一种鉴别阿胶真伪的方法.pdf

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1、(10)申请公布号 CN 102749349 A (43)申请公布日 2012.10.24 CN 102749349 A *CN102749349A* (21)申请号 201210203293.4 (22)申请日 2012.06.20 G01N 24/08(2006.01) (71)申请人 山东大学 地址 250014 山东省济南市历下区文化西路 44 号 (72)发明人 聂磊 邓书鸿 宋丽 段晓菊 张丹潞 (74)专利代理机构 济南圣达知识产权代理有限 公司 37221 代理人 杨琪 (54) 发明名称 一种鉴别阿胶真伪的方法 (57) 摘要 本发明公开了一种鉴别阿胶真伪的方法， 步 骤如下。

2、 ： 在 25的室温下， 采用核磁共振波谱仪 测定得到待测真伪的阿胶样品水溶性成分的原 始核磁共振氢谱， 然后与数学模型进行对比分析， 得出其真伪 ； 所述数学模型是通过以下步骤建立 的 ：（1） 择取不同批次的阿胶真品和其伪品 ；（2） 采用核磁共振波谱仪取得水溶性成分的原始核磁 共振氢谱 ；（3） 按化学位移数据进行匹配， 去除残 余水核磁共振吸收峰及正规化处理 ；（4） 进行关 联建立数学模型 ；（5） 确定最佳光谱区域划分数 和特征光谱区域 ；（6） 形成数学模型 ；（7） 验证。 本发明的方法简便、 易行， 适于对阿胶真品及其伪 品进行快速、 无损、 无污染的鉴别， 为阿胶的质量 控。

3、制提供技术数据支持。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 4 页 附图 3 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 4 页 附图 3 页 1/1 页 2 1. 一种鉴别阿胶真伪的方法， 其特征在于， 步骤如下 ： 在 25的室温下， 采用核磁共振 波谱仪测定得到待测真伪的阿胶样品水溶性成分的原始核磁共振氢谱， 然后与数学模型进 行对比分析， 得出其真伪 ； 所述数学模型是通过以下步骤建立的 ： （1） 择取不同品牌不同批次的阿胶真品及其伪品 ； （2） 采用核磁共振波谱仪采集上述不同品牌不同批次的阿胶真品及其伪品水溶性成分 的。

4、原始核磁共振氢谱 ； （3） 将上述所得的核磁共振氢谱按照化学位移数据对样品的水溶性成分核磁共振氢谱 进行匹配 ； （4） 将匹配后的核磁共振氢谱中的残余水核磁共振吸收峰去除， 以消除其对样品水溶 性成分核磁共振氢谱的干扰 ； （5） 将去除残余水核磁共振吸收峰样品水溶性成分的核磁共振氢谱进行正规化处理， 即所得核磁共振氢谱中核磁共振吸收峰强度最大值为 1， 最小值为 0 ； （6） 将上述正规化处理后所得的核磁共振氢谱与阿胶样品的真伪进行关联建立数学模 型 ； （7） 比较不同的光谱区域划分数和光谱区域对建模的影响 ； （8） 选择优化的光谱区域划分数， 确定特征光谱区域 ； （9） 将所得。

5、核磁共振氢谱的特征光谱区域的图谱数据与阿胶样品的真伪进行关联建立 数学模型， 形成鉴别阿胶真伪的核磁共振波谱分析数学模型 ； （10） 对上述建立的数学模型的预测能力进行验证。 2. 根据权利要求 1 所述的一种鉴别阿胶真伪的方法， 其特征在于 ： 所述步骤 （9） 中， 所 述核磁共振氢谱的特征光谱区域为 1.36 2.03ppm。 3. 根据权利要求 1 所述的一种鉴别阿胶真伪的方法， 其特征在于 ： 所述数学模型是通 过以下步骤建立的 ： （1） 择取不同批次的阿胶真品和其伪品 ； （2） 在 25的室温下， 采用核磁共振波谱仪取得上述不同批次的阿胶真品和其伪品水 溶性成分的原始核磁共振。

6、氢谱 ； （3） 将上述所得的核磁共振氢谱按化学位移数据进行匹配， 去除残余水核磁共振吸收 峰及正规化处理 ； （4） 将上述预处理后的核磁共振氢谱在 0 10ppm 的光谱范围内与阿胶真品和其伪品 的实际类别进行关联建立数学模型 ； （5） 通过比较不同光谱区域划分数和光谱区域对建模的影响， 确定最佳光谱区域划分 数和特征光谱区域 ； （6） 将上述所得核磁共振氢谱特征光谱区域的图谱数据与阿胶真品和其伪品的实际类 别进行关联建立数学模型， 形成鉴别阿胶真品与其伪品的核磁共振氢谱分析数学模型 ； （7） 对上述建立的数学模型的预测能力进行验证。 权 利 要 求 书 CN 102749349 A。

7、 2 1/4 页 3 一种鉴别阿胶真伪的方法 技术领域 0001 本发明涉及一种鉴别阿胶真伪的方法。 背景技术 0002 阿胶是我国传统的补益名药， 据 图经本草 记载 “阿胶以乌驴皮加阿井水煎之而 成” ， 其性平、 味甘， 归肺、 肝、 肾经， 具有润燥止血， 补血润阴的作用。 在临床上主要用于补血 和改善微循环。近期研究表明， 阿胶还具有增强免疫力和抗疲劳等作用。关于阿胶化学成 分的研究已有大量报道， 研究表明阿胶含有蛋白质、 多肽、 氨基酸、 硫酸皮肤素、 透明质酸、 生物碱以及多种微量元素 1。 0003 由于阿胶的功效显著， 市场供不应求， 各地均出现了用其它动物皮熬制阿胶的代 用。

8、品。采用骨胶、 杂皮等熬制的假药用胶不仅临床疗效较差， 质量无法保障， 而且还可能出 现中毒现象。因此对其进行鉴别研究具有重要现实意义。目前阿胶的鉴别方法主要有肉眼 观察法 2、 近红外光谱法3、 热分析法4 及 HPLC 法 5 等。这些方法也存在一些不足 ： 如经 验依赖性较强 （肉眼观察法） ， 图谱特征不强 （近红外光谱法和热分析法） 及费时费力 （HPLC 法） 等。 0004 核磁共振法 （NMR） 是将核磁共振现象应用于测定分子结构的一种谱学技术， 获得 的图谱能够反映测定物质的结构信息。 由于核磁共振法对几乎所有的有机化合物均有响应 且具有无偏向性 6， 因此获得的图谱信息丰富。

9、， 基本上代表了中药重要的整体化学组成， 可 以客观、 全面地反映中药所含成分的特征。 0005 参考文献 0006 1 胡军影 , 程显隆 , 肖新月 , 等 . 阿胶的化学成分及质量评价方法研究进展 J. 中国药事 ,2007(03):193-195. 0007 2 黄 瑞 芹 , 李 春 瑜 . 阿 胶 的 制 作 历 史 及 其 真 伪 鉴 别 J. 时 珍 国 医 国 药 ,2004,(05):284. 0008 3 瞿海斌 , 杨海雷 , 程翼宇 . 近红外漫反射光谱法快速无损鉴别阿胶真伪 J. 光谱学与光谱分析 ,2006,(01):60-62. 0009 4 陈栋华 , 刘雪峰。

10、 , 黄艳 , 等 . 阿胶的差示扫描量热法鉴别法研究 J. 中草 药 ,1993,24(6):314-315. 0010 5于海英,周永妍,程秀民.阿胶、 龟甲胶中脂溶性成分的高效液相色谱指纹图 谱 J. 色谱 ,2009,(04):447-452. 0011 6 王俊美 , 欧阳捷 , 尚倩 , 等 . 土壤有机质研究中的核磁共振技术 J. 波谱学 杂志 ,2008,(02):287-295. 发明内容 0012 针对上述现有技术， 为了解决现有鉴别阿胶真品与其伪品的方法经验性强、 图谱 特征不强、 操作费时费力的问题， 本发明提供了一种能够快速、 简单鉴别阿胶真品和其伪品 说 明 书 C。

11、N 102749349 A 3 2/4 页 4 的方法， 本发明的方法简便、 易行、 快速、 无损， 能有效鉴别阿胶的真品与伪品。 0013 本发明是通过以下技术方案实现的 ： 0014 一种鉴别阿胶真伪的方法， 步骤如下 ： 在 25的室温下， 采用核磁共振波谱仪测 定得到待测真伪的阿胶样品水溶性成分的原始核磁共振氢谱， 然后与数学模型进行对比分 析， 得出其真伪 ； 0015 所述数学模型是通过以下步骤建立的 ： 0016 （1） 择取不同品牌不同批次的阿胶真品及其伪品 ； 0017 （2） 采用核磁共振波谱仪采集上述不同品牌不同批次的阿胶真品及其伪品水溶性 成分的原始核磁共振氢谱 ； 0。

12、018 （3） 将上述所得的核磁共振氢谱按照化学位移数据对样品的水溶性成分核磁共振 氢谱进行匹配 ； 0019 （4） 将匹配后的核磁共振氢谱中的残余水核磁共振吸收峰去除， 以消除其对样品 水溶性成分核磁共振氢谱的干扰 ； 0020 （5） 将去除残余水核磁共振吸收峰样品水溶性成分的核磁共振氢谱进行正规化处 理， 即所得核磁共振氢谱中核磁共振吸收峰强度最大值为 1， 最小值为 0 ； 0021 （6） 将上述正规化处理后所得的核磁共振氢谱与阿胶样品的真伪进行关联建立数 学模型 ； 0022 （7） 比较不同的光谱区域划分数和光谱区域对建模的影响 ； 0023 （8） 选择优化的光谱区域划分数，。

13、 确定特征光谱区域 ； 0024 （9） 将所得核磁共振氢谱的特征光谱区域的图谱数据与阿胶样品的真伪进行关联 建立数学模型， 形成鉴别阿胶真伪的核磁共振波谱分析数学模型 ； 0025 （10） 对上述建立的数学模型的预测能力进行验证。 0026 优选的， 所述步骤 （9） 中， 所述核磁共振氢谱的特征光谱区域为 1.36 2.03ppm。 0027 优选的， 所述数学模型是通过以下步骤建立的 ： 0028 （1） 择取不同批次的阿胶真品和其伪品 ； 0029 （2） 在 25的室温下， 采用核磁共振波谱仪取得上述不同批次的阿胶真品和其伪 品水溶性成分的原始核磁共振氢谱 ； 0030 （3） 将。

14、上述所得的核磁共振氢谱按化学位移数据进行匹配， 去除残余水核磁共振 吸收峰及正规化处理 ； 0031 （4） 将上述预处理后的核磁共振氢谱在 0 10ppm 的光谱范围内与阿胶真品和其 伪品的实际类别进行关联建立数学模型 ； 0032 （5） 通过比较不同光谱区域划分数和光谱区域对建模的影响， 确定最佳光谱区域 划分数和特征光谱区域 ； 0033 （6） 将上述所得核磁共振氢谱特征光谱区域的图谱数据与阿胶真品和其伪品的 实际类别进行关联建立数学模型， 形成鉴别阿胶真品与其伪品的核磁共振氢谱分析数学模 型 ； 0034 （7） 对上述建立的数学模型的预测能力进行验证。 0035 本发明的方法简便。

15、、 易行， 适于对阿胶真品及其伪品进行快速、 无损、 无污染的鉴 别， 为阿胶的质量控制提供技术数据支持。 说 明 书 CN 102749349 A 4 3/4 页 5 附图说明 0036 图 1 为 25的室温下， 采用瑞士 Bruker AVANCE 600 型超导傅立叶变换核磁共振 波谱仪取得阿胶真品及其伪品水溶性成分的原始核磁共振氢谱， 其中，（a） 阿胶真品 ；（b） 阿胶伪品。 0037 图 2 为采用 SpecAlign（1.2.1） 软件对各样品原始核磁共振氢谱按化学位移数据 进行匹配， 使用 Matlab 软件去除残余水核磁共振吸收峰 （4.61ppm-5.17ppm 区域的。

16、核 磁共振吸收峰） ， 并进行数据正规化处理 （图谱中核磁共振吸收峰的强度最大值为 1， 最小值 为 0） 后得到的核磁共振氢谱， 其中，（a） 阿胶真品 ；（b） 阿胶伪品。 0038 图 3 为本发明比较不同光谱区域计算的交叉验证均方根误差 （RMSECV） 图， 图中， 虚线是在010ppm全光谱区域计算得到的RMSECV， 光谱为所有样品水溶性成分经匹配， 去 除残余水核磁共振吸收峰及正规化处理后所得的核磁共振氢谱的平均图谱。 0039 图 4 为本发明采用核磁共振氢谱特征光谱区域 （即图 3 中光谱区域 3） 数据建立数 学模型对阿胶真品和伪品的鉴别结果图， 图中 1 和 2 分别代。

17、表校正集中阿胶真品和伪品， 3 和 4 分别代表验证集中阿胶的真品和伪品。 具体实施方式 0040 下面结合实施例对本发明作进一步的说明。 0041 实施例 1 建立数学模型 0042 首先取适量不同批次的阿胶真品和其伪品样品进行研磨， 精密称取研磨好的样品 细粉 100mg， 加蒸馏水 5mL， 超声提取 25min， 3000r/min 离心 10min。然后精密吸取 2mL 上清 液置于平行蒸发仪中挥干水分， 残渣溶于 0.5mL D2O 后转入核磁管中， 即得待测样品溶液。 将样品待测溶液在 25室温下， 采用核磁共振波谱分析仪测得不同批次阿胶真品及其伪品 水溶性成分的原始核磁共振氢谱。

18、， 如图 1 所示。使用 SpecAlign（1.2.1） 软件将各样品的 原始核磁共振氢谱按照化学位移数据进行匹配， 使用 Matlab 软件去除残余水核磁共振吸 收峰 （4.61ppm-5.17ppm区域的核磁共振吸收峰） ， 并进行数据正规化处理 （图谱中核磁 共振吸收峰的强度最大值为 1， 最小值为 0） ， 如图 2 所示。将阿胶真品和伪品的实际类别与 上述预处理后的核磁共振氢谱在 0 10ppm 的光谱范围内进行关联建立数学模型。 0043 在全光谱区域考察不同光谱区域划分数及光谱区域对间隔偏最小二乘 （i-PLS） 法 建模的影响。i-PLS 法的建模参数为 ： 光谱区域划分数及。

19、光谱区域 ； 首先考察光谱区域划 分数 5 20， 计算每个光谱区域划分数对应的交叉验证均方根误差 （RMSECV） 。该值越小表 明交叉验证预测性能越好。当光谱区域划分数为 14 时， RMSECV 达到最小， 因此选择光谱区 域划分数为 14（如表 1 所示） 。由图 3 可见， 当光谱区域划分数为 14 时， 光谱区域为 3 时， RMSECV 达到最小， 故选择光谱区域 3 为特征光谱区域。 0044 表 1 不同光谱区域划分数计算的 RMSECV 的比较 0045 说 明 书 CN 102749349 A 5 4/4 页 6 0046 通过不同光谱区域划分数和特征光谱区域的选择， 最。

20、终我们建立了 i-PLS 的数学 模型， 形成鉴别阿胶真品与其伪品的核磁共振氢谱分析数学模型， 具体参数见表 2。 0047 表 2 ： 为本发明获得的用于鉴别阿胶真伪的核磁共振氢谱的模型参数 0048 0049 实施例 2 对实施例 1 建立的数学模型进行验证 0050 验证方法为 ： 选取不同品牌不同批次的阿胶真品及其伪品对上述数学模型进行验 证， 检验其正确率。 0051 结果 ： 如表 3 和图 4 所示， 采用实施例 1 建立的数学模型进行验证的结果， 正确率 达到 100%。 0052 表 3 ： 为本发明方法对验证集样品的预测结果 0053 0054 上面所述的实施例仅是对本发明。

21、的优选实施方式进行描述， 并非对本发明的构思 和保护范围进行限定， 在不脱离本发明设计构思的前提下， 本领域中普通工程技术人员对 本发明的技术方案作出的各种变型和改进， 均应落入本发明的保护范围。 0055 基金项目 ： 本发明得到了山东省自然基金 （ZR2011HM080） 及山东大学自主创新基 金项目 （2010TS054） 的资助。 说 明 书 CN 102749349 A 6 1/3 页 7 图 1 说 明 书 附 图 CN 102749349 A 7 2/3 页 8 图 2 图 3 说 明 书 附 图 CN 102749349 A 8 3/3 页 9 图 4 说 明 书 附 图 CN 102749349 A 9 。