《一种淫羊藿生产中总黄酮的检测方法.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《一种淫羊藿生产中总黄酮的检测方法.pdf（12页完整版）》请在专利查询网上搜索。
1、(10)申请公布号 CN 104089915 A (43)申请公布日 2014.10.08 CN 104089915 A (21)申请号 201410339050.2 (22)申请日 2014.07.16 G01N 21/33(2006.01) G01N 21/3577(2014.01) G01N 21/359(2014.01) (71)申请人 广州白云山汉方现代药业有限公司 地址 510240 广东省广州市海珠区江南大道 中 134 号 (72)发明人 许定舟 李菁 刘翠红 杨丽 李宇 钟鸣 (74)专利代理机构 广州市深研专利事务所 44229 代理人 姜若天 (54) 发明名称 一种淫羊。
2、藿生产中总黄酮的检测方法 (57) 摘要 本发明公开了一种淫羊藿生产中总黄酮的检 测方法， 包括以下步骤 ：（1） 制备淫羊藿提取液， 取样 ；（2） 利用 AOTF 近红外光谱仪采集与光谱相 对应的近红外光谱 ；（3） 紫外分光光度法离线检 测采集样品的总黄酮含量 ；（4） 利用数学计量软 件关联近红外光谱数据和离线检测数据， 建立校 正模型 ；（5） 利用建立的校正模型在线检测生产 过程中提取液中总黄酮含量。本发明采集提取工 艺中的校正样品集， 采用紫外分光光度法检测样 品总黄酮含量， 利用 TheUnscambler 分析软件建 立校正模型， 使用建立的好校正模型对生产过程 中淫羊藿提取。
3、液总黄酮含量实时监测。本发明将 近红外光谱技术成功运用于中药生产过程中， 实 现中药生产过程的实时、 在线的质量控制。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 7 页 附图 3 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书7页 附图3页 (10)申请公布号 CN 104089915 A CN 104089915 A 1/1 页 2 1. 一种淫羊藿生产中总黄酮的检测方法， 其特征在于包括以下步骤 ： （1） 制备淫羊藿提取液， 取样 ； （2） 利用 AOTF 近红外光谱仪采集与光谱相对应的近红外光谱 ； （3） 紫外分光光度法离线检测采集。
4、样品的总黄酮含量 ； （4） 利用数学计量软件关联近红外光谱数据和离线检测数据， 建立校正模型 ； （5） 利用建立的校正模型在线检测生产过程中提取液中总黄酮含量。 2. 根据权利要求 1 所述的淫羊藿生产中总黄酮的检测方法， 其特征在于淫羊藿提取 液的制备包括 ： 将淫羊藿 2550 kg/ 罐投入多能提取罐， 加水提取 13 次， 第一次提取的加 1015 倍体积量水， 第二、 三次均加 10 倍体积量水， 各沸腾 12 小时 ； 提取液经 60 100 目 筛粗， 冷却至 40 60 ， 离心液合并， 备用。 3. 根据权利要求 1 所述的淫羊藿生产中总黄酮的检测方法， 其特征在于取样方。
5、法包 括 ： 在提取罐体的管道上安装的取样阀取样， 记录取样时间， 取样方案为前 40 分钟每分钟 取一次样， 后 20 分钟每 5 分钟取一次样， 每次取样 50 mL。 4.根据权利要求1所述的淫羊藿生产中总黄酮的检测方法， 其特征在于 ： 步骤 （2） 采集 近红外光谱所使用的是 Brimrose 公司的 Luminar3060 型近红外光谱仪， 加装流体探头。 5.根据权利要求1所述的淫羊藿生产中总黄酮的检测方法， 其特征在于 ： 步骤 （2） 所述 采集的光谱的波长范围 1100 2300 ； 波长增量 ： 2.0 nm， 扫描次数 ： 200 ； 采用透射检测方 式， 光程为 5n。
6、m。 6. 根据权利要求 1 所述的淫羊藿生产中总黄酮的检测方法， 其特征在于， 步骤 （4） 所述 的数学计量软件是 CAMA 公司 The Unscrambler 分析软件。 权 利 要 求 书 CN 104089915 A 2 1/7 页 3 一种淫羊藿生产中总黄酮的检测方法 技术领域 0001 本发明涉及医药领域， 具体地说， 涉及一种淫羊藿生产中总黄酮的检测方法。 背景技术 0002 淫羊藿为小檗科植物， 具有很高的药用价值。味性归经 ： 辛、 甘， 温。归肝、 肾经主 治功能 ： 补肾阳， 强筋骨， 祛风湿。其提取液中主要有含黄酮类化合物、 木脂素、 生物碱、 挥 发油等。对淫羊藿。
7、提取液的评价主要以其中总黄酮的含量为标准， 总黄酮的含量检测以分 光光度法计算而得。如要进一步得到其中淫羊藿苷的含量则需要使用高效液相色谱法， 此 种方法需要消耗大量药品及试剂， 检测时间较长， 检测结果滞后， 不能满足现代化大生产对 时效性的要求， 及在线质量控制的需求。近红外光谱技术作为一种在线监测技术， 具有快 速无无损的特点， 已在众多领域得到广泛应用， 本实验以声光可调滤光器 (Acousto-Optic Tunable Filter,AOTF) 近红外光谱仪在线采集提取工艺阶段管道中淫羊藿提取液的近红 外光谱， 建立定量模型并预测， 实现近红外对中药质控中快速检测及保障中药产品质量。
8、的 稳定。 发明内容 0003 本发明的目的是克服现有技术的不足， 提供一种淫羊藿生产中总黄酮的检测方 法， 以实现淫羊藿生产过程中总黄酮含量的在线质量控制。 0004 为了实现上述目的， 本发明采用如下技术方案 ： 0005 一种淫羊藿生产中总黄酮的检测方法， 包括以下步骤 ： 0006 (1) 制备淫羊藿提取液， 取样 ； 0007 (2) 利用 AOTF 近红外光谱仪采集与光谱相对应的近红外光谱 ； 0008 (3) 紫外分光光度法离线检测采集样品的总黄酮含量 ； 0009 (4) 利用数学计量软件关联近红外光谱数据和离线检测数据， 建立校正模型 ； 0010 (5) 利用建立的校正模型。
9、在线检测生产过程中提取液中总黄酮含量。 0011 在上述淫羊藿生产中总黄酮的检测方法中， 淫羊藿提取液的制备包括 ： 将淫羊藿 25 50kg/ 罐投入多能提取罐， 加水提取 1 3 次， 第一次提取的加 10 15 倍体积量水， 第二、 三次均加10倍体积量水， 各沸腾12小时 ； 提取液经60100目筛粗， 冷却至40 60， 离心液合并， 备用。 0012 在上述淫羊藿生产中总黄酮的检测方法中， 取样方法包括 ： 在提取罐体的管道上 安装的取样阀取样， 记录取样时间， 取样方案为前 40 分钟每分钟取一次样， 后 20 分钟每 5 分钟取一次样， 每次取样 50mL。 0013 在上述淫。
10、羊藿生产中总黄酮的检测方法中， 步骤 (2) 采集近红外光谱所使用的是 Brimrose 公司的 Luminar3060 型近红外光谱仪， 加装流体探头。步骤 (2) 生产全程采集光 谱， 光谱采集采用 “Ratio mode” 通过连接于流体测样器的光纤探头以透视的方式对管道内 的淫羊藿水提液进行光谱采集。波长范围 1100 2300 ； 波长增量 ： 2.0nm， 扫描次数 ： 200。 说 明 书 CN 104089915 A 3 2/7 页 4 采用透射检测方式， 光程为 5nm。 0014 在上述淫羊藿生产中总黄酮的检测方法中， 步骤 (4) 所述的数学计量软件是 CAMA 公司 T。
11、he Unscrambler 分析软件。 0015 在上述淫羊藿生产中总黄酮的检测方法中， 步骤 (3) 紫外分光光度法为精密量取 淫羊藿水提液 0.5mL， 置 50mL 容量瓶中。加甲醇至刻度， 摇匀， 作为供试品溶液。另取淫羊 藿苷对照品适量， 精密称定， 加甲醇制成每 1mL 含 10g 的溶液， 作为对照品溶液。分别取 供试品溶液和对照品溶液， 以相应试剂为空白， 照紫外 - 可见分光光度法， 在 270nm 波长处 测定吸光度， 计算， 即得。 0016 在上述淫羊藿生产中总黄酮的检测方法中， 步骤 (4) 光谱采用一阶微分 9 点平滑 (Savitzy-golay) 对原始光谱进。
12、行预处理。将经过处理的光谱数据和离线的检测数据相关 联， 采用偏最小二乘法 (PLS1)， 交叉 - 验证法 (Cross-validation)， 用 The Uscrambler 定 量分析软件建立模型。 0017 与现有技术相比， 本发明具有如下有益效果 ： 本发明实现了淫羊藿生产过程中对 总黄酮含量的实时在线检测。包括采集提取工艺中的校正样品集， 采用紫外分光光度法检 测样品总黄酮含量， 利用 The Unscambler 分析软件建立校正模型， 使用建立的好校正模型 对生产过程中淫羊藿提取液总黄酮含量实时监测。 本发明将近红外光谱技术成功运用于中 药生产过程中， 实现中药生产过程的实。
13、时、 在线的质量控制。 附图说明 ： 0018 图 1 为提取第一次煎煮原始光谱图 ； 0019 图 2 为提取第二次原始光谱图 ； 0020 图 3 为提取三煎煮原始光谱图 ； 0021 图 4 为提取一煎 PLS1 回归模型图 ； 0022 图 5 为提取二煎 PLS1 回归模型图 ； 0023 图 6 为提取三煎 PLS1 回归模型图。 具体实施方式 ： 0024 实施例 1 ： 0025 1、 制备淫羊藿提取液 0026 将淫羊藿 25kg/ 罐投入多能提取罐， 加水提取 3 次， 第一次提取的加 15 倍量水， 第 二、 三次均加10倍体积量水， 各沸腾1小时。 提取液经60100目。
14、筛粗， 冷却至4060， 离心液合并， 备用。 0027 2、 取样方法 0028 水提前 40 分钟每分钟去一次样， 后 20 分钟每 5 分钟取一次样。每次取样 50mL 0029 3、 总黄酮检测方法 0030 精密量取淫羊藿水提液 0.5mL， 置 50mL 容量瓶中。加甲醇至刻度， 摇匀， 作为供试 品溶液。 另取淫羊藿苷对照品适量， 精密称定， 加甲醇制成每1mL含10g的溶液， 作为对照 品溶液。分别取供试品溶液和对照品溶液， 以相应试剂为空白， 照紫外 - 可见分光光度法， 在 270nm 波长处测定吸光度， 计算， 即得。 说 明 书 CN 104089915 A 4 3/7。
15、 页 5 0031 4、 光谱采集与处理 0032 光谱采集采用 “Ratio mode” 通过连接于流体测样器的光纤探头以透视的方式对 管道内的淫羊藿水提液进行光谱采集。 波长范围11002300 ； 波长增量 ： 2.0nm扫描次数 ： 200。采用透射检测方式， 光程为 5nm， 0033 光谱采用一阶微分 9 点平滑 (Savitzy-golay) 对原始光谱进行预处理。将经 过处理的光谱数据和离线的检测数据相关联， 采用偏最小二乘法 (PLS1)， 交叉 - 验证法 (Cross-validation)， 用 The Uscrambler 定量分析软件建立模型。 0034 5、 预测。
16、 0035 本次共建立三个模型， 分别为提取第一次煎煮、 提取第二次煎煮、 提取第三次煎 煮， 分别对参与建模样品和随机抽取的样品进行预测结果如表 1、 2、 3、 4。通过模型的内部 验证和外部验证， AOTF 近红外光谱在线检测预测淫羊藿生产过程中总黄酮含量的相对偏差 在 10左右， 在实际生产过程中可有效的实现实时在线的质量控制。在后期的研究中， 将 投料的原料批次、 产地等因素综合考虑建模， 减小系统误差。 后期模型维护需要加大数据采 集量， 以丰富模型梯度， 使得模型更加丰满， 梯度得以展开， 使模型适应性更好更加准确。 图 1为提取第一次煎煮原始光谱图 ； 图2为提取第二次原始光谱。
17、图 ； 图3为提取三煎煮原始光 谱图 ； 图 4 为提取一煎 PLS1 回归模型图 ； 图 5 为提取二煎 PLS1 回归模型图 ； 图 6 为提取三 煎 PLS1 回归模型图。 0036 表 1 第一次煎煮模型的内部验证结果 0037 说 明 书 CN 104089915 A 5 4/7 页 6 0038 说 明 书 CN 104089915 A 6 5/7 页 7 0039 表 2 第二次煎煮模型的内部验证结果 0040 说 明 书 CN 104089915 A 7 6/7 页 8 0041 0042 表 3 第三次煎煮模型的内部验证结果 0043 0044 表 4 模型的外部验证结果 0045 说 明 书 CN 104089915 A 8 7/7 页 9 0046 说 明 书 CN 104089915 A 9 1/3 页 10 图 1 图 2 说 明 书 附 图 CN 104089915 A 10 2/3 页 11 图 3 图 4 说 明 书 附 图 CN 104089915 A 11 3/3 页 12 图 5 图 6 说 明 书 附 图 CN 104089915 A 12 。