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1、(10)申请公布号 CN 102914603 A (43)申请公布日 2013.02.06 CN 102914603 A *CN102914603A* (21)申请号 201210363643.3 (22)申请日 2012.09.27 G01N 30/02(2006.01) G01N 30/74(2006.01) (71)申请人 苏州市产品质量监督检验所 地址 215104 江苏省苏州市吴中区吴中大道 1368 号 申请人 江南大学 (72)发明人 李培 李灿 孙秀兰 陈英 丁洪流 陈尚卫 戴军 谢云飞 姚卫蓉 (54) 发明名称 一种同时分离检测十三种糖和糖醇的高效液 相色谱蒸发光散射检测法。
2、 (57) 摘要 本发明属于食品中糖和糖醇的检测领域。 包括以下步骤 ： 对十三种糖与糖醇的混合标 准溶液， 采用乙腈 - 水的混合溶液为分离流动 相， 在氨基柱上进行梯度洗脱分离， 洗脱速度为 0.8-1.2ml/min ； 分离后采用蒸发光散射检测器 进行检测 ； 蒸发光散射检测器检测条件为 ： 漂移 管温度为 40-70， 载气为 N2， 流速为 0.8-1.5l/ min， 增益为 1。本法提供了一种食品中常见的多 种糖及糖醇的同时分离检测的高效， 便捷， 低检出 限， 高通用性的分析方法。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 3 页 附图 3 页 (19)中华人民共和。
3、国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 3 页 附图 3 页 1/1 页 2 1. 一种同时分离检测十三种糖和糖醇的高效液相色谱蒸发光散射检测法， 其特征在 于 ： 包括以下步骤 ： (1) 配制十三种糖和糖醇混合标准溶液， 各单品的浓度均为 0.4mg/ml ； (2) 采用乙腈 - 水的混合溶液为分离流动相， 在氨基柱上进行梯度洗脱分离 ； (3) 分离后采用蒸发光散射检测器进行检测 ； (4)取一定量的步骤(1)所得的混合标准溶液进样高效液相色谱仪， 采用步骤(2)进行 分离， 采用步骤 (3) 进行检测。 2. 根据权利要求 1 所述的同时分离检测十三种糖和。
4、糖醇的高效液相色谱蒸发光散射 检测法， 其特征在于 ： 所述步骤 (1) 中混合标准溶液的配制过程如下 ： 分别准确称取葡萄 糖、 果糖、 木糖、 蔗糖、 麦芽糖、 乳糖、 蔗果三糖、 蔗果四糖、 蔗果五糖、 赤藓糖醇、 木糖醇、 甘露 糖醇、 麦芽糖醇各 0.25g( 精确至 0.1mg) 于 150ml 烧杯中， 用少量超纯水溶解， 超声波震 荡 2min， 过 0.45m 水相滤膜并转移至 25ml 容量瓶， 定容至刻度， 配制成 10mg/ml 的单标 溶液。分别取配制好的单标溶液各 1ml 于 25ml 容量瓶中， 取超纯水定容至刻度， 超声振荡 2min， 配制成 0.4mg/ml。
5、 的混合标准溶液。 3. 根据权利要求 1 所述的同时分离检测十三种糖和糖醇的高效液相色谱蒸发光散射 检测法， 其特征在于 ： 所述步骤 (1) 中涉及的十三种糖和糖醇分别为 ： 葡萄糖、 果糖、 木糖、 麦芽糖、 蔗糖、 乳糖、 蔗果三糖、 蔗果四糖、 蔗果五糖、 赤藓糖醇、 木糖醇、 甘露糖醇、 麦芽糖 醇。 4. 根据权利要求 1 所述的同时分离检测十三种糖和糖醇的高效液相色谱蒸发光 散射检测法， 其特征在于 ： 所述步骤 (2) 中氨基柱为 Agilent ZORBAX NH2柱 (5m， 4.6250mm)。 5. 根据权利要求 1 所述的同时分离检测十三种糖和糖醇的高效液相色谱蒸发。
6、光散射 检测法， 其特征在于 ： 所述步骤 (2) 中的梯度洗脱程序为 0-1min 时， 乙腈水的体积比为 80 20， 1-5min 时， 乙腈水的体积比从 80 20 变到 85 15， 5-20min 时， 乙腈 - 水的 体积比从 85 15 变到 70 30， 20-40min 时， 乙腈水的体积比为 70 30， 洗脱速度为 0.8-1.2ml/min， 柱温为 30。 6. 根据权利要求 1 所述的同时分离检测十三种糖和糖醇的高效液相色谱蒸发光散射 检测法， 其特征在于 ： 所述步骤(3)中的蒸发光散射检测条件为 ： 漂移管温度为40-70， 载 气 N2， 流速为 0.8-1。
7、.5l/min， 增益为 1。 7. 根据权利要求 1 所述的同时分离检测十三种糖和糖醇的高效液相色谱蒸发光散射 检测法， 其特征在于 ： 所述步骤 (4) 中的进样量 3-20l。 权 利 要 求 书 CN 102914603 A 2 1/3 页 3 一种同时分离检测十三种糖和糖醇的高效液相色谱蒸发光 散射检测法 技术领域 0001 本发明属于食品中糖和糖醇的检测领域， 特别是涉及到葡萄糖、 果糖、 木糖、 麦芽 糖、 蔗糖、 乳糖、 蔗果三糖、 蔗果四糖、 蔗果五糖、 赤藓糖醇、 木糖醇、 甘露糖醇、 麦芽糖醇这 十三种常见糖与糖醇的高效液相色谱蒸发光散射检测方法。 背景技术 0002 糖。
8、类是食品中的主要营养成分之一， 其主要影响食品的质构、 风味、 甜味等性质， 同时糖类也是人体的主要能量来源。食品中常见的糖类包括单糖， 如木糖、 葡萄糖、 果糖， 双糖， 如麦芽糖、 乳糖、 蔗糖， 功能性低聚糖， 如低聚果糖 ( 包括蔗果三糖、 蔗果四糖、 蔗果五 糖 )， 功能性糖醇， 如赤藓糖醇、 木糖醇、 甘露糖醇、 麦芽糖醇等。其中单、 双糖是食品中的 主要甜味来源， 同时也是某些食品的安全指标， 如 GB14963-2011 中明确规定蜂蜜中果糖和 葡萄糖含量应 60g/100g， 蔗糖含量应 10g/100g ； 功能性低聚糖如低聚果糖作为益生元 已被广泛用于各种配方食品、 保。
9、健食品， 特别是婴幼儿配方食品中， 但添加量一般较低， 在 2g/100g 以下， 功能性糖醇如赤藓糖醇、 木糖醇、 甘露醇、 麦芽糖醇一般作为糖类替代成分添 加到无糖食品如无糖口香糖、 无糖肉松等食品中， 现行国家标准 预包装特殊膳食用食品标 签通则 规定 “无糖” 的要求是指固体或液体食品中每 100g 或 100ml 的含糖量不高于 0.5g。 0003 目前糖类检测方法的研究中， 主要有高效液相色谱 (HPLC)- 荧光检测法 (FLD)， HPLC- 示差折光法， 离子色谱法， 高效液相色谱 - 质谱联用法 (HPLC-MS/MS)， 高效气相色谱 质谱联用法 (GC-MS/MS)。。
10、HPLC-FLD 法虽然灵敏度较高， 但是具有较强的选择性 ； 离子色谱 法具有较好的重复性和准确性， 但是糖类能在电极表面还原样品中某些分子 ； HPLC-MS/MS 法和 GC-MS/MS 法虽然具有高分离、 高选择、 高灵敏的特性， 但是其设备昂贵， 操作复杂， 通 用性较差 ； 现行国标中对单、 双糖、 糖醇的检测方法主要为化学还原法和 HPLC- 示差折光检 测法， 前者费时， 操作繁琐， 并且只能对具有还原性的糖进行定量检测， 无法准确定性 ； 后者 由于灵敏度不高， 平衡时间较长， 无法进行梯度洗脱， 亦无法完成多种单、 双糖、 低聚糖和糖 醇的同时检测。而功能性低聚糖的检测方法。
11、仍在探索中， 尚无成熟的国家标准。本法采用 高效液相色谱蒸发光散射法 (HPLC-ELSD)， 对以上十三种单、 双糖、 功能性低聚糖、 糖醇进行 检测， 方法简便、 灵敏度较高、 稳定性较好、 重复性较高。目前未见采用 HPLC-ELSD 法对以上 十三种单、 双糖、 功能性低聚糖、 功能性糖醇进行同时分离检测的报道。 发明内容 0004 本发明的目的在于提供一种方法简便、 通用性较高的糖和糖醇的高效液相色谱蒸 发光散射检测方法。本发明的技术方案如下 ： 0005 (1) 十三种单标溶液的配制 0006 分别准确称取葡萄糖、 果糖、 木糖、 蔗糖、 麦芽糖、 乳糖、 蔗果三糖、 蔗果四糖、 。
12、蔗果 五糖、 赤藓糖醇、 木糖醇、 甘露糖醇、 麦芽糖醇各 0.25g( 精确至 0.1mg) 于 150ml 烧杯中， 用 说 明 书 CN 102914603 A 3 2/3 页 4 少量超纯水溶解， 超声波震荡 2min， 过 0.45m 水相滤膜并转移至 25ml 容量瓶， 定容至刻 度， 配制成 10mg/ml 的单一标准溶液。于 4冰箱保存， 待用。 0007 (2) 含十三种单标的混合标准溶液的配制 0008 分别取配制好的单标液各 1ml 于 25ml 容量瓶中， 取超纯水定容至刻度， 超声振荡 2min， 配制成 0.4mg/ml 的混合标准溶液。置于 4冰箱保存， 用于 H。
13、PLC 检测。 0009 (3) 混合标准溶液的梯度洗脱 0010 采用Agilent ZORBAX NH2柱(5m， 4.6250mm)对十三种糖与糖醇进行分离。 分 离条件为 ： 流动相为乙腈 - 水， 梯度洗脱程序为 0-1min 时， 乙腈水的体积比为 80 20， 1-5min 时， 乙腈水的体积比从 80 20 变到 85 15， 5-20min 时， 乙腈 - 水的体积比从 85 15 变到 70 30， 20-40min 时， 乙腈水的体积比为 70 30， 柱温为 30， 洗脱速度 为 1.0ml/min， 进样量 10l ； 0011 (4) 蒸发光散射 (ELSD) 检测。
14、 0012 蒸发光散射检测条件 ： 漂移管温度 60， 载气 N2流速 1.5L/min， 增益为 1。 0013 在上述液相分离和 ELSD 检测条件下， 混合标准溶液得到了较好的分离， 分离图谱 见附图 1。 0014 (5) 混合标准溶液 HPLC-ELSD 法的标准曲线、 检出限的测定 0015 将 10mg/ml 的各种单标溶液的浓度依次稀释为 5mg/ml， 3mg/ml， 2mg/ml， 1mg/ml， 0.5mg/ml， 0.1mg/ml， 0.05mg/ml， 按步骤 (3) 和 (4) 进行分离检测， 根据峰面积 (Y) 与对应 糖和糖醇的浓度 (X) 进行线性回归， 可得。
15、到 13 种糖、 糖醇的标准曲线、 标准曲线方程、 线性 范围， 可用于实际样品中的各糖和糖醇含量的定量检测。 0016 同时将各单标溶液不断稀释， 当液相色谱峰的信噪比为 3 时， 确定该浓度为单一 标准溶液的检出限。 0017 本发明的优点与有益效果是 ： 采用本发明同时分离检测十三种糖与糖醇的高效液 相色谱蒸发光散射检测法对糖与糖醇进行检测， 检测限低， 操作简便， 可快速准确定性、 定 量食品中的十三种糖与糖醇， 可用于大规模样品检测， 适于标准化。 附图说明 0018 图 1 十三种糖与糖醇混合标准溶液的高效液相色谱蒸发光散射图谱， 1. 赤藓糖醇 2.木糖3.木糖醇 4.果糖 5.。
16、葡萄糖 6.甘露糖醇 7.蔗糖 8.麦芽糖 9.麦芽糖醇 10.乳 糖 11. 蔗果三糖 12. 蔗果四糖 13. 蔗果五糖。 0019 图 2 各单标的定量标准曲线。 具体实施方式 0020 下面结合实施例对本发明做进一步详细说明， 但本发明并不仅仅局限于下述实施 例。 0021 实施例 1 0022 将 10mg/ml 的各种单标液的浓度依次稀释为 5mg/ml， 3mg/ml， 2mg/ml， 1mg/ml， 0.5mg/ml， 0.1mg/ml， 0.05mg/ml， 分别在确佳分离检测条件下进行检测， 根据峰面积 (Y) 与 对应糖和糖醇的浓度 (X) 进行线性回归， 可得到 13 。
17、种糖、 糖醇的标准曲线、 标准曲线方程、 说 明 书 CN 102914603 A 4 3/3 页 5 线性范围， 并将浓度不断稀释， 当信噪比为 3 时， 确定每种糖或糖醇标准溶液的检出限， 具 体结果见表 1。 0023 表 1 十三种糖与糖醇混合标准溶液的标准曲线方程、 线性范围、 线性相关系数及 检出限 0024 0025 以上较佳实施例仅用于说明本发明的内容， 除此之外， 本发明还有其他实施方式， 但凡本领域技术人员因本发明所涉及之技术启示， 而采用等同替换或等效变形方式形成的 技术方案均落在本发明的保护范围内。 说 明 书 CN 102914603 A 5 1/3 页 6 图 1 说 明 书 附 图 CN 102914603 A 6 2/3 页 7 说 明 书 附 图 CN 102914603 A 7 3/3 页 8 图 2 说 明 书 附 图 CN 102914603 A 8 。