一种米氏硫胺素芽孢杆菌DY3菌株及其应用.pdf

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1、(10)申请公布号 CN 104277995 A (43)申请公布日 2015.01.14 CN 104277995 A (21)申请号 201410333874.9 (22)申请日 2014.07.14 CGMCC No.9121 2014.05.04 C12N 1/20(2006.01) D01C 1/04(2006.01) C12R 1/01(2006.01) (71)申请人 东华大学 地址 201620 上海市松江区松江新城人民北 路 2999 号 (72)发明人 丁若垚 郁崇文 张兴群 (74)专利代理机构 上海泰能知识产权代理事务 所 31233 代理人 黄志达 (54) 发明名称。

2、 一种米氏硫胺素芽孢杆菌 DY3 菌株及其应用 (57) 摘要 本发明涉及一种米氏硫胺素芽孢杆菌 DY3 菌 株及其应用， 其 16Sr DNA 序列如 SEQ IDNO:1 所 示。 菌株应用于沤麻制备红麻纤维或黄麻纤维。 本 发明培养条件粗放， 耐热性好， 生长繁殖快， 可以 有效去除红麻或黄麻纤维中的非纤维素胶质， 且 酶活稳定， 菌、 酶均无毒性， 具有良好的应用前景。 (83)生物保藏信息 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 2 页 序列表 1 页 附图 11 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书2页 序列表1页 附图。

3、11页 (10)申请公布号 CN 104277995 A CN 104277995 A 1/1 页 2 1. 一种米氏硫胺素芽孢杆菌 DY3 菌株， 其特征在于 ： 其 16Sr DNA 序列如 SEQ ID NO:1 所示。 2. 一种如权利要求 1 所述的米氏硫胺素芽孢杆菌 DY3 菌株的应用， 其特征在于 ： 所述 菌株应用于沤麻制备红麻纤维或黄麻纤维。 3. 根据权利要求 2 所述的一种米氏硫胺素芽孢杆菌 DY3 菌株的应用， 其特征在于 ： 所 述红麻纤维或黄麻纤维应用于制作麻袋、 麻布、 造纸、 绳索、 织地毯或窗帘。 权 利 要 求 书 CN 104277995 A 2 1/2 。

4、页 3 一种米氏硫胺素芽孢杆菌 DY3 菌株及其应用 技术领域 0001 本发明属于沤麻领域， 特别涉及一种米氏硫胺素芽孢杆菌 DY3 菌株及其应用。 背景技术 0002 麻是纺织原料之一， 其品种主要有亚麻、 苎麻、 大麻、 红麻、 黄麻、 罗布麻、 剑麻、 蕉 麻、 荨麻和苘麻等。 麻纤维是从各种麻植物取得的纤维的统称， 具有吸湿、 透气、 散热和抗菌 等其他天然纤维无法比拟的优点。我国作为世界上麻类资源最丰富的国家之一， 每年生产 的麻纤维及其制品除满足国内市场的需求， 还作为大宗商品出口美国、 西欧及东南亚国家， 年均创汇近百亿美元。在国家节能减排政策和消费者回归自然、 追求绿色的消费。

5、观念推动 下， 麻类纤维绿色加工技术已经成为纺织领域的研究热点。 0003 沤麻利用细菌和水分对植物的作用， 溶解或腐蚀包围在韧皮纤维束外面的大部分 蜂窝状结缔组织和胶质， 从而促使纤维与麻茎分离的加工过程。 在广泛应用的水沤法中， 麻 茎浸没在水中， 水渗透到麻茎的中央部分， 使内部细胞膨胀， 胀破最外层， 从而增加对水分 和细菌的吸收。沤麻法是生产优质纤维的加工工艺， 沤麻过程的菌种选择是沤麻的关键。 发明内容 0004 本发明所要解决的技术问题是提供一种米氏硫胺素芽孢杆菌 DY3 菌株及其应用， 该菌株培养条件粗放， 耐热性好， 生长繁殖快， 可以有效去除红麻或黄麻纤维中的非纤维素 胶质。

6、， 且酶活稳定， 菌、 酶均无毒性， 具有良好的应用前景。 0005 本发明的一种米氏硫胺素芽孢杆菌 DY3 菌株， 其 16Sr DNA 序列如 SEQ ID NO:1 所 示。 0006 本发明的一种米氏硫胺素芽孢杆菌 DY3 菌株的应用， 所述菌株应用于沤麻制备红 麻纤维或黄麻纤维。 0007 所述红麻纤维或黄麻纤维应用于制作麻袋、 麻布、 造纸、 绳索、 织地毯或窗帘。 0008 本发明所采用的米氏硫胺素芽孢杆菌(Aneurinibacillus migulanus)DY3菌株的 保藏号为 CGMCC No.9121， 保藏日为 2014 年 5 月 4 日， 建议分类命名为 ： 米氏。

7、硫胺素芽孢杆 菌 (Aneurinibacillus migulanus), 保藏单位名称 ： CGMCC 中国微生物菌种保藏管理委员 会普通微生物中心， 保藏地址 ： 北京市朝阳区北辰西路 1 号院 3 号中国科学院微生物研究 所。 0009 根据16sR DNA测序Blast及聚类分析结果， 该菌与米氏硫胺素芽孢杆菌相似性为 99， 结合镜检分析， 命名此菌株为米氏硫胺素芽孢杆菌 (Aneurinibacillus migulanus) DY3 菌株。16S rDNA 测序中， 所采用的正向引物 27F， 反向引物 1492R， 均为国际通用引物， 由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。。

8、 0010 有益效果 0011 本发明培养条件粗放， 耐热性好， 生长繁殖快， 可以有效去除红麻或黄麻纤维中的 非纤维素胶质， 且酶活稳定， 菌、 酶均无毒性， 具有良好的应用前景。 说 明 书 CN 104277995 A 3 2/2 页 4 附图说明 0012 图 1 为本发明所用菌株显微镜染色照片 ( 油镜 ) ； 0013 图 2a-j 为本发明采用引物 27F 产生的细菌 DNA 图谱 ； 0014 图 3a-k 为本发明采用引物 1492R 产生的细菌 DNA 图谱。 具体实施方式 0015 下面结合具体实施例， 进一步阐述本发明。 应理解， 这些实施例仅用于说明本发明 而不用于限。

9、制本发明的范围。 此外应理解， 在阅读了本发明讲授的内容之后， 本领域技术人 员可以对本发明作各种改动或修改， 这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定 的范围。 0016 实施例 1 0017 沤麻时间据红麻或黄麻收获时间定， 一般为 9 月中下旬至 10 月中下旬。 0018 沤麻方法 ： 0019 (1)将保存的米氏硫胺素芽孢杆菌DY3菌株于牛肉膏蛋白胨培养基(每1000ml培 养基包括牛肉膏3g、 蛋白胨10g、 氯化钠5g和水1000ml)中培养， 添加冻存缓冲液(每100ml 冻存缓冲液包括甘油 50ml 和水 50ml)， 培养条件为 37， pH 自然， 培养时间 12 。

10、小时 ； 0020 (2) 在红麻或黄麻麸皮培养基 ( 每 1000ml 培养基包括红麻或黄麻皮 200g， 麸皮 50g， 麦芽汁 50ml 和水 950ml)1000ml 中接入菌一环， 摇瓶培养， 培养条件为 37， pH 自然， 培养时间 24 小时 ； 0021 (3) 将培养基接种入红麻或黄麻麸皮发酵培养基 ( 每 1000ml 培养基包括红麻或 黄麻皮 100g， 麸皮 100g， 麦芽汁 200ml 和水 800ml)， 摇瓶培养得到发酵菌液， 培养条件为 37， pH 自然， 培养时间 24 小时 ； 0022 (4) 沤麻池的准备 ： 用 4HB-800 型红麻或黄麻剥皮机。

11、将鲜皮从红麻或黄麻全杆中 分离出来 ( 韧皮部因机械挤压、 打板击打已造成许多伤口， 利于脱胶菌入侵， 但不破坏纤 维 ) ； 尾部端齐 ( 以洗麻时能甩得动为度， 20 根左右为一把 )， 稍部拢齐、 直， 顺折成三至四 层 ( 沤麻池深度相仿， 浸水时正好淹没麻把 ) 或对折， 每把麻中部靠尾处用鲜皮扎把， 把与 把之间用扎把的鲜皮连接， 按顺序排列、 排紧 ； 一般每个沤麻池均分批投放， 便于分批洗麻 ； 投放好麻把后然后将麻把全部压入水中， 基本上不露出水面为宜。最后用厚型塑料薄膜 ( 透明 ) 将全部麻把盖住， 再压紧塑料薄膜， 以防麻皮离水。麻趟间距 15-20 厘米。麻层厚 度一。

12、般在 2-2.5 厘米为宜。 0023 (5) 将制备的发酵菌液使用喷淋法入沤麻池做沤麻处理， 沤麻后制得可供纺织制 品用红麻或 黄麻纤维， 沤麻条件为自然温度， pH 自然 ； 喷淋法的工艺具体为每 48 小时向沤 麻区域喷洒菌液 8ml。 0024 完成沤制时间 ： 视气温定， 一般 9 月中下旬至 10 月中下旬， 沤制时间逐渐延长， 若 气温变化不大， 则沤制时间基本相同。在红麻或黄麻正常收获季节约为 10-20 天。 说 明 书 CN 104277995 A 4 1/1 页 5 0001 序 列 表 CN 104277995 A 5 1/11 页 6 图 1 图 2a 说 明 书 附。

13、 图 CN 104277995 A 6 2/11 页 7 图 2b 图 2c 说 明 书 附 图 CN 104277995 A 7 3/11 页 8 图 2d 图 2e 说 明 书 附 图 CN 104277995 A 8 4/11 页 9 图 2f 图 2g 说 明 书 附 图 CN 104277995 A 9 5/11 页 10 图 2h 图 2i 说 明 书 附 图 CN 104277995 A 10 6/11 页 11 图 2j 图 3a 说 明 书 附 图 CN 104277995 A 11 7/11 页 12 图 3b 图 3c 说 明 书 附 图 CN 104277995 A 12 8/11 页 13 图 3d 图 3e 说 明 书 附 图 CN 104277995 A 13 9/11 页 14 图 3f 图 3g 说 明 书 附 图 CN 104277995 A 14 10/11 页 15 图 3h 图 3i 说 明 书 附 图 CN 104277995 A 15 11/11 页 16 图 3j 图 3k 说 明 书 附 图 CN 104277995 A 16 。