基于表面等离子体耦合效应的均相多组分免疫分析方法.pdf

《基于表面等离子体耦合效应的均相多组分免疫分析方法.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《基于表面等离子体耦合效应的均相多组分免疫分析方法.pdf（7页完整版）》请在专利查询网上搜索。

1、(10)申请公布号 CN 102914646 A (43)申请公布日 2013.02.06 CN 102914646 A *CN102914646A* (21)申请号 201210463931.6 (22)申请日 2012.11.16 G01N 33/558(2006.01) G01N 21/65(2006.01) G01N 33/531(2006.01) (71)申请人 湖南大学 地址 410082 湖南省长沙市岳麓区麓山南路 2 号 (72)发明人 王玉 蒋健晖 楚霞 唐丽娟 俞汝勤 (74)专利代理机构 长沙正奇专利事务所有限责 任公司 43113 代理人 马强 (54) 发明名称 基于。

2、表面等离子体耦合效应的均相多组分免 疫分析方法 (57) 摘要 本发明公开了一种基于表面等离子体耦合效 应的均相多组分免疫分析方法， 分别制备了表面 修饰有拉曼活性染料和捕获抗体的金纳米球探针 和表面修饰有拉曼活性染料和检测抗体的金纳米 棒探针， 拉曼活性染料自身带有巯基且无荧光背 景， 抗体经 TCEP 还原处理。待测物抗原与抗体发 生免疫夹心反应， 生成免疫复合物， 拉近纳米颗粒 之间的距离， 产生表面等离子体耦合效应， 显著增 强了纳米颗粒表面修饰染料的拉曼信号， 利用耦 合增强效应实现了对抗原的 SERS 定量分析。该 方法简单、 快速， 检测过程只需要一步操作， 不需 要反复洗脱， 。

3、无需对样品进行分离， 实现了样品中 含有多个组分的同步定量分析， 灵敏度高， 特异性 好， 有望成为蛋白组学研究和药物疗效评估的一 种新方法。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 5 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 5 页 1/1 页 2 1. 一种基于表面等离子体耦合效应的均相多组分免疫分析方法， 包括制备表面修饰有 拉曼活性染料和抗体的金纳米颗粒探针， 抗原与抗体免疫夹心反应使纳米颗粒之间的距离 拉近， 产生表面等离子体耦合效应， 显著增强纳米颗粒表面修饰染料的拉曼信号， 利用耦合 增强效应和拉曼光谱自身性质实现了。

4、多组分 SERS 定量分析。 2. 根据权利要求 1 所述的基于表面等离子体耦合效应的均相多组分免疫分析方法， 包 括如下步骤 ： （1） 制备表面修饰有拉曼活性染料和抗体的金纳米颗粒探针 ； （2） 将待测物样品加入到含有步骤 （1） 所述的金纳米颗粒探针的 PBS 缓冲溶液中， 进行 免疫夹心反应 ； （3） 对反应后的样品溶液进行检测。 3. 如权利要求 2 所述的分析方法， 其特征在于， 步骤 （1） 所述的金纳米颗粒探针包括修 饰有拉曼活性染料和抗体的金纳米棒探针， 修饰有拉曼活性染料和抗体的金纳米球探针。 4. 如权利要求 2 所述的分析方法， 其特征在于， 所述抗体均经过三 （2。

5、- 羧乙基） 膦盐酸 盐还原处理。 5. 如权利要求 2 所述的分析方法， 其特征在于， 步骤 （3） 所述的检测是对反应后的样品 溶液进行拉曼光谱扫描。 6. 如权利要求 2 至 5 任一项所述的方法， 其特征在于， 所述方法的具体步骤如下 ： （1） 制备表面修饰有拉曼活性染料和抗体的金纳米棒探针 ： （a） 取三 （2- 羧乙基） 膦盐酸盐溶液加入到抗体溶液中， 充分混匀， 37培育 ； （b） 取金纳米棒溶液， 离心去除多余的 CTAB 保护剂， 将金纳米棒重新分散在灭菌水中， 取中性表面活性剂 Brij 56 溶液加入到金纳米棒溶液中， 充分混匀， 37培育， 置换掉金纳 米棒表面的。

6、 CTAB 保护剂， 再次离心去除多余的 Brij 56， 将金纳米棒重新分散在灭菌水中 ； （c） 向步骤 （b） 所得的金纳米棒溶液中加入经步骤 （a） 还原处理后的抗体溶液， 30 培育 ； 取拉曼染料溶液加入到该溶液中， 充分混匀， 30培育 ； 再加入 BSA 溶液， 充分混匀， 30培育 ； 标记过程结束后， 反复离心三次去除多余的抗体和拉曼染料， 将离心得到的金纳 米棒重新分散在 PB 溶液中， 4 储存备用 ； （2） 制备表面修饰有拉曼活性染料和抗体的金纳米球探针 ： （a） 取三 （2- 羧乙基） 膦盐酸盐溶液加入到抗体溶液中， 充分混匀， 37培育 ； （b） 取金纳米球。

7、溶液， 离心去除上层溶液， 将金纳米球重新分散在灭菌水中， 取拉曼染 料溶液加入到该溶液中， 充分混匀， 37培育 ； 加入经步骤 （a） 还原处理后的抗体溶液， 充 分混匀， 37培育 ； 再加入 BSA 溶液， 充分混匀， 37培育 ； 标记过程结束后， 反复离心三次 去除多余的抗体和拉曼染料， 将离心得到的金纳米球重新分散在 PB 溶液中， 4 储存备 用 ； （3） 对反应后的样品溶液进行检测 ： 分别取步骤 （1） 制备的金纳米棒探针， 步骤 （2） 制 备的金纳米球探针和含有待测物抗原的样品溶液加入到 PBS 缓冲溶液中， 充分混匀， 37 培育， 反应结束后， 使用拉曼光谱仪对产。

8、物溶液进行拉曼光谱扫描。 权 利 要 求 书 CN 102914646 A 2 1/5 页 3 基于表面等离子体耦合效应的均相多组分免疫分析方法 技术领域 0001 本发明属于一种基于表面等离子体耦合效应的均相多组分免疫分析方法， 具体是 指纳米材料的生物功能化和应用， 表面增强拉曼共振 (SERS) 以及耦合增强效应， 蛋白质定 量和免疫分析技术。 背景技术 0002 蛋白质分子标志物的定量检测对于蛋白组学研究具有重要的意义， 它作为一种分 析指标， 可以灵敏的反应治疗药物在疾病模型中的药效。目前的免疫分析技术都是利用了 抗原抗体免疫夹心反应原理， 传统的检测方法多以固相反应为主， 先固定捕。

9、获抗体， 再依次 结合抗原和检测抗体， 洗脱步骤多， 费时费力。 另外， 还建立了一些新的免疫分析技术， 如磁 分离分析技术， 微流控免疫分析技术， 基于场效应晶体管的纳米管技术等， 这些分析方法灵 敏、 快速、 特异， 但是， 需要借助于复杂的仪器， 操作难度高， 实验人员需要掌握一定的技术。 发明内容 0003 本发明针对现有技术存在的不足， 提出了一种基于表面等离子体耦合效应的均相 多组分免疫分析方法， 检测过程只需要一步操作， 简单、 快速， 不需要洗脱， 无需对样品进行 分离， 实现了样品中含有多个组分的同步定量分析， 灵敏度高， 特异性好。 0004 当贵金属纳米颗粒表面等离子体受。

10、到激发， 在颗粒表面产生电磁场， 显著增强了 表面吸附分子的拉曼信号 ； 当纳米颗粒之间的距离足够接近时， 表面等离子体产生耦合作 用， 形成了更强的电磁场， 对表面吸附分子的拉曼信号能达到 1041015倍的增强作用。 0005 本发明所述的基于表面等离子体耦合效应的均相多组分免疫分析方法， 包括制备 表面修饰有拉曼活性染料和抗体的纳米颗粒探针， 抗原抗体结合拉近纳米颗粒之间的距 离， 表面等离子体产生耦合， 利用耦合增强效应进行 SERS 定量分析。其中， 所述的纳米颗粒 表面功能化修饰是通过 Au-S 键共价作用来实现的， 拉曼活性染料自身带有巯基且无荧光 背景， 抗体经三 （2- 羧乙。

11、基） 膦盐酸盐 (TCEP) 还原处理。 0006 本发明所述的免疫分析方法， 分别制备了表面修饰有拉曼活性染料和捕获抗体的 金纳米球探针和表面修饰有拉曼活性染料和检测抗体的金纳米棒探针， 待测物抗原与抗体 发生免疫夹心反应， 生成免疫复合物， 拉近纳米颗粒之间的距离， 产生表面等离子体耦合效 应， 显著增强了纳米颗粒表面修饰染料的拉曼信号， 利用这种耦合增强效应实现了对抗原 的 SERS 定量分析。 0007 本发明所述的多组分免疫分析方法包括如下步骤 ： （1） 制备修饰有拉曼活性染料和检测抗体 （多抗） 的金纳米棒探针 ； （2） 制备修饰有拉曼活性染料和捕获抗体 （单抗） 的金纳米球探。

12、针 ； （3） 将待测物样品加入到含有步骤 （1） 和 （2） 所述的两种金纳米颗粒探针的缓冲溶液 中， 发生免疫夹心反应 ； （4） 对反应后的样品溶液进行检测。 说 明 书 CN 102914646 A 3 2/5 页 4 0008 其中， 针对不同的待测物抗原， 步骤 （1） 所述的金纳米棒探针是表面修饰有不同的 拉曼活性染料和不同的检测抗体的纳米颗粒探针。 0009 其中， 针对不同的待测物抗原， 步骤 （2） 所述的金纳米球探针是表面修饰有不同的 拉曼活性染料和不同的捕获抗体的纳米颗粒探针。 0010 其中， 针对一种待测物抗原， 步骤 （1） 所述的金纳米棒探针和步骤 （2） 所述。

13、的金纳 米球探针是表面修饰有同一种拉曼活性染料的纳米颗粒探针。 0011 其中， 步骤 （4） 所述的检测手段是利用拉曼光谱仪对产物溶液进行定量分析。 0012 其中， 所述的检测抗体和捕获抗体均经过三 （2- 羧乙基） 膦盐酸盐 (TCEP) 还原处 理。 0013 以下结合具体的操作步骤对本发明做进一步的说明 （以样品中含有三种待测抗原 为例） ： （1） 分别制备了三种能与待测抗原 （， ， ） 特异性结合的金纳米棒探针， 金纳米 棒探针， 金纳米棒探针。 金纳米棒探针是表面修饰有拉曼染料(1), 检测抗体(1)和 BSA 的纳米颗粒探针， 金纳米棒探针是表面修饰有拉曼染料 (2), 检。

14、测抗体 (2) 和 BSA 的 纳米颗粒探针， 金纳米棒探针是表面修饰有拉曼染料(3), 检测抗体(3)和BSA的纳米颗 粒探针。 0014 （2） 分别制备了三种能与待测抗原 （， ， ） 特异性结合的金纳米球探针， 金 纳米球探针， 金纳米球探针。金纳米球探针是表面修饰有拉曼染料 (1), 捕获抗体 (1) 和 BSA 的纳米颗粒探针， 金纳米球探针是表面修饰有拉曼染料 (2), 捕获抗体 (2) 和 BSA 的纳米颗粒探针， 金纳米球探针是表面修饰有拉曼染料 (3), 捕获抗体 (3) 和 BSA 的 纳米颗粒探针。 0015 （3） 将步骤 （1） 和 （2） 所述的两种金纳米颗粒探针。

15、加入到含有三种待测抗原的样 品溶液中， 抗原与抗体发生免疫夹心反应。 0016 （4） 对反应后的样品溶液进行拉曼光谱扫描。 0017 对于样品中含有三种待测抗原的定量分析， 检测过程是 ： 取金纳米棒探针， ， 和金纳米球探针， ， 的储备液以及缓冲溶液于微量管中， 加入含有三种待测抗原的 样品溶液， 于 37恒温水浴中培育 15 分钟， 反应结束后， 取一定体积的样品进行拉曼光谱 扫描。 0018 本发明中， 制备金纳米棒探针的具体步骤是 ： (1) 取1 mL 50 mM TCEP溶液加入到 检测抗体溶液(0.1 mg/mL, 150 mL)中， 充分混匀， 放入37摇床中培育30分钟 。

16、； (2) 取金 纳米棒 ( 长径比 2.7) 溶液 4 mL， 8000 rpm 离心 10min， 去除上层溶液， 将金纳米棒分散在 5 mL 灭菌水中， 取 280 mL 15 mM Brij 56 溶液加入到金纳米棒溶液中， 充分混匀， 于 37 摇床中培育 30 分钟后， 取出， 8000 rpm 离心 10min， 去除上层溶液， 将金纳米棒分散在 2 mL 灭菌水中 ； (3) 取检测抗体溶液 (0.1 mg/mL, 180 mL) 加入到金纳米棒溶液中， 充分混匀， 放入 30摇床中培育 2 小时 ； (4) 取拉曼染料溶液 (50 mM， 6 mL) 加入到金纳米棒溶液中， 。

17、充分混匀， 放入30摇床中培育2小时 ； (5) 取90 mL 5% BSA溶液加入到金纳米棒溶液中， 充分混匀， 于 30摇床中继续培育 2 小时后， 取出， 8000 rpm 离心 10min， 去除上层溶液， 将 金纳米棒分散在 10 mM PB 溶液中， 反复离心洗涤三次后， 用 0.6 mL 10 mM PB 溶液定容， 4 储存备用。 说 明 书 CN 102914646 A 4 3/5 页 5 0019 制备金纳米球探针的具体步骤是 ： (1) 取 1 mL 50 mM TCEP 溶液加入到捕获抗体 溶液 (0.1 mg/mL, 150 mL) 中， 充分混匀， 放入 37摇床中。

18、培育 30 分钟 ； (2) 取金纳米球 溶液 1 mL， 10000 rpm 离心 10min， 去除上层溶液， 将金纳米球分散在 300 mL 灭菌水中， 取 拉曼染料溶液 (50 mM, 6 mL) 加入到金纳米球溶液中， 充分混匀， 放入 37摇床中培育 15 分钟 ； (3) 取捕获抗体溶液 (0.1 mg/mL, 112 mL) 加入到金纳米球溶液中， 充分混匀， 放入 37摇床中培育 1 小时 ； (4) 取 17 mL 5% BSA 溶液加入到金纳米球溶液中， 充分混匀， 于 37摇床中继续培育1小时后， 取出， 8000 rpm离心10min， 去除上层溶液， 将金纳米球分散。

19、 在 10 mM PB 溶液中， 反复离心洗涤三次后， 用 300 mL 10 mM PB 溶液定容， 4 储存备用。 0020 对于样品中含有三种待测抗原的定量分析， 具体的操作步骤是 ： 分别取三种金纳 米棒探针， ， (2 nM , 1.25 mL)和三种金纳米球探针， ， (50 pM , 2 mL)加 入到 17.25 mL PBS 缓冲溶液 (10 mM PB, 200 mM NaCl) 中， 取 3 mL 含有待测抗原的样品 溶液加入到该溶液中， 充分混匀后， 放入37恒温水浴中反应15分钟。 反应结束后， 使用拉 曼光谱仪对产物溶液进行拉曼光谱扫描。 0021 注意， 以上反应。

20、条件为最优条件， 所述溶液体积均可成倍变化不改变最优结果。 改 变比例或试剂加入顺序可使信号的变化程度在 1 100内变化。 0022 本发明提出了一种基于表面等离子体耦合效应的均相多组分免疫分析方法， 分别 制备了表面修饰有拉曼活性染料和捕获抗体的金纳米球探针和表面修饰有拉曼活性染料 和检测抗体的金纳米棒探针， 拉曼活性染料自身带有巯基且无荧光背景， 抗体经 TCEP 还原 处理。待测物抗原与抗体发生免疫夹心反应， 生成免疫复合物， 拉近纳米颗粒之间的距离， 产生表面等离子体耦合效应， 显著增强了纳米颗粒表面修饰染料的拉曼信号， 利用这种耦 合增强效应实现了对抗原的 SERS 定量分析。该方。

21、法简单、 快速， 检测过程只需要一步操作， 不需要反复洗脱， 无需对样品进行分离， 实现了样品中含有多个组分的同步定量分析， 灵敏 度高， 特异性好， 有望成为蛋白组学研究和药物疗效评估的一种新方法。 具体实施方式 0023 实施例 1 ： 人干扰素 - 检测 具体的操作步骤是 ： (1) 制备金纳米棒探针和金纳米球探针 金纳米棒探针的制备方法 ： (1) 取 1 mL 50 mM TCEP 溶液加入到人干扰素 - 抗体 溶液 ( 多抗， 0.1 mg/mL, 150 mL) 中， 充分混匀， 放入 37摇床中培育 30 分钟 ； (2) 取金 纳米棒 ( 长径比 2.7) 溶液 4 mL， 。

22、8000 rpm 离心 10min， 去除多余的十六烷基三甲基溴化 铵 （CTAB） 溶液， 将金纳米棒重新分散在 5 mL 灭菌水中 ； 取 280 mL 15 mM Brij 56 溶液 加入到金纳米棒溶液中， 充分混匀， 放入 37摇床中培育 30 分钟， 置换掉金纳米棒表面的 CTAB ； 取出， 8000 rpm 离心 10min， 去除上层溶液， 将金纳米棒重新分散在 2 mL 灭菌水中 ； (3) 取经 TCEP 还原处理后的人干扰素 - 抗体溶液 ( 多抗， 0.1 mg/mL, 180 mL) 加入到 金纳米棒溶液中， 充分混匀， 放入 30摇床中培育 2 小时 ； (4) 。

23、取 DTNB (5,5 -dithio- bis(2-nitrobenzoic acid) 溶液 (50 mM， 6 mL) 加入到金纳米棒溶液中， 充分混匀， 放入 30摇床中培育 2 小时 ； (5) 取 90 mL 5% BSA 溶液加入到金纳米棒溶液中， 充分混匀， 于 30摇床中继续培育2小时后， 取出， 8000 rpm离心10min， 去除上层溶液， 将金纳米棒分散 说 明 书 CN 102914646 A 5 4/5 页 6 在 10 mM PB 溶液中， 反复离心洗涤三次后， 用 0.6 mL 10 mM PB 溶液定容， 4 储存备用。 0024 金纳米球探针的制备方法 ：。

24、 (1) 取 1 mL 50 mM TCEP 溶液加入到人干扰素 - 抗 体溶液(单抗， 0.1 mg/mL, 150 mL)中， 充分混匀， 放入37摇床中培育30分钟 ； (2) 取金 纳米球溶液 1 mL， 10000 rpm 离心 10min， 去除上层溶液， 将金纳米球分散在 300 mL 灭菌水 中， 取拉曼染料溶液 (50 mM, 6 mL) 加入到金纳米球溶液中， 充分混匀， 放入 37摇床中培 育 15 分钟 ； (3) 取经 TCEP 还原处理后的人干扰素 - 抗体溶液 ( 单抗， 0.1 mg/mL, 112 mL) 加入到金纳米球溶液中， 充分混匀， 放入 37摇床中培。

25、育 1 小时 ； (4) 取 17 mL 5% BSA 溶液加入到金纳米球溶液中， 充分混匀， 于 37摇床中继续培育 1 小时后， 取出， 8000 rpm 离心 10min， 去除上层溶液， 将金纳米球分散在 10 mM PB 溶液中， 反复离心洗涤三次后， 用 300 mL 10 mM PB 溶液定容， 4 储存备用。 0025 (2) 人干扰素 - 检测 分别取 3.75 mL 金纳米棒探针和 6 mL 金纳米球探针加入到 17.25 mL PBS 缓冲溶液 ( 含 10 mM PB, 200 mM NaCl) 中， 取 3 mL 含有人干扰素 - 的样品溶液加入到缓冲溶液 中， 充分。

26、混匀， 放入37恒温水浴中反应15分钟。 反应结束后， 取产物溶液10?L滴在硅片 上， 使用激光共聚焦拉曼光谱仪对产物溶液进行拉曼光谱扫描。选用 He-Ne 激发器 ( 激发 波长 632 nm)， 曝光时间 10 秒， 扫描圈数 1 圈， 扫描范围 600 nm-2000 nm。 0026 实验结果 ： 待测物人干扰素-的浓度与响应呈现良好的线性关系， 线性范围是1.2 nM 1.2 pM， 能达到 3 个数量级， 检测下限是 1.0 pM。 0027 实施例 2 ： 细胞因子多组分检测 选取含有三种细胞因子 ( 干扰素 -， 白介素 -2， 肿瘤坏死因子 -) 的待测样品作为 模型体系。。

27、对于三种待测细胞因子， 分别制备了三种金纳米棒探针， ， 和三种金纳米 球探针， ， ， 金纳米棒探针与金纳米球探针能特异性结合人干扰素 -， 金纳米棒 探针与金纳米球探针能特异性结合人白介素 -2， 金纳米棒探针与金纳米球探针能 特异性结合肿瘤坏死因子 -。 0028 具体的操作步骤是 ： (1) 制备金纳米棒探针和金纳米球探针 修饰有拉曼染料DTNB和人干扰素-抗体的金纳米棒探针的制备方法 ： (1) 取1 mL 50 mM TCEP 溶液加入到人干扰素 - 抗体溶液 ( 多抗， 0.1 mg/mL, 150 mL) 中， 充分混匀， 放入37摇床中培育30分钟 ； 取金纳米棒(长径比2.。

28、7)溶液4 mL， 8000 rpm离心10min， 去除多余的十六烷基三甲基溴化铵 （CTAB） 溶液， 将金纳米棒重新分散在 5 mL 灭菌水中 ； 取 280 mL 15 mM Brij 56溶液加入到金纳米棒溶液中， 充分混匀， 放入37摇床中培育30分 钟， 置换掉金纳米棒表面的 CTAB ； 取出， 8000 rpm 离心 10min， 去除上层溶液， 将金纳米棒重 新分散在 2 mL 灭菌水中 ； (3) 取经 TCEP 还原处理后的人干扰素 - 抗体溶液 ( 多抗， 0.1 mg/mL, 180 mL) 加入到金纳米棒溶液中， 充分混匀， 放入 30摇床中培育 2 小时 ； (。

29、4) 取 DTNB 溶液 (50 mM， 6 mL) 加入到金纳米棒溶液中， 充分混匀， 放入 30摇床中培育 2 小时 ； (5) 取 90 mL 5% BSA 溶液加入到金纳米棒溶液中， 充分混匀， 于 30摇床中继续培育 2 小 时后， 取出， 8000 rpm离心10min， 去除上层溶液， 将金纳米棒分散在10 mM PB溶液中， 反复 离心洗涤三次后， 用 0.6 mL 10 mM PB 溶液定容， 4 储存备用。 说 明 书 CN 102914646 A 6 5/5 页 7 0029 修饰有拉曼染料DTNB和人干扰素-抗体的金纳米球探针的制备方法 ： (1) 取 1 mL 50 。

30、mM TCEP 溶液加入到人干扰素 - 抗体溶液 ( 单抗， 0.1 mg/mL, 150 mL) 中， 充分 混匀， 放入 37摇床中培育 30 分钟 ； (2) 取金纳米球溶液 1 mL， 10000 rpm 离心 10min， 去 除上层溶液， 将金纳米球分散在 300 mL 灭菌水中， 取拉曼染料溶液 (50 mM, 6 mL) 加入到 金纳米球溶液中， 充分混匀， 放入 37摇床中培育 15 分钟 ； (3) 取经 TCEP 还原处理后的人 干扰素 - 抗体溶液 ( 单抗， 0.1 mg/mL, 112 mL) 加入到金纳米球溶液中， 充分混匀， 放入 37摇床中培育 1 小时 ； 。

31、(4) 取 17 mL 5% BSA 溶液加入到金纳米球溶液中， 充分混匀， 于 37摇床中继续培育1小时后， 取出， 8000 rpm离心10min， 去除上层溶液， 将金纳米球分散 在 10 mM PB 溶液中， 反复离心洗涤三次后， 用 300 mL 10 mM PB 溶液定容， 4 储存备用。 0030 修饰有拉曼染料2-thiouracil和人白介素-2抗体的金纳米棒探针和金纳米球 探针， 以及修饰有拉曼染料 4-acetamidothiophenol 和人肿瘤坏死因子 - 抗体的金纳 米棒探针和金纳米球探针与上述步骤完全一致。 0031 (2) 细胞因子多组分检测 分别取三种金纳米。

32、棒探针， ， (2 nM, 1.25 mL) 和三种金纳米球探针， ， (50 pM, 2 mL)加入到17.25 mL PBS缓冲溶液(10 mM PB, 200 mM NaCl)中， 取3 mL样 品溶液加入到缓冲溶液中， 充分混匀， 放入37恒温水浴中反应15分钟。 反应结束后， 取产 物溶液 10?L 滴在硅片上， 使用激光共聚焦拉曼光谱仪对产物溶液进行拉曼光谱扫描。选 用He-Ne激发器(激发波长632 nm)， 曝光时间10秒， 扫描圈数1圈， 扫描范围600 nm-2000 nm。 0032 实验结果 ： 选择的三种拉曼染料 (DTNB, 2-thiouracil, 4-acet。

33、amidothiophenol)， 每种染料都 各自有一个特征峰不受其它两种染料拉曼峰的干扰， 以此特征峰的强度值作为待测物的定 量分析依据。 0033 待测物人干扰素-的浓度与响应呈现良好的线性关系， 线性范围是1.2 nM 1.2 pM， 能达到 3 个数量级， 检测下限是 1.0 pM ； 待测物人白介素 -2 的浓度与响应呈现良好的 线性关系， 线性范围是 1.3 nM 3.25 pM， 接近 3 个数量级， 检测下限是 2.75 pM ； 待测物人 肿瘤坏死因子-的浓度与响应呈现良好的线性关系， 线性范围是1.14 nM 0.57 pM， 能达 到 3 个数量级， 检测下限是 0.45 pM。 说 明 书 CN 102914646 A 7 。