蛋白酶体抑制剂硼替佐米及其类似物的合成方法.pdf

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1、(10)申请公布号 CN 103030656 A (43)申请公布日 2013.04.10 C N 1 0 3 0 3 0 6 5 6 A *CN103030656A* (21)申请号 201110301290.X (22)申请日 2011.09.30 C07F 5/02(2006.01) (71)申请人北京大学 地址 100191 北京市海淀区学院路38号 (72)发明人李润涛 葛泽梅 孙崎 韩利强 程铁明 (74)专利代理机构北京科龙寰宇知识产权代理 有限责任公司 11139 代理人孙皓晨 (54) 发明名称 蛋白酶体抑制剂硼替佐米及其类似物的合成 方法 (57) 摘要 本发明提供一种蛋白。

2、酶体抑制剂硼替佐米及 其类似物的合成方法。 (51)Int.Cl. 权利要求书3页 说明书18页 附图1页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 3 页 说明书 18 页 附图 1 页 1/3页 2 1.一种合成硼替佐米及其类似物的方法，包括将式(II)表示的-氨基硼酸原料 其中R 1 代表异丙基、苯基、苄基、H、甲基或其他天然或非天然氨基酸残基；与式(III) 表示的肽末端原料反应 其中R 2 代表如苯丙氨酸、亮氨酸、萘丙氨酸、色氨酸、酪氨酸或丙氨酸等天然或非天然 氨基酸的残基；R 3 代表2-吡嗪基、2-1，4-2氯苯基或叔丁氧基等； 其缩合反应采用EDC。

3、和HOBt、TBTU、DCC和HOBt、HBTU、HCTU、TCTU、HATU或PyBOP为脱 水缩合剂，以干燥的二氯甲烷、四氢呋喃、甲苯、苯、乙腈或二氧六环为溶剂，在-20-5温度 下进行，得到的产物再采用芳香族硼酸或C2-C6的脂肪族硼酸在甲醇-己烷的两相体系中 通过加入13N的盐酸进行置换得到如下式(I)的硼替佐米及类似物，式中R 1 、R 2 、R 3 的定 义同上。 2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述缩合反应的催化剂为EDC和HOBt或DCC和 HOBt，以干燥的二氯甲烷或四氢呋喃为溶剂，-15-0下反应后得到的产物，采用PhB(OH) 2 或异丁基硼酸在两相体系中进行置换得到。

4、目标化合物(I)。 3.根据权利要求2所述的方法，其中，所述缩合反应的催化剂为EDC和HOBt，以干燥的 二氯甲烷为溶剂，-10下反应后得到的产物，采用PhB(OH) 2 在两相体系中进行置换得到目 标化合物(I)。 4.根据权利要求1所述的方法，其中，R 1 代表异丙基的式(II)化合物 与R 2 代表苯基、R 3 代表2-吡嗪基的式(III)化合物 合成得到的式(I)化合物为硼替佐米。 权 利 要 求 书CN 103030656 A 2/3页 3 5.根据权利要求1所述的方法，式(II)表示的-氨基硼酸原料按照如下方法合成： 1)手性叔丁基亚磺酰亚胺的合成：将R 1 取代的醛和手性叔丁基亚。

5、磺酰胺在室温下反 应，R 1 的定义同权利要求1； 2)催化剂(ICy)CuOt-Bu的合成：制备得到ICyHCl后，在CuCl和叔丁醇钠的作用下 得到所述催化剂； 3)催化下联硼酸频哪醇酯对手性叔丁基亚磺酰亚胺的加成及脱保护：将步骤2)所得 催化剂加入步骤1)的产物中与联硼酸频哪醇酯原料反应，再用HCl的无水溶液脱除叔丁基 亚磺酰基即得到-氨基硼酸(II)。 6.根据权利要求5所述的方法，其中，步骤1)所述手性叔丁基亚磺酰亚胺的合成 R 1 的定义同权利要求1；所用溶剂选自四氢呋喃、二氯甲烷、甲苯、乙腈、二氧六环，优选 四氢呋喃或甲苯； 所用催化剂，即脱水剂，选自无水的金属硫酸盐MSO 4 。

6、，如无水CuSO 4 、无水MgSO 4 、无水 Na 2 SO 4 等，优选无水MgSO 4 或Na 2 SO 4 。 7.根据权利要求5所述的方法，其中，步骤2)所述催化剂(ICy)CuOt-Bu的合成按如下 方法： 使用2倍量的叔丁醇钠在CuCl存在下一步反应得到目标产物；所用溶剂可以是四氢呋 喃、甲苯、二氯甲烷、二氧六环等，优选四氢呋喃。 8.根据权利要求5所述的方法，其中，步骤3)催化下联硼酸频哪醇酯对手性叔丁基亚 磺酰亚胺的加成及脱保护 R 1 的定义同权利要求1； 是将步骤2)所得催化剂以甲苯、苯、四氢呋喃、二氧六环等溶剂，溶解后滴加至反应体 系中，催化反应温度在-10至20进行。

7、；中间体不经过进一步纯化直接采用HCl的无水溶 权 利 要 求 书CN 103030656 A 3/3页 4 液对保护基进行脱除，可以是HCl的乙醚溶液、乙酸乙酯溶液、二氧六环溶液等。 9.根据权利要求1所述的方法，在本发明提供的方法中，式(III)表示的肽末端原料的 合成 以L-氨基酸为原料经SOCl 2 /MeOH甲酯化后，以DCC和HOBt、TBTU、EDC和HOBt、HBTU、 HCTU、TCTU、HATU或PyBOP为缩合剂同R 3 取代的羧酸酸缩合，以干燥的二氯甲烷、四氢呋喃、 甲苯、苯、乙腈、二氧六环等溶剂，在-20至5，-5为最佳温度下反应，得到的酯中间体 以四氢呋喃作为溶剂，。

8、采用LiOH、NaOH或KOH等作为碱进行皂化反应得到式(III)所示化 合物，其中R 2 、R 3 的定义同权利要求1。 10.根据权利要求9所述的方法，是以DCC和HOBt为缩合剂，干燥的二氯甲烷，-5温 度下反应，得到的相应酯在四氢呋喃作为溶剂中，采用LiOH、进行皂化反应。 权 利 要 求 书CN 103030656 A 1/18页 5 蛋白酶体抑制剂硼替佐米及其类似物的合成方法 技术领域 0001 本发明涉及一种新的化学合成方法，具体涉及蛋白酶体抑制剂硼替佐米及其类似 物的合成方法。 背景技术 0002 硼替佐米(PS-341)，商品名为万珂(Velcade) TM 。2003年，美。

9、国食品与药物管理局 (FDA)快速审批通过了万珂用于多发性骨髓瘤(MM)的临床治疗；2005年，美国FDA和欧洲 药物评审局批准万珂用于MM首次复发后的治疗。目前，NCCN(美国国家综合癌症网络)诊 疗指南推荐万珂作为MCL(套细胞性淋巴瘤)的二线治疗用药。 0003 硼替佐米的化学名称为：(1R)-3-甲基-1-(2S)-1-氧-3-苯基-2-(吡嗪羧 基)氨基丙基氨基丁基硼酸，具体结构如下所示： 0004 0005 当前经报道的比较具有代表性意义的合成路线有两条，其区别主要在于关键原料 -氨基硼酸化合物的合成方法有所不同。 0006 合成路线之一(1.Matteson，D.S.；Ray，R。

10、.Directed chiral synthesis with pinanediol boronic esters.J.Am.Chem.Soc.1980，102，7590-7591；2.Matteson，D.S.； Arne，K.Carbanions from deprotonation of(phenylthio)alkaneboronic esters.J.Am. Chem.Soc.1978，100，1325-1326) 0007 0008 该合成路线以二氯甲烷为原料，经强碱正丁基锂脱氢然后进攻硼酸三甲酯以得到 C-B键。在(1S，2S，3R，5S)(+)-2，3-蒎烷二醇的保护下，两个氯。

11、原子分别被格式试剂和六甲 基二硅基氨基锂取代，经脱保护得到所需要的-氨基硼酸原料。其另一部分肽末端原料 说 明 书CN 103030656 A 2/18页 6 经如下方法制备： 0009 0010 当两部分原料分别拿到之后进行对接，常用缩合剂为TBTU。再经脱保护即可得到 目标分子PS-341。 0011 0012 分析硼替佐米的这一传统合成路线，可以发现其合成成本最为高昂的部分是手性 -氨基硼酸原料的合成，共需要6步反应，其中有5步反应需要在-30到-100的低温 条件下进行，同时还伴随有其他苛刻的条件和贵重的试剂的使用。 0013 首先要在-100下利用正丁基锂作为强碱将二氯甲烷上的一个质。

12、子脱掉，以进一 步和硼酸三甲酯反应生成取代的硼酸酯。该反应对温度极其敏感，控制的不好极容易发生 金属-卤素交换反应而得不到期望的产物；对于反应条件d，该步反应要求使用格式试剂作 为原料，既要求反应在-78进行的同时又要求无水无氧的反应环境，而且所用格式试剂还 需要现制现用，这些对于实验室操作而言尚可以接受，但对于工业生产来讲却是难度非常， 成本高昂；最后两步反应同样是要求低温和无水无氧，同时还应用到了较贵重的原料六甲 基二硅基氨基锂以及对仪器和设备要求较高的无水HCl的乙酸乙酯溶液，这些都无一例外 的增加了该合成路线的成本。 0014 此外，在诱导目标产物产生手性中心时，又不可避免的用到了(1。

13、S，2S，3R，5S) (+)-2，3-蒎烷二醇(3-7)这个原料，当前用于合成该原料的方法一般是采用毒性非常大的 四氧化锇(OsO4)作为催化剂，氮的氧化物作为氧化剂由天然的-蒎烯(3-6)氧化而来 3，4。剧毒四氧化锇的使用给生产和安全带来了很大麻烦，使这条路线变得更加复杂和不 适用。 0015 另一合成路线(Melissa A.Beenen，Chihui An，and Jonathan A.Ellman. Asymmetric Copper-Catalyzed Synthesis of a-Amino Boronate Esters from N-tert-Butanesulfinyl 。

14、Aldimines.J.Am.Chem.Soc.2008，130，6910-6911. 说 明 书CN 103030656 A 3/18页 7 0016 0017 该合成路线中-氨基硼酸原料的合成方法相对简洁，避免了第一条合成路线中 的苛刻反应条件，但是采用的是线性策略，使得最终产物的收率显著下降；此外，该合成路 线中制备关键中间体原料-氨基硼酸化合物时所用的催化剂(ICy)CuOt-Bu，以一价铜作 为中心金属，以一种氮杂碳烯化合物ICy作为配体。文献中报到的ICy通常以其四氟化硼 的盐的形式ICyHBF 4 使用，但由于合成困难成本非常高，其使用受到严重限制。 发明内容 0018 本发明的。

15、目的在于提供一条硼替佐米及其类似物新的合成方法，对其传统的反应 条件进行了大量的改造而形成的，以避免传统合成方法中的诸多弊端。 0019 为了达到上述目的，本发明采用如下技术方案： 0020 本发明提供一种合成硼替佐米及其类似物的方法，包括将式(II)表示的-氨基 硼酸原料 0021 0022 其中R 1 代表异丙基、苯基、苄基、H、甲基或其他天然或非天然氨基酸残基；与式 (III)表示的肽末端原料反应 0023 0024 其中R 2 代表如苯丙氨酸、亮氨酸、萘丙氨酸、色氨酸、酪氨酸或丙氨酸等天然或非 天然氨基酸的残基；R 3 代表2-吡嗪基、2-1，4-2氯苯基或叔丁氧基等； 0025 其缩。

16、合反应采用EDC和HOBt、TBTU、DCC和HOBt、HBTU、HCTU、TCTU、HATU或PyBOP 为脱水缩合剂，以干燥的二氯甲烷、四氢呋喃、甲苯、苯、乙腈或二氧六环为溶剂，在-20至 5温度下反应后得到的产物，再采用芳香族硼酸或C2-C6的脂肪族硼酸在甲醇己烷两相 体系中加入13N的盐酸进行置换得到如下式(I)的硼替佐米类似物，式中R 1 、R 2 、R 3 的定 义同上。 0026 说 明 书CN 103030656 A 4/18页 8 0027 其中，所述缩合反应的催化剂为EDC和HOBt或DCC和HOBt，以干燥的二氯甲烷或 四氢呋喃为溶剂，-15至0下反应后得到的产物，采用P。

17、hB(OH) 2 或异丁基硼酸在两相体系 中进行置换得到目标化合物。 0028 更优选的，所述缩合反应的催化剂为EDC和HOBt，以干燥的二氯甲烷为溶 剂，-10下反应后得到的产物，采用PhB(OH) 2 在两相体系中进行置换得到目标化合物。 0029 其中，式(II)表示的-氨基硼酸代表亮氨酸硼酸酯盐酸盐、苯丙氨酸硼酸酯盐 酸盐、-苯丙氨酸硼酸酯盐酸盐、甘氨酸硼酸酯盐酸盐或丙氨酸硼酸酯盐酸盐等。在本发 明优选的实施方式中，R 1 代表异丙基时式(II)的结构为 0030 0031 式(III)中的R 2 代表苯丙氨酸、亮氨酸、萘丙氨酸、色氨酸、酪氨酸或丙氨酸等天 然或非天然氨基酸的残基。在本。

18、发明优选的实施方式中，R 2 代表苯基、R 3 代表2-吡嗪基时 式(III)的结构为 0032 0033 在本发明优选的实施方式中，当R 1 为异丙基，R 2 为苯基，R 3 为2-吡嗪基时合成得 到的化合物为以下结构： 0034 0035 此化合物即为蛋白酶体抑制剂硼替佐米(PS-341)。 0036 在本发明提供的方法中，式(II)表示的-氨基硼酸原料按照如下方法合成： 0037 1)手性叔丁基亚磺酰亚胺的合成：将R 1 取代的醛和手性叔丁基亚磺酰胺在室温 下反应，R 1 的定义同权利要求1； 0038 2)催化剂(ICy)CuOt-Bu的合成：制备得到ICyHCl后，在CuCl和叔丁醇。

19、钠的作 用下得到所述催化剂； 说 明 书CN 103030656 A 5/18页 9 0039 3)催化下联硼酸频哪醇酯对手性叔丁基亚磺酰亚胺的加成及脱保护：将步骤2) 所得催化剂加入步骤1)的产物中与联硼酸频哪醇酯原料反应，再用HCl的无水溶液脱除叔 丁基亚磺酰基即得到-氨基硼酸(II)。 0040 其中，步骤1)所述亚胺的合成 0041 0042 R 1 的定义同前，所用溶剂选自四氢呋喃、二氯甲烷、甲苯、乙腈、二氧六环，优选四 氢呋喃或甲苯； 0043 所用催化剂，即脱水剂，选自无水的金属硫酸盐MSO 4 ，如无水CuSO 4 、无水MgSO 4 或 Na 2 SO 4 等，优选无水MgS。

20、O 4 或Na 2 SO 4 。 0044 其中，步骤2)所述催化剂(ICy)CuOt-Bu的合成按如下方法： 0045 0046 使用2倍量的叔丁醇钠在CuCl存在下一步反应得到目标产物；所用溶剂可以是四 氢呋喃、甲苯、二氯甲烷、二氧六环等，优选四氢呋喃。 0047 其中，步骤3)催化下联硼酸频哪醇酯的加成及脱保护 0048 0049 是将步骤2)所得催化剂以甲苯、苯、四氢呋喃、二氧六环等溶剂，溶解后滴加至反 应体系中，催化反应温度在-10至20进行。中间体不经过进一步纯化直接采用HCl的 无水溶液对保护基进行脱除，可以是HCl的乙醚溶液、乙酸乙酯溶液、二氧六环溶液等。R 1 的定义同前。 。

21、0050 在本发明提供的方法中，式(III)表示的肽末端原料的合成 0051 说 明 书CN 103030656 A 6/18页 10 0052 以L-氨基酸为原料经SOCl 2 /MeOH甲酯化后，以DCC和HOBt、TBTU、EDC和HOBt、 HBTU、HCTU、TCTU、HATU或PyBOP为缩合剂同R 3 取代的羧酸酸缩合，以干燥的二氯甲烷、四 氢呋喃、甲苯、苯、乙腈、二氧六环等溶剂，在-20至5，-5为最佳温度下反应后得到的 酯中间体；得到的相应酯在四氢呋喃作为溶剂中，采用LiOH、NaOH、KOH等作为碱进行皂化 反应得到式(III)所示化合物，其中R 2 、R 3 的定义同上。。

22、 0053 优选是以DCC和HOBt为缩合剂，干燥的二氯甲烷，-5温度下反应，得到的相应酯 在四氢呋喃作为溶剂中，采用LiOH进行皂化反应。 0054 本发明提供的方法合成蛋白酶体抑制剂硼替佐米，将-氨基硼酸原料和肽末端 原料分别制备，最后再进行对接和脱保护得到目标化合物。在关键中间体-氨基硼酸化 合物的合成当中，采用了简洁的催化方式，将昂贵的催化剂改造为易于制备并且价格低廉 的催化剂，大大降低了整个路线的合成成本。经计算，不考虑原料的成本问题，总收率为 40。而合成路线1(Matteson，D.S.的方法)的总收率不足10；合成路线2(Melissa A.Beenen的方法)的总收率约为21。

23、。 附图说明 0055 图1为本发明的优选实施例硼替佐米PS-341的合成路线图。 0056 缩略语 0057 EDC：1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺 0058 HOBt：1-羟基苯并三唑 0059 TBTU：O-苯并三氮唑-N，N，N，N-四甲基脲四氟硼酸盐 0060 DCC：二环己基碳二亚胺 0061 HBTU：苯并三氮唑-N，N，N，N-四甲基脲六氟磷酸盐 0062 HCTU：6-氯苯并三氮唑-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸酯 0063 TCTU：O-(6-氯苯并三氮唑-1-基)-N，N，N，N-四甲基脲四氟硼酸盐 0064 HATU：2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N，N，N。

24、，N-四甲基脲六氟磷酸酯 0065 PyBOP：六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基 具体实施方式 0066 本发明提供了蛋白酶体抑制剂硼替佐米及其类似物的新合成方法，图1所示的为 典型代表化合物硼替佐米的合成方法，分步骤介绍如下： 0067 1、亚胺的合成 0068 0069 该步反应一般文献介绍所用脱水剂为无水CuSO 4 ，由于无水CuSO 4 的使用是大过量 的，反应完毕后首先要除去颗粒细密的硫酸铜固体才能进行柱层析。但粗品直接过滤乃至 抽滤都会堵塞滤纸以致过滤不能，若是采用带有隔板的抽滤仪器，则会发现硫酸铜固体仍 然混悬在滤液当中。经实验发现无水MgSO 4 或Na 2 SO 4。

25、 亦能非常好的催化该反应进行且后处 理极为方便。此外，除了文献报道的常用的二氯甲烷溶剂，优选四氢呋喃或甲苯作为溶剂能 说 明 书CN 103030656 A 10 7/18页 11 够使反应更高收率更快的进行，反应时间缩短了一半以上，且收率有所提高。 0070 R 1 代表异丙基、苯基、苄基、H、甲基或其他天然或非天然氨基酸残基；其他取代的 醛同(R)-(+)叔丁基亚磺酰胺的反应与此类似，可以得到的化合物有如下几种(包括但不 限于)： 0071 0072 2、催化剂的制备 0073 0074 首先根据其他文献(CN1216536A)完成ICyHCl合成； 0075 0076 在已有文献中，目标。

26、产物(ICy)CuOt-Bu的合成采用两步完成，即第一步先将 ICyHCl转化为(ICy)CuCl，然后在叔丁醇钠的作用下转化为所需要的催化剂。本发明中直 接使用2倍量的叔丁醇钠一步反应得到目标产物，仍能很好的得到催化剂(ICy)CuOt-Bu， 既缩短了反应时间，又简化了反应步骤。 0077 3、催化下联硼酸频哪醇酯的加成及脱保护 0078 0079 上一步得到的催化剂不经进一步纯化，以甲苯、苯、四氢呋喃、二氧六环等(优选 甲苯)溶解后直接滴加至该加成反应体系中进行催化。催化剂(ICy)CuOt-Bu相对不稳定， 该反应的反应温度越低越有利，当反应温度降至0甚至更低，收率更高。产物经柱层析后。

27、 说 明 书CN 103030656 A 11 8/18页 12 用HCl的无水乙醚溶液、乙酸乙酯溶液或二氧六环溶液(优选HCl的无水乙酸乙酯溶液) 脱除叔丁基亚磺酰基。 0080 所得关键中间体带保护的氨基硼酸酯有相应如下几种(包括但不限于)： 0081 0082 4、肽末端原料的合成 0083 0084 以L-氨基酸为原料经SOCl 2 /MeOH甲酯化后，以DCC和HOBt为缩合剂同R 3 取代的 羧酸缩合，以干燥的二氯甲烷在-5为最佳温度下反应后得到的酯中间体；得到的相应酯 在四氢呋喃作为溶剂中，采用LiOH作为碱进行皂化反应得到式(III)所示化合物。 0085 R 2 代表如苯丙氨。

28、酸、亮氨酸、萘丙氨酸、色氨酸、酪氨酸或丙氨酸等天然或非天然 氨基酸的残基；R 3 代表2-吡嗪基、2-1，4-2氯苯基或叔丁氧基等。采用本发明方法所得肽 末端原料有以下几种(包括但不限于)： 0086 说 明 书CN 103030656 A 12 9/18页 13 0087 5、对接及脱保护 0088 以R 1 为异丙基，R 2 为苯基，R 3 为2-吡嗪基时合成得到硼替佐米(PS-341)为例： 0089 0090 在这一步反应中，许多文献采用TBTU为缩合剂，收率较低。而用传统的DCC/HOBt 形成酰胺键的方法时，有时会发生药效团硼酸酯发生C-B键断裂的副反应。本发明采用 EDC/HOB。

29、t为复合缩合剂，以干燥的二氯甲烷为溶剂，在-10下反应可以达到75以上的 收率。在第二步反应中采用了PhB(OH) 2 或C2-C6的脂肪族硼酸在甲醇己烷的两相体系中 通过加入13N的盐酸进行置换的方法，成功地高收率、条件温和反应地得到了最终的目 标产物PS-341。 0091 以下通过具体的实验例来进一步说明本发明。 0092 实施例1 0093 (R)-N-叔丁基亚磺酰基-3-甲基-1-丁基亚胺 0094 0095 在100ml烧瓶中加入40mL甲苯，室温下分别加入1.2ml(11mmol)异戊醛、 1.2g(10mmol)叔丁基亚磺酰胺和4g(27mmol)的无水硫酸钠，搅拌48h以上。。

30、后处理为，经 说 明 书CN 103030656 A 13 10/18页 14 硅藻土滤去过量的不容物，有机相旋干直接柱层析(PE200ml换PEEA201至完全 出完)得到产物为无色油状物1.77g，具有特殊的发甜的气味，收率95。 1 H NMR(400MHz， CDCl 3 )8.06(t，J5.1Hz，IH)，2.42(t，J5.9Hz，2H)，2.07(dp，J13.6，6.8Hz，IH)， 1.21(d，J7.8Hz，9H)，1.00(d，J6.5Hz，6H). 0096 实施例2 0097 2-氯-1，3-二环己基-2，3-二氢-1H-咪唑(ICyHCl) 0098 0099 于。

31、500ml圆底烧瓶中注入100毫升甲苯，加入9.92g(100mmol)环己胺及 3g(100mmol)多聚甲醛同时剧烈搅拌。室温下反应30min后冰浴至0，进一步加入 9.92g(100mmol)环己胺，在冷却和剧烈搅拌下，缓慢的滴加30ml 3.3mol/L的HCl水溶液 (100mmol)。然后移开冷却装置，缓慢加入14.5毫升的40的乙二醛水溶液(100mmol)，并 在50下搅拌过夜即可得到所需化合物，收率：60-80，熔点：256-257。 1 H NMR(400MHz， CDCl 3 )10.98(s，IH)，7.46(s，2H)，4.57(tt，J11.8，3.6Hz，2H)，。

32、2.22(d，J11.0Hz， 4H)，2.03-1.65(m，10H)，1.57-1.17(m，6H). 0100 实施例3 0101 (ICy)CuOtBu 0102 0103 100ml茄形瓶中加入100mg(3.7mmol)实施例2制备的ICyHCl，氯化亚铜 46mg(46mmol)及叔丁醇钠90mg(93mmol)，然后注入约20ml无水四氢呋喃，氩气保护，在室 温下反应5h以上即可反应完毕，后处理为用硅藻土过滤，有机相旋干得浅棕色发泡状固 体，不经纯化和后处理直接用于下一步催化反应。 0104 实施例4 0105 (R)-N-叔丁基亚磺酰基-3-甲基-1-频哪醇二酯硼基-1-丁基。

33、亚胺 0106 0107 室温下于100ml茄形瓶中加入40ml甲苯，加入实施例1的亚胺2g(10.6mmol)和 联硼酸频那醇酯原料2.5(9.8mmol)g，将实施例3所得催化剂溶于适量甲苯，滴入到本反应 液中，反应24h以上，薄层层析监测反应进程。后处理：有机相用饱和碳酸钠20mL洗涤，充 分静置后分得有机相，水层用乙酸乙酯反淬后合并有机相，无水硫酸钠干燥后进行柱层析 说 明 书CN 103030656 A 14 11/18页 15 (CH 2 Cl 2 EA41)，若纯度不够可进行第二次柱层析，得无色油状物2.56g，收率80。 1 H NMR(400MHz，CDCl 3 )3.08(。

34、t，J5.8Hz，2H)，1.72(dt，J13.4，6.7Hz，1H)，1.54(ddt， J21.6，14.4，7.2Hz，2H)，1.26(s，6H)，1.25(s，6H)，1.19(s，9H)，0.92(d，J6.6Hz，6H). 0108 实施例5 0109 (R)-3-甲基-1-频哪醇二酯硼基-1-丁基胺盐酸盐 0110 0111 100ml茄形瓶中取少量乙酸乙酯溶解1g(3.15mmol)实施例4的产物，冰浴下滴入 自制的HCl的乙酸乙酯溶液10ml(1.38N，13.8mmol)，很快出现白色固体，2h反应完全，过滤 并重结晶得白色固体0.65g，收率84。熔点：190-191。

35、(178-179时变为针状晶体)。 1 H NMR(400MHz，CDCl 3 )8.25(s，3H)，2.91(dd，J12.7，6.8Hz，1H)，1.90(dt，J13.4， 6.7Hz，1H)，1.77(dt，J15.2，7.7Hz，1H)，1.70-1.53(m，1H)，1.26(d，J15.5Hz，12H)， 0.95(d，J6.5Hz，6H). 0112 实施例6 0113 L-苯丙氨酸甲酯盐酸盐 0114 0115 在100mL反应瓶中加入25mL无水甲醇，冰盐浴冷却到-10以下，搅拌下缓慢滴加 SOCl 2 (7mL，96mmol)，然后于-10下反应10min，再加入L-苯。

36、丙氨酸(1.65g，10mmol)，反应 40min。撤去冰盐浴，室温反应48h，减压浓缩，再加入15mL甲醇，反复减压浓缩两次。加入 50mL乙醚，放置，析出针状结晶，过滤干燥，粗产品用甲醇-乙醚重结晶，得白色晶体2.0g， 收率95，熔点：155-158。 0116 实施例7 0117 N-吡嗪甲酰-L-苯丙氨酸甲酯 0118 0119 将实施例6的L-苯丙氨酸甲酯盐酸盐(1.12g，5.2mmol)溶于20mL THF中，用 N-甲基吗啉(NMM)(0.7mL，6.2mmol)中和，于冰浴下冷却备用。在另一反应瓶中加入吡嗪甲 酸(0.65g，5.2mmol)，用20mL THF溶解，冰水。

37、浴冷却，于0加入二环己基碳二亚胺(DCC) (1.07g，5.2mmol)，HOBt(0.84g，6.2mmol)，于0反应40min，然后加入L-苯丙氨酸甲酯盐 酸盐的THF溶液，TLC检测反应，2h后反应完毕，过滤除去不溶物N，N-二环己基脲(DCU)， 滤液加入乙酸乙酯150mL，依次用5NaHCO 3 溶液、10的柠檬酸溶液、5NaHCO 3 溶液、饱 说 明 书CN 103030656 A 15 12/18页 16 和食盐水洗。乙酸乙酯层用无水Na 2 SO 4 干燥，过滤，减压蒸除溶剂，得白色固体产物1.37g， 收率98，熔点：152-155。 1 H-NMR(CDCl 3 ，4。

38、00MHz)3.26(m，2H)，3.75(s，3H)，5.09(m， 1H)，7.157.32(m，5H)，8.23(d，1H)，8.52(d，1H)，8.74(d，1H)，9.37(s，1H). 0120 实施例8 0121 N-吡嗪甲酰-L-苯丙氨酸 0122 0123 将实施例7的N-吡嗪甲酰-L-苯丙氨酸甲酯(1.0g，3.51mmol)溶于10mL丙酮 中，冰浴下缓慢滴加2N的LiOH至pH值为1213，继续保持冰浴中反应，TLC检测，2h后 反应完毕。冰浴下滴加盐酸至pH值为23，产生大量白色固体，过滤，滤饼用水、乙醚洗涤 后烘干，得白色固体产物1c 0.89g，收率93.6。熔。

39、点：166-169. 1 H NMR(400MHz，CDCl 3 ) 9.37(s，1H)，8.76(s，1H)，8.53(s，1H)，8.22(d，J8.1Hz，1H)，7.25(dt，J16.6， 7.2Hz，5H)，5.12(dd，J13.8，6.2Hz，1H)，3.31(dd，J20.6，14.1，6.0Hz，2H). 0124 实施例9 0125 N-吡嗪甲酰-L-苯丙氨酰-L-亮氨酸硼酸频哪醇酯 0126 0127 将实施例8的N-吡嗪甲酰-L-苯丙氨酸(0.54g，2mmol)溶于20mL无水二氯甲烷 中，将体系冷却至-30后加入HOBt(0.3g，2.2mmol)，反应10mi。

40、n后加入1-(3-二甲氨基丙 基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCHCl 0.57g，3mmol)继续反应30min，保持-30滴入 N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)(0.44mL，2.5mmol)中和并加入实施例5的a-氨基硼酸的盐酸 盐(0.63g，2mmol)反应过夜后缓慢升至室温，再反应2h以上反应完毕，反应液直接用饱和 食盐水洗涤2次，有机层用无水Na 2 SO 4 干燥，过滤，减压蒸除溶剂，经柱层析得无水油状物 0.71g，收率76。 1 H NMR(400MHz，CDCl 3 )9.22(d，J1.3Hz，1H)，8.63(d，J2.3Hz， 1H)，8.42(dd，J2.5，。

41、1.5Hz，1H)，8.32(d，J8.3Hz，1H)，7.20-7.06(m，5H)，6.33(d，J 4.3Hz，1H)，4.80(q，J7.0Hz，1H)，3.11(d，J7.0Hz，2H)，2.96(td，J7.5，5.1Hz，1H)， 1.41-1.31(m，1H)，1.28(t，J7.2Hz，2H)，1.18-1.14(m，14H)，0.73(dd，J8.8，6.5Hz， 6H). 13 C NMR(101MHz，CDCl 3 )170.96，162.81，147.41，144.23，143.99，142.74，136.38， 129.44，128.55，126.93，83.12，。

42、53.75，39.66，38.49，25.41，24.87，22.98，21.96. 0128 实施例10 0129 N-吡嗪甲酰-L-苯丙氨酰-L-亮氨酸硼酸(PS-341) 0130 说 明 书CN 103030656 A 16 13/18页 17 0131 取1mmol未脱保护的实施例9化合物，溶于15ml无水甲醇中，剧烈搅拌下加 入2.5mmolPhB(OH) 2 后加入15ml正己烷。5分钟后加入1N盐酸15ml保持剧烈搅拌， 反应6h以上，TLC检测反应完毕后静置反应液使之分层，分去正己烷层后再用正己烷洗 320ml次，醇水层用二氯甲烷萃取320ml，合并二氯甲烷并用无水硫酸钠干燥。

43、。柱层 析进行提纯，乙酸乙酯换乙酸乙酯甲醇21，得到泡沫状黄白色固体0.34g，收率 90，熔点：122-125。 1 H NMR(400MHz，CDCl 3 )9.24(s，1H)，8.73(d，J2.0Hz，1H)， 8.48(s，2H)，8.37(s，1H)，8.11(d，J6.5Hz，2H)，7.48-7.37(m，3H)，7.24(dd，J8.0， 6.8Hz，2H)，5.20(ddt，J23.1，14.1，6.9Hz，1H)，3.29(ddd，J25.3，15.1，9.0Hz，2H)， 1.34(s，2H)，1.36-1.20(m，1H)，0.79(ddd，J19.1，12.7，6。

44、.1Hz，6H). 13 C NMR(101MHz， CDCl 3 )174.66，162.43，147.04，143.26，133.90，129.76，128.69，128.40，127.88， 126.47，49.67，38.13，37.26，25.18，24.93，21.99，21.39，21.17.HRMS(ESI + )Caled for： C 19 H 25 BN 4 O 4 S(M+Na) + 407.18668，found：407.18611. 0132 实施例11 0133 1-B-频哪醇酯-叔丁基亚磺酰苯乙胺 0134 0135 采用苯乙醛、叔丁基亚磺酰胺和联硼酸频那醇酯为。

45、原料按实施例(1-4)的方法制 备得到。 0136 1 H NMR(400MHz，CDCl3)：1.10(s，15H)，1.12(s，6H)，2.92(m，2H)，3.12(d，J1 6.4Hz，1H)，3.27(dt，J17.0Hz，J 26.9Hz，1H)，7.12-7.20(m，1H). 13 C NMR(100MHz， CDCl3)：22.5，24.4，24.8，39.2，43.9(br)，56.0，84.0，126.5，128.3，129.4，138.2.Exact mass calcd for C18H31BNO3S requires m/z 352.2118，found m/z 。

46、352.2112(MH+，FAB). 0137 实施例12 0138 1-B-频哪醇酯-叔丁基亚磺酰苯丙胺 0139 0140 采用苯丙醛、叔丁基亚磺酰胺和联硼酸频那醇酯为原料按实施例(1-4)的方法制 说 明 书CN 103030656 A 17 14/18页 18 备得到。 0141 1 H NMR(400MHz，CDCl3)：1.19(s，9H)，1.27(s，6H)，1.28(s，6H)，2.03(m，2H)， 2.62-2.80(m，2H)，3.10(dt，J16.7Hz，J2J36.8Hz，1H)，3.28(d，J6.7，1H)， 7.15-7.29(m，5H). 13 C NMR。

47、(100MHz，CDCl3)：22.4，24.4，24.9，33.0，35.3，42.8，55.9， 84.0，125.7，128.2，128.4，141.7.Exact mass calcd for C19H33BNO3S requires m/z 366.2274，found m/z 366.2269(MH+，FAB). 0142 实施例13 0143 1-B-频哪醇酯-叔丁基亚磺酰异丁胺 0144 0145 采用异丁醛、叔丁基亚磺酰胺和联硼酸频那醇酯为原料按实施例(1-4)的方法制 备得到。 0146 1 H NMR(400MHz，CDCl3)：0.97(d，J7.0Hz，3H)，0.9。

48、9(d，J6.9Hz，3H)， 1.19(s，9H)，1.40(s，6H)，1.41(s，6H)，1.99(m，1H)，2.89(dd，J16.9Hz，J25.7Hz，1H)， 3.29(d，J6.9Hz，1H). 13 C NMR(100MHz，CDCl3)：19.7，20.2，22.7，24.7，25.3，32.0， 50.0，56.4，84.1.Exac mass calcd for C14H31BNO3S requires m/z304.2118，found m/z 304.2123(MH+，FAB). 0147 实施例14 0148 1-B-频哪醇酯-1-环己基-叔丁基亚磺酰胺 0149 0150 采用1-环甲醛、叔丁基亚磺酰胺和联硼酸频那醇酯为原料按实施例(1-4)的方法 制备得到。 0151 1 H NMR(400MHz，CDCl3)：1.04(m，3H)，1.17(s，9H)，1.22(m，1H)，1.。