表示为平均值±标准偏差。粟精胺测试浓度在0-100μM；西戈斯韦测试浓度在0-20μM；且干扰素-α2b测试浓度＝0-60IU/mL。
表8中列出了各种三重组合的协同作用体积。西戈斯韦或粟精胺在与干扰素-α2b和利巴韦林三重组合中的抗病毒活性产生了强协同作用。在利巴韦林的治疗相关浓度(0.12-3.3μM)下，与粟精胺或西戈斯韦和干扰素-α2b的三重组合在协同作用体积方面显示出浓度依赖性增加(参见表8和附图19A-F)。和干扰素-α2b与利巴韦林的双重组合相比(参见附图13)，所有西戈斯韦和大部分粟精胺的三重组合达到了较高的协同作用体积和较高的峰值协同作用(参见附图19和20)。
表9.西戈斯韦或粟精胺与干扰素α和利巴韦林的三重组合的协同作用体积
*协同作用体积具有如MacSynergyTM II软件测定的95％置信水平。将数据表示为平均值±标准偏差。粟精胺测试浓度在0-100μM；西戈斯韦测试浓度在0-20μM；且干扰素-α2b测试浓度＝0-60IU/mL。
此外，在利巴韦林剂量为0-1.1μM时，西戈斯韦或粟精胺与干扰素-α2b联合用药的拮抗作用水平并不显著或极低(参见表9)。在最高利巴韦林剂量下(3.3μM)，西戈斯韦/干扰素-α2b/利巴韦林三重组合和粟精胺/干扰素-α2b/利巴韦林三重组合产生强拮抗作用水平(参见表9)。在大于约20IU/mL干扰素-α2b和大于约6.7μM西戈斯韦浓度下观察到这种拮抗作用(数据未显示)。在有3.3μM利巴韦林存在下观察到的拮抗作用可能是因利巴韦林在该浓度下细胞毒性作用所致，且由此降低了所述三重组合抑制BVDV的致细胞病变作用的能力。
实施例7
粟精胺或西戈斯韦在其它三重组合中的协同作用
固定比例手段
将实施例2的致细胞病变作用(CPE)的抑制测定用于分析西戈斯韦或粟精胺与至少两种额外的测试化合物，包括各种干扰素和病毒复制抑制剂联用的相互作用。以固定摩尔比合并所示的化合物并且在细胞生长培养基中顺序稀释2倍以便检验如实施例4中所述的6种固定比例的联合用药。如本文所述使用CalcuSynTM II软件程序分析组合功效数据。此外，生成等效线图作为联用药物相互作用的二次测量手段。表10中收集了三重组合的组合指数。
表10.各种西戈斯韦或粟精胺三重组合的组合指数(CI)
组合 比例 CI(EC50) CI(EC75) CI(EC90)
西戈斯韦+IFN-α-con-1+NM-107 25∶400∶5 0.73 0.61 0.53
西戈斯韦+IFN-α-con-1+NM-107 25∶200∶2.5 0.65 0.55 0.48
西戈斯韦+IFN-α-n3+NM-107 25∶80∶5 0.72 0.67 0.64
西戈斯韦+IFN-α-n3+NM-107 25∶40∶2.5 0.68 0.67 0.66
西戈斯韦+IFN-λ1+NM-107 25∶800∶5 0.64 0.60 0.57
西戈斯韦+IFN-λ1+NM-107 25∶400∶2.5 0.63 0.62 0.62
西戈斯韦+IFN-ω+NM-107 25∶600∶2.5 0.62 0.58 0.55
西戈斯韦+IFN-ω+NM-107 25∶1200∶5 0.71 0.71 0.73
西戈斯韦+NM-107+IFN-α2b 20∶2.22∶20 0.71 0.70 0.70
西戈斯韦+NM-107+IFN-α2b 25∶5∶30 0.96 0.78 0.65
西戈斯韦+NM-107+IFN-α2b 20∶6.67∶20 0.61 0.52 0.45
西戈斯韦+NM-107+IFN-α2b 25∶10∶60 0.94 0.73 0.57
西戈斯韦+Peg-IFN-α2a+NM-107 25∶40∶10 0.81 0.67 0.56
西戈斯韦+Peg-IFN-α2a+NM-107 25∶100∶5 1.03 0.84 0.69
西戈斯韦+Peg-IFN-α2a+利巴韦林 25∶40∶6 0.58 0.49 0.42
西戈斯韦+Peg-IFN-α2a+利巴韦林 25∶20∶3 0.79 0.76 0.74
西戈斯韦+Peg-IFN-α2b+NM-107 25∶40∶5 0.61 0.46 0.36
西戈斯韦+Peg-IFN-α2b+NM-107 25∶20∶2.5 0.64 0.58 0.54
西戈斯韦+Peg-IFN-α2b+利巴韦林 25∶40∶6 0.67 0.58 0.51
西戈斯韦+Peg-IFN-α2b+利巴韦林 25∶20∶3 0.83 0.84 0.86
西戈斯韦+利巴韦林+IFN-α2b 25∶3∶30 0.84 0.58 0.41
西戈斯韦+利巴韦林+IFN-α2b 25∶6∶60 0.68 0.53 0.43
粟精胺+Peg-IFN-α2a+NM-107 300∶100∶5 0.74 0.65 0.57
具有西戈斯韦和NM-107和各种干扰素(干扰素-α-con-1、干扰素-α-n3、干扰素-α2b、Peg-干扰素-α2a、Peg-干扰素-α2b和干扰素-λ1)的三重组合在所有测试比例下均表现出中等至良好的协同活性。西戈斯韦和NM-107与干扰素-ω的联合用药根据比例的不同表现出良好的协同作用(25∶600∶2.5)或中等的协同作用(25∶1200∶5)。类似地，粟精胺、NM-107和Peg-干扰素-α2a的三重组合表现出良好的协同作用。总之，所述的三重组合表现出令人意外的对黄病毒科感染的协同相互作用。
表11.与双重组合指数(CI)相比三重组合的优势
组合 比例 CI(EC50) CI(EC75) CI(EC90)
西戈斯韦+IFN-α-n3 25∶80 0.82 0.72 0.64
西戈斯韦+NM-107 25∶5 1.14 1.05 0.97
西戈斯韦+IFN-α-n3+ NM～107 25∶80∶5 0.72 0.67 0.64
西戈斯韦+Peg-IFN-α2a 25∶20 0.95 0.94 0.93
西戈斯韦+Peg-IFN-α2a+利 巴韦林 25∶20∶3 0.79 0.76 0.74
西戈斯韦+NM-107 20∶2.22 0.81 0.83 0.86
西戈斯韦+NM-107+IFN-α2b 20∶2.22∶20 0.71 0.70 0.70
西戈斯韦+NM-107+IFN-α2b 25∶5∶30 0.96 0.78 0.65
西戈斯韦+利巴韦林 25∶6 1.00 1.00 1.06
西戈斯韦+利巴韦林+ IFN-α2b 25∶6∶60 0.68 0.53 0.43
此外，具有西戈斯韦、干扰素和病毒复制抑制(例如利巴韦林或NM-107)的三重组合一般表现出优于西戈斯韦和干扰素或西戈斯韦和病毒复制抑制剂的相关双重组合的协同作用活性(参见表11)。
实施例8
干扰素-α2B和/或利巴韦林对粟精胺或西戈斯韦功效的剂量影响
将实施例2的致细胞病变作用(CPE)的抑制测定用于分析西戈斯韦或粟精胺与干扰素-α2b在有增加浓度的利巴韦林(约1.1-3.3μM)存在下联用的相互作用。各进行两次双重或三重组合。如本文所述使用MacSynergyTM II软件程序分析组合功效数据。根据实施例6中所述的三重组合研究计算西戈斯韦和粟精胺的各自的EC50。
西戈斯韦和粟精胺各自的EC50表现出随干扰素-α2b浓度的增加的剂量依赖性降低(分别参见表12和13。)
表12.干扰素和/或利巴韦林对西戈斯韦EC50的影响
*NT意指″未测试″
+测试的西戈斯韦浓度为20-0.3μM
当干扰素-α2b浓度从0增加至20IU/mL时，西戈斯韦的EC50从约6.5降至0.4μM以下(参见表12。)。这种EC50降低甚至在将增加浓度的利巴韦林加入到西戈斯韦和干扰素-α2b的双重组合中时更为明显。因此，用于联合治疗的西戈斯韦的量可能因存在利巴韦林和/或干扰素而降低。
表13.干扰素和/或利巴韦林对粟精胺EC50的影响
+测试的粟精胺浓度为100-1.2μM
当干扰素-α2b浓度从0增加至20IU/mL时，粟精胺的EC50从约52μM降至约1.3μM以下(参见表13。)。这种EC50降低甚至在将增加浓度的利巴韦林加入到粟精胺和干扰素-α2b的双重组合中时更为明显。因此，用于联合治疗的粟精胺的量可能因存在利巴韦林和/或干扰素而降低。
买施例9
粟精胺或西戈斯韦对干扰素-α2B功效的剂量影响
将实施例2的致细胞病变作用(CPE)的抑制测定用于分析西戈斯韦或粟精胺与干扰素-α2b在有增加浓度的利巴韦林(约1.1-3.3μM)存在下联用的相互作用。各进行两次双重或三重组合。如本文所述使用MacSynergyTM软件程序分析组合功效数据。根据实施例6中所述的三重组合研究计算干扰素-α2b的EC50。
干扰素-α2b的EC50表现出随西戈斯韦或粟精胺浓度的增加的剂量依赖性降低(表14。)
表12.粟精胺和/或西戈斯韦联用对IFN-α2b的影响
+测试的干扰素-α2b浓度为60-0.7IU/mL
当粟精胺或西戈斯韦浓度增加时，干扰素-α2b的EC50从约20IU/mL降至约1IU/mL以下(参见表14。)。这种EC50降低甚至在将增加浓度的利巴韦林加入到粟精胺或西戈斯韦和干扰素-α2b的双重组合中时更为明显(数据未显示)。因此，用于联合治疗的干扰素的量可能因存在西戈斯韦和/或利巴韦林而降低。
实施例10
双重和三重固定比例组合的剂量下降指数
将实施例4，5和7中所述的联合用药用于测定如Chou和Chou(Pharmacologist 30：231，1988)所述的用CalcusynTM 2软件(Biosoft)计算的剂量下降指数(DRI)。DRI为协同组合中各药物在指定作用水平上比各单独药物作用剂量下降多少的测量值。DRI在临床情况中是重要的，其中剂量下降产生具有对患者而言下降的毒性特性且同时维持治疗功效的治疗方案。表15中表示了EC50下双重组合的DRIs且表16表示了EC90下的DRIs。用黑体字和下划线表示优于相应双重组合的三重组合的DRIs。
表15.双重和三重西戈斯韦或粟精胺组合的DRI(EC50)
表16.双重和三重西戈斯韦或粟精胺组合的DRI(EC90)
所述的三重组合一般不仅表现出令人意外的协同相互作用，而且表现出与双重组合相比，三重组合中的化合物成分的潜在的剂量下降指数。
实施例11
双重和三重组合的药物致细胞病变性的减少
检查板手段
为进行如实施例3和6中所述的功效评价平行测定测试化合物联合用药的细胞毒性并且如本文所述使用MacSynergyTM II软件程序进行分析。在这种情况中，较大的负百分比体积(拮抗作用)表示联合用药具有的细胞毒性活性降低。认为值小于-25μM(IU/mL)％或μM2具有显著拮抗作用(即细胞毒性显著降低)，而认为值在-25-0μM(IU/mL)或μM2在细胞毒性方面没有显著性改变。
表17.双重组合的细胞毒性协同作用和拮抗作用体积
发现西戈斯韦与IFN-α2b和粟精胺与IFN-α2b的联合用药在未感染的MDBK细胞中分别表现出强的和中度的拮抗作用，而无细胞毒性增加(即协同作用)(参见表17)。就西戈斯韦与IFN-α2b的联合用药而言，拮抗谷位于大于或等于约0.7μM西戈斯韦和在大于约10IU/mL的干扰素-α2b浓度下(参见附图23)。就粟精胺与干扰素-α2b的联合用药而言，拮抗谷位于约50-100μM粟精胺和在大于约0.4IU/mL的干扰素-α2b浓度下(参见附图25)。
西戈斯韦与利巴韦林的联合用药在未感染MDBK细胞中对细胞毒性表现出强拮抗作用(-101μM2％)，而未观察到协同(增加)的细胞毒性作用(参见表17)。拮抗谷位于约0.25-20μM西戈斯韦和约0.25-2.2μM利巴韦林浓度下(参见附图24)。粟精胺与利巴韦林的联合用药在未感染MDBK细胞中对细胞毒性表现出中度拮抗作用(-46μM2％)，而未观察到协同细胞毒性作用(参见表17)。拮抗谷位于约大于约20μM粟精胺和约3μM利巴韦林浓度下(参见附图26)。
测定了粟精胺或西戈斯韦与金刚烷胺、2-BAIP或NB-DNJ的联合用药在未感染MDBK细胞中的细胞毒性并且这些双重组合的细胞毒性体积一般为加和性的(即协同作用体积为0-25μM2％)或中度拮抗的，表明将粟精胺添加到金刚烷胺或2-BAIP中可以减少后面所述化合物的预计毒性。
干扰素-α2b与利巴韦林的标准HCV联合治疗对细胞毒性表现出中等的拮抗作用(参见表17)。拮抗作用在这两种抗病毒药的浓度范围内均十分均匀，没有表现出比任何其它区域高的显著拮抗作用的浓度区(数据未显示)。达到的最大拮抗百分比约为-10％。所述的联合用药的细胞毒性体积一般为拮抗性的，表明这些联合用药对各化合物的细胞毒性没有显著性影响，而这种拮抗作用表明所述的联合用药可以降低测试化合物各自的细胞毒性。如上所述，在添加增加浓度的干扰素-α2b时观察到粟精胺(约达52倍)和西戈斯韦(约达26倍)的EC50的剂量依赖性下降(参见实施例8和9)。这种EC50的下降随利巴韦林添加浓度的增加而显著。幸运的是，所述的联合用药不会增加干扰素-α2b或利巴韦林的细胞毒性。这些数据表明西戈斯韦或粟精胺与干扰素-α2b和/或利巴韦林的联合用药可以有益于为HCV-感染的患者设计低毒性治疗方案，同时改善治疗作用。
表18.三重组合治疗研究的细胞毒性拮抗作用体积(在各种利巴韦林浓度下)
*平均协同作用体积处于95％置信水平
三重组合西戈斯韦、干扰素-α2b和利巴韦林的细胞毒性体积在至多将1.1μM利巴韦林加入到西戈斯韦/干扰素-α2b联合用药中时为强拮抗作用(值低于约-100μM(IU/mL)％(参见表18)。在西戈斯韦、干扰素-α2b和利巴韦林的三重组合中未观察到在细胞毒性中的显著协同作用。粟精胺、干扰素-α2b和利巴韦林联合用药的细胞毒性拮抗作用体积为最小到中等(参见表18)，而细胞毒性协同作用体积并不明显到最小(参见表19)。因此，所述的三重组合可以为治疗HCV-感染患者提供设计给药方案的优点。
表19.三重组合的细胞毒性协同作用体积(在各种利巴韦林浓度下)
*平均协同作用体积处于95％置信水平
实施例12
粟精胺或西戈斯韦在有止泻药存在下的药代动力学
本研究的目的在于评价止泻药对口服给予的西戈斯韦的药代动力学(PK)的作用。此外，研究了止泻药对西戈斯韦PK的作用。通过按照西戈斯韦初级代谢物粟精胺的血浆分布型评价西戈斯韦的药代动力学。作为背景技术，尽管在人体内充分耐受，但是口服给予的西戈斯韦确实在胃肠道中产生副作用，包括肠胃气胀和轻度到中度的腹泻。研究了用于缓解急性和慢性腹泻症状的某些非处方药中发现的抗运动剂活性组分的盐酸洛哌丁胺对口服给予西戈斯韦的PK的作用。
雄性Sprague-Dawley大鼠(Crl；CD)获自Charles RiverLaboratories(Montreal，Canada)。称重约200g-约400g的大鼠根据每只动物的体重调整剂量水平。西戈斯韦和洛哌丁胺的剂量水平基于为总体表面积调整的人剂量。对第一组6只大鼠(正常对照组)给予单一口服剂量的35mg/kg西戈斯韦。对第二组6只大鼠(洛哌丁胺-治疗的)给予单一口服剂量的0.35mg/kg洛哌丁胺，10分钟后，对每只动物给予单一口服剂量的35mg/kg西戈斯韦。使第三组6只大鼠(诱发腹泻的)禁食约18小时，但可自由饮水。然后将蓖麻油作为5mL/kg单一口服剂量给予，然后即刻获得自由取食。给予蓖麻油后1小时，对每只大鼠给予单一口服剂量的35mg/kg西戈斯韦。使第四组6只大鼠(禁食对照组)禁食约18小时，但可自由饮水且然后使其自由取食约30分钟，此后给予单一口服剂量的35mg/kg西戈斯韦。
在西戈斯韦给药后的不同时间点，通过尾静脉从动物中抽取血样。产生血浆样品并且冷冻储存至分析为止。使用LC/MS分析血浆样品的粟精胺，即西戈斯韦的主要代谢物。简言之，使用固相提取(SPE)提取样品，随后通过在电喷射正模式中的反相HPLC和MS检测进行分离。生物分析测定范围在约0.1-约50μg/mL。通过按照西戈斯韦的初级代谢物粟精胺的血浆浓度评价其药代动力学。按照带有生物指数衰变的双-室模型，使用残留方法计算药代动力学参数。使用未配对斯氏t检验比较药代动力学参数，其中置信区间为95％(p＝0.01)。
对正常大鼠口服给予35mg/kg剂量的西戈斯韦(正常对照组)分别产生8.8μg/mL、0.44小时和10.5μg·小时/mL的粟精胺Cmax、tmax和AUC值。在预先给予0.35mg/kg剂量的洛哌丁胺(洛哌丁胺-治疗的)动物中获得了相差无几的结果(参见附图28A和表20)。
表20.药代动力学参数概括
治疗组 描述 Cmax (μg/mL) tmax (hours)AUC(μg·hour/mL)
1 正常对照组 8.76±1.15 0.44±0.0110.5
2 洛哌丁胺-治疗的 6.30±2.33 0.47±0.059.5
3 诱发腹泻的 4.03±0.83 0.44±0.015.9
4 禁食对照组 5.28±1.77 0.327.2
还研究了腹泻对西戈斯韦PK的影响。比较正常对照组和诱发腹泻的组，粟精胺Cmax和AUC值分别下降了54％和44％(表20)。经测定Cmax之差异具有统计学意义。使用蓖麻油诱发腹泻需要过夜禁食(约18小时)，随后即刻取食下给予蓖麻油。为了测定过夜禁食的影响，使用禁食对照组并且这些动物中的某些粟精胺Cmax和AUC值在那些对正常对照组和诱发腹泻的组获得的值中(附图28B和28C和表20)。这些结果表明禁食和腹泻可以降低口服给予的西戈斯韦的Cmax和AUC。
同时给予止泻药对西戈斯韦在正常大鼠中的PK没有显著影响并且可以视为减轻可能与西戈斯韦治疗有关的胃肠道作用的有活力的选择。诱发腹泻的大鼠表现出粟精胺Cmax和AUC降低，由此使用止泻药治疗可以用于预防发生腹泻的患者降低的全身药物接触。
本领域技术人员认为或能够使用仅常规实验确定与本文所述的本发明具体实施方案等效的技术方案。指定这类等效技术方案包括在下列权利要求中。