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1、(10)申请公布号 CN 102478521 A (43)申请公布日 2012.05.30 CN 102478521 A *CN102478521A* (21)申请号 201010557944.0 (22)申请日 2010.11.25 G01N 21/78(2006.01) G01N 1/38(2006.01) (71)申请人 北京瑞康医药技术有限公司 地址 100070 北京市丰台科技园航丰路 8 号 科研楼 611 室 (72)发明人 王晋 闫春颖 刘京 (54) 发明名称 药物中游离肼的检测方法 (57) 摘要 本发明是一种应用紫外分光光度法对氨氯地 平类药物中所含游离肼的检测方法， 其。
2、特征在于 ： 游离肼与对二甲氨基苯甲醛发生反应， 生成的黄 色缩合物于 456nm 波长处有最大吸收， 向不含游 离肼的氨氯地平对照品中加入对二甲氨基苯甲醛 在 456nm 波长处检测无吸收的原理， 通过紫外分 光光度计测定游离肼。本方法相比于已有的游离 肼检测方法， 准确度好， 灵敏度高， 误差小， 且操作 简便， 易于实施。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 5 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 5 页 1/1 页 2 1. 一种用于测定氨氯地平药物中所含游离肼的检测方法， 其特征在于 ： 依据游离肼与 对二甲氨基。
3、苯甲醛发生反应， 生成的黄色缩合物于 456nm 波长处有最大吸收， 不含游离肼 的氨氯地平对照品中加入对二甲氨基苯甲醛在 456nm 波长处检测无吸收的原理， 通过紫外 分光光度法测定游离肼。 2. 根据权利要求 1 所述的方法， 其特征在于 ： 检测用对二甲氨基苯甲醛试液配制方法 为 ： 取对二甲氨基苯甲醛适量， 加盐酸使溶解， 用水稀释至适宜浓度， 即得。 3. 根据权利要求 1 所述的方法， 其特征在于 ： 游离肼检测中所用对照品为可产生肼的 化合物。 4. 根据权利要求 3 所述的肼对照品可选自肼、 水合肼、 盐酸肼、 单乙酸肼、 磷酸肼、 硫酸 肼等， 优选盐酸肼、 单乙酸肼、 磷。
4、酸肼、 硫酸肼等盐类。 5. 根据权利要求 4 所述肼对照品溶液配制方法为 ： 精密称取对照品适量， 用适宜溶剂 稀释， 制成适宜浓度的肼标准液。 6. 根据权利要求 1 所述的方法， 其特征在于 ： 所需检测游离肼的氨氯地平类药物， 是通 过氨氯地平亚胺与水合肼反应， 生成氨氯地平， 后与各种基团反应生成的氨氯地平类药物。 例如 ： 苯磺酸氨氯地平、 马来酸氨氯地平、 甲磺酸氨氯地平与苯磺酸左旋氨氯地平、 L- 门冬 氨酸氨氯地平等。 权 利 要 求 书 CN 102478521 A 2 1/5 页 3 药物中游离肼的检测方法 发明领域 0001 本发明涉及药物中杂质分析检测技术领域， 具体。
5、地说是氨氯地平类药物中所含游 离肼的检测方法。 0002 发明背景 0003 二氢吡啶类的钙离子拮抗剂为当前一线的降压药物， 最早应用的品种是硝苯地 平。现在有不少新的品种， 例如尼群地平， 尼卡地平， 氨氯地平， 拉西地平等。其除降压作用 外还能治疗心绞痛， 应用广泛。 0004 其中氨氯地平属双氢吡啶类中的长效品种， 每天早餐后服一次， 即能控制一天 24 小时的血压， 服用方便， 降压平稳， 血压波动小， 不良反应也少。伴有心力衰竭者也可应用， 不受影响。 目前在我国已上市的氨氯地平有苯磺酸氨氯地平、 马来酸氨氯地平、 甲磺酸氨氯 地平与苯磺酸左旋氨氯地平、 L-门冬氨酸氨氯地平等五种。。
6、 氨氯地平类药物因治疗范围广， 药效时间长， 不良反应少， 治疗效果好受到广大高血压患者的青睐， 在高血压治疗药物中占 据很高的市场份额。 0005 当前氨氯地平类药物合成途径中， 普遍应用的是氨氯地平亚胺与水合肼反应， 生 成氨氯地平， 见以下反应式。后添加各种基团， 生成氨氯地平类药物。此途径步骤简单， 工 艺易实施， 收率高， 是目前常用的氨氯地平药物合成途径。但因其合成工艺中引入水合肼， 肼是一种诱变剂和致癌物质， 因此要对氨氯地平药物中的肼进行方法学研究和控制。 0006 0007 氨氯地平亚胺 水合肼 氨氯地平 0008 中华人民共和国卫生部药典委员会， 卫生部药品标准 ( 化学药。
7、品及制剂第一册 )， 1989 年 1 月， 描述用比浊法对药物中游离肼进行检测， 但该方法专属性差， 准确度低， 人为 误差大， 放置时间过长会对结果造成较大影响。 0009 中华人名共和国药典二部(2010版)中描述异烟肼原料和注射用异烟肼中游离肼 的检查均采用薄层色谱法， 最大限度定为 0.02。但该方法准确度和精密度差， 灵敏度低， 人为误差大。 0010 王洁， 差示分光光度法应用于异烟肼注射液中游离肼的测定， 现代食品与药品杂 质， 2007年第17卷第5期中描述了采用差示分光光度法， 以对二甲氨基苯甲醛为显色剂， 在 参比溶液中加入 3丙酮消除干扰， 在 456nm 检测波长处，。
8、 用紫外分光光度计测定游离肼的 方法。该试验采用多种溶剂， 操作比较复杂。 说 明 书 CN 102478521 A 3 2/5 页 4 发明内容 0011 本发明采用分光光度计法测定氨氯地平类药物中游离肼含量。原理为 ： 游离肼 + 对二甲氨基苯甲醛黄色缩合物于 456nm 波长处有最大吸收， 0012 不含游离肼的氨氯地平对照品+对二甲氨基苯甲醛缩合物于456nm波长处无吸 收。 0013 本方法相比于已有的游离肼检测方法， 准确度好， 灵敏度高， 误差小， 且操作简便， 易于实施。 0014 测定方法 ： 0015 对二甲氨基苯甲醛试液 ： 取对二甲氨基苯甲醛适量， 加盐酸使溶解， 用水。
9、稀释至适 宜浓度， 即得 0016 对照品溶液制备精密称取含游离肼化合物适量， 制成肼标准液。 0017 供试品溶液制备称取氨氯地平类药物样品适量， 加水溶解制成适宜浓度的供试品 溶液。 0018 测定 ： 精密吸取对照品溶液、 供试品溶液适量， 置量瓶中， 加对二甲氨基苯甲醛试 液适量， 再加水稀释至刻度， 摇匀， 反应2-5分钟在456nm波长处测定吸光度， 以含相应浓度 的对二甲氨基苯甲醛试液的水溶液为空白。 0019 公式 ： A 对照品 EC 对照品 L 0020 A 供试品 EC 供试品 L 0021 根据公式、 得出 C 供试品 A 供试品 C 对照品 /A 对照品 0022 肼。
10、含量供试品溶液浓度供试品溶液体积 / 供试品称样量 100由此可计 算出氨氯地平药物中游离肼含量。 实施例 0023 实施例 1 ： 用分光光度法测定烟酸氨氯地平中游离肼的含量。 0024 仪器 ： 岛津 UV1800 紫外分光光度计 0025 试剂 ： 硫酸肼 分析纯 北京金龙化学试剂有限公司 0026 对二甲氨基苯甲醛试液 ： 取对二甲氨基苯甲醛 20g， 加盐酸 172.5ml 使溶解， 用水 稀释至 1000ml， 即得。 0027 溶液制备 0028 对照品溶液制备精密称取硫酸肼 40.6mg( 相当于肼 10mg)， 加水溶解并稀释至 100ml ； 精密量取 1ml， 用水稀释至。
11、 100ml， 制成 1g/ml 的肼标准液。 0029 供试品溶液制备取烟酸氨氯地平样品适量， 加少量甲醇溶解后加水制成 60mg/ml 的溶液， 后用水稀释成 6mg/ml 的供试液。 0030 测定法精密吸取溶液适量， 置 50ml 量瓶中， 加对二甲氨基苯甲醛试液 20ml， 再加 水稀释至刻度， 摇匀， 反应 2-5 分钟在 456nm 波长处测定吸光度， 以含相应浓度的对二甲氨 基苯甲醛试液的水溶液为空白。 0031 系统适用性试验 ： 0032 溶液稳定性试验 0033 我们考察了对照溶液的稳定性。 说 明 书 CN 102478521 A 4 3/5 页 5 0034 对照溶液。
12、稳定性试验 0035 精密称取硫酸肼 40.6mg( 相当于肼 10mg)， 加水溶解并稀释至 100ml ； 精密量取 1ml， 用水稀释至100ml， 制成1g/ml的肼标准液。 精密吸取15ml肼标准液， 置于50ml量瓶 中， 加 20ml 对二甲氨基苯甲醛试液， 加水稀释至刻度， 摇匀， 作为对照溶液。分别于 0、 0.5、 1、 1.5、 2、 2.5、 3、 4、 小时时取对照溶液于 456nm 波长处测定吸光度。溶液稳定性试验结果见 表 1 0036 表 1 ： 烟酸氨氯地平对照溶液稳定性试验结果 0037 0038 结论 ： 由上表可知， 对照溶液在放置 2 小时时， 吸光度。
13、基本无变化， 因此本品对照 溶液在放置 2 小时内稳定。 0039 线性关系 0040 精密量取 1.01g/ml 的肼标准液 7、 10、 15、 20、 25、 28ml， 分别置于 6 个 50ml 量瓶 中， 按上述对照品测定方法稀释成 0.1409、 0.2012、 0.3018、 0.4025、 0.5031、 0.5634g/ml 的溶液， 于 456nm 波长处测定吸光度， 以吸光度 A 值与肼标准液浓度 C(g/ml) 做线性回 归， 结果见表 2。标准曲线为 y 1.5474x-0.0073， R2 0.9995。 0041 表 2 ： 肼的标准曲线数据表 0042 004。
14、3 结论 ： 该测定方法下， 游离肼在 0.14 0.56g/ml 浓度范围内成良好线性关系。 0044 精密度试验 0045 对同一个对照溶液 (0.3019g/ml)， 按上述测定方法取 6 次溶液， 检测 6 次吸光 度， 计算 RSD， 结果见表 3。 0046 表 3 ： 精密度试验结果 0047 说 明 书 CN 102478521 A 5 4/5 页 6 0048 结论 ： 以上数据表明仪器精密度符合要求 0049 加样回收率试验 0050 采用加样回收法， 取已知游离肼含量的烟酸氨氯地平供试液 (6mg/ml， )20ml， ( 游 离肼含量为 0.017ug/ml) 分别加入。
15、等量的 3 种浓度的对照溶液， 按上述方法测定游离肼的 含量， 计算回收率和 RSD为 2.27， 见表 4。 0051 表 4 ： 烟酸氨氯地平中肼的回收率测定结果 0052 0053 0054 结论 ： 本品的回收率测定符合要求。 0055 烟酸氨氯地平中肼的检测结果 说 明 书 CN 102478521 A 6 5/5 页 7 0056 精密吸取本品供试液 20ml， 置 50ml 量瓶中， 加对二甲氨基苯甲醛试液 20ml， 再加 水稀释至刻度， 摇匀， 反应 2-5 分钟在 456nm 波长处测定吸光度， 以含相应浓度的对二甲氨 基苯甲醛试液的水溶液为空白 ； 另取 15ml 肼标准。
16、液， 同法测定。按外标法计算供试品中游 离肼的含量。 0057 表 5 ： 3 批烟酸氨氯地平中肼的检测结果 0058 0059 供试液 (6mg/ml)20ml， 稀释至 50ml， 最终浓度为 6 2050 2.4mgml。以最低可 检出的 A 值为 0.01 计算， 游离肼检出限为 0.01/1.54742.4 1000100 0.00027， 低 于中国药典2010年版异烟肼原料和注射用异烟肼中游离肼的检查限度0.02。 因此， 本发 明中游离肼的测定方法优于药典中游离肼测定方法。 0060 实施例 2 ： 用分光光度法测定苯磺酸氨氯地平中游离肼的含量。 0061 方法同实施例1， 结。
17、果 ： 精密度RSD0.23， 游离肼在0.160.59g/ml浓度范 围内成良好线性关系， 系统加样回收率为 99.72， RSD 2.16。系统适应性良好。三 批苯磺酸氨氯地平样品检测结果 ： 平均肼含量为 0.00106。 0062 实施例 3 ： 用分光光度法测定马来酸氨氯地平中游离肼的含量。 0063 方法同实施例1， 结果 ： 精密度RSD0.26， 游离肼在0.120.54g/ml浓度范 围内成良好线性关系， 系统加样回收率为 99.79， RSD 2.35。系统适应性良好。三 批苯磺酸氨氯地平样品检测结果 ： 平均肼含量为 0.00092。 0064 实施例 4 ： 用分光光度法测定甲磺酸氨氯地平中游离肼的含量。 0065 方法同实施例1， 结果 ： 精密度RSD0.35， 游离肼在0.170.57g/ml浓度范 围内成良好线性关系， 系统加样回收率为 99.85， RSD 1.85。系统适应性良好。三 批苯磺酸氨氯地平样品检测结果 ： 平均肼含量为 0.00063。 说 明 书 CN 102478521 A 7 。