一种检测头孢西丁产品中杂质的方法.pdf

本发明提供一种检测头孢西丁产品中杂质的方法，该方法采用高效液相色谱法，其中包括采用反相十八烷基键合相硅胶色谱柱，以用磷酸调节pH为3.5的0.7％(重量/体积)磷酸氢二钾水溶液作为流动相A，乙腈作为流动相B组成混合流动相，按照以下条件进行梯度洗脱：0至5分钟：流动相A与流动相B的体积比为95∶5；5至15分钟：流动相A与流动相B的体积比由95∶5匀速变化至70∶30；15至35分钟：流动相A与流动相B的体积比由70∶30匀速变化至30∶70；35至45分钟：流动相A与流动相B的体积比由30∶70匀速变化至15∶85；45至60分钟：流动相A与流动相B的体积比由15∶85匀速变化至95∶5。该方法对头孢西丁中四种杂质分别进行定量检测，简便、专属性强。

1.  一种采用高效液相色谱检测头孢西丁产品中杂质的方法，该方法包括采用反相十八烷基键合相硅胶色谱柱，以用磷酸调节pH为3.5的0.7％(重量/体积)磷酸氢二钾水溶液作为流动相A，乙腈作为流动相B组成混合流动相，按照以下条件进行梯度洗脱：
0至5分钟：流动相A与流动相B的体积比为95∶5；
5至15分钟：流动相A与流动相B的体积比由95∶5匀速变化至70∶30；
15至35分钟：流动相A与流动相B的体积比由70∶30匀速变化至30∶70；
35至45分钟：流动相A与流动相B的体积比由30∶70匀速变化至15∶85；
45至60分钟：流动相A与流动相B的体积比由15∶85匀速变化至95∶5。

2.  根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述高效液相色谱法采用紫外检测器，检测波长为254nm。

3.  根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述反相十八烷基键合相硅胶色谱柱为YWG-C12H25色谱柱。

4.  根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其特征在于，所述混合流动相的流速为0.8ml/min。

5.  根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法包括分别将已知量的头孢西丁产品，以及已知量的去甲酰氨基西丁、δ-3-西丁、噻吩内酯和西丁内酯的混合物进行高效液相色谱检测，并将头孢西丁产品的高效液相图谱与去甲酰氨基西丁、δ-3-西丁、噻吩内酯和西丁内酯的混合物的高效液相图谱进行比较。

6.  根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法包括分别将已知量的头孢西丁产品，以及已知量的去甲酰氨基西丁、δ-3-西丁、噻吩内酯和西丁内酯的混合物进行高效液相色谱检测，并将头孢西丁产品的高效液相图谱与去甲酰氨基西丁、δ-3-西丁、噻吩内酯和西丁内酯的混合物的高效液相图谱中对应的峰进行峰面积比较。

7.  根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于，所述已知量的去甲酰氨基西丁、δ-3-西丁、噻吩内酯或西丁内酯与已知量的头孢西丁产品的质量之比均小于0.25％。

一种检测头孢西丁产品中杂质的方法
技术领域
本发明涉及一种检测头孢西丁产品中杂质的方法，具体涉及一种采用高效液相色谱检测头孢西丁产品中杂质的方法。
背景技术
头孢西丁属于第二代头孢菌素类药物，是一种由头霉素C经化学修饰衍生而来的半合成广谱杀菌药，其杀菌作用源于能够抑制细菌细胞壁的合成。相对于第一代头孢菌素，头孢西丁对第一代头胞菌素耐药的多数革兰阴性菌的作用明显增强，对厌氧菌有高效；对多种β-内酰胺酶更稳定；对肾脏的毒性也有所降低。头孢西丁的化学结构独特(见式I所示结构)，其结构中的甲氧基处于“反式”，能阻碍β-内酰胺酶接近β-内酰胺环，减低酶对药物的亲和，从而保护β-内酰胺环不被破坏，使其对多种β-内酰胺酶的稳定性比多数头孢菌素更强，具有极高的稳定性，尤其对众多质粒或染色体介导的β-内酰胺酶高度稳定，不易被β-内酰胺酶水解。

与其他头孢菌素相比，头孢西丁抗菌谱更广，更均衡，对革兰氏阳性和阴性、厌氧菌或需氧菌皆有较强活性。其抗菌谱较第一代头孢菌素进一步扩大，许多耐第一代头孢菌素的革兰阴性菌(如肠杆菌、吲哚阳性变形杆菌等)对头孢西丁敏感。头孢西丁这一对需氧菌和厌氧菌均具有较强活性的特性，使其在临床治疗厌氧菌感染或混合感染中可能成为有前途替代目前联合用药的一种选择。头孢西丁的抗菌谱广、抗菌活性强、毒性低，深受医生和广大病人的欢迎，具有优异的临床结果，成功地用于治疗革兰氏阳性、阴性需氧菌和厌氧菌引起的多种感染，其中包括上下呼吸道感染，泌尿道感染，腹膜炎以及其它腹腔内、盆腔内感染，妇科感染，骨、关节和软组织感染，败血症等。由于头孢西丁见效快、剂量小、副作用低，临床疗效显著，非常值得提倡应用。据报道，应用头孢西丁治疗各种感染，总有效率为74％。内科病人中支气管炎、肺炎、肺脓肿等呼吸道感染的有效率为72.6％；急、慢性尿路感染的有效率分别为99.5％和77.8％。化脓性骨关节炎、骨髓炎、皮下脓肿等的有效率为66.7％。病原菌以革兰阴性杆菌为主，治疗后细菌清除率为71.6％；大肠杆菌和肺炎杆菌的清除率分别为89.6％和65.7％。金葡菌等革兰阳性球菌的清除效果也比较满意。外科、泌尿科和妇产科病人中临床有效率分别为71.6％、71.0％和85.2％，3组病人的总细菌清除率为75.2％，其中大肠杆菌、肺炎杆菌和沙雷菌属的清除率分别为79.2％、82.1％和60.0％，革兰阳性和阴性球菌的细菌清除率为83.3％。文献资料显示头孢西丁对革兰阳性需氧菌感染的疗效与头孢唑啉和头孢孟多相似，对革兰阴性需氧菌感染、厌氧菌感染以及厌氧和需氧混合感染的疗效比头孢噻吩更佳。下呼吸道感染的有效率为80％，其中包括其他抗生素治疗无效者。由于头孢西丁对需氧和厌氧菌(尤其是脆弱拟杆菌)皆有作用，所以用于治疗腹腔内和女性生殖道感染的临床有效率超过85％。应用头孢西丁治疗免疫缺陷者感染也获得良好疗效，且很少不良反应发生。
通常，以头孢噻吩为原料，通过甲氧基化、去乙酰化、氨甲氧酰化三步反应合成头孢西丁钠。具体来说，首先，在合成7-α-甲氧基-7-[(2-噻吩基)乙酰氨基]-4-头孢烷酸环己胺盐的过程中，通过williamson反应在头孢噻吩主核的7位生成甲氧基；其次，在合成3-羟甲基-7-α-[(2-噻吩基)乙酰氨基]-4-头孢烷酸醋酸苄星盐的过程中，中间体头孢烷酸环己胺盐水解生成去甲酰氨基西丁，这样导致终产品中含有去甲酰氨基西丁、δ-3-西丁、噻吩内酯和西丁内酯等几种主要杂质，这些杂质在制剂使用过程中易导致过敏等不良反应，因此在生产过程中控制这四种杂质的含量是非常重要的。现有的检测方法多采用自身对照法测定有关物质，仅对单个杂质或总杂质的含量进行测定，而不能同时对产品中的四种杂质加以区分并分别进行定量研究。
发明内容
因此，本发明的目的是提供一种能够同时有效定量检测头孢西丁产品中四种杂质去甲酰氨基西丁、δ-3-西丁、噻吩内酯和西丁内酯的方法。
用于实现本发明的上述技术目的的技术方案如下：
一种采用高效液相色谱检测头孢西丁产品中杂质的方法，该方法包括采用反相十八烷基键合相硅胶色谱柱，以用磷酸调节pH为3.5的0.7％(重量/体积)磷酸氢二钾水溶液作为流动相A，乙腈作为流动相B组成混合流动相，按照以下条件进行梯度洗脱：
0至5分钟：流动相A与流动相B的体积比为95∶5；
5至15分钟：流动相A与流动相B的体积比由95∶5匀速变化至70∶30；
15至35分钟：流动相A与流动相B的体积比由70∶30匀速变化至30∶70；
35至45分钟：流动相A与流动相B的体积比由30∶70匀速变化至15∶85；
45至60分钟：流动相A与流动相B的体积比由15∶85匀速变化至95∶5。
在上述方法中，高效液相色谱法优选采用紫外检测器，检测波长为254nm。反相十八烷基键合相硅胶色谱柱优选为YWG-C12H25色谱柱。混合流动相的流速可以为0.8ml/min。
上述方法包括分别将已知量的头孢西丁产品，以及已知量的去甲酰氨基西丁、δ-3-西丁、噻吩内酯和西丁内酯的混合物进行高效液相色谱检测，并将头孢西丁产品的高效液相图谱与去甲酰氨基西丁、δ-3-西丁、噻吩内酯和西丁内酯的混合物的高效液相图谱进行比较。具体来说，上述方法包括分别将已知量的头孢西丁产品，以及已知量的去甲酰氨基西丁、δ-3-西丁、噻吩内酯和西丁内酯的混合物进行高效液相色谱检测，并将头孢西丁产品的高效液相图谱与去甲酰氨基西丁、δ-3-西丁、噻吩内酯和西丁内酯的混合物的高效液相图谱中对应的峰进行峰面积比较。其中，优选地，已知量的去甲酰氨基西丁、δ-3-西丁、噻吩内酯或西丁内酯与已知量的头孢西丁产品的质量之比均小于0.25％。
该检测方法经过方法学验证，样品对杂质测定无干扰，各杂质在测定范围内呈良好的线性关系，回收率符合含量测定的要求，结果见表1。
表1方法学验证结果

本发明的有益效果在于完善了头孢西丁产品，例如注射用头孢西丁钠的杂质检测方法，针对头孢西丁中四种明确的杂质同时进行了定量检测。该方法简便、专属性强，能够更有效地用于控制产品的质量，减少不良反应的发生，确保人体用药的安全。
附图说明
以下，结合附图来详细说明本发明的实施例，其中：
图1为供试品溶液的高效液相色谱图；
图2为对照品溶液的高效液相色谱图。
具体实施方式
以下通过实施例对本发明作进一步说明。应理解，以下实施例仅用于说明本发明，而不用于限定本发明的范围。
实施例1
采用反相高效液相色谱法，通过不同极性的混合溶剂进行梯度洗脱，于紫外254nm处测定杂质的吸收峰，并利用已知的杂质对照品，计算出杂质的含量。
(1)色谱条件：
色谱柱：YWG-C12H25柱(厂家为天津试剂二厂)；
仪器：岛津10A高效液相色谱仪：LC-10AT溶剂输送泵，SPD-10AV紫外检测器，浙江大学2010色谱工作站；
试剂：乙腈(色谱纯)、磷酸二氢钾(A.R.)、磷酸(A.R.)；
流动相A：0.7％(重量/体积)磷酸氢二钾溶液，用磷酸调节pH为3.5；
流动相B：乙腈；
按照下表所列梯度进行洗脱：
表2梯度洗脱程序

(2)测定法：精密称取适量头孢西丁产品，加起始流动相A制成每1ml含头孢西丁5mg的溶液，作为供试品溶液；分别精密量取适量已知对照杂质甲酰胺西丁、δ-3-西丁、噻吩内酯、西丁内酯，分别加上起始流动相A制成每1ml含甲酰胺西丁、δ-3-西丁、噻吩内酯、西丁内酯各12.5μg的溶液，作为对照品溶液。按照上述色谱条件操作，精密量取供试品溶液与对照溶液各20μl分别注入液相色谱仪，按照上述梯度洗脱分别进行操作。供试品溶液的色谱图如图1所示，其中各杂质峰能够完全分离，按保留时间，依次为甲酰胺西丁、δ-3-西丁、噻吩内酯、西丁内酯等的杂质峰，供试样品的各杂质峰面积不得大于对照溶液中相对应的杂质峰面积(即各杂质的质量不得大于头孢西丁产品重量的0.25％)，参见图2。
分别取海口市制药厂有限公司生产的批号为081101、081102、081103注射用头孢西丁钠，按照上述检测方法测定有关杂质，测定结果如表3所示。
表3不同批次的杂质检测结果