氨 ( 氨离子 ) 的测定方法与氨 ( 氨离子 ) 诊断 / 测定试剂 盒 【技术领域】
本发明涉及医学 / 食品检验测定技术领域， 更具体地， 本发明涉及氨 ( 氨离子 ) 诊 断 / 测定方法及其试剂盒。背景技术
氨测定的方法有微量扩散法、 离子交换法、 酶法和氨电极法等。 目前应用最多的方 法是酶法和基于离子选择电极的血氨测定仪分析法。
扩散法是标本碱化后， 释放出 NH3， 用酸滴定释放出的氨， 或用 Nessler 反应形成 棕黄色碘化双汞胺进行比色。这些方法需要碱化， 内源性的氨形成造成影响， 使其准确性 和精密度受到影响， 目前已很少应用 ； 离子交换法比扩散法更准确， CV 为 8％～ 13％ ； 离子 选择电极法是利用 NH3 扩散到电极表面， 引起电极的 pH 发生变化进行测定， 该方法的 CV 为 3.5％～ 4.8％， 回收率高。结合具体实际， 应以酶法测定为实用。 检索中国专利， 仅查出 87105593.7 专利申请公开了一种血氨测定速冻杯， 却未发 现比较理想的血氨测定方法。
发明内容 [ 要解决的技术问题 ]
本发明的目的是提供一种氨 ( 氨离子 ) 的测定方法。
本发明的另一个目的是提供一种氨 ( 氨离子 ) 诊断 / 测定试剂盒。
[ 技术方案 ]
本发明是通过下述技术方案实现的。
本发明的方法是一种采用酶比色法 (Enzymatic Colorimetric Method) 与酶 ( 偶 ) 联法 (Couple Reaction) 的联用技术， 利用测定还原型烟酰胺辅酶 ( 还原型辅酶 ) 在 340nm 波长处的吸光度变化测定氨 ( 氨离子 ) 的方法。
本发明氨 ( 氨离子 ) 测定方法的的技术原理是根据下述氨激酶、 去硫代生物素合 成酶、 脂肪酸合成酶的系列催化反应完成 ：
氨 + 腺苷三磷酸 氨激酶 腺苷二磷酸 + 磷酰胺
腺苷二磷酸 + 磷酸根 + 去硫代生物素 去硫代生物素合成酶
腺苷三磷酸 +7， 8- 二氨基壬酸 + 二氧化碳
n 二氧化碳 +(n+1) 辅酶 A+ 长链脂肪酸 +2n 辅酶 脂肪酸合成酶
乙酰 - 辅酶 A+n 苹果酰 - 辅酶 A+2n 还原型辅酶
本发明的方法利用氨激酶 (ammonia kinase ； EC 2.7.3.8) 酶 ( 偶 ) 联去硫代生物 素合成酶 (dethiobiotin synthase ； EC 6.3.3.3)、 脂肪酸合成酶 (fatty-acid synthase ； EC 2.3.1.85) 酶促反应比色终点法。氨激酶酶解氨反应产生腺苷二磷酸， 再通过 ( 偶 ) 联 合去硫代生物素合成酶、 脂肪酸合成酶的作用， 最终将辅酶 ( 在 340nm 处没有吸收峰 ) 还原
成为还原型辅酶 ( 在 340nm 处有吸收峰 )， 从而得以测定还原型辅酶在 340nm 处吸光度上 升的程度， 这样可以通过测量 340nm 处吸光度上升的程度， 可以测算氨 ( 氨离子 ) 的浓度大 小。
本发明是通过下述技术方案实现的。
本发明涉及一种氨 ( 氨离子 ) 的测定方法。该氨 ( 氨离子 ) 测定方法的步骤如 下：
A、 样品准备 ：
A.1 标准样品的制备
将一定量的氨盐溶于水或缓冲液中， 再将氨浓度调整到 100 微摩尔 / 升， 得到的溶 液作为标准样品 ；
A.2 待测样品的制备
待测液体样品直接测试， 无须预处理 ； 将一定量的待测固体样品像制备标准样品 一样溶于水或缓冲液中 ；
A.3 空白样品
所述的水或缓冲液作为空白样品， 其氨 ( 氨离子 ) 浓度为 0 微摩尔 / 升 ；
B、 试剂溶液的制备 ：
分别移取或称取缓冲液、 稳定剂、 辅酶、 氨激酶、 去硫代生物素合成酶、 脂肪酸合 成酶、 腺苷三磷酸、 去硫代生物素、 长链脂肪酸、 单价磷酸盐与辅酶 A， 然后将它们混合 均匀， 用水溶解得到所述的试剂溶液， 它们的浓度分别是 20-500mmol/L、 0.001-7mol/L、 0.1-2mmol/L、 1000-80000U/L、 1000-80000U/L、 1000-80000U/L、 1-100mmol/L、 1-100mmol/ L、 1-100mmol/L、 1-100mmol/L 与 1-100mmol/L ；
C、 待测样品与在步骤 B) 得到的试剂溶液按照体积比 1/10 至 1/500 进行混合， 在 温度 15-45℃下反应 5-60 分钟， 在主波长 340nm 与副波长 405nm( 如果受仪器限制可以不设 副波长 ) 下进行测定， 测定其吸光度随时间的变化 ；
D、 在与步骤 C) 同样的条件下测定步骤 A) 标准样品的吸光度随时间的变化 ；
E、 在与步骤 C) 同样的条件下测定在步骤 A) 空白样品的吸光度随时间的变化 ；
F、 数据处理
由步骤 C-E) 所述测定的主波长 340nm 的吸光度随时间的变化， 根据下式计算得到 氨的含量 ：
式中 ：
ΔA( 样品 ) 表示步骤 C) 得到的待测样品的吸光度变化 ；
ΔA( 空白 ) 表示步骤 E) 得到的空白样品的吸光度变化 ；
ΔA( 标准 ) 表示步骤 D) 标准样品的吸光度变化。
根据本发明， 在所述的氨 ( 氨离子 ) 测定方法中， 所述的缓冲液应该理解是能够使 其测定介质的 pH 基本保持稳定 ( 一般是 6.0-9.0) 的溶液。如果该 pH 高于 9.0 或 pH 低
于 6.0， 则该测定方法使用的酶的活性达不到预期的活性效果， 因此需要添加更多的介质与 酶， 才有可能达到预期的活性效果。
在本发明中， 所述的缓冲液是一种或多种选自三 ( 羧甲基 ) 氨基甲烷 - 盐酸缓冲 液、 磷酸盐缓冲液、 咪唑 - 盐酸缓冲液、 磷酸氢二钠 - 柠檬酸缓冲液、 硼砂 - 盐酸缓冲液、 甘 氨酸 - 氢氧化钠缓冲液、 巴比妥钠 - 盐酸缓冲液、 硼酸 - 硼砂缓冲液、 二乙醇胺缓冲液或 “PBS” 缓冲液的缓冲液。
优选地， 所述的缓冲液例如选自三 ( 羧甲基 ) 氨基甲烷 - 盐酸 (Tris-HCl) 缓冲液、 磷酸盐缓冲液或 “PBS” 缓冲液。
更优选地， 所述的缓冲液例如选自三 ( 羧甲基 ) 氨基甲烷 - 盐酸 (Tris-HCl) 缓冲 液或磷酸盐缓冲液。
根据本发明， 在所述的氨 ( 氨离子 ) 测定方法中， 所述的稳定剂应该理解是一种能 保护试剂中的介质 ( 底物 ) 与酶， 使其不会随着时间推移而改变其性质， 进而失去活性的物 质， 它会使得试剂具备很长的活性寿命， 通常长达数月， 甚至一、 二年。 如果没有所述的稳定 剂， 则试剂的活性在溶液中只能维持数十小时， 顶多数天， 就会逐渐失去活性而不再具备检 测性能。在本发明中， 所述的稳定剂使用量是 0.01-7mol/L。如果所述的稳定剂使用量不 够， 则试剂活性的寿命就会缩短 ； 如果所述的稳定剂使用量过高， 则会增加成本。 在本发明中， 所述的稳定剂是一种或多种选自氯化钠、 乙二醇、 丙二醇、 甘油或双 乙酸钠或叠氮钠防腐剂的稳定剂。
优选地， 所述的稳定剂例如是一种或多种选自氯化钠、 丙二醇、 甘油或双乙酸钠或 叠氮钠的稳定剂。
更优选地， 所述的稳定剂例如是一种或多种选自甘油或双乙酸钠的稳定剂。
在本发明中， 所述的辅酶是一种或多种选自 NADP+、 NAD+ 或 thio-NAD+ 的辅酶。
根据一种本发明的优选实施方式， 本发明使用全自动生化分析仪测定氨 ( 氨离 子 ) 时， 待测样品、 所述标准样品与所述空白样品由该分析仪在设定条件下 ( 参数 ) 自动取 样， 然后在下述条件下进行测定 ： 测定方法为二点终点法 / 终点法， 温度 37℃， 反应时间 10 分钟， 测试主波长 340nm， 测试副波长 405nm， 被测氨 ( 氨离子 ) 样品与试剂的体积比例为 1/10-1/500， 反应方向为正反应， 延迟时间 1/0 分钟， 检测时间 4/5 分钟。
根据另一种本发明的优选实施方式， 本发明使用的试剂溶液配制成如下双剂试 剂：
由所述的缓冲液、 稳定剂、 辅酶、 腺苷三磷酸、 去硫代生物素、 长链脂肪酸、 单价磷 酸盐与辅酶 A 组成的试剂 1 ；
由所述的缓冲液、 稳定剂、 氨激酶、 去硫代生物素合成酶与脂肪酸合成酶 组成的 试剂 2 ；
其中辅酶、 氨激酶、 去硫代生物素合成酶、 脂肪酸合成酶、 腺苷三磷酸、 去硫代生物 素、 长链脂肪酸、 单价磷酸盐、 辅酶 A 在试剂 1 或试剂 2 中的位置是不限定的。
根据另一种本发明的优选实施方式， 本发明使用的试剂配制成如下三剂试剂 ：
由所述的缓冲液、 稳定剂、 辅酶、 腺苷三磷酸、 去硫代生物素、 长链脂肪酸、 单价磷 酸盐与辅酶 A 组成的试剂 1 ；
由所述的缓冲液、 稳定剂、 去硫代生物素合成酶与脂肪酸合成酶组成的试剂 2 ；
由所述的缓冲液、 稳定剂与氨激酶组成的试剂 3 ；
其中辅酶、 氨激酶、 去硫代生物素合成酶、 脂肪酸合成酶、 腺苷三磷酸、 去硫代生物 素、 长链脂肪酸、 单价磷酸盐、 辅酶 A 在试剂 1、 试剂 2 或试剂 3 中的位置是不限定的。
在本发明氨 ( 氨离子 ) 测定方法中使用的测定仪器可以是紫外 / 可见光分析仪， 例如上海精密仪器仪表有限公司销售的紫外可见分光光度计、 天津喀纳斯光学分析仪器有 限公司销售的 723 可见分光光度计 ； 半自动生化分析仪， 例如上海伟思医用设备有限公司 的 BTS-330 半自动生化分析仪 ； 全自动生化分析仪， 例如 ： 由迈瑞公司以商品名 BS-300、 奥 林帕斯公司以商品名 AU400、 东芝公司以商品名 120、 日立公司以商品名 7600、 雅培公司以 商品名 CB8000 或贝克曼公司以商品名 CX20 销售的全自动生化分析仪。
本发明还涉及氨 ( 氨离子 ) 诊断 / 测定试剂盒。该氨 ( 氨离子 ) 诊断 / 测定试剂 盒由下述粉状试剂组成， 在使用时用水将它们溶解得到具有下述浓度范围的可直接使用的 液体试剂 ：
缓冲液 20-500mmol/L
稳定剂 0.001-7mol/L
辅酶 0.1-2mmol/L
氨激酶 1000-80000U/L 去硫代生物素合成酶 1000-80000U/L 脂肪酸合成酶 1000-80000U/L 腺苷三磷酸 1-100mmol/L 去硫代生物素 1-100mmol/L 长链脂肪酸 1-100mmol/L 单价磷酸盐 1-100mmol/L 辅酶 A 1-100mmol/L。 根据一种本发明的优选实施方式， 本发明的氨 ( 氨离子 ) 诊断 / 测定试剂盒有 ： 试剂 1 ： 缓冲液 100mmol/L 稳定剂 500mmol/L 辅酶 0.25mmol/L 腺苷三磷酸 5mmol/L 去硫代生物素 5mmol/L 长链脂肪酸 5mmol/L 单价磷酸盐 5mmol/L 辅酶 A 5mmol/L ； 组成如下的试剂 2 ： 缓冲液 100mmol/L 稳定剂 500mmol/L 氨激酶 16000U/L 去硫代生物素合成酶 18000U/L 脂肪酸合成酶 12000U/L。根据另一种本发明的优选实施方式， 本发明的氨 ( 氨离子 ) 诊断 / 测定试剂盒有 ： 试剂 1 ： 缓冲液 100mmol/L 稳定剂 500mmol/L 辅酶 0.25mmol/L 腺苷三磷酸 5mmol/L 去硫代生物素 5mmol/L 长链脂肪酸 5mmol/L 单价磷酸盐 5mmol/L 辅酶 A 5mmol/L ； 组成如下的试剂 2 ： 缓冲液 100mmol/L 稳定剂 500mmol/L 去硫代生物素合成酶 18000U/L 脂肪酸合成酶 12000U/L ；组成如下的试剂 3 ：
缓冲液 100mmol/L
稳定剂 500mmol/L
氨激酶 16000U/L。
根据另一种本发明的优选实施方式， 在本发明的氨 ( 氨离子 ) 诊断 / 测定试剂盒 中， 所述的缓冲液是一种或多种选自三 ( 羧甲基 ) 氨基甲烷 - 盐酸缓冲液、 磷酸盐缓冲液、 咪唑 - 盐酸缓冲液、 磷酸氢二钠 - 柠檬酸缓冲液、 硼砂 - 盐酸缓冲液、 甘氨酸 - 氢氧化钠缓 冲液、 巴比妥钠 - 盐酸缓冲液、 硼酸 - 硼砂缓冲液、 二乙醇胺缓冲液或 “PBS” 缓冲液的缓冲 液。
优选地， 所述的缓冲液例如选自三 ( 羧甲基 ) 氨基甲烷 - 盐酸 (Tris-HCl) 缓冲液、 磷酸盐缓冲液或 “PBS” 缓冲液。
更优选地， 所述的缓冲液例如选自三 ( 羧甲基 ) 氨基甲烷 - 盐酸 (Tris-HCl) 缓冲 液或磷酸盐缓冲液。
在本发明中， 所述的稳定剂是一种或多种选自氯化钠、 乙二醇、 丙二醇、 甘油或双 乙酸钠或叠氮钠防腐剂的稳定剂。
优选地， 所述的稳定剂例如是一种或多种选自氯化钠、 丙二醇、 甘油、 双乙酸钠或 叠氮钠的稳定剂。
更优选地， 所述的稳定剂例如是一种或多种选自甘油或双乙酸钠的稳定剂。
在本发明中， 无论是单剂试剂、 双剂试剂或三剂试剂， 在本发明测定氨 ( 氨离子 ) + + 的方法中， 所述的辅酶可以是一种或多种选自 NADP 、 NAD 或 thio-NAD+ 的辅酶。
使用本发明的氨 ( 氨离子 ) 诊断 / 测定试剂盒时， 可以使用紫外 / 可见光分析仪， 例如上海精密仪器仪表有限公司销售的紫外可见分光光度计、 天津喀纳斯光学分析仪器有 限公司销售的 723 可见分光光度计 ； 半自动生化分析仪， 例如上海伟思医用设备有限公司 的 BTS-330 半自动生化分析仪 ； 全自动生化分析仪， 例如 ： 由迈瑞公司以商品名 BS-300、 奥林帕斯公司以商品名 AU400、 东芝公司以商品名 120、 日立公司以商品名 7600、 雅培公司以 商品名 CB8000 或贝克曼公司以商品名 CX20 销售的全自动生化分析仪。
在采用本发明方法测定氨 ( 氨离子 ) 时， 根据实验要求进行多次试验， 然后将得到 的这些试验结果按照下式计算出精密度 (CV) ：
式中 ： - 试验结果平均值 ； Xi- 各次试验结果 ； n- 试验次数 .N ≥ 10 将得到的这些试验结果按照下式计算出相对极差 ：——第一批各次试验结果平均值 ——第二批各次试验结果平均值 ——第三批各次试验结果平均值 ——为 X， Y， Z 中的最大值 ——为 X， Y， Z 中的最小值每批试样数取 n ≥ 3
经过大量试验确定， 对于氨 ( 氨离子 ) 含量为 0-1000μmol/L 的样品， 其分析误差 可以达到≤ 5％。
本发明方法的灵敏度可以达到 1μmol/L。
通过大量试验确定， 本发明方法测定氨 ( 氨离子 ) 含量范围是 0-1000μmol/L， 本 发明方法适合于医学临床 / 食品诊断 / 检测。 具体实施方式
下述实施例说明本发明而不限制本发明的保护范围。
实施例 1 ： 血浆中氨 ( 氨离子 ) 含量的测定
1) 标准样品的制备
将一定量的氨盐溶于水或缓冲液中， 再将氨浓度调整到 100 微摩尔 / 升 ；
2) 待测样品预处理
血浆样品作为待测样品， 无须预处理 ；
3) 空白样品
所述的水或缓冲液作为空白样品， 其氨浓度为 0 微摩尔 / 升 ；
B、 试剂溶液的制备 ：
本实施例的氨诊断 / 测定试剂为单剂试剂， 它含有 ：
三 ( 羧甲基 ) 氨基甲烷 - 盐酸缓冲液 100mmol/L甘油 1mol/L +
NADP 0.25mmol/L
氨激酶 16000U/L
去硫代生物素合成酶 18000U/L
脂肪酸合成酶 12000U/L
腺苷三磷酸 5mmol/L
去硫代生物素 5mmol/L
长链脂肪酸 5mmol/L
单价磷酸盐 5mmol/L
辅酶 A 5mmol/L。
按照上述浓度将这些试剂加入去离子水全部溶解配制好待用。
C、 待测血浆样品， 与在步骤 B) 得到的试剂溶液按照体积比 1/20 进行混合， 在温 度 37℃下反应 5 分钟， 在主波长 340nm 与副波长 405nm 下进行测定， 测定其吸光度随时间的 变化 ΔA( 样品 ) 为 0.0277 ；
D、 在 与 步 骤 C) 同 样 的 条 件 下 测 定 步 骤 A) 标 准 样 品 的 吸 光 度 随 时 间 的 变 化 ΔA( 标准 ) 为 0.0523 ； E、 在与步骤 C) 同样的条件下测定在步骤 A) 使用的水作为空白溶液的吸光度随时 间的变化 ΔA( 空白 ) 为 0.0106 ；
F、 数据处理
由步骤 C-E) 所述测定的主波长 340nm 的吸光度随时间的变化， 根据下式计算得到 氨 ( 氨离子 ) 的含量 ：
式中 ：
ΔA( 样品 ) 表示步骤 C) 得到的待测样品的吸光度变化 ；
ΔA( 空白 ) 表示步骤 E) 得到的空白样品的吸光度变化 ；
ΔA( 标准 ) 表示步骤 D) 标准样品的吸光度变化。
通 过 上 式 计 算 得 到 该 血 浆 样 品 的 氨 ( 氨 离 子 ) 含 量 为 82μmol/L， 其误差是 ±2μmol/L。
实施例 2 ： 血浆中氨 ( 氨离子 ) 含量的测定
1) 标准样品的制备
将一定量的氨盐溶于水中， 再将氨 ( 氨离子 ) 浓度调整到 100 微摩尔 / 升， 作为标 准样品 ；
2) 待测样品的制备
血浆样品作为待测样品， 无须预处理 ；
3) 空白样品
所述的水作为空白样品， 其氨 ( 氨离子 ) 浓度为 0 微摩尔 / 升 ；
B、 试剂溶液的制备 ： 氨 ( 氨离子 ) 诊断 / 测定试剂为双剂试剂， 它含有 ： 组成如下的试剂 1 ： 磷酸盐缓冲液 100mmol/L + NAD 0.25mmol/L 腺苷三磷酸 5mmol/L 去硫代生物素 5mmol/L 长链脂肪酸 5mmol/L 单价磷酸盐 5mmol/L 辅酶 A 5mmol/L ； 组成如下的试剂 2 ： 磷酸盐缓冲液 100mmol/L 乙二醇 5mol/L 氨激酶 16000U/L 去硫代生物素合成酶 32000U/L 脂肪酸合成酶 40000U/L。 按照上述浓度将这些试剂加入去离子水全部溶解配制好待用。 C、 样品使用日立 7080 全自动生化分析仪测定 该全自动生化分析仪主要操作参数如下 ： 计量方法 ： 两点终点法 测试计量时间点 ： 21， 31 主波长 ： 340 副波长 ： 405 反应温度 ： 37 样品体积 ： 20 试剂 1(R1) 体积 ： 200 试剂 2(R3) 体积 ： 50 反应方向 ： 正 标准样品 1 ： 0 标准样品 2 ： 100 定标结果显示 K 值为 5011， 换算成灵敏度为 0.00020ΔA/μmol/L。 测试结果显示该血浆中含有氨 ( 氨离子 ) 为 21μmol/L。其误差是 ±1μmol/L。 实施例 3 ： 血浆样品中氨 ( 氨离子 ) 含量的测定 该实施例的操作方式与实施例 2 相同， 只是本实施例 ： B、 试剂溶液的制备 ： 氨 ( 氨离子 ) 诊断 / 测定试剂为三剂试剂， 它含有 ： 组成如下的试剂 1 ： 三 ( 羧甲基 ) 氨基甲烷 - 盐酸缓冲液 100mmol/L + NAD 0.25mmol/L腺苷三磷酸 5mmol/L
去硫代生物素 5mmol/L
长链脂肪酸 5mmol/L
单价磷酸盐 5mmol/L
辅酶 A 5mmol/L ；
组成如下的试剂 2 ：
三 ( 羧甲基 ) 氨基甲烷 - 盐酸缓冲液 100mmol/L
氯化钠 2mol/L
去硫代生物素合成酶 28000U/L
脂肪酸合成酶 50000U/L ；
组成如下的试剂 3 ：
三 ( 羧甲基 ) 氨基甲烷 - 盐酸缓冲液 100mmol/L
氯化钠 2mol/L
氨激酶 26000U/L。
按照上述浓度将这些试剂加入去离子水全部溶解配制好待用。
C、 样品使用日立 7080 全自动生化分析仪测定
该全自动生化分析仪主要操作参数如下 ：
计量方法 ： 两点终点法
测试计量时间点 ： 21， 31
主波长 ： 340
副波长 ： 405
反应温度 ： 37
样品体积 ： 20
试剂 1(R1) 体积 ： 20
试剂 2(R2) 体积 ： 180
试剂 3(R3) 体积 ： 50
反应方向 ： 正
标准样品 1 ： 0
标准样品 2 ： 100
定标结果显示 K 值为 4705， 换算成灵敏度为 0.00021ΔA/μmol/L。
测试结果显示该血浆中含有氨 ( 氨离子 ) 为 78μmol/L。其误差是 ±2μmol/L。
实施例 4 ： 稳定性试验
该实施例的操作方式与实施例 1 相同， 只是在实施例 1 实施后， 实施例 1 使用的试 剂在密闭试剂瓶中在 2-8℃下存放了半年与一年。
使用同样的标准样品， 使用与实施例 2 同样的新试剂与上述存放半年与一年的试 剂分别进行了测定， 其它条件都与实施例 2 相同， 其测定结果如下 ：
表1
氨 ( 氨离子 ) 含量 13 分析误差CN 102539666 A 新试剂 存放半年的试剂 存放一年的试剂
说明书±4μmol/L ±4μmol/L ±4μmol/L10/10 页201μmol/L 202μmol/L 205μmol/L表 1 结果表明， 使用本发明的试剂盒， 采用本发明的测定方法可以保证获得稳定 的结果， 其稳定性至少一年以上。
实施例 5 ： 线性试验
该 实 施 例 的 操 作 方 式 与 实 施 例 2 相 同， 只是配制新的标准样品浓度达到 1200μmol/L， 将 800μmol/L 的氨 ( 氨离子 ) 依倍比稀释， 然后进行测试， 其测定结果如下 ：
表2
氨 ( 氨离子 ) 预期值 0 50 100 200 400 600 800 1000 1200
氨 ( 氨离子 ) 测试值 0 49 99 98 399 601 798 1003 1150表 2 结果表明， 使用本发明的试剂盒， 采用本发明的测定方法可以保证线性可以 达到 1000μmol/L。
申请人经过实验验证， 采用以上发明内容中记载的其他测定方法均能达到本发明 的目的， 鉴于测定步骤等情况与以上实施例类同， 不另一一例举。
总之， 实验证明 ： 采用本发明的测定方法完全可以通过一般生化分析仪器得出所 需的测定结果——空白试剂吸光度变化 (ΔA) ≤ 0.01 ； 吸光度时间反应曲线应呈上升曲 线； 试剂可测有效 (R ≥ 0.99) 线形范围可达 1000μmol/L ； 试剂测试的不准确度， 其相对偏 差不超过 ±5％ ； 试剂测试的精密度 ( 重复性 ) 的变异系数 (CV) ≤ 5％ ； 试剂的灵敏度可 达 0.0002±0.0001A/μmol/L ； 试剂在 2-8℃下保存， 活性可以稳定一年 ； ——本发明灵敏 度高、 精确度好， 线形范围宽广， 稳定期长， 足以便于推广应用。
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