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1、(10)申请公布号 CN 104152533 A (43)申请公布日 2014.11.19 CN 104152533 A (21)申请号 201410386031.5 (22)申请日 2014.08.07 C12Q 1/18(2006.01) C12N 1/14(2006.01) A01G 7/00(2006.01) (71)申请人 贵州省烟草科学研究院 地址 550032 贵州省贵阳市金阳新区云潭北 路贵州省烟草科学研究院 (72)发明人 王仁刚 林世锋 王轶 曾吉凡 (54) 发明名称 一种烟草小苗期快速鉴定黑胫病抗性的方法 (57) 摘要 本发明公开了一种烟草小苗期快速鉴定黑胫 病抗性的。
2、方法， 将待鉴定的烟草品种播种到育苗 穴盘中育苗， 当苗龄达 35 45 天后， 进行人工 接种， 对所有供试烟株在穴盘的穴孔中埋入预先 培养的黑胫病接种材料 0.1 1g， 分别在接种后 3 10 天调查病情分级， 计算病情指数。本发明 采用小苗不移栽 / 移植的鉴定方法， 不人为创造 伤口， 更加快捷方便， 经过多年的常规田间病圃鉴 定与本发明方法的同步验证， 本发明鉴定结果与 田间鉴定相当， 且年度间差异小， 鉴定时间短， 工 作量小。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 3 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书3页 (1。
3、0)申请公布号 CN 104152533 A CN 104152533 A 1/1 页 2 1. 一种烟草小苗期快速鉴定黑胫病抗性的方法， 其特征在于 ： 将待鉴定的烟草品种播 种到育苗穴盘中育苗， 当苗龄达 35 45 天后， 进行人工接种， 对所有供试烟株在穴盘的穴 孔中埋入预先培养的黑胫病接种材料 0.1 1g， 分别在接种后 3 10 天调查病情分级， 计 算病情指数。 2. 根据权利要求 1 所述的一种烟草小苗期快速鉴定黑胫病抗性的方法， 其特征在于 ： 当苗龄达 35 45 天后， 不需移栽、 剪叶， 直接人工接种。 3. 根据权利要求 1 所述的一种烟草小苗期快速鉴定黑胫病抗性的。
4、方法， 其特征在于 ： 预先培养的黑胫病接种材料的制作方法为将小米用水煮至 6 分熟， 捞出放到纱布上摊开， 沥水 10 分钟， 装入 250ml 圆形塑料组培瓶中， 装至瓶体的 2/3 处， 用高压蒸气灭菌锅 121 灭菌 1 小时， 冷却至室温后， 将分离好的在燕麦培养基上的黑胫病菌丝接种到小米上， 在培 养箱中 28下培养 15 天， 菌丝长满即可得黑胫病接种材料。 4. 根据权利要求 3 所述的一种烟草小苗期快速鉴定黑胫病抗性的方法， 其特征在于 ： 在小米上接种黑胫病菌丝前， 将灭菌后的小米均匀填装在矩形槽体内， 按重量 0.1 1g 均 匀矩形槽体内的小米切成小块， 黑胫病菌丝均匀。
5、接种在块状的小米材料上。 权 利 要 求 书 CN 104152533 A 2 1/3 页 3 一种烟草小苗期快速鉴定黑胫病抗性的方法 技术领域 0001 本发明属于植物抗病性鉴定技术领域， 具体涉及烟草黑胫病抗性鉴定方法。 背景技术 0002 烟草黑胫病是烟草生产上最具毁灭性的病害之一， 同时也是世界烟草生产中危害 最严重的病害之一， 该病在我国各产烟省均有不同程度的发生， 且危害较为普遍和严重。 选 用烟草抗黑胫病品种是解决这一病害的重要途径。 0003 目前， 现有的烟草品种抗病性鉴定方法主要有田间黑胫病圃鉴定法和苗期鉴定方 法。田间黑胫病圃鉴定法由于受地力、 季节， 每年的鉴定品种数量。
6、受到很大限制， 且年份间 鉴定的品种抗性有一定的差异 ； 而现有的苗期鉴定方法都要育苗后移栽到花盆、 室内病圃 中或移植到新的盘上， 缺点是移栽缓苗后接种， 时间长， 工作量大。 发明内容 0004 本发明要解决的技术问题是 ： 针对现有技术中存在的问题， 本发明提供了一种小 苗不移栽 / 移植的鉴定方法， 不人为创造伤口， 更加快捷方便， 经过多年的田间病圃鉴定与 本发明方法的同步对比验证， 本发明鉴定结果与田间鉴定相当， 且年度间差异小， 鉴定时间 短， 工作量少。 0005 本发明采用的技术方案 ： 小苗快速鉴定法在温室中进行， 温度环境 25。将待鉴 定的各烟草品种播种到 54 孔育苗。
7、穴盘中育苗， 每个品种 / 系 1 盘， 育苗管理措施同常规烟 叶生产。当苗龄达 35 45 天后 （不需剪叶） ， 进行人工接种。对所有供试烟株在穴盘的穴 孔中埋入预先培养的黑胫病接种材料 0.1 1g。分别在接种后 3 10 天调查病情分级， 计 算病情指数。 0006 接种材料的制作 ： 将小米用水煮至 6 分熟， 捞出放到纱布上摊开， 沥水 10 分钟。装 入 250ml 圆形塑料组培瓶中， 装至瓶体的 2/3 处。用高压蒸气灭菌锅 121灭菌 1 小时。冷 却至室温后， 将分离好的在燕麦培养基上的黑胫病菌丝接种到小米上， 在培养箱中 28下 培养 15 天， 菌丝长满即可。 0007。
8、 记载方法执行国家标准 “烟草病虫害分级及调查方法 （GB/T 23222-2008） ” 。病情 指数 （D） 计算公式 ： D= （各级病株数 该病级数） 100/（调查总株数 最高级数） 病害严重度分级标准按国家标准 GB/T 23224-2008 执行， 抗性划分为 6 个级别 ： 高抗 或免疫 （I） ： 病指为 0 ； 抗病 （R） ： 抗病 （R） ； 中抗 （MR） ： 病指为 20.1 40 ； 中感 （MS） ： 病指为 40.1 60 ； 感 （S） ： 病指为 60.1 80 ； 高感 （HS） ： 病指为 80.1 100。 0008 本发明达到的有益效果 ： 本发明。
9、采用小苗不移栽 / 移植的鉴定方法， 不人为创造伤口， 更加快捷方便。经过多年 的常规田间病圃鉴定与本发明方法的同步验证， 本发明鉴定结果与田间鉴定相当， 且年度 间差异小。具体表现如下 ： 说 明 书 CN 104152533 A 3 2/3 页 4 （1） 鉴定周期更短， 35 45 天小苗不剪叶即可用于鉴定， 整个鉴定周期仅为 45 55 天即可， 比现有的其它鉴定方法的鉴定周期更短， 说明本发明的方法更高效 ； （2） 育种方法不同， 其它方法均采用漂浮育苗， 移栽后鉴定或移植到新盘上再做鉴定。 本方法采用大孔穴盘， 有足够空间在原盘上直接鉴定， 盘不在营养液中浸泡， 更适合固体接 种。
10、病原接种 ； （3） 病原接种材料的制作不同。 常规的菌谷制作是采用带壳的谷子制作， 本方法的采用 脱粒后的小米制作， 更方便接种， 并有利于发病。 0009 （4） 黑胫病接种材料所用的小米经过水煮、 沥干、 消毒、 填装在矩形槽体并进行均 匀分块， 这样在使用时直接按块拿取， 这样可以进一步提高试验速率、 提高试验规范化程 度。 具体实施方式 0010 实施例 1 1、 材料与方法 1.1、 试验材料 贵州省烟草品种 / 系 10 份烤烟材料， 对照品种革新 3 号、 金星 6007、 小黄金 1025。 0011 1.2、 试验方法 1.2.1、 常规病圃鉴定法 田间病圃鉴定在贵州省烟草。
11、科学研究院烤烟品种试验黑胫病鉴定圃中进行。试验设 4 个重复， 每重复 1 行， 栽烟 10 株。采用漂浮育苗法， 育苗方法同常规生产。剪叶两次， 培育 成壮苗后， 于 5 月上旬移栽， 密度 10.6m2， 亩施纯氮 6 公斤。其它栽培管理措施同大田生 产。设革新 3 号为抗病对照、 金星 6007 为中抗对照， 小黄金 1025 为感病对照。田间鉴定于 移栽后 20 天， 对所有供试烟株进行人工接种， 在烟株根部埋入预先培养的黑胫病接种材料 3g。分别在接种后 20 天、 40 天、 60 天调查病情分级， 取三次调查平均值计算病情指数。 0012 1.2.2、 本发明方法 小苗快速鉴定法。
12、在温室中进行， 温度环境25。 将待鉴定的各烟草品种播种到54孔育 苗穴盘中育苗， 每个品种 / 系 1 盘。育苗管理措施同常规烟叶生产。当苗龄达 40 天后 （不 需剪叶） ， 进行人工接种。对所有供试烟株在穴盘的穴孔中埋入预先培养的黑胫病接种材料 0.5g。分别在接种后 3 天、 7 天、 10 天调查病情分级， 取三次调查平均值计算病情指数。 0013 1.2.3、 接种材料的制作 将小米用水煮至 6 分熟， 捞出放到纱布上摊开， 沥水 10 分钟。装入 250ml 圆形塑料组 培瓶中， 装至瓶体的 2/3 处。用高压蒸气灭菌锅 121灭菌 1 小时。冷却至室温后， 将灭菌 后的小米均匀。
13、填装在矩形槽体内， 按重量 0.1 1g 均匀矩形槽体内的小米切成小块， 将分 离好的在燕麦培养基上的黑胫病菌丝接种到小米上， 在培养箱中 28下培养 15 天， 菌丝长 满即可， 使用时按块取用即可。 0014 1.2.4 调查方法及抗性划分 记载方法执行国家标准 “烟草病虫害分级及调查方法 （GB/T 23222-2008） ” 。 0015 病情指数 （D） 计算公式 ： D= （各级病株数 该病级数） 100/（调查总株数 最高级数） 说 明 书 CN 104152533 A 4 3/3 页 5 抗性划分按国家标准 GB/T 23224-2008 执行， 分为 6 个级别 ： 表 1 ： 国家标准抗性划分表 表 2 ： 常规病圃鉴定与小苗快速鉴定结果 通过本发明方法和常规病圃鉴定法的同步验证对比， 由表 2 的试验结果可以看出， 两 种方法的鉴定结果对品种抗性的判定基本一致， 说明本发明方法的有效性， 而本发明采用 的方法的鉴定周期更短， 工作量更小， 是一种更优越的烟草小苗期快速鉴定黑胫病抗性的 方法。 说 明 书 CN 104152533 A 5 。