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1、(10)申请公布号 CN 102841208 A (43)申请公布日 2012.12.26 CN 102841208 A *CN102841208A* (21)申请号 201110174611.4 (22)申请日 2011.06.24 G01N 33/68(2006.01) G01N 33/532(2006.01) (71)申请人 北京乐普医疗科技有限责任公司 地址 102200 北京市昌平区科技园区超前路 37 号 7-1 号楼 (72)发明人 余占江 胡光宇 王长青 张芳 (74)专利代理机构 北京路浩知识产权代理有限 公司 11002 代理人 王加岭 张庆敏 (54) 发明名称 快速检测。
2、肌钙蛋白 I 的胶体金试纸及其制备 方法 (57) 摘要 本发明涉及临床免疫学检测领域， 具体涉及 一种快速检测肌钙蛋白 I 胶体金试纸条及其制备 方法。 本发明提供的试纸条， 其为在底板上依次相 互交错地粘贴包被膜、 喷涂有胶体金标记的抗心 肌肌钙蛋白I抗体的胶体金垫1、 喷涂有胶体金标 记的抗 BSA 单克隆抗体或抗 PEG 单克隆抗体的胶 体金垫 2、 样品垫和吸水垫， 所述的包被膜涂覆有 抗心肌肌钙蛋白 I 抗体检测线和兔抗鼠抗体质控 线。 通过对试纸条的改进， 首次将抗PEG技术和抗 BSA 单克隆抗体技术引入心肌肌钙蛋白 I 的检测 中， 大大提高了心肌肌钙蛋白 I 的检测灵敏度，。
3、 扩 大了现有胶体金快速诊断试纸条的临床应用。 (51)Int.Cl. 权利要求书 2 页 说明书 6 页 附图 1 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 2 页 说明书 6 页 附图 1 页 1/2 页 2 1. 一种快速检测心肌肌钙蛋白 I 胶体金试纸条， 其包括包被膜、 喷涂有胶体金标记的 抗心肌肌钙蛋白 I 单克隆抗体的胶体金垫 1、 喷涂有胶体金标记的抗 BSA 单克隆抗体或抗 PEG 单克隆抗体的胶体金垫 2、 样品垫、 吸水垫和底板， 所述的包被膜涂覆有抗心肌肌钙蛋 白 I 单克隆抗体检测线和兔抗鼠抗体质控线。 2. 根据权利要求 1 所述的。
4、试纸条， 其特征在于， 所述的胶体金垫 1 喷涂有粒径为 10nm 100nm 的胶体金标记的抗心肌肌钙蛋白 I 单克隆抗体。 3.根据权利要求2所述的试纸条， 其特征在于， 所述的胶体金标记的抗心肌肌钙蛋白I 单克隆抗体用 BSA 或 PEG 封闭。 4. 根据权利要求 1 所述的试纸条， 其特征在于， 所述的胶体金垫 2 喷涂有粒径为 20nm 100nm 的胶体金标记的抗 BSA 单克隆抗体或抗 PEG 单克隆抗体。 5.根据权利要求14任一项所述的试纸条， 其特征在于， 所述的包被膜为硝酸纤维素 膜。 6. 根据权利要求 1 4 任一项所述的试纸条， 其特征在于， 所述的胶体金垫 1、。
5、 胶体金 垫 2 和样品垫为聚酯膜或玻璃纤维素膜。 7. 权利要求 1 6 任一项所述的试纸条的制备方法， 包括如下步骤 ： 1) 制备胶体金垫 1 ： 将 BSA 或 PEG 封闭的胶体金标记的抗心肌肌钙蛋白 I 抗体溶液喷 洒于聚酯膜或玻璃纤维素膜上， 烘干备用 ； 2) 制备胶体金垫 2 ： 将胶体金标记的抗 BSA 单克隆抗体溶液或抗 PEG 溶液喷洒于聚酯 膜或玻璃纤维素膜上， 烘干备用 ； 3) 制备包被膜 ： 将抗心肌肌钙蛋白 I 抗体稀释液和兔抗鼠抗体稀释液喷涂于硝酸纤维 素膜上， 烘干备用 ； 4) 将样品垫用样品垫溶液处理后烘干备用 ； 5) 底板上依次相互交错地粘上制备的。
6、样品垫、 金标垫 1、 金标垫 2、 包被膜、 和吸水垫， 然后在上面覆盖透明塑料密封膜得到试纸。 8. 根据权利要求 7 所述的制备方法， 其特征在于， 胶体金标垫 1 的制备方法为 ： 用碳酸 钾调节颗粒粒径10nm100nm胶体金溶液的pH值至7.08.0， 加入150g抗心肌肌钙 蛋白 I 单克隆抗体， 室温搅拌 10 60min 后， 加入终浓度 0.01 1的 PEG20000 溶液或 者 0.1 5的 BSA 溶液终止， 冷冻离心后， 用 pH5.0 pH6.5， 含 0.01 5 PEG20000 的0.010.5M硼酸盐缓冲液或pH7.08.0， 含0.011PEG20000。
7、的0.010.5M磷 酸盐缓冲液清洗后再次离心， 加入 pH6.5 8.0， 含 0.01 3 BSA， 0.01 1 PEG20000、 1 8蔗糖的 0.01 0.5M 磷酸盐缓冲液复溶后， 使用 Biodot 三维喷点平台将复溶液以 1 5L/cm 的速度喷洒于聚酯膜或玻璃纤维素膜上， 于 25 40烘干 8 24 小时。 9. 根据权利要求 7 所述的制备方法， 其特征在于， 胶体金垫 2 的制备方法是 ： 用碳酸钾 调节颗粒粒径 10nm 100nm 胶体金溶液的 pH 值至 7.0 8.0， 加入 1 50g 抗 BSA 单克 隆抗体或者 1 50g 抗 PEG 单克隆抗体， 室温。
8、搅拌 10 60min 后， 加入终浓度 0.01 1的 PEG20000 溶液或者 0.1 5的 BSA 溶液终止， 冷冻离心后， 用 pH5.0 pH6.5， 含 0.01 5 PEG20000 的 0.01 0.5M 硼酸盐缓冲液或 pH7.0 8.0， 含 0.01 1 PEG20000 的 0.01 0.5M 磷酸盐缓冲液清洗后再次离心， 加入 pH6.5 8.0， 含 0.01 3 BSA， 0.01 1 PEG20000、 1 8蔗糖的 0.01 0.5M 磷酸盐缓冲液复溶后， 使用 Biodot 权 利 要 求 书 CN 102841208 A 2 2/2 页 3 三维喷点平台。
9、将复溶液以 1 5L/cm 的速度喷洒于聚酯膜或玻璃纤维素膜上， 于 25 40烘干 8 24 小时。 10. 权利要求 1 6 任一项所述的试纸条在检测肌钙蛋白 I 中的应用。 权 利 要 求 书 CN 102841208 A 3 1/6 页 4 快速检测肌钙蛋白 I 的胶体金试纸及其制备方法 技术领域 0001 本发明涉及临床免疫学检测领域， 具体涉及一种快速检测肌钙蛋白 I 胶体金试纸 条及其制备方法。 背景技术 0002 心肌梗死是全球范围内致死和致残的主要疾病之一。全球每年有 1700 万人死于 心血管疾病， 其中一半以上死于急性心肌梗死(AMI)。 在中国， 冠心病患者超过2千万人。
10、， 而 每年有超过 100 万人被急性心肌梗死夺去生命。因此， 快速识别出早期急性心肌梗死患者 并及时治疗是提高其存活率的关键。对于无典型胸痛和心电图改变的 AMI 患者， 检测血清 心肌标志物是诊断 AMI 的必要依据。以往世界卫生组织 (WHO) 定义的心梗标准包括缺血症 状、 心电图 (ECG) 异常改变和血清心肌酶学变化。然而随着敏感性和特异性更高的生化标 志物肌钙蛋白 (cTn) 的发现以及更精确的无创影像学技术的发展， 使得检测到更小的 心梗病灶成为可能。 诊断心肌梗死的重要一条就是如何快速准确检测体内心脏生化标志物 的水平。 选择特异性的心肌梗死生化标志物和选择特异性高灵敏度的方。
11、法检测心肌梗死生 化标志物水平 ( 免疫诊断试剂盒 ) 是快速诊断急性心肌梗死首先需要解决的问题。因此， 各种以心肌梗死心脏标志物为检测对象的免疫诊断试剂盒和生物芯片逐渐应用于临床并 得到广泛发展。 0003 心肌肌钙蛋白 (cTn) 灵敏度高、 特异性强、 发病后持续时间长， 几乎完全具有心肌 组织特异性并具有高度敏感性， 因此是评价心肌坏死的首选标志物。即使心肌组织发生微 小区域的坏死也能检查到 cTn 的升高。cTn 的升高对于诊断急性心肌梗死至关重要。目前 cTn 主要用于心肌缺血损伤的临床诊断、 危险性估计和预后判断， 此外还可用于 MI 后临床 溶栓治疗效果判定 ； 心肌缺血损伤面。
12、积的估计、 临床诊断心肌炎、 心肌创伤 ( 心脏手术 )、 围 手术期心脏并发症、 严重脓毒血症或脓毒血症导致的左心衰竭、 充血性心功能不全， 以及某 些治疗药物的临床疗效观察等。因此， 如何快速、 特异性、 高灵敏度的检测体内肌钙蛋白的 水平对于心肌梗死患者的诊断和治疗具有重要的意义， 具有广泛的临床应用前景和市场潜 力。 0004 目前肌钙蛋白检测主要采用金标免疫法、 酶联免疫法、 化学发光法、 酶联荧光分析 法 (ELFA) 等方法。金标免疫法由于标本用量少， 简便快速， 适合于急性心肌梗死 (AMI) 的 床旁检测， 不受时间、 地点限制， 24h 全方位为患者服务， 在临床广泛应用，。
13、 但是胶体金试纸 条检测灵敏度低， 一般情况最低检出限为1ng/mL。 大量临床试验和循证医学证据表明， 心肌 肌钙蛋白作为心肌梗死的标志物具有非常高的灵敏度和特异性， 在正常人体中用现有的检 测方法几乎检测不出肌钙蛋白的含量， 至少其在正常人体的含量低于0.1ng。 临床广泛应用 的金标免疫法作为心肌梗死检测的重要手段， 其灵敏度的局限性制约了进一步的更广泛应 用。因此， 提高胶体金检测灵敏度作为快速诊断的一个重要方向受到越来越多的重视。如 将生物素 - 亲和素放大系统、 胶体金与荧光结合等技术应用于胶体金试纸的检测， 以实现 更精确的检测。 说 明 书 CN 102841208 A 4 2。
14、/6 页 5 发明内容 0005 为了解决上述问题， 本发明的目的在于提供一种快速检测肌钙蛋白 I 胶体金试纸 条及其制备方法。 0006 本发明提供的快速检测肌钙蛋白 I 胶体金试纸条， 其包括包被膜、 喷涂有胶体金 标记的抗心肌肌钙蛋白I单克隆抗体的胶体金垫1、 喷涂有胶体金标记的抗BSA单克隆抗体 或抗 PEG 单克隆抗体的胶体金垫 2、 样品垫、 吸水垫和底板， 所述的包被膜涂覆有抗心肌肌 钙蛋白 I 单克隆抗体检测线和兔抗鼠抗体质控线。 0007 其中， 所述的胶体金垫 1 喷涂有 10nm 100nm 的胶体金标记的抗心肌肌钙蛋白 I 单克隆抗体。所述的抗心肌肌钙蛋白 I 单克隆抗。
15、体的量为 1 50g。 0008 其中， 所述的胶体金标记的抗心肌肌钙蛋白 I 单克隆抗体为胶体金标记的抗心肌 肌钙蛋白 I 的单克隆抗体或多克隆抗体。更进一步， 所述的胶体金标记的抗心肌肌钙蛋白 I 单克隆抗体用 BSA 或 PEG 封闭。 0009 其中， 所述的胶体金垫 2 喷涂有 20nm 100nm 胶体金标记的抗 BSA 单克隆抗体或 抗 PEG 单克隆抗体。所述的抗 BSA 单克隆抗体或抗 PEG 单克隆抗体的量为 1 50g。 0010 其中， 所述的包被膜为硝酸纤维素膜 ； 所述的胶体金垫 1、 胶体金垫 2 和样品垫为 聚酯膜或玻璃纤维素膜。 0011 本发明所述的试纸条，。
16、 在普通胶体金试纸的基础上增加抗 BSA 单克隆抗体或抗 PEG 单克隆抗体胶体金垫， 测试时， 将标本滴入试纸条的样品垫上， 如是阳性标本， 则标本中 的心肌肌钙蛋白 I 与预先包被在聚酯膜上的金标记的抗心肌肌钙蛋白 I 单克隆抗体结合， 结合物在毛细效应下向上层析， 随后会被固定在膜上测试线 (T) 的抗心肌肌钙蛋白 I 单克 隆抗体结合捕获， 从而在测试线 (T) 出现一条紫红色条带。同时金标记的抗 BSA 单克隆抗 体或金标记的抗 PEG 单克隆抗体在毛细效应下向上层析， 在测试线 (T) 区与之前固定在该 区的金标记抗心肌肌钙蛋白 I 单克隆抗体结合， 对测试线 (T) 进行进一步的。
17、显色放大。具 体金标垫 2 选用金标记抗 BSA 单克隆抗体还是金标记的抗 PEG 单克隆抗体， 根据制备胶体 金标记抗心肌肌钙蛋白 I 单克隆抗体时是选用 BSA 封闭还是 PEG 封闭而决定。 0012 本发明所述的试纸条的制备方法， 包括如下步骤 ： 0013 1) 制备胶体金垫 1 ： 将 BSA 或 PEG 封闭的胶体金标记的抗心肌肌钙蛋白 I 单克隆 抗体溶液喷洒于聚酯膜或玻璃纤维素膜上， 烘干备用 ； 0014 2) 制备胶体金垫 2 ： 将胶体金标记的抗 BSA 单克隆抗体溶液或抗 PEG 溶液喷洒于 聚酯膜或玻璃纤维素膜上， 烘干备用 ； 0015 3) 制备包被膜 ： 将抗。
18、心肌肌钙蛋白 I 单克隆抗体稀释液和兔抗鼠抗体稀释液喷涂 于聚酯膜或玻璃纤维素膜上， 烘干备用 ； 0016 4) 将样品垫用样品垫溶液处理后烘干备用 ； 0017 5) 底板上依次相互交错 2mm 地粘上包被膜、 金标垫 1、 金标垫 2、 样品垫和吸水垫， 然后在上面覆盖透明塑料密封膜得到试纸。 0018 具体的， 本发明所述的试纸条的制备方法， 包括如下具体步骤 ： 0019 胶体金标记抗心肌肌钙蛋白 I 单克隆抗体金标垫 1 的制备 ： 0020 用碳酸钾调节胶体金溶液(胶体金溶液颗粒粒径10nm100nm)的pH值至7.0 说 明 书 CN 102841208 A 5 3/6 页 6。
19、 8.0， 加入抗心肌肌钙蛋白 I 单克隆抗体， 室温搅拌 10 60min 后， 加入终浓度 0.01 1的 PEG20000 溶液或者 0.1 5的 BSA 溶液终止， 冷冻离心后， 用洗液 ( 洗液为含 0.01 5 PEG20000 的 0.01 0.5M 硼酸盐缓冲液 (pH5.0 pH6.5)， 或 0.01 1 PEG20000 的 0.01 0.5M 磷酸盐缓冲液 (pH7.0 8.0) 清洗后再次离心， 加入复溶液 后 ( 复溶液为 0.01 0.5M 磷酸盐缓冲液， pH6.5 8.0， 含 0.01 3 BSA， 0.01 1 PEG20000、 1 8蔗糖， 使用 Bi。
20、odot 三维喷点平台将复溶液以 1 5L/cm 的速度喷洒于 聚酯膜或玻璃纤维素膜上， 于 25 40烘干 8 24 小时。加入干燥剂封存备用 ； 0021 金标记抗 BSA 单克隆抗体 / 抗 PEG 单克隆抗体金标垫 2 的制备 ： 0022 用碳酸钾调节胶体金溶液 ( 胶体金溶液颗粒粒径 10nm 100nm) 的 pH 值， 加入 1 50g 抗 BSA 单克隆抗体或者 1 50g 抗 PEG 单克隆抗体， 室温搅拌 10 60min 后， 加入终浓度 0.01 1的 PEG20000 溶液或者 0.1 5的 BSA 溶液终止， 冷冻离心后， 用洗液为含 0.01 5 PEG2000。
21、0 的 0.01 0.5M 硼酸盐 (pH5.0 pH6.5)， 或 0.01 1 PEG20000 的 0.01 0.5M 磷酸盐缓冲液 (pH7.0 8.0) 清洗后再次离心， 加入复溶 液 ( 复溶液为 0.01 0.5M 磷酸盐缓冲液， pH6.5 8.0， 含 0.1 5 BSA， 0.01 1 PEG20000、 1 8蔗糖 ) 后， 使用 Biodot 三维喷点平台将复溶液以 1 5L/cm 的速度喷 洒于聚酯膜或玻璃纤维素膜上， 于 25 40烘干 8 24 小时。加入干燥剂封存备用 ； 0023 包被膜的制备 0024 使用包被缓冲液分别将抗心肌肌钙蛋白 I 单克隆抗体以及兔。
22、抗鼠抗体稀释到 0.52.0mg/mL浓度， 使用Biodot三维喷点平台分别将两者以0.51.0cm的间隔喷涂于 硝酸纤维素膜上， 于 25 40烘干 8 24 小时。加入干燥剂封存备用 ； 0025 样品垫的处理 ： 0026 将样品垫放入样品垫处理溶液 (0.01 0.5M Tris 缓冲液， 磷酸盐缓冲液或柠檬 酸缓冲液， 其中含 0.01 1表面活性剂 S9， 0.1 5 BSA)， 中浸泡 1 3 小时后取出于 25 40烘干 8 24 小时 ； 0027 试纸条的组装 ： 0028 在透明塑料底板上依次相互交错2mm地粘上包被膜、 金标垫1、 金标垫2、 样品垫和 吸水垫， 然后。
23、在上面覆盖透明塑料密封膜得到试纸， 根据要求宽度切割即得到新型胶体金 检测试纸。 0029 与现有快速诊断胶体金试纸条相比较， 本发明具有以下优点 ： 0030 通过对试纸条的改进， 首次将抗 BSA 单克隆抗体技术和抗 PEG 技术引入心肌肌钙 蛋白I的检测中， 大大提高了心肌肌钙蛋白I的检测灵敏度， 扩大了现有胶体金快速诊断试 纸条的临床应用。 0031 双重金标垫的复合应用， 在同一检测项目中利用两次金标抗体的显色， 进一步放 大金标显色效果， 更便于临床检验医师的观察和判断。 附图说明 0032 图 1 ： A 本发明试纸条的正面示意图 ； 0033 B 本发明试纸条的侧面示意图。其中。
24、， 0034 1 ： 样品垫 ； 说 明 书 CN 102841208 A 6 4/6 页 7 0035 2 ： 胶体金垫 1 ； 0036 3 ： 胶体金垫 2 ； 0037 4 ： 包被膜， 包被 T ： 涂覆抗心肌肌钙蛋白 I 单克隆抗体测试线 ； C 涂覆兔抗鼠抗体 质控线 ； 0038 5 ： 吸水垫 ； 0039 6 ： 反应支持物。 0040 图 2 ： 检测结果示意图。其中， 0041 从左至右依次为 ： T、 C 两条线显色为阳性 ； C 一条线显色为阴性 ； T、 C 两条线均未 显色为无效。 具体实施方式 0042 以下实施例用于说明本发明， 但不用来限制本发明的范围。 。
25、0043 实施例 1 心肌肌钙蛋白 I 胶体金试纸及其制备方法 ( 参见图 1) 0044 心肌肌钙蛋白I抗体制备 ： 选用商品化的cTnI抗体(Hytest公司， cat ： 4T2)， 10mM PBS， pH7.2， 4透析过夜。 0045 包被膜 ( 硝酸纤维素膜 2.5cm0.6cm) 的制备 ： 0046 包被缓冲液的配制 ： 10mM pH7.2 的磷酸盐缓冲液， 0.22m 微孔滤膜过滤除菌后 置于 4保存备用。 0047 用包被缓冲液将抗心肌肌钙蛋白 I 抗体和兔抗鼠抗体分别稀释到 0.5mg/mL 和 0.7mg/mL， 使用 Biodot 三维喷点平台以 1.5L/cm 。
26、的量将两者以 1.5cm 的间隔均匀喷印于 3.5cm 宽度的硝酸纤维素膜上， 于 25 40烘干 8 小时， 加入干燥剂封存备用。 0048 金标记抗心肌肌钙蛋白 I 单克隆抗体金标垫 1 的制备 0049 用碳酸钾调节颗粒粒径 20nm 的胶体金溶液的 pH 值为 7.2， 加入抗心肌肌钙蛋白 I 单克隆抗体， 室温搅拌 30min 后， 加入终浓度 0.8的 BSA 溶液终止， 冷冻离心后， 用洗 液清洗后再次离心， 加入复溶液后， 4保存备用。使用 Biodot 三维喷点平台将复溶液以 1.8L/cm 的速度喷洒于聚酯膜 (0.8cm0.6cm) 上， 于 25 40烘干 8 小时。加。
27、入干燥 剂封存备用 ； 0050 金标记抗 BSA 单克隆抗体金标垫 2 的制备 0051 用碳酸钾调节颗粒粒径 100nm 的胶体金溶液的 pH 值为 7.0， 加入抗 BSA 单克隆抗 体， 室温搅拌 40min 后， 加入终浓度 0.09的 PEG20000 溶液终止， 冷冻离心后， 用洗液清洗 后再次离心， 加入复溶液后， 4保存备用。使用 Biodot 三维喷点平台将复溶液以 1.8L/ cm 的速度喷洒于聚酯膜 (0.8cm0.6cm) 上， 于 25 40烘干 8 小时。加入干燥剂封存备 用 ； 0052 样品垫 ( 聚酯膜 2.7cm0.6cm) 的处理 0053 将样品垫放入。
28、样品垫处理溶液 (0.1M Tris 缓冲液含 0.05表面活性剂 S9( 购自 杭州隆基生物技术有限公司， 下同 )， 1 BSA) 中浸泡 1 小时后取出于 25 40烘干 8 小 时 ； 0054 试纸条的组装及切割 ( 下列所有操作必须在湿度小于 38， 温度 18 26的房 间内进行 ) 说 明 书 CN 102841208 A 7 5/6 页 8 0055 按照要求手工将包被膜、 吸水垫 (2.8cm0.6cm)、 金标垫 2、 金标垫 1 和样品垫装 于 PVC 底板上， 组装成试纸板。 0056 使用 Biodot CM4000 型切条刀将组装好的试纸板切成 6mm 宽的成品试。
29、纸条， 然后 在上面覆盖透明塑料密封膜得到试纸。 0057 实施例 2 心肌肌钙蛋白 I 胶体金试纸及其制备方法 ( 参见图 1) 0058 包被膜 ( 硝酸纤维素膜 2.5cm0.6cm) 的制备 ： 0059 包被缓冲液的配制 ： 10mM pH7.2 的磷酸盐缓冲液， 0.22m 微孔滤膜过滤除菌后 置于 4保存备用。 0060 用包被缓冲液将实施例 1 制备的抗心肌肌钙蛋白 I 抗体和兔抗鼠抗体 ( 购自 Abcam) 分别稀释到 1.0mg/mL 和 1.5mg/mL， 使用 Biodot 三维喷点平台以 1.5L/cm 的量将 两者以1cm的间隔均匀喷印于3.5cm宽度的硝酸纤维素。
30、膜上， 于37烘干8小时， 加入干燥 剂封存备用。 0061 金标记抗心肌肌钙蛋白 I 单克隆抗体金标垫 1 的制备 0062 用碳酸钾调节颗粒粒径 100nm 的胶体金溶液的 pH 值为 7.5， 加入抗心肌肌钙蛋白 I 单克隆抗体， 室温搅拌 30min 后， 加入终浓度 0.05的 PEG20000 溶液终止， 冷冻离心后， 用洗液清洗后再次离心， 加入复溶液后， 4保存备用。使用 Biodot 三维喷点平台将复溶液 以 1.8L/cm 的速度喷洒于玻璃纤维素膜 (0.8cm0.6cm) 上， 于 25 40烘干 8 小时。 加入干燥剂封存备用 ； 0063 金标记抗 BSA 单克隆抗体。
31、金标垫 2 的制备 0064 用碳酸钾调节颗粒粒径 40nm 的胶体金溶液的 pH 值为 8.0， 加入抗 PEG 单克隆抗 体， 室温搅拌40min后， 加入终浓度1的PEG20000溶液终止， 冷冻离心后， 用洗液清洗后再 次离心， 加入复溶液后， 4保存备用。使用 Biodot 三维喷点平台将复溶液以 1.8L/cm 的 速度喷洒于玻璃纤维素膜 (0.8cm0.6cm) 上， 于 37烘干 8 小时。加入干燥剂封存备用 ； 0065 样品垫 ( 玻璃纤维素膜 2.7cm0.6cm) 的处理 0066 将样品垫放入样品垫处理溶液 (0.1M Tris 缓冲液含 0.05表面活性剂 S9， 。
32、1 BSA) 中浸泡 1 小时后取出于 25 40烘干 8 小时 ； 0067 试纸条的组装及切割 ( 下列所有操作必须在湿度小于 38， 温度 18 26的房 间内进行 ) 0068 按照要求手工将包被膜、 吸水垫 (2.8cm0.6cm)、 金标垫 2、 金标垫 1 和样品垫装 于 PVC 底板上， 组装成试纸板。 0069 使用 Biodot CM4000 型切条刀将组装好的试纸板切成 6mm 宽的成品试纸条， 然后 在上面覆盖透明塑料密封膜得到试纸。 0070 实施例 3 本发明试纸条灵敏度测试 0071 随机抽取按照上述实施例 1 或 2 制作的新型肌钙蛋白 I 胶体金试纸 25 条。
33、， 普通市 售的肌钙蛋白 I 胶体金试纸条 25 条作为对照组 ( 在底板上依次相互交错地粘贴包被膜、 喷 涂有胶体金标记的抗心肌肌钙蛋白 I 单克隆抗体的胶体金垫、 样品垫和吸水垫 )。将心肌 肌钙蛋白 I 三元复合物 (SRM2921， 购自 Hytest 公司 ) 溶解于无肌钙蛋白 I 血清中 ( 购自 Hytest 公司 )， 并使用该血清稀释到 5ng/mL， 1ng/mL， 0.5ng/mL， 0.1ng/mL， 每个样品浓度测 试 5 条。表 1 所示为通过肉眼判读结果。从结果中可以看出， 当血清中肌钙蛋白 I 含量低 说 明 书 CN 102841208 A 8 6/6 页 9。
34、 于 0.5ng/mL， 普通胶体金试纸条未能检测， 及时含量为 0.5ng/ml 也只有 40的检出率。而 新型肌钙蛋白I胶体金试纸条即使血清中肌钙蛋白I浓度为0.1ng/mL， 仍能准确判断， 而且 检出率为100。 这一实验结果表明， 本发明提供的胶体金试纸条大大提高了现有胶体金试 纸条的灵敏度， 具有重要的临床应用价值。 0072 表 1 本发明试纸条的灵敏度检测 0073 0074 实施例 4 本发明试纸条的临床试验 0075 为了进一步评价新型胶体金试纸条的临床效果， 收集 50 份经 Dade Behring 公 司 Stratus CS STAT 荧光分析仪检测肌钙蛋白 I 含。
35、量的血清， 其中 0ng/mL 10 份， 0.01 0.1ng/mL 5 份， 0.1 0.5ng/mL 5 份， 0.5 1.0ng/mL 10 份， 1.0 5.0ng/mL 10 份， 5.0ng/mL以上10份。 同时采用新型胶体金试纸条和普通胶体金试纸条检测以上血清， 结果 如下表 2 所示。 0076 表 2 本发明胶体金试纸条与普通胶体金试纸条的阳性检出率比较 0077 0078 0079 以上临床试验结果表明， 本发明提供的新型肌钙蛋白 I 胶体金试纸条相比现有普 通胶体金试纸条， 灵敏度大大提高， 进一步拓宽了肌钙蛋白 I 胶体金试纸条的临床应用范 围。 0080 以上所述仅是本发明的优选实施方式， 应当指出， 对于本技术领域的普通技术人 员来说， 在不脱离本发明技术原理的前提下， 还可以做出若干改进和润饰， 这些改进和润饰 也应视为本发明的保护范围。 说 明 书 CN 102841208 A 9 1/1 页 10 图 1A 图 1B 图 2 说 明 书 附 图 CN 102841208 A 10 。