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1、(10)申请公布号 CN 104327935 A (43)申请公布日 2015.02.04 C N 1 0 4 3 2 7 9 3 5 A (21)申请号 201410476266.3 (22)申请日 2014.09.17 C11B 1/00(2006.01) (71)申请人上海蓝怡科技有限公司 地址 201100 上海市闵行区友东路85号 申请人浙江蓝怡医药有限公司 (72)发明人李子樵 陈亮德 (74)专利代理机构上海一平知识产权代理有限 公司 31266 代理人马莉华 陆凤 (54) 发明名称 蛋黄油及其制法和应用 (57) 摘要 本发明提供了一种蛋黄油及其制备方法和应 用。具体的，本发。
2、明提供了一种蛋黄油的制备方 法，制备的蛋黄油为透明液体，可与水互溶，主要 包括胆固醇(TC)脂蛋白(包括高密度脂蛋白胆固 醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、相 互结合的甘油三酯(TG)和脂蛋白，亲水性极强， 且该制备方法简单，适合工业化生产。 (51)Int.Cl. 权利要求书1页 说明书6页 附图1页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书6页 附图1页 (10)申请公布号 CN 104327935 A CN 104327935 A 1/1页 2 1.一种蛋黄油的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤： (a)从禽蛋中分离。
3、获得蛋黄； (b)将所述蛋黄进行离心，形成分为上下两层的离心产物，其中上层为透明液体，而下 层为不透明的沉淀； (c)从所述离心产物中分离获得上层液体，即为蛋黄油。 2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(b)中的离心条件包括： 在27000g60000g下离心，离心时间为20min2h。 3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(b)包括： 配平装有蛋黄的离心管，然后进行离心；和 在步骤(c)中，吸取离心后分成的上下两层液体中的上层液体，得到所述蛋黄油。 4.根据权利要求1至3中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述离心温度为2 40。 5.一种蛋黄油，其特征在于，。
4、所述蛋黄油是利用如权利要求1所述的制备方法制备的。 6.根据权利要求5所述的蛋黄油，其特征在于，所述蛋黄油包括第一结合物和第二结 合物，其中，所述第一结合物包括胆固醇和脂蛋白所形成的结合物，所述第二结合物包括甘 油三酯和脂蛋白所形成的结合物。 7.根据权利要求5所述的蛋黄油，其特征在于，所述蛋黄油还包括第三结合物，其中， 该第三结合物包括胆固醇、甘油三酯和脂蛋白三者所形成的结合物。 8.根据权利要求6或7所述的蛋黄油，其特征在于，所述蛋黄油中，胆固醇的含量约为 1.612，甘油三酯的含量约为20.31，以蛋黄油的总重量计。 9.根据权利要求8中所述的蛋黄油，其特征在于，所述蛋黄油为能与水互溶的。
5、橙黄色 透明液体。 10.一种制品，其特征在于，所述制品包括如权利要求6至9中任一项所述的蛋黄油，或 由所述蛋黄油制成。 权 利 要 求 书CN 104327935 A 1/6页 3 蛋黄油及其制法和应用 技术领域 0001 本发明涉及化工领域，具体地涉及一种蛋黄油的制备技术。 背景技术 0002 蛋黄油又称蛋黄脂质，是禽类鲜卵经分离提纯得到的产物。蛋黄油的主要成分是 甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)和磷脂类，还有蛋白质氨基酸类、矿物质、维生素类等多种营养 物质。由于其在临床医疗、保健食品和化妆品等领域有着广泛的用途，因此成为近年来研究 的热点。在某些应用中，要求所得到的蛋黄有具有一定的亲水性。
6、。比如，在化妆添加蛋黄油 时，如果有保湿功能会增加产品的品质；添加到水溶液性质的产品或某一过程中时，能够不 分层或产生浑浊。 0003 蛋黄油的制备方法包括高温煎煮法、萃取法、水相酶法、超临界CO 2 萃取法以及超 滤法等。 0004 高温煎煮法的温度一般需要加热到260-280，在如此高温下蛋黄中的蛋白质和 卵磷脂容易分解，酸值升高，规模较大时温度也不易控制。而且在高温下蛋黄油容易产生苯 并芘，具有致癌的作用，因此在用作食品、药品及保健品添加剂的时候不得不考虑此问题。 0005 萃取法制备蛋黄油，主要是机溶剂萃取法，如使用氯仿、乙醚等，萃取法所用到的 溶剂易得，成本也不高，但是工艺较繁琐、耗。
7、时长、溶剂回收耗能大，并且容易残留。由于乙 醚和氯仿对人体都有一定的刺激性，所以使用有一定的限制。无水乙醇法萃取现在国内外 均有报道，但是提取效率不是很理想。 0006 水相酶法提取蛋黄油得到的是纯粹的蛋黄脂质，相关的蛋白质(如高密度脂蛋白 和低密度脂蛋白)被部分或全部酶解，脂蛋白与脂质部分分开并且被分离分层，只剩下具 有疏水性的脂质部分，在部分需要蛋黄油仍保持一定亲水性的用途上受到限制。 0007 超临界CO 2 萃取蛋黄油主要是在一定的压力和温度下(通常为1040MPa、30 50左右)，将超临界的CO 2 流体通过压力泵送入装有蛋黄粉的萃取缸，经45h的萃取， 可得到较高的萃取率。该法首。
8、先要将蛋黄制成蛋黄粉，然后还 需要配置较高压力装置、加 热装置、制冷装置，需要在较长的时间内才能得到较高的萃取率。所以成本较高，效率依然 较低，且高压状态下蛋黄油中的某些成分的结构会受到一定程度的损伤。 0008 现有技术中的很多技术的缺点包括：生成了某些不需要的新物质、引入了杂质，改 变了蛋黄油的特性，载脂蛋白的流失或缺失。 0009 综上所述，本领域尚缺乏安全、简便地在不使用有机溶剂的情况下生产水溶性好 的蛋黄油的方法。因此，本领域迫切需要开发安全、简便地生产水溶性好的蛋黄油的方法。 发明内容 0010 本发明的目的就是提供了一种安全、简便地生产水溶性好的蛋黄油的方法，尤其 是不使用任何有。
9、机溶剂的生产方法。 0011 在本发明的第一方面，提供了一种蛋黄油的制备方法，所述制备方法包括以下步 说 明 书CN 104327935 A 2/6页 4 骤： 0012 (a)从禽蛋中分离获得蛋黄； 0013 (b)将所述蛋黄进行离心，形成分为上下两层的离心产物，其中上层为透明液体， 而下层为不透明的沉淀； 0014 (c)从所述离心产物中分离获得上层液体，即为蛋黄油。 0015 在另一优选例中，在所述步骤(b)中，所述的上层液体占所述离心产物的体积的 35-75，较佳地45-70。 0016 在另一优选例中，所述的禽蛋包括：鸡蛋、鸭蛋、鹅蛋。 0017 在另一优选例中，所述的上层液体为亲水。
10、性的蛋黄油。 0018 在另一优选例中，所述的上层液体具有以下特征： 0019 (i)能与水互溶；和 0020 (ii)橙黄色透明液体。 0021 在另一优选例中，所述的上层液体中，外源的有机溶剂的含量为零。 0022 在另一优选例中，所述步骤(b)中的离心条件包括： 0023 在27000g60000g下离心，离心时间为20min2h。 0024 在另一优选例中，在所述步骤(b)中，所述离心速度为1500025000rpm。 0025 在另一优选例中，所述离心条件为离心速度为20000rpm，离心时间为30min。 0026 在另一优选例中，所述步骤(b)包括： 0027 配平装有蛋黄的离心。
11、管，然后进行离心；和 0028 在步骤(c)中，吸取离心后分成的上下两层液体中的上层液体，得到所述蛋黄油。 0029 在另一优选例中，所述离心温度为240。 0030 在另一优选例中，所述的离心温度为2-20。 0031 在另一优选例中，所述方法不包括添加外源有机溶剂的步骤。 0032 在本发明的第二方面，提供了一种蛋黄油，所述蛋黄油是利用本发明第一方法所 述的制备方法制备的。 0033 在另一优选例中，所述蛋黄油包括第一结合物和第二结合物，其中，所述第一结合 物包括胆固醇和脂蛋白所形成的结合物，所述第二结合物包括甘油三酯和脂蛋白所形成的 结合物。 0034 在另一优选例中，所述脂蛋白包括高密。
12、度脂蛋白和/或低密度脂蛋白。 0035 在另一优选例中，所述蛋黄油还包括第三结合物，其中，该第三结合物包括胆固 醇、甘油三酯和脂蛋白三者所形成的结合物。 0036 在另一优选例中，所述脂蛋白包括高密度脂蛋白和/或低密度脂蛋白。 0037 在另一优选例中，所述蛋黄油中，胆固醇的含量约为1.612，甘油三酯的含量约 为20.31，以蛋黄油的总重量计。 0038 在另一优选例中，所述蛋黄油中，高密度脂蛋白胆固醇的含量约为0.54，低密度 脂蛋白胆固醇的含量为1.07，磷脂含量含量8.77，水分含量51，其他成分1，以蛋 黄油的总重量计。 0039 在另一优选例中，所述第一结合物包括高密度脂蛋白胆固醇。
13、和低密度脂蛋白胆固 醇。 说 明 书CN 104327935 A 3/6页 5 0040 在另一优选例中，所述蛋黄油为能与水互溶的橙黄色透明液体。 0041 在另一优选例中，所述的蛋黄油中，外源的有机溶剂的含量为零。 0042 在本发明的第三方面，提供了一种制品，所述制品包括本发明的第二方面所述的 蛋黄油，或由所述蛋黄油制成。 0043 应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具 体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在 此不再一一累述。 附图说明 0044 图1是本发明制备实施例1中蛋黄离心后的离心产物的示意图； 0045。
14、 图2是本发明制备实施例2中蛋黄离心后的离心产物的示意图； 0046 图3是本发明制备实施例3中蛋黄离心后的离心产物的示意图； 0047 图4是本发明对比例1中蛋黄离心后的离心产物的示意图。 具体实施方式 0048 本发明人经过广泛而深入的研究，对于蛋黄油的分离方法进行了大量摸索和筛 选，并进行了多次实验，首次开发了一种无需添加剂(如无需加入任何有机溶剂)且在常温 下进行的分离的方法。本发明方法通过特定条件下的离心，制备出亲水性强的蛋黄油。本 发明方法所制得的蛋黄油含有丰富的胆固醇脂蛋白结合物和甘油三酯脂蛋白结合物，亲水 性极强。本发明制备方法简单，特别适合工业化生产。在此基础上完成了本发明。。
15、 0049 蛋黄油 0050 本发明的蛋黄油为透明液体，其主要成分包括胆固醇(TC)脂蛋白(包括高密度 脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、相互结合的甘油三酯(TG)和脂 蛋白，即包括第一结合物、第二结合物、或第三结合物，这些结合物使得蛋黄油具有亲水性， 能够与水互溶。此外，蛋黄油中还包括有磷脂、IgY(免疫特异性蛋黄)等此处仅以TC、TG、 LDL-C、HDL-C作为蛋黄油成分的代表，但并不代表其他成分不存在。 0051 本发明中，本发明的蛋黄油(即离心后的上层液体)中，不含有任何外源添加的有 机溶剂，即外源的有机溶剂的含量为零。 0052 蛋黄油的制备方法 005。
16、3 本发明还提供了本发明蛋黄油的制备方法，包括以下步骤： 0054 1.将鲜鸡蛋小心去除蛋壳和蛋清，只留蛋黄； 0055 2.将蛋黄转入离心管中，配平； 0056 3.放入离心机中，高速离心后取出，可见明显分层，上层为透明橙黄色液体，下层 为浅黄色沉淀，其中，离心条件为： 0057 在27000g60000g下离心，离心时间为20min2h，离心温度为220。 0058 4.收集上层橙黄色透明液体，此即为蛋黄油。 0059 应用 0060 本发明的蛋黄油在临床医疗、保健食品和化妆品等领域具有广泛的用途，例如，作 为药物，蛋黄油具有清热润肤、消炎止痛、收敛生肌和保护疮面的作用，可用于治疗轻度烫 。
17、说 明 书CN 104327935 A 4/6页 6 伤，也可作为皮肤再生的美容制品的成分等。 0061 本发明的主要优点包括： 0062 (a)本发明制备的蛋黄油包括互相结合的胆固醇(TC)和脂蛋白(即高密度脂蛋白 胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、相互结合的甘油三酯(TG)和脂蛋白，亲 水性极强。 0063 (b)本发明的制备方法在制备过程中不会引入其他杂质，且对制备设备的要求低， 操作简单，适合大规模工业化生产。 0064 下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明 而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按。
18、照常规条 件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数是重量百分比和重量 份数。 0065 实施例 0066 制备实施例1 0067 1.将鲜鸡蛋小心去除蛋壳和蛋清，只留蛋黄； 0068 2.将蛋黄转入离心50ml离心管中，每只鸡蛋的蛋黄装一管(体积14-16ml/ 管,12-14g/管)，然后相互配平； 0069 3.放入离心机中，4、20000rpm高速离心30min后取出，可见明显分层，上层为透 明橙黄色液体，下层为浅黄色沉淀； 0070 4.收集上层橙黄色透明液体(体积911ml，重810g)，如图1所示，得到蛋黄 油No.1。可观察到该蛋黄油与水互溶。 0071 制备。
19、实施例2 0072 1.将鲜鸡蛋小心去除蛋壳和蛋清，只留蛋黄； 0073 2.将蛋黄转入离心管中，配平； 0074 3.放入离心机中，4、18000rpm高速离心60min后取出，可见明显分层，上层为透 明橙黄色液体，下层为浅黄色沉淀； 0075 4.收集上层橙黄色透明液体，如图2所示，得到蛋黄油No.2。可观察到该蛋黄油 与水互溶。 0076 制备实施例3 0077 1.将鲜鸡蛋小心去除蛋壳和蛋清，只留蛋黄； 0078 2.将蛋黄转入离心管中，每只鸡蛋的蛋黄装一管(体积14-16ml/管,12-14g/ 管)，然后配平； 0079 3.放入离心机中，4、15000rpm高速离心120min后。
20、取出，可见明显分层，上层为 透明橙黄色液体，下层为浅黄色沉淀； 0080 4.收集上层橙黄色透明液体(体积911ml，重810g)，如图3所示，得到蛋黄 油No.3。可观察到该蛋黄油与水互溶。 0081 对比例1 0082 1.将鲜鸡蛋小心去除蛋壳和蛋清，只留蛋黄； 0083 2.将蛋黄转入离心管中，(体积14-16ml/管,12-14g/管)，然后配平； 0084 3.放入离心机中，4、13000rpm高速离心120min后取出，可见有分层现象，上层 说 明 书CN 104327935 A 5/6页 7 为透明橙黄色液体，下层为浅黄色沉淀，中间有部分浅黄色胶状物； 0085 4.收集上层橙黄。
21、色透明液体(体积4ml，重4g)，如图4所示，得到蛋黄油No.4。可 观察到该蛋黄油与水互溶。 0086 对比例2 0087 乙醇法提取蛋黄中的脂类，步骤如下： 0088 1.小心去除鲜鸡蛋的蛋壳和蛋清，取蛋黄； 0089 2.用量筒量得蛋黄的体积，用十倍体积的纯水稀释蛋黄； 0090 3.充分搅拌均匀后，均分成两份，分别用盐酸将两份的PH调为6.3和5.0； 0091 4.配平后4，2800g离心30min，混合液分成两层，下层非水溶性即为脂类层； 0092 5.加入无水乙醇将水不溶物溶解，在振荡器上震荡2min； 0093 6.配平后4，2000g离心10min，收集上清； 0094 7.。
22、将乙醇低温蒸干，得到的就是蛋黄中的脂类； 0095 8.将得到的脂类加入纯水中，基本不溶，明显分层； 0096 9.将加入上步骤中得到的脂类、水混合物在CA400生化自动分析仪上检测TC、TG、 HDL-C、LDL-C项目。 0097 对比例3 0098 异丙醇法提取蛋黄油： 0099 1.取鲜鸡蛋，小心去除蛋壳、蛋清，收集蛋黄； 0100 2.用五倍体积的1M的NaCl稀释上述蛋黄； 0101 3.以2:3的比例混合上述蛋黄和异丙醇，混合均匀； 0102 4.加入与上步中含异丙醇混合液等体积的石油醚； 0103 5.分装至合适容器中盖上盖子后混匀，放置5min，可见混合液分层； 0104 6。
23、.收集下层液体，其中即含有甘油三酯和胆固醇等； 0105 7.用纯水将上步中收集的液体稀释一倍，溶液浑浊； 0106 8.在CA400生化自动分析仪中检测TC、TG、HDL-C、LDL-C项目。 0107 测试例 0108 上述蛋黄油No.1、No.2、No.3以及对比例中制得的样品的脂类成分测试结果如 下： 0109 说 明 书CN 104327935 A 6/6页 8 0110 上述测试是在CA400中检测得到的，采用的是购自上海蓝怡科技有限公司 的临 床诊断试剂盒，其中TC用的是酶法检测，TG用的是GPO-POD法检测，HDL-C使用的是直接法 检测，LDL-C使用的是也是直接法，具体过。
24、程如下： 0111 1.将检测各试剂的试剂1-R1、试剂2-R2放入试剂仓,将盖子取下，改好仓盖； 0112 2.使用商业校准品校准仪器和试剂组成的检测系统，并测试商业质控品的值； 0113 3.待检测商业质控品的结果出来后，与商家给定的靶值区间表对比，若测得值在 给定范围内，进行下步试验；若超出给定靶值区间，检查原因从新校准直至质控品值在给定 靶值区间； 0114 4.将样本加入样品杯中，放入样品仓，测试其值。 0115 由于TG项目的浓度远远超过试剂盒的测试范围，故作5-100多个梯度稀释，根据 结果推出其实际浓度。 0116 由上述数据可以看出，在离心法中，转速在15000-25000r。
25、pm范围内，离心达到2小 时都能达到预期目标，低于15000rpm时，则不能在2小时离心后达到预期目标。从离心得 到的蛋黄油成分来看，在达到分离目标，即明显分层后，成分上无明显差异。包括不成功的 对比例1，其得到的蛋黄油成分也与前三种无明显差异，只是产率较低，前三种成功的例子 中，蛋黄油的产率在蛋黄总体积的一半以上，由图1、2、3可以看出。选择20000rpm为最优 的原因是可以在较短的时间(30min)内达到目的。 0117 而其他方法，根据以上的产物溶于水后上机测试结果可以看出，水溶液中目标物 浓度很低，甚至基本没有，说明产物水溶性很差。 0118 在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独 引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可 以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范 围。 说 明 书CN 104327935 A 1/1页 9 图1 图2 图3图4 说 明 书 附 图CN 104327935 A 。