颗粒状载体和包含它们的药物组合物 技术领域：
本发明涉及用作药物输送体系(DDS)中的药物载体的颗粒状载体以及包含该载体的药物组合物。
背景技术：
在DDS领域中，术语“药物载体”用来指将药物输送到目标器官或细胞的载体。当药物载体是颗粒形式时，它们被称作是颗粒状载体。颗粒载体根据它们的尺寸，形状和功能被分成微胶囊，微球，纳米级颗粒等。用于制备这些颗粒状载体的材料包括类脂类，聚合物等。
术语“微胶囊”和“微球”通常用于指直径为几微米的颗粒。微胶囊通常认为包括比微球更广义的一类。从表面到核由聚合物形成的颗粒常常不同于微胶囊并在当前被称作微球。
术语“纳米级颗粒”常常用来指通过乳液聚合反应制得的聚合物胶乳，其尺寸是几个纳米的数量级。然而，目前实际上更常见的是总称由天然或合成聚合物组成的颗粒，即使由不是乳液聚合的方法制得，因为纳米级颗粒只要尺寸是几个纳米的数量级就行。
作为颗粒状载体的纳米级颗粒首先就用作为例如抗癌剂标靶(确定目标)的载体来进行研究的。在早一些时间地研究中，应用的主要目的是是注射(L.格利斯兰(L.Grislain)等人，国际药物学杂志(international Journalof Pharmaceutics),15,335(1984))。九十年代中期，开始报道了有关口服剂量形式的纳米级颗粒的研究。
当以纳米级颗粒制备药物并以口服形式使用时，下面是被认为要达到的目标：吸收特性差的药物的改进((P.麦升特(P.Maincent)等人，药物科学期刊，75,955(1986)；C.达姆格(C.Damge)等人，国际药物学杂志，36,121(1987))，肽药物如胰岛素的口服剂量形式(C.达姆格(C.Damge)等人，糖尿病(Diabetes),37,246(1988)；P.考夫瑞尔(P.Couvreur)和F.皮西尤克斯(F.Puisieux)，最新药物输送体系综述，10,141(1993))，疫苗抗原的口服输送(J.H.爱尔德瑞格(Eldrige)，受控释放杂志，11,205(1990)；P.U.珍妮(Jani)等人，国际药物学杂志，86,239(1992))，和药物的受控释放(B.胡伯特(Hubert)等人，药物研究，8,734(1991))。
而且，与微胶囊的情况一样，有时候使用纳米级颗粒是试图确保胃肠道药物的稳定性(M.罗格斯(Rogues)等人，糖尿病(Diabetes),41,451(1992))或减缓由强刺激性药物对肠胃粘膜所引起的刺激(N.爱莫里(Ammoury)等人，药物研究，8,101(1991))。
供药物使用的纳米级颗粒主要是由两种方法中的一种来制备的。第一种方法是典型的微胶囊化法，它是通过相分离或溶剂蒸发来进行的。
当使用这一方法时，常常使用平常被用作药物的添加剂的疏水性聚合物类，如聚乳酸(A.M.雷(Ray)等人，药物科学期刊，83,845(1994))，纤维素衍生物(H.衣不拉黑姆(Ibrahim)等人，国际药物杂志，87,239(1992)，或聚丙烯酸酯衍生物(E.阿里曼(Allemann)等人，国际药物杂志，87,247(1992))。
制备纳米级颗粒的其它方法是利用乳液聚合方法(L.范斯尼克(Vansnick)等人，药物研究，1,36(1985)；N.Al考里法娄(KhouriFallouh)等人，国际药物杂志，28,125(1986))。在这种情况下，疏水性聚乙烯基化合物如聚苯乙烯，聚丙烯酸酯和聚甲基丙烯酸酯被认为可用作纳米级颗粒的材料。聚氰基丙烯酸酯是比较频繁使用的，尤其聚氰基丙烯酸异丁基酯，它是外科手术用的粘合剂。
通过将药物与纳米级颗粒混合来制备药物产品，从而携带上药物。被携带的药物常常是疏水性化合物，因为制备纳米级颗粒的方法不适合于亲水性化合物。虽然已经报道了其中亲水性化合物被转变成纳米级颗粒的一些实例，但它们在效果上仅限于在某些PH值下不溶于水的化合物(例如多肽)(Yoshiaki KAWASHIMA，日本药物学协会第114届会议，报告摘要第4卷，第9页，1994，东京)。
其中使用如此制备的纳米级颗粒-药物配合物以改进吸收性差的药物的吸收作用，制备多肽药物的口服剂量形式，和控制药物的释放的研究工作的例子包括以下这些。
P．麦升特(P.Maincent)等人通过使用聚氰基丙烯酸己酯制备了长春蔓胺(一种吸收性差的降血压药物)的纳米级颗粒，并研究了吸收增强效果。然而，在被转变成纳米级颗粒之后长春蔓胺的吸收速率仅仅是转变之前的1.6倍(药物科学期刊，75,955(1986))。
C．达姆格(C.Damge)等人通过使用聚氰基丙烯酸异丁基酯将胰岛素包覆在纳米级颗粒中试图制备肽的口服剂量形式。然而，当含有大量胰岛素的纳米级颗粒在绝食的情况下以口服方式施用于已在实验室中诱发糖尿病的鼠时，仅仅观察到血液中葡萄糖的轻微降低(糖尿病，37,246(1988))。
此外，B．胡伯特等人研究了使用达罗地平(darodipine)(一种降压药)的药物受控释放。然而，他们将药物包覆在纳米级颗粒中仅仅仅仅成功地降低了药物的初始释放速度[药物研究，8,734(1991)]。没有有关由纳米级颗粒实现的受控释放。
如以上所述，目前没有一种颗粒状载体对药物有充分的口服吸收增强作用。因此，本发明涉及一种具有优异的药物吸收增强效果的颗粒状载体，和涉及含有载体的药物组合物。
本发明的公开
本发明人针对作为药物载体的接枝共聚物在口服药物的吸收增强效果上经过深入的研究。他们发现，具有由聚乙烯基胺化合物组成的接枝链的接枝共聚物显示出优异的口服吸收增强效果，并提交了相应的专利申请(日本公开特许(kokai)NO.8-268916)。在继续研究之后，他们出乎意料地发现，具有由以下所示的聚N-烷基丙烯酰胺或聚N-烷基甲基丙烯酰胺所组成的接枝链的接枝共聚物中的一种或多种的混合物与普通的接枝共聚物相比显示出特别优异的口服吸收增强效果，导致本发明的完成。
因此，本发明提供一种包括具有下式(1)和(2)的结构单元的接枝共聚物(A)的颗粒状载体：其中
Q1是氢原子，甲基或氰基，和
Q2是氢原子，其中
R1是氢原子或卤代甲基，
R2是C1-C10烷基，
R3是氢原子或C1-C10烷基，和
R4是C1-C10烷基，条件是R3和R4的碳原子总数在3和20(包括端值)之间；其中
Q3是氢原子或甲基，
Q4是具有以下结构的基团：
其中A1是C1-C10亚烷基，
Q5是氧原子或-NH-，
Q6是C1-C10亚烷基，
Q7是氧原子或硫原子，
X1是氧原子或两个氢原子，
R5,R7和R8分别是氢原子或甲基，
R6是C1-C10烷基，
l是1-100的数，和
m和n分别是0-100的数。
本发明还提供了含以下组分(a)和(b)的组合物(接枝共聚物组合物)的颗粒状载体组合物：
(a)上述接枝共聚物(A)；和
(b)一种或多种选自以下接枝共聚物(B-1)和(B-2)的接枝共聚物：
(B-1)具有以下通式(1)和(3)的结构单元的接枝共聚物：其中
Q1是氢原子，甲基，或氰基，和
Q2是氢原子，其中
R1是氢原子或卤代甲基，
R2是C1-C10烷基，
R3是氢原子或C1-C10烷基，和
R4是C1-C10烷基，条件是R3和R4的碳原子总数在3和20(包含端值)之间；
Q8是氢原子或甲基，
Q9是具有以下结构的基团：
其中A2是C1-C10亚烷基，
Q10是氧原子或-NH-，
Q11是C1-C10亚烷基，
Q12是氧原子或硫原子，
X2是氧原子或两个氢原子，
R9和R10分别是氢原子或甲基，
R11是C1-C10烷基，和
p和q各自独立地是0-100的数，使得p+q的总数等于或大于1；
(B-2)具有以下通式(1)和(4)的结构单元的接枝共聚物：其中
Q1是氢原子，甲基，或氰基，和
Q2是氢原子，其中
R1是氢原子或卤代甲基，
R2是C1-C10烷基，
R3是氢原子或C1-C10烷基，和
R4是C1-C10烷基，条件是R3和R4的碳原子总数在3和20(包含端值)之间；其中
Q13是氢原子或甲基，
Q14是具有以下结构的基团：
其中A3是C1-C10亚烷基，
Q15是氧原子或-NH-，
Q16是C1-C10亚烷基，
Q17是氧原子或硫原子，
X3是氧原子或两个氢原子，
R12、和R13各自是氢原子或甲基，
R14是C2-C11链烷酰基，和
s和t各自独立地是0-100的数，使得s+t的总数等于或大于1；
本发明还提供了含药物和上述接枝共聚物(A)的药物组合物，或含药物和含组分(a)和(b)的上述接枝共聚物组合物的药物组合物。
附图的简要描述
图1是参考实施例1-2合成的N-异丙基丙烯酰胺大分子的质子NMR谱图。图2是参考实施例1-3合成的接枝共聚物的质子NMR谱图，其中疏水性骨架由聚苯乙烯组成和亲水性分支由聚N-异丙基丙烯酰胺组成。图3是参考实施例2-2合成的大分子的质子NMR谱图，大分子是由N-异丙基丙烯酰胺和丙烯酰胺的无规共聚物组成。图4是参考实施例4-2合成的大分子的质子NMR谱图，大分子是由N-异丙基丙烯酰胺和丙烯酰胺的无规共聚物组成。图5是参考实施例6-2合成的大分子的质子NMR谱图，大分子是由N-异丙基丙烯酰胺和丙烯酰胺的无规共聚物组成。图6是在实施例2中酚磺酞经十二指肠施用于大鼠后，血浆酚磺酞浓度作为时间的函数(平均值±S.D.)的曲线图。图7是在实施例4中鲑降钙素以口服方式施用于鼠后，血液中离子钙浓度(平均值±S.E.)的变化作为时间的函数的曲线图。图8是在实施例6中阿片样肽以口服方式施用于小鼠后，止痛效果(平均值±S.E.)随时间推移而变化的曲线图。图9是在实施例8中鲑降钙素以口服方式施用于大鼠后，血液中离子钙浓度(平均值±S.E.)的变化作为时间的函数的曲线图。图10是在实施例10中鲑降钙素以口服方式施用于大鼠后，血液中离子钙浓度(平均值±S.E.)的变化作为时间的函数的曲线图。图11是在实施例11中鲑降钙素以口服方式分几次施用于大鼠后，血液中离子钙浓度(平均值±S.E.)的变化作为时间的函数的曲线图。
实施本发明的最佳方式
用于本发明的颗粒状载体和药物组合物中的接枝共聚物被分成以下三组；即，具有结构单元(1)和(2)的接枝共聚物(A)，具有结构单元(1)和(3)的接枝共聚物(B-1)，具有结构单元(1)和(4)的接枝共聚物(B-2)。
存在于这些接枝共聚物中的接枝链的比例没有特别的限制。然而，从提高药物吸收的观点看，通式(2),(3)，或(4)的结构单元的摩尔分数应该在0.001和1之间。
下面将描述用于通式(1),(2),(3)，和(4)的符号，它们表示了组成本发明接枝共聚物的结构单元。
在通式(1)中，由R1表示的卤代甲基包括氯甲基，溴甲基，碘甲基等。由R2,R3，和R4表示的C1-C10烷基是线性的或支化的；它的特定实例包括甲基，乙基，正丙基，异丙基，正丁基，叔丁基，正戊基，正己基等。在这些当中，R2优选是C1-C5烷基，其中甲基，乙基和异丙基是特别优选的。有两种情况：一种是R3为氢原子和R4为烷基，和一种是R3和R4都为烷基。在任何一种情况下，碳原子总数在3-20之间，包括端值。例如，当R3为氢原子时，R4为具有3-10个碳原子的烷基，和当R3和R4都为烷基时，R3和R4是使得碳原子总数在3-20之间(包括端值)的烷基。
在由通式(1)表示的结构单元中，以下通式(1a)的结构单元：(其中Q1和R1与上述定义相同)是优选的，以下通式(1b)的结构单元：(其中R1与上述定义相同)是尤其优选的。
在通式(2),(3)，和(4)中，由A1,A2,A3,Q6,Q11，和Q16表示的C1-C10亚烷基可以是线性的或支化的；它的特定例子包括亚甲基，亚乙基，三亚甲基，六亚甲基，亚丙基，(乙基)亚乙基，(二甲基)亚乙基等。其中C1-C5线性或支化亚烷基是优选的。
由R6和R11表示的C1-C10烷基可以是线性的或支化的，它的特定例子包括甲基，乙基，正丙基，异丙基，正丁基，叔丁基，正戊基，正己基等。其中，R6优选是C3-C10支化烷基，其中异丙基是特别优选的。R11优选是C1-C8线性或支化烷基，其中甲基，乙基，异丙基，叔丁基，和正己基是特别优选的。
由R14表示的C2-C11链烷酰基可以是线性的或支化的，优选地，他们具有2-6个碳原子。乙酰基，丙酰基和丁酰基是特别优选的。
在通式(2)中，因为m和n可以是0，因此，通式(2)的结构单元可以采取由通式(2a),(2b),(2c)和(2d)表示的结构：其中Q3,Q4,Q5,Q6,Q7,X1,R5,R6,R7,R8和l与上述定义相同。
在通式(2)的结构单元中，优选的是通式(2e)的那些：(其中Q5,Q6,Q7,X1,R5,R6,R7,R8和l,m和n与上述定义相同)，特别优选的是通式(2f)和(2g)的那些：(其中R6,l,m和n与上述定义相同)。
在通式(3)中，因为p和q各可以是0，因此，通式(3)的结构单元可以采取由通式(3a),(3b)和(3c)之一表示的结构：其中Q8,Q9,Q10,Q11,Q12,X2,R9,R10和R10与上述定义相同。
在通式(3)的结构单元中，优选的是通式(3d)的那些：(其中Q10,Q11,Q12,X2,R9,R10,R11,p和q与上述定义相同)，特别优选的是通式(3e)和(3f)的那些：(其中R10,p和q与上述定义相同)。
在通式(4)中，因为s和t可以是0，因此，通式(4)的结构单元可以采取由通式(4a),(4b)和(4c)之一表示的结构：其中Q13,Q14,Q15,Q16,Q17,X3,R12,R13和R14与上述定义相同。
在通式(4)的结构单元中，优选的是通式(4d)的那些：(其中Q15,Q16,Q17,X3,R12,R13和R14,s和t与上述定义相同)，特别优选的是通式(4e)和(4f)的那些：(其中R13,s和t与上述定义相同)。
在上述接枝共聚物中，在各接枝链中的重复单元(如N-烷基丙烯酰胺，N-烷基甲基丙烯酰胺，丙烯酰胺，甲基丙烯酰胺，丙烯酸，乙烯基胺，N-链烷酰基乙烯基胺等)可以是无规型或嵌段型。在通式(1)的结构单元和通式(2),(3)，或(4)中任一个的结构单元之间的链接也可以是无规型或嵌段型。
在上述通式(A)的接枝共聚物中，落在以下三类型内的那些是新型的：由通式(1)和通式(2b)的结构单元组成的接枝共聚物；由通式(1)和通式(2c)的结构单元组成的接枝共聚物；和由通式(1)和通式(2d)的结构单元组成的接枝共聚物。
接枝共聚物可以通过，例如合成与通式(2),(3)，或(4)的结构单元相对应的大分子，和随后将所得到的大分子和与通式(1)所对应的乙烯基化合物进行共聚合反应制备的。
制备接枝共聚物的方法被详细描述如下。
与通式(2),(3)，或(4)的结构单元相对应的大分子可以容易地通过如下步骤来制备：在分子中具有氨基、羟基或羧酸基团的链转移剂存在下，通过一种或多种与通式(2)-(4)中任何一个的重复单元相对应的单体(例如烷基丙烯酰胺衍生物，和烷基甲基丙烯酰胺衍生物)的自由基聚合反应，从而，合成一种或多种端部具有氨基，羟基，或羧酸基团的聚合物或共聚物(例如烷基丙烯酰胺衍生物或烷基甲基丙烯酰胺衍生物的聚合物或共聚物)，然后，让所得到的聚合物或共聚物与乙烯基单体如乙烯基苄基卤或甲基丙烯酸烷基酯二氧化物进行反应。
一种或多种单体如烷基丙烯酰胺衍生物或烷基甲基丙烯酰胺衍生物的聚合反应是在链转移剂和自由基聚合反应引发剂存在下进行的。在聚合反应过程中，溶剂可以存在或不存在。从控制反应和操作简单方面考虑，溶剂的存在是优选的，溶剂的例子包括，但是，并不限于水，醇类，二甲基甲酰胺，和苯。链转移剂的例子包括巯基烷基胺类，巯基链烷醇类，ω-巯基羧酸，亚烷基二醇类等。其中，2-巯基乙基胺，2-巯基乙醇，和β-巯基丙酸是优选的。自由基聚合反应引发剂包括偶氮二异丁腈，过氧化苯甲酰，和过硫酸铵。其中偶氮二异丁腈，过氧化苯甲酰是优选的。
乙烯基单体和一种或多种端部具有氨基，羟基，或羧酸基团的聚合物或共聚物(例如烷基丙烯酰胺衍生物，和烷基甲基丙烯酰胺衍生物的聚合物或共聚物)的反应可以简单地通过通常的酰胺反应，醚化反应，或酯化反应来进行。优选乙烯基单体包括氯甲基苯乙烯和亚丙基甲基丙烯酸酯二氧化物。
例如，由端部具有羟基的烷基丙烯酰胺衍生物或烷基甲基丙烯酰胺衍生物与丙烯酰胺或甲基丙烯酰胺组成的无规共聚物可以在0-100℃的温度下，在50％KOH水溶液和，若需要，相转移催化剂存在下，在溶剂如二甲基甲酰胺中与氯代苯乙烯反应。
当如此制备的，与通式(2),(3)，或(4)的结构单元相对应的大分子被聚合，或与通式(1)相对应的乙烯基化合物(他们能够进行自由基聚合反应)进行共聚合时，获得上述接枝共聚物。
乙烯基化合物的例子包括苯乙烯，卤代甲基苯乙烯，丙烯酸甲酯，甲基丙烯酸甲酯，氰基丙烯酸异丁酯，丙烯腈，丙烯酰胺和乙酸乙烯酯。其中苯乙烯，卤甲基苯乙烯，丙烯酸甲酯，甲基丙烯酸甲酯是优选的。
在上述接枝共聚物中，具有通式(2b),(2c),(2d),(3a),(3b),(4a),或(4b)的那些共聚物，它们在接枝链上具有酰胺基团、羧酸基团或伯氨基，也可以通过将具有(2a),(3c)，和/或(4c)结构单元的大分子进行聚合，或它们各自与上述乙烯基化合物进行共聚合，随后用已知的方法将所得到的产物水解到合适的程度来制备。
通过改变聚合度，有可能获得溶于水，乙醇，氯仿，二甲亚砜等中的两亲性接枝共聚物。
由这些接枝共聚物组成的颗粒是通过疏水性单体和与通式(2),(3)，或(4)的结构单元相对应的亲水性大分子的分散聚合反应和随后通过水解(若必要，可以进行)获得的。每一种所获得的颗粒都具有一种形式，其中亲水性大分子位于颗粒的外部和颗粒的内部是由疏水性聚合物组成的。
因为如此制备的颗粒的表面是亲水性的，所以亲水性药物能够有效地引入颗粒中。另一方面，在疏水性药物和由疏水性聚合物组成的内层之间存在疏水性相互作用。疏水性药物也能够利用外部的两亲特性引入颗粒外部。换句话说，因为本发明的颗粒被认为不依靠药物的性能而能有效地引入药物，本发明的颗粒用作颗粒状载体。
在本发明中，优选的药物载体是含有接枝共聚物(A)(也称作组分(a))和一种或多种选自接枝共聚物(B-1)和(B-2)的组分(也称作组分(b))的混合物的组合物。(下文，由组分(A)和组分(B)组成的组合物也称作接枝共聚物组合物。)因为该接枝共聚物组合物具有两种或多种由亲水性大分子衍生的接枝链，所以，认为药物能够有效地引入纳米级颗粒，并保护免受胃肠道酶的侵害，从而提高了肠道的药物吸收率。
包含在本发明药物载体中的组分(a)与组分(b)的含量比优选为1,000∶1-1∶1,000，和特别优选100∶1-1∶100。
为了使用上述接枝共聚物作为颗粒载体，接枝共聚物被制备成微胶囊，微球或纳米级颗粒形式。
微胶囊和微球可通过使用普通的方法获得。纳米级颗粒可通过使用由Akashi等人(Die Angewandte,Macromolekulare Chemie,132,81(1985)；聚合物杂志，24,959(1992)；化学工程，第505页。1994)开发的大分子方法和分散聚合反应获得，从而获得其中亲水性大分子位于每一颗粒的外部和每一颗粒的内部由疏水性聚合物形成的纳米级颗粒。
纳米级颗粒的粒径根据大分子的分子量，制备大分子的反应条件，和其它因素的变化而变化。当选择合适的环境和条件时，有可能获得直径为微米级的微球。
如上所述，因为接枝共聚物或接枝共聚物组合物用作药物载体，所以当接枝共聚物或接枝共聚物组合物与药物混合时，能够获得显示出良好的口服吸收提高效果的药物组合物。认为，在通过将接枝共聚物或接枝共聚物组合物与药物混合制备的药物组合物中，接枝共聚物或接枝共聚物组合物和药物一起形成配合物。形成配合物的驱动力认为是静电相互作用，氢键(即与纳米级颗粒外部的亲水性官能团的相互作用)，疏水性相互作用(吸引到颗粒的内部)。
用于制备本发明药物组合物的药物没有特别的限制，可以是亲水性或疏水性，认为药物能够被控制释放或提高吸收率。
期望被控制释放的药物包括：1)在血液中具有短的半衰期的药物和2)具有窄的最佳治疗范围的药物。期望提高吸收率的药物，换句话说，吸收性差的药物包括：3)由于它们高的水溶性，从而具有较低膜渗透性的药物，4)由于在胃肠道中的分解、胃肠道的低吸收率等而妨碍效力发挥的药物和5)疫苗。
1)在血液中具有短半衰期的药物的例子包括异山梨醇，罂粟碱，硝酸甘油，酮洛芬，地尔硫，普萘洛尔，异丙肾上腺素，isotipenzyl，阿司匹林，pindrol，硝苯地平，乙酰唑胺，头孢氨苄，头孢克洛，奎尼丁，和普罗卡因胺。
2)具有窄的最佳治疗范围的药物的例子包括匹鲁卡品，茶碱，东莨菪碱，甲基东莨菪碱，氯苯那敏，苯福林，苯海索，维静宁，奋乃静，那可丁，硫利达嗪，二甲茚定，吡斯的明，和曲普利啶。
3)由于它们高的水溶性，从而具有较低膜渗透的药物的例子包括酚磺酞，水杨酸及其衍生物，巴比土酸及其衍生物，季铵盐如筒箭毒碱和琥珀胆碱，磺胺试剂如次磺酰酸，次磺酰基乙酰胺，和磺胺胍，喹啉，麻黄碱，苄咪唑啉，普鲁卡因酰胺，阿替洛尔和氯噻嗪。
4)由于在胃肠道中的分解、胃肠道的低吸收率而妨碍效力发挥的药物的例子包括肽类；更具体地讲，干扰素，白介素，促红细胞生成素，胰岛素，新制癌菌素，甲状旁腺素，阿片样肽类和降钙素。
5)疫苗的例子包括，当通过口服途径施用时被认为有用的那些。疫苗的特定的例子包括流感HA疫苗，肝炎B疫苗，和灰质疫苗。
用于制备疫苗的抗原的例子包括一系列蛋白质：病毒如流感A病毒，流感B病毒，流感C病毒，轮分病毒，细胞巨化病毒，RS病毒，腺病毒，艾滋病毒(HIV)，甲型肝炎病毒，乙型肝炎病毒，丙型肝炎病毒，水痘带状疱疹病毒，单纯性疱疹病毒(1型和2型)，成人T细胞白血病病毒(ATLV)，科赛奇病毒，肠病毒，猝发疹病毒，麻疹病毒，风疹病毒，流行性腮腺炎病毒，灰质病毒，日本脑炎病毒，狂犬病毒；细菌如链球菌龋，霍乱弧菌，流感嗜血菌，脑炎链球菌，百日咳博德特式杆菌，白喉棒状杆菌，和破伤风梭菌；立克次氏体类如衣原体属；原虫类如三日疟原虫。此外，以上所列病毒，细菌，立克次氏体类，和原虫类在它们的致病性减弱后本身可用作抗原。在上述药物中，希望提高吸收的那些药物(即，吸收性差的药物)优选用于本发明中。肽类是较优选的，和阿片样肽和降钙素是特别优选的。
认为，当上述配合物口服时，大部分药物被传送到胃肠道的微小凸起物的附近，同时保持它们的配合物形式，因为配合物的颗粒很小(J.Kreuter等人，国际药物杂志，55,39(1989))。此外，因为用于本发明的接枝共聚物在其外部具有亲水基团，所以配合物和胃肠道膜的相容性很高。
总之，由本发明的接枝共聚物或接枝共聚物组合物组成的颗粒状载体，尤其是纳米级颗粒和药物的配合物，能够在膜附近以高浓度聚集药物，其结果，可以改进吸收性差的药物的吸收性。
此外，当配制成颗粒形式时，在胃肠道中很容易由消化酶分解的肽类和类似药物能够免受酶的攻击。
另外，认为与膜具有相容性的颗粒和药物的配合物在胃肠道中能够缩短传送时间。因此，当药物经长的时间停留在吸收位置时，即在胃肠道内时，控制药物的释放是可期望的。
在本发明的药物组合物中，接枝共聚物或接枝共聚物组合物的用量与药物用量的比例根据所使用的药物调节。
事实上，接枝共聚物或接枝共聚物组合物和药物的混合物或配合物能够用已知的方法配制成药物制剂而且能够口服。另外，接枝共聚物或接枝共聚物组合物和药物的混合物或配合物能够包覆在软胶囊中。
药物制剂的物理形式没有特别的限制。药物制剂可以采用固体形式如片剂，粒剂，粉剂，和胶囊等；或液体形式如糖浆剂，酏剂，悬浮液，乳剂等。当制备这些药物制剂时，很显然，也可以混入常规的添加剂如赋形剂，粘结剂，润滑剂，和崩解剂。
本发明药物组合物的药物吸收提高效果甚至在低PH值如PH为1.2的条件下也不会降低。此外，该效果在体温为40℃时也不会降低。因此，本发明的药物组合物特别用于口服治疗。
如在下面实施例部分所描述的，当组合物以每隔一定的周期分几次的方式施用时，本发明药物组合物的药物吸收提高效果可以大大地改进。因此，通过合适设计药剂方式或药物制剂的配制方法(例如，通过分两部分或多部分服用单一剂量，或通过将快速释放配制剂和缓慢释放配制剂同时引入单一种的药物制剂中)，本发明药物组合物的药物吸收提高效果能够进一步地提高。
实施例
下面，将通过参考实施例，工作实施例，试验实施例描述本发明，它不应被理解为限于本发明。
参考实施例1
具有聚N-异丙基丙烯酰胺作为接枝链(接枝共聚物(A-1))的接枝共聚物：
1-1．N-异丙基丙烯酰胺低聚物的合成
将N-异丙基丙烯酰胺(20g,Kojin),2,2′-偶氮二异丁腈(AIBN)(0.6g)，和2-巯基乙醇(0.20g)溶于乙醇(80ml)中。在60℃和氮气气氛下，将溶液聚合7小时。当聚合反应完成时，由蒸发器除去含在反应混合物中的溶剂。预聚物在蒸馏水中再溶解，加热，和在60℃或60℃以上离心分离来提纯，所得到的提纯产物被冻干。聚合物的产率是83％。由凝胶渗透色谱法(GPC)测定的聚合物的数均分子量(Mn)为3,400。
1-2．N-异丙基丙烯酰胺大分子的合成
将第1-1步骤中获得的N-异丙基丙烯酰胺低聚物(8g)溶于二甲基甲酰胺(DMF)(50ml)中。向溶液中添加50％KOH(3.3g)，所得到的混合物在30℃下搅拌30分钟。添加四丁基溴化鏻(500mg)，和随后添加氯甲基苯乙烯(4.65g)。在30℃下，进行反应72小时。通过过滤除去沉淀物，反应混合物被渗析和冻干。大分子的产率为82％。由GPS测得大分子的数均分子量(Mn)为3,500。大分子溶于水和乙醇中。
图1是如此获得的N-异丙基丙烯酰胺大分子在DMSO-D6中的质子NMR谱图。
该谱图给出了，由苯乙烯的乙烯基质子引起的峰(δ=5.3-6.0ppm和6.6-7.0ppm)和在7.5ppm附近由苯核的质子引起的峰。
1-3．N-异丙基丙烯酰胺大分子和苯乙烯的共聚合(接枝共聚物(A-1)的合成和纳米级颗粒的制备)；
在步骤1-2中获得的大分子(Mn=3,500)(635mg)，苯乙烯(520mg)，和AIBN(8.5mg)溶于乙醇中。溶液在60℃下反应24小时。聚合反应后，通过渗析除去未反应的物质和溶剂，并将聚合物冻干。聚合物溶于氯仿和DMSO中。接枝共聚物的颗粒直径是430nm，由动态光散射光谱仪测定。
图2是接枝共聚物在DMSO-D6中的质子NMR谱图。
在谱图中，在上述大分子中观察到的苯乙烯的乙烯基质子(δ=5.3-6.0ppm和6.6-7.0ppm)消失，替代它们的是由苯乙烯的亚甲基质子引起的峰(δ=1.8-2.6ppm)和在7.5ppm附近由苯核的质子引起的峰。
参考实施例2
具有由N-异丙基丙烯酰胺和丙烯酰胺组成的无规共聚物作为接枝链的接枝共聚物(包含在接枝链中的N-异丙基丙烯酰胺的比例是53％)(接枝共聚物(A-2))
2-1．由N-异丙基丙烯酰胺和丙烯酰胺组成的无规共聚物的低聚物的合成
将N-异丙基丙烯酰胺单体(8.70g,75mmol)和丙烯酰胺单体(1.44g,25mmol)溶于乙醇(50ml)中。添加作为链转移剂的2-巯基乙醇(0.273g,3.50mmol)和作为自由基聚合反应引发剂的偶氮二异丁腈(0.164g,1.00mmol)。在60℃和氮气气氛下，将聚合反应进行6小时，从而合成标题低聚物。反应后，蒸发溶剂，残余物溶于丙酮后在己烷中沉淀从而回收该产物。再沉淀进行数次使得低聚物被提纯。低聚物的分子量(Mn)为3,100。由GPC测定。
2-2．由N-异丙基丙烯酰胺和丙烯酰胺组成的无规共聚物的大分子的合成
将在2-1步骤中获得的低聚物(4g,1.29mmol)溶于二甲基甲酰胺(50ml)中。向溶液中添加氢化钠(0.062g,2.58mmol)和四丁基溴化鏻(2.189g,6.45mmol)作为相转移催化剂，混合物被搅拌60分钟。之后，添加p-氯甲基苯乙烯(4.10g,26.7mmol)，混合物在30℃下被搅拌48小时。搅拌后，溶剂蒸发，将残余物溶于丙酮后在己烷中沉淀来回收该产物。再沉淀进行数次以提纯。乙烯基苄基的引入速率根据1H-NMR数据计算。结果证明，乙烯基苄基几乎定量地被引入(图3)。所获得的大分子的分子量(Mn)由GPC测定为4,600。
2-3．苯乙烯和由N-异丙基丙烯酰胺和丙烯酰胺组成的无规共聚物的大分子的共聚合(接枝共聚物(A-2)的合成；和纳米级颗粒的制备)
将在2-2步骤中获得的大分子(0.300g,0.065mmol)和苯乙烯(0.500g,4.80mmol)溶于乙醇(5ml)中。添加作为自由基聚合反应引发剂的偶氮二异丁腈(0.008g,0.049mmol)，和聚合反应在60℃下在脱气密封管中进行48小时。反应后，将试管的内容物进行数次离心分离并再分散在乙醇中。在最后的步骤中，接枝共聚物分散在水中，从而结束纯化。动态光散射光谱仪的测量结果表明，平均粒径为494nm。
参考实施例3
具有由N-异丙基丙烯酰胺和丙烯酸组成的无规共聚物作为接枝链的接枝共聚物(包含在接枝链中的N-异丙基丙烯酰胺的比例是53％)(接枝共聚物(A-3))
将在2-3步骤中获得的纳米级颗粒分散在2N-HCl中，随后在95℃下水解12小时，使得大分子的丙烯酰胺基团取代为丙烯酸基团。反应后，进行渗析来纯化。存在与纳米级颗粒外部的丙烯酰胺通过IR证实已经水解。从而，获得标题接枝共聚物。平均粒径由动态光散射光谱仪测量为311nm。
参考实施例4
具有由N-异丙基丙烯酰胺和丙烯酰胺组成的无规共聚物作为接枝链的接枝共聚物(包含在接枝链中的N-异丙基丙烯酰胺的比例是25％)(接枝共聚物(A-4))
4-1．由N-异丙基丙烯酰胺和丙烯酰胺组成的无规共聚物的低聚物的合成
将N-异丙基丙烯酰胺单体(3.48g,30mmol)和丙烯酰胺单体(4.03g,70mmol)溶于乙醇和水(1∶1(V/V))的溶剂混合物(50ml)中。添加作为链转移剂的2-巯基乙醇(0.273g,3.50mmol)和作为自由基聚合反应引发剂的偶氮二异丁腈(0.164g,1.00mmol)。在60℃和氮气气氛下，将聚合反应进行6小时，从而合成标题低聚物。反应后，蒸发溶剂，并将残余物溶于丙酮后，在己烷中沉淀从而回收该产物。再沉淀进行数次使得低聚物被提纯。所获得的低聚物的分子量(Mn)由GPC测定为2,100。
4-2．由N-异丙基丙烯酰胺和丙烯酰胺组成的无规共聚物的大分子的合成
将在4-1步骤中获得的低聚物(3.5gg,1.66mmol)溶于二甲基甲酰胺(50ml)中。向溶液中添加氢化钠(0.080g,3.32mmol)和四丁基溴化鏻(2.82g,8.30mmol)作为相转移催化剂，混合物被搅拌60分钟。之后，添加p-氯甲基苯乙烯(3.58g,23.3mmol)，混合物在30℃下被搅拌48小时。反应后，溶剂蒸发，将残余物溶于丙酮后在己烷中沉淀来回收该产物。再沉淀进行数次以提纯。乙烯基苄基的引入速率是根据1H-NMR数据计算。结果证明，乙烯基苄基几乎定量地被引入(图4)。所获得的大分子的分子量(Mn)由GPC测定为2,100。
4-3．苯乙烯和由N-异丙基丙烯酰胺和丙烯酰胺组成的无规共聚物的大分子的共聚合(接枝共聚物(A-4)的合成；和纳米级颗粒的制备)
将在4-2步骤中获得的大分子(0.300g,0.065mmol)和苯乙烯(0.550g,5.28mmol)溶于乙醇和水(1∶1(V/V))的溶剂混合物(5ml)中。添加作为自由基聚合反应引发剂的偶氮二异丁腈(0.0089g,0.0542mmol)，共聚反应在60℃下在脱气密封管中进行48小时。反应后，将试管的内容物进行数次离心分离并再分散在乙醇中。在最后的步骤中，接枝共聚物分散在水中，从而结束纯化。动态光散射光谱仪的测量结果表明，平均粒径为347nm。
参考实施例5
具有由N-异丙基丙烯酰胺和丙烯酸组成的无规共聚物作为接枝链的接枝共聚物(包含在接枝链中的N-异丙基丙烯酰胺的比例是25％)(接枝共聚物(A-5))
将在4-3步骤中获得的纳米级颗粒分散在2N-HCl中，随后在95℃下水解12小时，使得大分子的丙烯酰胺基团变成丙烯酸基团。反应后，进行渗析来纯化。存在于纳米级颗粒外部的丙烯酰胺通过IR证实已经水解。从而，获得标题接枝共聚物。平均粒径由动态光散射光谱仪测量为482nm。
参考实施例6
具有由N-异丙基丙烯酰胺和丙烯酰胺组成的无规共聚物作为接枝链的接枝共聚物(包含在接枝链中的N-异丙基丙烯酰胺的比例是68％)(接枝共聚物(A-6))
6-1．由N-异丙基丙烯酰胺和丙烯酰胺组成的无规共聚物的低聚物的合成
将N-异丙基丙烯酰胺单体(12.75g,112.7mmol)和丙烯酰胺单体(1.82g,16.1mmol)溶于乙醇(50ml)中。添加作为链转移剂的2-巯基乙醇(0.351g,4.50mmol)和作为自由基聚合反应引发剂的偶氮二异丁腈(0.211g,1.29mmol)。在60℃和氮气气氛下，将聚合反应进行6小时，从而合成标题低聚物。反应后，蒸发溶剂，残余物溶于丙酮后在己烷中沉淀从而回收该产物。再沉淀进行数次使得低聚物被提纯。所获得的低聚物的分子量(Mn)为4,400，由GPC测定。
6-2．由N-异丙基丙烯酰胺和丙烯酰胺组成的无规共聚物的大分子的合成
将在6-1步骤中获得的低聚物(3g,0.66mmol)溶于二甲基甲酰胺(50ml)中。向溶液中添加氢化钠(0.032g,1.32mmol)和四丁基溴化鏻(1.12g,3.30mmol)作为相转移催化剂，混合物被搅拌60分钟。之后，添加p-氯甲基苯乙烯(2.97g,19.3mmol)，混合物在30℃下被搅拌48小时。反应后，溶剂蒸发，残余物溶于丙酮后在己烷中沉淀来回收该产物。再沉淀进行数次以提纯。乙烯基苯基团的引入速率根据1H-NMR数据计算。结果证明，乙烯基苯基团几乎定量地被引入(图5)。所获得的大分子的分子量(Mn)由GPC测定为7,200。
6-3．苯乙烯和由N-异丙基丙烯酰胺和丙烯酰胺组成的无规共聚物的大分子的共聚合(接枝共聚物(A-6)的合成；和纳米级颗粒的制备)
将在6-2步骤中获得的大分子(0.374g,0.052mmol)和苯乙烯(0.650g,6.25mmol)溶于乙醇(5ml)中。添加作为自由基聚合反应引发剂的偶氮二异丁腈(0.010g,0.063mmol)，共聚反应在60℃下在脱气密封管中进行48小时。反应后，将试管的内容物进行数次离心分离并再分散在乙醇中。在最后的步骤中，接枝共聚物产物分散在水中，从而完成纯化。动态光散射光谱仪的测量结果表明，平均粒径为253nm。
参考实施例7
具有由N-异丙基丙烯酰胺和丙烯酸组成的无规共聚物作为接枝链的接枝共聚物(包含在接枝链中的N-异丙基丙烯酰胺的比例是68％)(接枝共聚物(A-7))
将在6-3步骤中获得的纳米级颗粒分散在2N-HCl中，随后在95℃下水解12小时，使得大分子的丙烯酰胺基团变成丙烯酸基团。反应后，进行渗析来纯化。存在与纳米级颗粒外部的丙烯酰胺通过IR证实已经水解。从而，获得标题接枝共聚物。平均粒径由动态光散射光谱仪测量为769nm。
在参考实施例3,5和7中合成的接枝共聚物结构列于下面。
参考实施例8
具有聚甲基丙烯酸叔丁酯作为接枝链的接枝共聚物的制备(接枝共聚物(B-1-1))：
8-1．甲基丙烯酸叔丁酯(t-BMA)低聚物的合成
将甲基丙烯酸叔丁酯单体(25.02g,175.8mmol)溶于四氢呋喃(THF)(50ml)中。添加作为链转移剂的2-巯基乙醇(0.345g,4.42mmol)和作为自由基聚合反应引发剂的偶氮二异丁腈(0.288g,1.76mmol)。在60℃和氮气气氛下，将聚合反应进行6小时，从而合成t-BMA低聚物。反应后，反应物质通过使用甲醇和水(1∶1)的混合物由一系列再沉淀来提纯。所获得的聚合物的分子量由GPC测定为3,620。
8-2．叔-BMA大分子的合成
将在8-1步骤中获得的t-BMA低聚物(5.00g,1.38mmol)溶于二甲基甲酰胺(DMF)(50ml)。向该溶液中添加50％KOH水溶液(0.774g)和，作为相转移剂的四丁基溴化鏻(TBPB)(0.468g,1.38mmol)。所得混合物在30℃下搅拌24小时。随后，添加氯甲基苯乙烯(4.24g,27.6mmol)。混合物在30℃下反应48小时。反应后，将反应物质进行提纯步骤，其中通过使用1∶1的水-甲醇混合物来再沉淀。乙烯基苄基的引入速率根据1H-NMR数据计算。其结果证明，乙烯基苄基几乎被定量地引入。所获得的大分子
8-3．t-BMA大分子和苯乙烯的共聚合(接枝共聚物(B-1-1)的合成和纳米级颗粒的制备)
将在8-2步骤中获得的t-BMA大分子(0.300g,0.083mmol)和苯乙烯(0.345g,3.32mmol)溶于乙醇(5ml)中。向其中添加作为自由基聚合反应引发剂的AIBN(5.88mg,0.036mmol)，在60℃下，在脱气密封试管中进行聚合反应48小时。反应后，试管的内容物通过渗析提纯。动态光散射光谱仪的测量结果表明，平均粒径为679nm。
参考实施例9
具有聚甲基丙烯酸作为接枝链的接枝共聚物(接枝共聚物(B-1-2))
将在8-3步骤中获得的纳米级颗粒分散在2N-HCl-乙醇中，并在80℃下水解12小时，从而使大分子的酯转化成羧酸基团。反应后，进行渗析来提纯纳米级颗粒。动态光散射光谱仪测量结果表明，纳米级颗粒的平均粒径为835nm。
参考实施例10
具有N-乙烯基乙烯酰胺作为接枝链的接枝共聚物(接枝共聚物(B-2-1))
10-1．N-乙烯基乙烯酰胺低聚物的合成
将N-乙烯基乙烯酰胺(NVA)单体(10g,117.6mmol)溶于乙醇(50ml)中。向其中添加作为链转移剂的2-巯基乙醇(2.3g,29.44mmol)和作为自由基聚合反应引发剂的偶氮二异丁腈(0.197g,1.2mmol)。在60℃和氮气气氛下，将聚合反应进行6小时，从而合成NVA低聚物。反应后，反应物质通过使用乙醚再沉淀数次来提纯。所获得的聚合物的分子量(Mn)由GPC测定为2,500。
10-2．NVA大分子的合成
将在10-1步骤中获得的NVA低聚物(1.875g,0.75mmol)溶于二甲基甲酰胺(DMF)(50ml)。向该溶液中添加50％KOH水溶液(0.84g,7.5mmol)和，作为相转移剂的四丁基溴化鏻(0.127g,0.374mmol)。所得混合物搅拌30分钟。随后，添加氯甲基苯乙烯(1.152g,7.5mmol)。混合物在30℃下反应48小时获得NVA大分子。反应后，将反应物质进行提纯步骤，其中通过使用乙醚再沉淀数次。乙烯基苯基团的引入速率根据1H-NMR数据计算。其结果证明，乙烯基苯基团几乎被定量地引入。所获得的大分子的分子量(Mn)由GPC测定为2,600。
10-3．NVA大分子和苯乙烯的共聚合(接枝共聚物(B-2-1)的合成和纳米级颗粒的制备)
将在10-2步骤中获得的NVA大分子(0.25g,0.096mmol)和苯乙烯(0.23g,1.99mmol)溶于乙醇(5ml)中。向其中添加作为自由基聚合反应引发剂的偶氮二异丁腈(3.34mg,0.02mmol)，在60℃下，在脱气密封试管中进行聚合反应48小时。反应后，试管的内容物通过渗析以除去未反应的物质。动态光散射光谱仪的测量结果表明，平均粒径为257nm。
参考实施例11
具有聚乙烯基胺作为接枝链的接枝共聚物(接枝共聚物(B-2-2))
将在10-3步骤中获得的纳米级颗粒分散在2N-HCl中，并在100℃下水解12小时，从而使大分子链中的酰胺键水解。反应后，纳米级颗粒通过渗析来提纯。动态光散射光谱仪测量结果表明，纳米级颗粒的平均粒径为273nm。
实施例1
纳米级颗粒与酚磺酞(PSP)配合物的制备(PSP的纳米级颗粒制备)
将PSP的一钠盐(PSP-Na)溶于浓度为3.15w/v％的含蔗糖的磷酸盐缓冲液(pH7.0,0.50mM)中，使得PSP-Na的浓度为20mg/ml。向该溶液中添加浓度为20mg/ml的在参考实施例1的1-3步中获得的冻干产物(接枝共聚物(A-1))。将混合物均匀分散，获得纳米级颗粒的制剂。单独地，以类似的方式制备其中没有分散纳米级颗粒的PSP-Na水溶液，该产物用作对照制剂。
实施例2
纳米级颗粒与酚磺酞(PSP)配合物的活体内评价
2-1．方法
将SD雄性大鼠(七周大，约200g)禁食24小时。在醚麻醉作用下，进行剖腹术。利用注射针(它被插入pyrolus)，将实施例1中制备的纳米级制剂(0.5ml)或对照制剂(0.5ml)经十二指肠施用给大鼠(剂量：每只鼠9.4mgPSP；n=6)。施用后，伤口立即缝合。在施用后的0.5,1,2,4,8,12，和24小时，从颈动脉收集血液。
根据K.Higaki(药物科学杂志，79,334,1990)的方法，测定每只鼠的血浆PSP浓度。将从所收集的血液中离心分离的血浆(0.3ml)，纯化水(0.3ml)，和0.1N NaOH水溶液(0.9ml)混合。使用超滤膜(分级的分子量=10,000)过滤该混合物以除去蛋白质等。滤液用作样品溶液。单独地，标准溶液通过使用PSP-Na水溶液(从9.4mg/mlPSP开始，一系列的2倍稀释)(各0.3ml)来制备，将每只鼠的空白血浆(0.3ml)，和0.1NNaOH水溶液(0.9ml)混合并超滤。对每一种样品溶液和标准溶液，吸收率可以通过使用分光仪在波长560nm处测定。依据从标准溶液中获得的结果，获得校准曲线，并测定血浆PSP浓度。依据所获得的时间-血浆PSP浓度曲线，计算药物动力学参数。
2-2．结果
时间-血浆PSP浓度曲线在图6给出，计算的药物动力学参数由表1给出。由表1可以看出，当PSP与纳米级颗粒混合时(显著水平：1％)，PSP的平均滞留时间(MRT)显著增加。因此证明，利用本发明的接枝共聚物的纳米级颗粒制剂(即纳米级颗粒与PSP的配合物)具有可控的释放性能。
表1(平均值±S.D.)AUCo-infCmaxTmaxMRTo-24hPSP-Na水溶液(对照制剂)9.97±2.202.00±0.290.92±0.204.57±0.34PSP和纳米级颗粒的配合物(实施例1)9.53±1.151.28±0.320.58±0.206.74±0.38
实施例3
纳米级颗粒和鲑降钙素(sCT)的配合物的制备(sCT的纳米级颗粒制剂)
单独制备具有浓度为200μg/ml的sCT水溶液和在参考实施例1的1-3步中获得的纳米级颗粒(接枝共聚物(A-1))的分散体(分散介质：水)(它具有浓度为60μg/ml)。两者等量混合并将纳米级颗粒均匀分散获得纳米级颗粒制剂。单独地，按照与上述同样的方式制备其中没有分散纳米级颗粒的sCT水溶液来获得对照制剂。
实施例4
纳米级颗粒与鲑降钙素(sCT)的配合物的活体内评价
4-1．方法
对禁食24小时的SD雄性大鼠(七周大，约200g)以口服方式施用实施例3中制备的纳米级颗粒制剂(0.5ml)或对照制剂(0.5ml)(n=5)。施用后，在施用后的40,80分钟，2,3,4,6，和8小时，从每只鼠的尾部静脉收集血液约60μl。
使用634 Ca++/PH分析仪(Ciba-Coning)，测量所收集的血液中离子钙的浓度。计算并绘出在0时间或上述时间的钙离子浓度的差别。从曲线中来确定通过形成纳米级颗粒是否有吸收效果的提高。
在这方面，sCT是已知的具有降低血液离子钙浓度的药物效果。
4-2．结果
所得到的结果由图7给出。从图7可以清楚地看出，当服用sCT水溶液(即，对照制剂)时血液离子钙浓度稍降低，但是，当服用实施例3中获得的纳米级颗粒制剂(纳米级颗粒和sCT的配合物)时降低血液离子钙浓度的作用显著增加。服用后，本发明纳米级颗粒制剂提高的效果持续8小时。
因此证明，利用本发明的接枝共聚物的纳米级颗粒制剂提高了sCT的胃肠道吸收。
实施例5
纳米级颗粒和阿片样肽(OP)的配合物的制备(OP的纳米级颗粒制剂)
单独制备具有浓度为200μg/ml的阿片样肽水溶液和在参考实施例1的1-3步中获得的纳米级颗粒(接枝共聚物(A-1))的分散体(分散介质：水)(它具有浓度为20μg/ml)。两者等量混合并将纳米级颗粒均匀分散，获得纳米级颗粒制剂(纳米级颗粒和阿片样肽的配合物)。单独地，按照与上述同样的方式制备其中没有分散纳米级颗粒的阿片样肽水溶液来获得对照制剂(100μg/ml的阿片样肽)。在该实施例中所使用的阿片样肽化学结构如下：
H3CC(NH)-Tyr-D-Arg-Phe-N(CH3)-β-Ala
实施例6
纳米级颗粒与阿片样肽(OP)的配合物的活体内评价
6-1．方法
对自由喂养的每只ddy雄性小鼠(3-4周大，约20-25g)以口服方式施用实施例5中制备的纳米级颗粒制剂或对照制剂(阿片样肽：1mg/10ml/Kg)。通过使用Randall & Selitto压力压紧装置(model MK-300,Muromachi Kikai)向鼠尾的基干部分施加压力刺激，(32g/sec)。在几个时间点(1,2,3,4,5,6,8，和24小时)，利用刺激部分的挣扎，刺痛和类似的行为作为指标测量疼痛临界值。截止值为500g。疼痛相关的活性(MPE(最大可能的作用)的％)根据以下公式计算：
MPE的％={(服用后的疼痛临界值)-(服用前的疼痛临界值)/(500-服用前的疼痛临界值)}×100
6-2．结果
所得到的结果由图8给出。从图8可以清楚看出，通过将阿片样肽与纳米级颗粒混合，疼痛相关的活性(MPE的％)可以证明得到提高。
因此证明，利用本发明的接枝共聚物的纳米级颗粒制剂(纳米级颗粒和阿片样肽的配合物)提高了阿片样肽的胃肠道吸收。
实施例7
纳米级颗粒和鲑降钙素(sCT)的配合物的制备
单独制备具有浓度为200μg/ml的sCT水溶液和在参考实施例2和4中获得的纳米级颗粒(接枝共聚物(A-2)和(A-4))的分散体(分散介质：水)(它具有浓度为20μg/ml)。两者等量混合并将纳米级颗粒均匀分散，获得纳米级颗粒制剂。单独地，按照与上述同样的方式制备其中没有分散纳米级颗粒的sCT水溶液来获得对照制剂。
实施例8
纳米级颗粒与鲑降钙素(sCT)的配合物的活体内评价
利用实施例7中所获得的纳米级颗粒制剂或对照制剂，重复实施例4的步骤来测定，是否通过形成纳米级颗粒获得了吸收提高效果。结果由图9给出。
从图9可以看出，当服用sCT水溶液(即，对照制剂)时血液离子钙浓度稍降低，但是，当服用实施例7中获得的纳米级颗粒制剂(纳米级颗粒和sCT的配合物)时降低血液离子钙浓度的作用显著增加。服用后，本发明纳米级颗粒提高的效果持续6小时。
因此证明，利用本发明的接枝共聚物的纳米级颗粒制剂提高了sCT的胃肠道吸收。
实施例9
两种不同纳米级颗粒和鲑降钙素(sCT)的混合物的配合物(它是纳米级颗粒制剂)的制备
单独制备具有浓度为0.1mg/ml的sCT水溶液和在参考实施例1的1-3步中获得的纳米级颗粒(接枝共聚物(A-1))的分散体(分散介质：水)(它具有浓度为5mg/ml)，和在参考实施例11中获得的纳米级颗粒(接枝共聚物(B-2-2))的分散体(分散介质：水)(它具有浓度为5mg/ml)。三者等量混合并将纳米级颗粒均匀分散，获得纳米级颗粒制剂。单独地，按照与上述同样的方式制备其中没有分散纳米级颗粒的sCT水溶液来获得对照制剂。
实施例10
纳米级颗粒与鲑降钙素(sCT)的混合物的活体内评价
利用实施例9中所获得的纳米级颗粒制剂或对照制剂，重复实施例4的步骤来测定是否通过形成纳米级颗粒获得了吸收提高效果。结果由图10给出。
从图10可以看出，当服用sCT水溶液(即，对照制剂)时血液离子钙浓度稍降低，但是，当服用实施例9中获得的纳米级颗粒制剂(两种不同类型的纳米级颗粒和sCT的配合物)时降低血液离子钙浓度的作用显著增加。服用后，本发明纳米级颗粒的提高效果持续5小时。另外，与仅使用单一种纳米级颗粒的情况相比，效果进一步得到了提高。
因此证明，利用本发明的两种或多种接枝共聚物的纳米级颗粒制剂提高了sCT的胃肠道吸收。
实施例11
纳米级颗粒制剂的分几次施用
进行一项试验来检查当纳米级颗粒被分两次施用时所获得的吸收提高效果，其中间隔时间为40分钟。
单独制备具有浓度为100μg/ml的sCT水溶液和在参考实施例1的1-3步中获得的纳米级颗粒(接枝共聚物(A-1))的分散体(分散介质：水)(它具有浓度为10mg/ml)。两者等量混合并将纳米级颗粒均匀分散，获得纳米级颗粒制剂。单独地，按照与上述同样的方式制备其中没有分散纳米级颗粒的sCT水溶液来获得对照制剂。
重复实施例4的步骤，只是将每种制剂(0.5ml)分成两份(0.25ml×2)，在0和40分钟时服用各自的部分来检查鲑降钙素的吸收提高效果。
从图11可以看出，结果证明，当以特定的时间间隔分几次施用时，本发明的纳米级颗粒制剂对提高sCT吸收具有更为改进的效果。
工业用途
利用颗粒状载体的本发明的药物组合物对引入组合物中的药物显示出良好的口服吸收提高效果。因此，特别适合用作吸收性差的药物的DDS。