一种奥利司他的制备方法.pdf

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1、(10)申请公布号 CN 103992296 A (43)申请公布日 2014.08.20 CN 103992296 A (21)申请号 201410249734.3 (22)申请日 2014.06.06 C07D 305/12(2006.01) (71)申请人鲁南新时代生物技术有限公司地址 273400 山东省临沂市费县北外环路 1 号 (72)发明人闫同顺赵军杰赵桂芳 (54) 发明名称一种奥利司他的制备方法 (57) 摘要本发明属于医药技术领域，特别涉及了一种奥利司他的制备方法，具体包括发酵液的预处理、滤饼浸提、浓缩、非极性溶剂萃取、浓缩、极性溶剂萃取、。

2、冷冻除杂、浓缩、非极性溶剂结晶、氢化、反洗、结晶及重结晶。采用本发明工艺制备的奥利司他含量在 99以上，最大单杂在 0.1以内，高于药用标准。本发明工艺路线短，产品质量好，操作方便，设备投资少，溶剂用量小，且均可回收套用，极大地降低了奥利司他的生产成本和环境污染。 (51)Int.Cl. 权利要求书 2 页说明书 6 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请权利要求书2页说明书6页 (10)申请公布号 CN 103992296 A CN 103992296 A 1/2 页 2 1. 一种奥利司他的制备方法，具体包括以下步骤：。

3、1) 发酵液预处理：向发酵液中加入助滤剂，用酸调 pH4.0-5.0，搅拌，过滤，得滤饼； 2) 浸提：将步骤 1) 中所得滤饼用极性溶剂进行浸提，搅拌，过滤，得含奥利司他中间体的溶液； 3) 浓缩、调溶剂体积浓度：将步骤2)中过滤所得奥利司他中间体溶液浓缩至奥利司他中间体浓度为1530g/L，加饮用水调节有机溶剂水溶液的体积浓度为 50 80 ； 4) 非极性溶剂萃取：向步骤 3) 中所得奥利司他中间体含水有机溶剂溶液中加入与体系不混溶的非极性溶剂进行萃取，分相得到含奥利司他中间体的非极性萃取液； 5) 浓缩、极性溶剂萃取：将步骤 4) 萃取。

4、所得奥利司他中间体的非极性萃取溶液，浓缩至浓度为 100 200g/L，加入极性溶剂萃取，分相得奥利司他中间体的极性萃取溶液； 6) 冷冻除杂：将步骤 5) 所得奥利司他中间体的极性萃取液搅拌，降温至 5以下，保温，然后过滤除去不溶性杂质，得到奥利司他中间体的澄清滤液，浓缩至干，得奥利司他中间体油状物； 7) 结晶：用溶剂将步骤6)所得奥利司他中间体油状物进行稀释，使浓度为50100g/L，采用降温法，搅拌析晶，过滤得奥利司他中间体白色晶体； 8) 氢化：将步骤 7) 结晶奥利司他中间体晶体用非极性溶剂溶解成浓度为 10-80g/L，加入产品。

5、重量 5 10的钯炭，通入氢气在温度 30 40、压力 0.3 1Mpa 下进行反应，氢化结束后，过滤得氢化液； 9) 反洗：向氢化液中加入 2 倍体积、中等级性的有机溶剂水溶液，搅拌，静置，分相，收集上相； 10) 结晶：将奥利司他反洗后所得上相溶液用非极性溶剂稀释至浓度为 30 50g/L，采用降温法进行搅拌结晶，过滤后得奥利司他晶体。 2. 根据权利要求 1 所述一种奥利司他的制备方法，其特征在于，步骤 1) 所述的助滤剂为硅藻土、珍珠岩、纤维素、石墨粉、锯屑、氧化镁、石膏、活性炭、酸性白土中的任一种，加入量为发酵液重量的。

6、3 10 ；所述的酸为盐酸、草酸、醋酸、硫酸中的一种。 3. 根据权利要求 1 所述的一种奥利司他的制备方法，其特征在于，步骤 2) 中浸提的极性有机溶剂为甲醇、丙酮、乙腈或乙醇中的一种；极性有机溶剂与滤饼的体积重量比为 (5 10):1 ；步骤 3) 中加饮用水调节有机溶剂水溶液的体积浓度为 60 70。 4. 根据权利要求 1 所述的一种奥利司他的制备方法，其特征在于，步骤 4) 中加入的非极性有机溶剂为石油醚、庚烷或正己烷中的任一种，其用量相当于奥利司他中间体含水有机溶剂溶液体积的 0.5 1.5 倍；步骤 5) 中的极性萃取溶剂为乙腈或甲醇中的一。

7、种，其加入体积与萃取前奥利司他中间体非极性相的体积比为 (1 3):1。权利要求书 CN 103992296 A 2 2/2 页 3 5. 根据权利要求 1 所述的一种奥利司他的制备方法，其特征在于，步骤 6) 中冷冻除杂时降温至 -5 5，保温 1 3h，过滤除去不溶杂质；步骤 7) 中溶剂为石油醚、庚烷、正己烷中的一种，结晶温度为 -10 -15。 6. 根据权利要求 1 所述的一种奥利司他的制备方法，其特征在于，步骤 8) 中的非极性溶剂为正己烷、庚烷、石油醚中的一种。 7. 根据权利要求 1-6 任一权利要求所述的一种奥利司他的制备方法，。

8、其特征在于，步骤 9) 中的有机溶剂为甲醇、乙醇或乙腈的水溶液中的一种。 8. 根据权利要求 1-6 任一权利要求所述的一种奥利司他的制备方法，其特征在于，步骤 9) 中的有机溶剂水溶液中有机溶剂的体积浓度为 60 80。 9. 根据权利要求 1-6 任一权利要求所述的一种奥利司他的制备方法，其特征在于，步骤 10) 中的非极性溶剂为正己烷、庚烷、石油醚中的一种。 10. 根据权利要求 1-6 任一权利要求所述的一种奥利司他的制备方法，其特征在于，步骤 10) 中的结晶温度为 -5 5。权利要求书 CN 103992296 A 3 1/6 页 4 一种奥利。

9、司他的制备方法技术领域 0001 本发明属于医药技术领域，特别涉及了一种奥利司他的制备方法。背景技术 0002 奥利司他 (orlistat) 是罗氏公司最早开发的新型减肥药物，也是唯一一种非中枢神经减肥药，它是长效和强效的特异性胃肠道脂肪酶抑制剂，通过与胃和小肠内的胃脂肪酶和胰脂肪酶的活性丝氨酸部位结合形成共价键，使脂肪酶失去活性，阻止食物中脂肪分解、吸收和利用，从而达到减肥的目的。 0003 0004 目前，国内生产奥利司他有两种方法：一种是化学全合成，反应步骤多，收率低，环境兼容性差；另一种是微生物发酵得到奥利司他中间体，然后中间体经一步氢化。

10、合成奥利司他，第二种方法生产的奥利司他占主导地位。各个制药企业经过菌种筛选、发酵调控及下游提取纯化工艺的不断优化，可以逐步提高奥利司他中间体的发酵效价及最终产品的质量和收率。因此，从成本和环保角度来说，微生物发酵具有显著的优越性。 0005 中国专利申请 CN 102010387A 公开了一种提纯奥利司他的方法，描述了利用动态轴向压缩 (DAC) 技术分离纯化奥利司他的方法。 0006 中国专利申请 CN 101948450A 公开了一种生产制备奥利司他的方法，中间体提取阶段树脂柱吸附、洗脱以及氢化后的奥利司他的纯化经硅胶柱层析，得到奥利司他。 0007 中国专利。

11、申请 CN 102304105A 公开了一种制备奥利司他的方法，该发明中间体纯化阶段引入了硅胶柱层析，氢化后，使用乙醇、丙酮等中等级性溶剂结晶，再用庚烷、石油醚、正己烷等非极性溶剂转晶，获得高纯度奥利司他。发明内容 0008 为了解决将奥利司他提纯到 ICH 要求的高质量标准的技术难题，克服现有技术中生产设备投资高、生产成本高、收率低等缺点，发明人经过大量的试验，优选出了一种奥利司他的制备方法，包括发酵液的预处理、浸提、浓缩、非极性溶剂萃取、浓缩、中等级性溶剂萃取、浓缩，得到含量 80以上奥利司他中间体，然后再用非极性溶剂溶解、氢化，。

12、过滤得氢化液，向氢化液中加入中等级性的有机溶剂水溶液进行反洗除杂，然后进行非极性溶剂结说明书 CN 103992296 A 4 2/6 页 5 晶和重结晶，直至产品含量 99以上，最大单杂 0.1以内。 0009 发明人创造性采用非极性溶剂和极性溶剂两步萃取转相、低温冷冻除杂及结晶，获得高质量的奥利司他中间体，氢化后加入中等级性有机溶剂水溶液进行反洗，可优先除去大量的极性杂质，提高奥利司他含量及纯度，然后利用奥利司他在非极性溶剂中结晶温度高，含量提升幅度快的特点，反复进行非极性溶剂结晶，可有效除去大部分非极性杂质，降低有关物质的含量， 0010 本发明的。

13、技术方案具体为，一种奥利司他的制备方法，包括如下步骤： 0011 1) 发酵液预处理： 0012 向发酵液中加入助滤剂，用酸调 pH4.0-5.0，搅拌，过滤，得滤饼； 0013 2) 浸提： 0014 将步骤 1) 中所得滤饼用极性溶剂进行浸泡，搅拌，过滤，得含奥利司他中间体的溶液； 0015 3) 浓缩、调溶剂体积浓度： 0016 将步骤 2) 中过滤所得奥利司他中间体溶液浓缩至奥利司他中间体浓度为 15 30g/L，加饮用水调节有机溶剂水溶液的体积浓度为 50 80 ； 0017 4) 非极性溶剂萃取： 0018 向步骤 3) 中所得奥利司他中间体含。

14、水有机溶剂溶液中加入与体系不混溶的非极性溶剂进行萃取，分相得到含奥利司他中间体的非极性萃取液； 0019 5) 浓缩、极性溶剂萃取： 0020 将步骤 4) 萃取所得奥利司他中间体的非极性萃取溶液，浓缩至浓度为 100 200g/L，加入极性溶剂萃取，分相得奥利司他中间体的极性萃取溶液； 0021 6) 冷冻除杂： 0022 将步骤 5) 所得奥利司他中间体的极性萃取液搅拌，降温至 5以下，保温，然后过滤除去不溶物，得奥利司他中间体的澄清滤液，浓缩至干，得奥利司他中间体油状物； 0023 7) 中间体结晶： 0024 用溶剂将步骤6)所得奥利司他中间体油状。

15、物进行稀释，使其浓度为50100g/L，采用降温法，搅拌析晶，过滤得白色奥利司他中间体晶体； 0025 8) 氢化： 0026 将步骤7)结晶奥利司他中间体晶体用非极性溶剂溶解成浓度为1080g/L，加入相当于奥利司他中间体重量 5 10的钯炭，通氢气，在温度 30 40、压力 0.3 1Mpa 下进行反应；氢化结束后，过滤得氢化液； 0027 9) 反洗： 0028 向氢化液中加入体积相当于氢化液体积 1-3 倍、中等级性的有机溶剂水溶液，搅拌，静置，分相，收集上相； 0029 10) 结晶： 0030 将奥利司他反洗后所得上相溶液用非极性溶剂。

16、稀释至奥利司他浓度为 10 100g/L，采用降温法进行搅拌结晶，过滤得奥利司他晶体。 0031 步骤 10) 中的结晶步骤可以依据 HPLC 所得奥利司他含量及单杂情况，重复 0-4 次，以保证奥利司他单杂控制在小于 0.1 ；重复步骤是将得奥利司他晶体溶于非极性溶说明书 CN 103992296 A 5 3/6 页 6 剂，优选浓度为 10 100g/L，采用降温法进行搅拌结晶，过滤得奥利司他晶体。 0032 其中，步骤1)所述的发酵液可以是但不限于CN102304105A所公开的发酵液；所述的助滤剂可以为硅藻土、珍珠岩、纤维素、石墨粉、锯屑、氧化镁。

17、、石膏、活性炭、酸性白土中的至少一种；优选的助滤剂是硅藻土、氧化镁、珍珠岩中的任一种；加入量为发酵液重量的 3 10。所述的酸优选为盐酸、醋酸、硫酸、草酸中的至少一种。 0033 本发明对步骤 2) 中浸提的极性有机溶剂进行了优选，优选的溶剂为甲醇、丙酮、乙腈或乙醇中的一种；极性有机溶剂与滤饼的体积重量比为 (5 10):1。 0034 本发明对步骤 3) 中有机溶剂水溶液的体积浓度进行了优选，优选加饮用水调节有机溶剂水溶液的体积浓度为 60 70。 0035 本发明对步骤 4) 中加入的非极性有机溶剂进行了优选，优选石油醚、庚烷或正己烷中的任一种。

18、，其用量相当于奥利司他中间体含水有机溶剂溶液体积的 0.5 1.5 倍。 0036 本发明对步骤 5) 中加入的极性溶剂进行了优选，优选为乙腈或甲醇；其加入体积与萃取前奥利司他中间体非极性相的体积比为 (1 3):1。 0037 本发明对步骤6)中冷冻除杂条件进行了优选，优选降温至-55，保温13h，过滤除去不溶杂质。 0038 步骤7)中的溶剂优选为石油醚、庚烷、正己烷中的一种；结晶温度为-10-15。 0039 步骤 8) 中的非极性溶剂优选为正己烷、庚烷、石油醚中的一种。 0040 步骤 9) 中有机溶剂优选为甲醇、乙醇或乙腈中的一种，有机溶剂水溶液中有机。

19、溶剂的体积浓度为 60 80。 0041 步骤10)中的非极性溶剂优选为正己烷、庚烷、石油醚中的一种；结晶温度为-5 5。 0042 经研究发现，奥利司他中间体极易溶于极性有机溶剂，也溶于非极性有机溶剂，通过两种溶剂的交替萃取使用，既除去了夹杂在产品中的极性杂质，也除去了一些非极性杂质，然后再通过极性溶剂降温除杂，提高了奥利司他中间体结晶前的产品含量。之后，奥利司他中间体通过在非极性溶剂中降温结晶，更进一步除去一些萃取法无法消除的弱极性杂质，使奥利司他中间体晶体含量达 80以上。氢化后，利用中等极性溶剂的水溶液进行反洗，可除去大量的极性杂质。然后采。

20、用非极性溶剂对奥利司他连进行结晶，可以获得高纯度的奥利司他产品。 0043 其中，所述的减压蒸馏及真空干燥为本领域常用技术手段，除非特别说明，真空度与温度没有特别限定。 0044 本发明与现有技术相比具有如下突出的优点： 0045 1) 本发明技术方案中产品及中间体的提取、纯化不需树脂柱和硅胶柱，工艺路线短，操作简便，重复性好。 0046 2) 本发明克服了现有工艺生产成本高，操作步骤繁琐，设备投资大，生产能力不足的缺陷，该方法生产的奥利司他中间体含量高，提取收率在 80以上，具有显著的成本和质量优势，非常适合工业规模生产。 0047 3) 本发明通过。

21、将奥利司他中间体发酵液交替在极性、非极性有机溶剂中进行萃取，结合降温除杂、非极性溶剂中结晶，所得奥利司他中间体产品含量达 80以上；氢化及后处理简单，可获得含量 99以上，最大单杂不大于 0.1的奥利司他。说明书 CN 103992296 A 6 4/6 页 7 0048 4) 采用本发明工艺制备奥利司他中间体，设备投资少，收率高，所用溶剂均可回收套用，环境污染少，符合清洁生产的要求。具体实施方式 0049 为了更好的说明本发明，通过实施例进行阐述，但是并不因此将本发明限制在所述的实施例中。本发明实施例中其它未公开事项，均为现有技术。 0050 。

22、实施例 1 0051 1) 发酵液预处理：向 1.5m3发酵液 ( 发酵单位 8.5g/L) 中加入 45kg 硅藻土，用盐酸调 pH 为 4.5，搅拌 1h，板框压滤，收集滤饼 360kg ； 0052 2) 浸提：用 2.88m3工业丙酮对步骤 1) 获得的滤饼进行浸提，浸提 3h，过滤，得含奥利司他中间体的澄清、淡红色透明滤液 3.2m3； 0053 3) 浓缩、调溶剂体积浓度：将步骤 2) 所得奥利司他中间体丙酮溶液用降膜蒸发器进行减压浓缩，在温度30下，浓缩至产品浓度20g/L，加150L饮用水调节丙酮水溶液的体积浓度为 65 ； 0054。

23、 4) 非极性溶剂萃取：向步骤 3) 中调配好的奥利司他中间体的丙酮 / 水溶液中加入480L石油醚，搅拌60min，萃取，静置2h后，收集上相，得到含奥利司他中间体的石油醚溶液 520L ； 0055 5) 浓缩、极性溶剂萃取：将步骤 4) 中分相得到的奥利司他中间体的石油醚溶液用刮板蒸发器进行浓缩，在温度 50下，减压浓缩至浓度 200g/L 时，加入 60L 乙腈，搅拌 30min 萃取，静置 1h 后，收集下相，得奥利司他中间体的乙腈相溶液 70L ； 0056 6) 冷冻除杂：将含奥利司他中间体的乙腈相转移至结晶釜中，夹套通入 -10冷。

24、媒水降温搅拌处理，温度降至 0时，保温 1h，过滤除杂，得奥利司他中间体滤液。 0057 7) 中间体结晶：减压浓缩奥利司他中间体滤液至干，得淡红色奥利司他中间体油状物。将油状物用 210L 石油醚完全溶解，并稀释至奥利司他中间体浓度为 50g/L，进行降温搅拌结晶， -15过滤，得白色奥利司他中间体晶体。经 HPLC 检测，结晶后中间体含量为 84.3，纯度为 95.2，提取总收率为 83.2。 0058 8)氢化：奥利司他中间体结晶晶体用200L石油醚全部溶解，配制浓度为50g/L，加入 1kg 钯炭进行氢化，温度 40、压力 0.5MPa，反。

25、应 5h 后，过滤除去钯炭，得氢化液 210L。 0059 9) 反洗：向氢化液中加入 70的甲醇水溶液 420L，搅拌 30min，静置 30min 后，分相，收集得石油醚相 201L。 0060 10) 结晶和重结晶：将奥利司他浓度为 48g/L 的石油醚溶液在搅拌状态下，降温结晶， -1过滤，并用冷的石油醚洗涤，得奥利司他晶体。重复上述步骤，石油醚重结晶 3 次，最后得白色奥利司他晶体。 30真空干燥，经HPLC检测，奥利司他含量为99.1，最大单杂为 0.1，纯度为 99.3。经计算，总收率为 41.7。 0061 实施例 2 0062 1。

26、) 发酵液预处理：向 1.45m3发酵液 ( 发酵单位 9.2g/L) 中加入 70kg 珍珠岩，用草酸调 pH 为 4.7，搅拌 2h，板框压滤，收集滤饼 350kg ； 0063 2) 浸提：用 3.5m3工业甲醇对步骤 1) 所得滤饼进行浸提，浸提 5h，板框压滤，得含奥利司他中间体的澄清、淡红色透明溶液 4m3；说明书 CN 103992296 A 7 5/6 页 8 0064 3) 浓缩、调溶剂体积浓度：将步骤 2) 所得奥利司他中间体甲醇溶液用降膜蒸发器进行减压浓缩，在温度控制30下，浓缩至产品浓度20g/L，加170L饮用水调节甲醇。

27、水溶液的体积浓度为 62 ； 0065 4) 非极性溶剂萃取：向奥利司他中间体的甲醇 / 水溶液中加入 670L 庚烷，搅拌 60min，萃取，静置 2h 后，收集上相，得到含奥利司他中间体的庚烷溶液 730L ； 0066 5) 浓缩、极性溶剂萃取：用刮板蒸发器浓缩步骤 4) 所萃取奥利司他中间体的庚烷溶液，在温度 50下，减压浓缩至浓度 150g/L 时，加入 160L 乙腈，搅拌 30min 萃取，静置 1h 后分相，收集下相，得奥利司他中间体的乙腈溶液 175L ； 0067 6) 冷冻除杂、浓缩：将含奥利司他中间体的乙腈相转移至结晶釜中，。

28、夹套通入 -10冷媒水降温搅拌处理，温度降至 -5时，保温 2h，过滤除杂，得奥利司他中间体滤液。 0068 7) 结晶：减压浓缩奥利司他中间体滤液至干，得淡红色奥利司他中间体油状物。将油状物用 140L 庚烷完全溶解，并释至奥利司他中间体浓度为 80g/L，进行降温搅拌结晶， -13过滤，得白色奥利司他中间体晶体。经 HPLC 检测，结晶后中间体含量为 85.3，纯度为 96.5，提取总收率为 85.1。 0069 8)氢化：奥利司他中间体结晶晶体用130L庚烷全部溶解，配制浓度为80g/L，加入 0.9kg 钯炭进行氢化，温度 40、压力 0.。

29、35MPa，反应 5h 后，过滤除去钯炭，得氢化液 135L。 0070 9) 反洗：向氢化液中加入 65的乙醇水溶液 270L，搅拌 30min，静置 30min 后，分相，收集得庚烷相 139L。 0071 10) 结晶和重结晶：将奥利司他浓度为 75g/L 的庚烷相用庚烷稀释至浓度 30g/L，在搅拌状态下，降温结晶， -3过滤，并用冷的庚烷洗涤，得奥利司他晶体。重复上述步骤，庚烷重结晶 3 次，最后得白色奥利司他晶体。30真空干燥，经 HPLC 检测，奥利司他含量为 99.3，最大单杂为 0.080，纯度为 99.3。 0072 经计算，总。

30、收率为 42.8。 0073 实施例 3 0074 1) 发酵液预处理：向 1.5m3发酵液 ( 发酵单位 8.8g/L) 中加入 60kg 氧化镁，用草酸调 pH 为 5.0，搅拌 3h，过滤，收集滤饼 375kg ； 0075 2) 浸提：用 1.88m3工业乙醇对步骤 1) 中过滤所得滤饼进行浸提，浸提 3h，板框压滤，得含奥利司他中间体的澄清、淡红色透明溶液 2.1m3； 0076 3) 浓缩、调溶剂体积浓度：用降膜蒸发器将步骤 2) 所得奥利司他中间体乙醇溶液进行减压浓缩，在温度30下，浓缩至产品浓度25g/L，加200L饮用水调节乙醇水溶液。

31、的体积浓度为 67 ； 0077 4) 非极性溶剂萃取：向奥利司他中间体的乙醇 / 水溶液中加入 840L 正己烷，搅拌 60min 萃取，静置 2h 后，收集上相，得到含奥利司他中间体的正己烷溶液 900L ； 0078 5) 浓缩、极性溶剂萃取：用刮板蒸发器浓缩奥利司他中间体的正己烷溶液，在温度 50下减压浓缩至浓度 100g/L 时，加入 250L 甲醇，搅拌 30min 萃取， 1h 后分相，收集下相，得奥利司他中间体的甲醇溶液 290L ； 0079 6) 冷冻、过滤、浓缩：将含奥利司他中间体的甲醇相转移至结晶釜中，夹套通入 -10冷媒水。

32、降温搅拌处理，温度降至 -5时，保温 1h，过滤除杂，得奥利司他中间体滤说明书 CN 103992296 A 8 6/6 页 9 液。 0080 7) 结晶：减压浓缩奥利司他中间体滤液至干，得淡红色奥利司他中间体油状物。将油状物用 100L 正己烷完全溶解，并稀释至奥利司他中间体浓度为 100g/L，进行降温搅拌结晶， -13过滤，得白色奥利司他中间体晶体。经HPLC检测，结晶后中间体含量为84.4，纯度为 95.6，提取总收率为 82.5。 0081 8)氢化：奥利司他中间体结晶晶体用88L正己烷全部溶解，配制浓度为100g/L，加入 1kg 。

33、钯炭进行氢化，温度 40、压力 0.4MPa，反应 5h 后，过滤除去钯炭，得氢化液 95L。 0082 9) 反洗：向氢化液中加入 75的乙腈水溶液 190L，搅拌 30min，静置 30min 后，分相，收集得正己烷相 98L。 0083 10) 结晶和重结晶：将奥利司他浓度为 95g/L 的正己烷相用正己烷稀释至 60g/L，在搅拌状态下，降温结晶， 0过滤，并用冷的正己烷洗涤，得奥利司他晶体。用庚烷代替正己烷重复上述步骤，重结晶 4 次，最后得白色奥利司他晶体。30真空干燥，经 HPLC 检测，奥利司他含量为 99.1，最大单杂为 0.085，纯度为 99.3。经计算，总收率为 40。说明书 CN 103992296 A 9 。

摘要
申请专利号：	CN201410249734.3	申请日：	2014.06.06
公开号：	CN103992296A	公开日：	2014.08.20
当前法律状态：	授权	有效性：	有权
法律详情：	授权\|\|\|实质审查的生效IPC(主分类):C07D 305/12申请日:20140606\|\|\|公开
IPC分类号：	C07D305/12	主分类号：	C07D305/12
申请人：	鲁南新时代生物技术有限公司
发明人：	闫同顺; 赵军杰; 赵桂芳
地址：	273400 山东省临沂市费县北外环路1号
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内容摘要

本发明属于医药技术领域，特别涉及了一种奥利司他的制备方法，具体包括发酵液的预处理、滤饼浸提、浓缩、非极性溶剂萃取、浓缩、极性溶剂萃取、冷冻除杂、浓缩、非极性溶剂结晶、氢化、反洗、结晶及重结晶。采用本发明工艺制备的奥利司他含量在99％以上，最大单杂在0.1％以内，高于药用标准。本发明工艺路线短，产品质量好，操作方便，设备投资少，溶剂用量小，且均可回收套用，极大地降低了奥利司他的生产成本和环境污染。

权利要求书

权利要求书
1.  一种奥利司他的制备方法，具体包括以下步骤：
1)发酵液预处理：
向发酵液中加入助滤剂，用酸调pH4.0-5.0，搅拌，过滤，得滤饼；
2)浸提：
将步骤1)中所得滤饼用极性溶剂进行浸提，搅拌，过滤，得含奥利司他中间体的溶液；
3)浓缩、调溶剂体积浓度：
将步骤2)中过滤所得奥利司他中间体溶液浓缩至奥利司他中间体浓度为15～30g/L，加饮用水调节有机溶剂水溶液的体积浓度为50～80％；
4)非极性溶剂萃取：
向步骤3)中所得奥利司他中间体含水有机溶剂溶液中加入与体系不混溶的非极性溶剂进行萃取，分相得到含奥利司他中间体的非极性萃取液；
5)浓缩、极性溶剂萃取：
将步骤4)萃取所得奥利司他中间体的非极性萃取溶液，浓缩至浓度为100～200g/L，加入极性溶剂萃取，分相得奥利司他中间体的极性萃取溶液；
6)冷冻除杂：
将步骤5)所得奥利司他中间体的极性萃取液搅拌，降温至5℃以下，保温，然后过滤除去不溶性杂质，得到奥利司他中间体的澄清滤液，浓缩至干，得奥利司他中间体油状物；
7)结晶：
用溶剂将步骤6)所得奥利司他中间体油状物进行稀释，使浓度为50～100g/L，采用降温法，搅拌析晶，过滤得奥利司他中间体白色晶体；
8)氢化：
将步骤7)结晶奥利司他中间体晶体用非极性溶剂溶解成浓度为10-80g/L，加入产品重量5～10％的钯炭，通入氢气在温度30～40℃、压力0.3～1Mpa下进行反应，氢化结束后，过滤得氢化液；
9)反洗：
向氢化液中加入2倍体积、中等级性的有机溶剂水溶液，搅拌，静置，分相，收集上相；
10)结晶：
将奥利司他反洗后所得上相溶液用非极性溶剂稀释至浓度为30～50g/L，采用降温法进行搅拌结晶，过滤后得奥利司他晶体。

2.  根据权利要求1所述一种奥利司他的制备方法，其特征在于，步骤1)所述的助滤剂为硅藻土、珍珠岩、纤维素、石墨粉、锯屑、氧化镁、石膏、活性炭、酸性白土中的任一种，加入量为发酵液重量的3～10％；所述的酸为盐酸、草酸、醋酸、硫酸中的一种。

3.  根据权利要求1所述的一种奥利司他的制备方法，其特征在于，步骤2)中浸提的极性有机溶剂为甲醇、丙酮、乙腈或乙醇中的一种；极性有机溶剂与滤饼的体积重量比为(5～10):1；步骤3)中加饮用水调节有机溶剂水溶液的体积浓度为60～70％。

4.  根据权利要求1所述的一种奥利司他的制备方法，其特征在于，步骤4)中加入的非极性有机溶剂为石油醚、庚烷或正己烷中的任一种，其用量相当于奥利司他中间体含水有机溶剂溶液体积的0.5～1.5倍；步骤5)中的极性萃取溶剂为乙腈或甲醇中的一种，其加入体积与萃取前奥利司他中间体非极性相的体积比为(1～3):1。

5.  根据权利要求1所述的一种奥利司他的制备方法，其特征在于，步骤6)中冷冻除杂时降温至-5～5℃，保温1～3h，过滤除去不溶杂质；步骤7)中溶剂为石油醚、庚烷、正己烷中的一种，结晶温度为-10～-15℃。

6.  根据权利要求1所述的一种奥利司他的制备方法，其特征在于，步骤8)中的非极性溶剂为正己烷、庚烷、石油醚中的一种。

7.  根据权利要求1-6任一权利要求所述的一种奥利司他的制备方法，其特征在于，步骤9)中的有机溶剂为甲醇、乙醇或乙腈的水溶液中的一种。

8.  根据权利要求1-6任一权利要求所述的一种奥利司他的制备方法，其特征在于，步骤9)中的有机溶剂水溶液中有机溶剂的体积浓度为60～80％。

9.  根据权利要求1-6任一权利要求所述的一种奥利司他的制备方法，其特征在于，步骤10)中的非极性溶剂为正己烷、庚烷、石油醚中的一种。

10.  根据权利要求1-6任一权利要求所述的一种奥利司他的制备方法，其特征在于，步骤10)中的结晶温度为-5～5℃。

说明书

说明书一种奥利司他的制备方法
技术领域
本发明属于医药技术领域，特别涉及了一种奥利司他的制备方法。
背景技术
奥利司他(orlistat)是罗氏公司最早开发的新型减肥药物，也是唯一一种非中枢神经减肥药，它是长效和强效的特异性胃肠道脂肪酶抑制剂，通过与胃和小肠内的胃脂肪酶和胰脂肪酶的活性丝氨酸部位结合形成共价键，使脂肪酶失去活性，阻止食物中脂肪分解、吸收和利用，从而达到减肥的目的。

目前，国内生产奥利司他有两种方法：一种是化学全合成，反应步骤多，收率低，环境兼容性差；另一种是微生物发酵得到奥利司他中间体，然后中间体经一步氢化合成奥利司他，第二种方法生产的奥利司他占主导地位。各个制药企业经过菌种筛选、发酵调控及下游提取纯化工艺的不断优化，可以逐步提高奥利司他中间体的发酵效价及最终产品的质量和收率。因此，从成本和环保角度来说，微生物发酵具有显著的优越性。
中国专利申请CN 102010387A公开了一种提纯奥利司他的方法，描述了利用动态轴向压缩(DAC)技术分离纯化奥利司他的方法。
中国专利申请CN 101948450A公开了一种生产制备奥利司他的方法，中间体提取阶段树脂柱吸附、洗脱以及氢化后的奥利司他的纯化经硅胶柱层析，得到奥利司他。
中国专利申请CN 102304105A公开了一种制备奥利司他的方法，该发明中间体纯化阶段引入了硅胶柱层析，氢化后，使用乙醇、丙酮等中等级性溶剂结晶，再用庚烷、石油醚、正己烷等非极性溶剂转晶，获得高纯度奥利司他。
发明内容
为了解决将奥利司他提纯到ICH要求的高质量标准的技术难题，克服现有技术中生产设备投资高、生产成本高、收率低等缺点，发明人经过大量的试验，优选出了一种奥利司他的制备方法，包括发酵液的预处理、浸提、浓缩、非极性溶剂萃取、浓缩、中等级性溶剂萃取、浓缩，得到含量80％以上奥利司他中间体，然后再用非极性溶剂溶解、氢化，过滤得氢化液，向氢化液中加入中等级性的有机溶剂水溶液进行反洗除杂，然后进行非极性溶剂结晶和重结晶，直至产品含量99％以上，最大单杂0.1％以内。
发明人创造性采用非极性溶剂和极性溶剂两步萃取转相、低温冷冻除杂及结晶，获得高质量的奥利司他中间体，氢化后加入中等级性有机溶剂水溶液进行反洗，可优先除去大量的极性杂质，提高奥利司他含量及纯度，然后利用奥利司他在非极性溶剂中结晶温度高，含量提升幅度快的特点，反复进行非极性溶剂结晶，可有效除去大部分非极性杂质，降低有关物质的含量，
本发明的技术方案具体为，一种奥利司他的制备方法，包括如下步骤：
1)发酵液预处理：
向发酵液中加入助滤剂，用酸调pH4.0-5.0，搅拌，过滤，得滤饼；
2)浸提：
将步骤1)中所得滤饼用极性溶剂进行浸泡，搅拌，过滤，得含奥利司他中间体的溶液；
3)浓缩、调溶剂体积浓度：
将步骤2)中过滤所得奥利司他中间体溶液浓缩至奥利司他中间体浓度为15～30g/L，加饮用水调节有机溶剂水溶液的体积浓度为50～80％；
4)非极性溶剂萃取：
向步骤3)中所得奥利司他中间体含水有机溶剂溶液中加入与体系不混溶的非极性溶剂进行萃取，分相得到含奥利司他中间体的非极性萃取液；
5)浓缩、极性溶剂萃取：
将步骤4)萃取所得奥利司他中间体的非极性萃取溶液，浓缩至浓度为100～200g/L，加入极性溶剂萃取，分相得奥利司他中间体的极性萃取溶液；
6)冷冻除杂：
将步骤5)所得奥利司他中间体的极性萃取液搅拌，降温至5℃以下，保温，然后过滤除去不溶物，得奥利司他中间体的澄清滤液，浓缩至干，得奥利司他中间体油状物；
7)中间体结晶：
用溶剂将步骤6)所得奥利司他中间体油状物进行稀释，使其浓度为50～100g/L，采用降温法，搅拌析晶，过滤得白色奥利司他中间体晶体；
8)氢化：
将步骤7)结晶奥利司他中间体晶体用非极性溶剂溶解成浓度为10～80g/L，加入相当于奥利司他中间体重量5～10％的钯炭，通氢气，在温度30～40℃、压力0.3～1Mpa下进行反应；氢化结束后，过滤得氢化液；
9)反洗：
向氢化液中加入体积相当于氢化液体积1-3倍、中等级性的有机溶剂水溶液，搅拌，静置，分相，收集上相；
10)结晶：
将奥利司他反洗后所得上相溶液用非极性溶剂稀释至奥利司他浓度为10～100g/L，采用降温法进行搅拌结晶，过滤得奥利司他晶体。
步骤10)中的结晶步骤可以依据HPLC所得奥利司他含量及单杂情况，重复0-4次，以保证奥利司他单杂控制在小于0.1％；重复步骤是将得奥利司他晶体溶于非极性溶剂，优选浓度为10～100g/L，采用降温法进行搅拌结晶，过滤得奥利司他晶体。
其中，步骤1)所述的发酵液可以是但不限于CN102304105A所公开的发酵液；所述的助滤剂可以为硅藻土、珍珠岩、纤维素、石墨粉、锯屑、氧化镁、石膏、活性炭、酸性白土中的至少一种；优选的助滤剂是硅藻土、氧化镁、珍珠岩中的任一种；加入量为发酵液重量的3～10％。所述的酸优选为盐酸、醋酸、硫酸、草酸中的至少一种。
本发明对步骤2)中浸提的极性有机溶剂进行了优选，优选的溶剂为甲醇、丙酮、乙腈或乙醇中的一种；极性有机溶剂与滤饼的体积重量比为(5～10):1。
本发明对步骤3)中有机溶剂水溶液的体积浓度进行了优选，优选加饮用水调节有机溶剂水溶液的体积浓度为60～70％。
本发明对步骤4)中加入的非极性有机溶剂进行了优选，优选石油醚、庚烷或正己烷中的任一种，其用量相当于奥利司他中间体含水有机溶剂溶液体积的0.5～1.5倍。
本发明对步骤5)中加入的极性溶剂进行了优选，优选为乙腈或甲醇；其加入体积与萃取前奥利司他中间体非极性相的体积比为(1～3):1。
本发明对步骤6)中冷冻除杂条件进行了优选，优选降温至-5～5℃，保温1～3h，过滤除去不溶杂质。
步骤7)中的溶剂优选为石油醚、庚烷、正己烷中的一种；结晶温度为-10～-15℃。
步骤8)中的非极性溶剂优选为正己烷、庚烷、石油醚中的一种。
步骤9)中有机溶剂优选为甲醇、乙醇或乙腈中的一种，有机溶剂水溶液中有机溶剂的体积浓度为60～80％。
步骤10)中的非极性溶剂优选为正己烷、庚烷、石油醚中的一种；结晶温度为-5～5℃。
经研究发现，奥利司他中间体极易溶于极性有机溶剂，也溶于非极性有机溶剂，通过两种溶剂的交替萃取使用，既除去了夹杂在产品中的极性杂质，也除去了一些非极性杂质，然后再通过极性溶剂降温除杂，提高了奥利司他中间体结晶前的产品含量。之后，奥利司他中间体通过在非极性溶剂中降温结晶，更进一步除去一些萃取法无法消除的弱极性杂质，使奥利司他中间体晶体含量达80％以上。氢化后，利用中等极性溶剂的水溶液进行反洗，可除去大量的极性杂质。然后采用非极性溶剂对奥利司他连进行结晶，可以获得高纯度的奥利司他产品。
其中，所述的减压蒸馏及真空干燥为本领域常用技术手段，除非特别说明，真空度与温度没有特别限定。
本发明与现有技术相比具有如下突出的优点：
1)本发明技术方案中产品及中间体的提取、纯化不需树脂柱和硅胶柱，工艺路线短，操作简便，重复性好。
2)本发明克服了现有工艺生产成本高，操作步骤繁琐，设备投资大，生产能力不足的缺陷，该方法生产的奥利司他中间体含量高，提取收率在80％以上，具有显著的成本和质量优势，非常适合工业规模生产。
3)本发明通过将奥利司他中间体发酵液交替在极性、非极性有机溶剂中进行萃取，结合降温除杂、非极性溶剂中结晶，所得奥利司他中间体产品含量达80％以上；氢化及后处理简单，可获得含量99％以上，最大单杂不大于0.1％的奥利司他。
4)采用本发明工艺制备奥利司他中间体，设备投资少，收率高，所用溶剂均可回收套用，环境污染少，符合清洁生产的要求。
具体实施方式
为了更好的说明本发明，通过实施例进行阐述，但是并不因此将本发明限制在所述的实施例中。本发明实施例中其它未公开事项，均为现有技术。
实施例1
1)发酵液预处理：向1.5m3发酵液(发酵单位8.5g/L)中加入45kg硅藻土，用盐酸调pH为4.5，搅拌1h，板框压滤，收集滤饼360kg；
2)浸提：用2.88m3工业丙酮对步骤1)获得的滤饼进行浸提，浸提3h，过滤，得含奥利司他中间体的澄清、淡红色透明滤液3.2m3；
3)浓缩、调溶剂体积浓度：将步骤2)所得奥利司他中间体丙酮溶液用降膜蒸发器进行减压浓缩，在温度30℃下，浓缩至产品浓度20g/L，加150L饮用水调节丙酮水溶液的体积浓度为65％；
4)非极性溶剂萃取：向步骤3)中调配好的奥利司他中间体的丙酮/水溶液中加入480L石油醚，搅拌60min，萃取，静置2h后，收集上相，得到含奥利司他中间体的石油醚溶液520L；
5)浓缩、极性溶剂萃取：将步骤4)中分相得到的奥利司他中间体的石油醚溶液用刮板蒸发器进行浓缩，在温度50℃下，减压浓缩至浓度200g/L时，加入60L乙腈，搅拌30min萃取，静置1h后，收集下相，得奥利司他中间体的乙腈相溶液70L；
6)冷冻除杂：将含奥利司他中间体的乙腈相转移至结晶釜中，夹套通入-10℃冷媒水降温搅拌处理，温度降至0℃时，保温1h，过滤除杂，得奥利司他中间体滤液。
7)中间体结晶：减压浓缩奥利司他中间体滤液至干，得淡红色奥利司他中间体油状物。将油状物用210L石油醚完全溶解，并稀释至奥利司他中间体浓度为50g/L，进行降温搅拌结晶，-15℃过滤，得白色奥利司他中间体晶体。经HPLC检测，结晶后中间体含量为84.3％，纯度为95.2％，提取总收率为83.2％。
8)氢化：奥利司他中间体结晶晶体用200L石油醚全部溶解，配制浓度为50g/L，加入1kg钯炭进行氢化，温度40℃、压力0.5MPa，反应5h后，过滤除去钯炭，得氢化液210L。
9)反洗：向氢化液中加入70％的甲醇水溶液420L，搅拌30min，静置30min后，分相，收集得石油醚相201L。
10)结晶和重结晶：将奥利司他浓度为48g/L的石油醚溶液在搅拌状态下，降温结晶，-1℃过滤，并用冷的石油醚洗涤，得奥利司他晶体。重复上述步骤，石油醚重结晶3次，最后得白色奥利司他晶体。30℃真空干燥，经HPLC检测，奥利司他含量为99.1％，最大单杂为0.1％，纯度为99.3％。经计算，总收率为41.7％。
实施例2
1)发酵液预处理：向1.45m3发酵液(发酵单位9.2g/L)中加入70kg珍珠岩，用草酸调pH为4.7，搅拌2h，板框压滤，收集滤饼350kg；
2)浸提：用3.5m3工业甲醇对步骤1)所得滤饼进行浸提，浸提5h，板框压滤，得含奥利司他中间体的澄清、淡红色透明溶液4m3；
3)浓缩、调溶剂体积浓度：将步骤2)所得奥利司他中间体甲醇溶液用降膜蒸发器进行减压浓缩，在温度控制30℃下，浓缩至产品浓度20g/L，加170L饮用水调节甲醇水溶液的体积浓度为62％；
4)非极性溶剂萃取：向奥利司他中间体的甲醇/水溶液中加入670L庚烷，搅拌60min，萃取，静置2h后，收集上相，得到含奥利司他中间体的庚烷溶液730L；
5)浓缩、极性溶剂萃取：用刮板蒸发器浓缩步骤4)所萃取奥利司他中间体的庚烷溶液，在温度50℃下，减压浓缩至浓度150g/L时，加入160L乙腈，搅拌30min萃取，静置1h后分相，收集下相，得奥利司他中间体的乙腈溶液175L；
6)冷冻除杂、浓缩：将含奥利司他中间体的乙腈相转移至结晶釜中，夹套通入-10℃冷媒水降温搅拌处理，温度降至-5℃时，保温2h，过滤除杂，得奥利司他中间体滤液。
7)结晶：减压浓缩奥利司他中间体滤液至干，得淡红色奥利司他中间体油状物。将油状物用140L庚烷完全溶解，并释至奥利司他中间体浓度为80g/L，进行降温搅拌结晶，-13℃过滤，得白色奥利司他中间体晶体。经HPLC检测，结晶后中间体含量为85.3％，纯度为96.5％，提取总收率为85.1％。
8)氢化：奥利司他中间体结晶晶体用130L庚烷全部溶解，配制浓度为80g/L，加入0.9kg钯炭进行氢化，温度40℃、压力0.35MPa，反应5h后，过滤除去钯炭，得氢化液135L。
9)反洗：向氢化液中加入65％的乙醇水溶液270L，搅拌30min，静置30min后，分相，收集得庚烷相139L。
10)结晶和重结晶：将奥利司他浓度为75g/L的庚烷相用庚烷稀释至浓度30g/L，在搅拌状态下，降温结晶，-3℃过滤，并用冷的庚烷洗涤，得奥利司他晶体。重复上述步骤，庚烷重结晶3次，最后得白色奥利司他晶体。30℃真空干燥，经HPLC检测，奥利司他含量为99.3％，最大单杂为0.080％，纯度为99.3％。
经计算，总收率为42.8％。
实施例3
1)发酵液预处理：向1.5m3发酵液(发酵单位8.8g/L)中加入60kg氧化镁，用草酸调pH 为5.0，搅拌3h，过滤，收集滤饼375kg；
2)浸提：用1.88m3工业乙醇对步骤1)中过滤所得滤饼进行浸提，浸提3h，板框压滤，得含奥利司他中间体的澄清、淡红色透明溶液2.1m3；
3)浓缩、调溶剂体积浓度：用降膜蒸发器将步骤2)所得奥利司他中间体乙醇溶液进行减压浓缩，在温度30℃下，浓缩至产品浓度25g/L，加200L饮用水调节乙醇水溶液的体积浓度为67％；
4)非极性溶剂萃取：向奥利司他中间体的乙醇/水溶液中加入840L正己烷，搅拌60min萃取，静置2h后，收集上相，得到含奥利司他中间体的正己烷溶液900L；
5)浓缩、极性溶剂萃取：用刮板蒸发器浓缩奥利司他中间体的正己烷溶液，在温度50℃下减压浓缩至浓度100g/L时，加入250L甲醇，搅拌30min萃取，1h后分相，收集下相，得奥利司他中间体的甲醇溶液290L；
6)冷冻、过滤、浓缩：将含奥利司他中间体的甲醇相转移至结晶釜中，夹套通入-10℃冷媒水降温搅拌处理，温度降至-5℃时，保温1h，过滤除杂，得奥利司他中间体滤液。
7)结晶：减压浓缩奥利司他中间体滤液至干，得淡红色奥利司他中间体油状物。将油状物用100L正己烷完全溶解，并稀释至奥利司他中间体浓度为100g/L，进行降温搅拌结晶，-13℃过滤，得白色奥利司他中间体晶体。经HPLC检测，结晶后中间体含量为84.4％，纯度为95.6％，提取总收率为82.5％。
8)氢化：奥利司他中间体结晶晶体用88L正己烷全部溶解，配制浓度为100g/L，加入1kg钯炭进行氢化，温度40℃、压力0.4MPa，反应5h后，过滤除去钯炭，得氢化液95L。
9)反洗：向氢化液中加入75％的乙腈水溶液190L，搅拌30min，静置30min后，分相，收集得正己烷相98L。
10)结晶和重结晶：将奥利司他浓度为95g/L的正己烷相用正己烷稀释至60g/L，在搅拌状态下，降温结晶，0℃过滤，并用冷的正己烷洗涤，得奥利司他晶体。用庚烷代替正己烷重复上述步骤，重结晶4次，最后得白色奥利司他晶体。30℃真空干燥，经HPLC检测，奥利司他含量为99.1％，最大单杂为0.085％，纯度为99.3％。经计算，总收率为40％。