从中药鬼箭羽中提取的化合物及其用途.pdf

《从中药鬼箭羽中提取的化合物及其用途.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《从中药鬼箭羽中提取的化合物及其用途.pdf（10页完整版）》请在专利查询网上搜索。

1、(10)申请公布号 CN 102827179 A (43)申请公布日 2012.12.19 C N 1 0 2 8 2 7 1 7 9 A *CN102827179A* (21)申请号 201210329622.X (22)申请日 2012.09.09 C07D 493/04(2006.01) A61K 31/366(2006.01) A61P 3/04(2006.01) (71)申请人浙江大学 地址 310027 浙江省杭州市西湖区浙大路 38号 (72)发明人程翼宇 王毅 张玉峰 (74)专利代理机构杭州求是专利事务所有限公 司 33200 代理人张法高 赵杭丽 (54) 发明名称 从中药。

2、鬼箭羽中提取的化合物及其用途 (57) 摘要 本发明一种从中药鬼箭羽中提取的化合物， 化学名为：(2R,3S)-trans-8-(2“-carbonyl-4“, 5“-dihydroxy)-phenyl-7“,7-lactonecatechin。 是通过从鬼箭羽的粗提物中经过反复的硅胶柱层 析分离得到的一个多酚类新化合物。经3T3-L1细 胞验证具有抑制3T3-L1脂肪细胞分化的功能，抑 制甘油三酯的产生，可制备治疗及预防肥胖相关 疾病的药物。 (51)Int.Cl. 权利要求书1页 说明书4页 附图4页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 。

3、4 页 附图 4 页 1/1页 2 1.一种从中药鬼箭羽中提取的化合物， 其化学名为 (2R,3S) -8- (2“-carbonyl-4“,5“ -dihydroxy)-phenyl-7“,7-lactonecatechin， 结构式为 ： 。 2.根 据 权 利 要 求 1所 述 的 一 种 从 中 药 鬼 箭 羽 中 提 取 的 化 合 物 的 制 备 方 法， 其 特 征 在 于， 通过以下步骤实现 ： （1） 干燥的鬼箭羽药材， 加入 8倍量的体积比为 90%的乙醇加热回流提取 2-3次， 合并 滤液， 减压浓缩得浸膏 ； （2） 将浸膏分散在水中， 依次用石油醚、 二氯甲烷、 乙酸。

4、乙酯和正丁醇反复多次萃取， 减 压浓缩得各部分的萃取物 ； （3） 将 乙 酸 乙 酯 萃 取 物 进 行 硅 胶 柱 分 离， 按 照 石 油 醚 :乙 酸 乙 酯 :甲 醇 为 65:35:0, 50:50:0, 25:75:0, 0:100:0, 0:90:10, 0:70:30, 0:50:50, 0:0:100进行梯度洗脱， 减 压浓缩得组分 A， B， C， D， E， F， G， H， I， J， K； （4） 将组分 C反相色谱分离梯度洗脱， 每 500mL收集一流分， 得 20流分， 其中第 6和第 7流分经制备色谱分离得化合物 I。 3.根据权利要求 1所述的化合物在制备治。

5、疗与预防肥胖的药物中的应用。 4.根 据 权 利 要 求 3所 述 的 应 用， 其 特 征 在 于， 所 述 药 物 按 照 药 剂 学 上 记 载 的 方 法 制 成 制剂。 5.根据权利要求 4所述的应用， 其特征在于， 所述药物的制剂形式为液体制剂、 固体制 剂、 胶囊剂、 胶丸剂。 权 利 要 求 书CN 102827179 A 1/4页 3 从中药鬼箭羽中提取的化合物及其用途 技术领域 0001 本 发 明 为 植 物 化 学 领 域， 具 体 属 于 中 药 有 效 成 分 的 提 取、 分 离 与 制 备 工 艺 领 域， 尤 其涉及中药鬼箭羽中提取分离具有药理活性的化合物及其。

6、应用。 背景技术 0002 脂肪组织是机体的重要能量储存器官， 脂肪细胞在脂肪组织中约占 1/3， 脂肪细胞 的 分 化 异 常 将 导 致 其 数 目 的 异 常 增 多、 脂 质 的 过 多 堆 积， 继 而 导 致 肥 胖、 糖 尿 病、 高 脂 血 症 和 动 脉 粥 样 硬 化 等。 鬼 箭 羽 是 卫 矛 科 卫 矛 属 植 物 卫 矛 具 翅 状 物 的 枝 条 或 翅 状 附 属 物， 具 有 破血， 杀虫， 通经等功效。 用于治疗经闭产后瘀滞腹痛跌打损伤虫积腹痛等。 民间用 鬼箭羽治疗肺心痛、 心绞痛及糖尿病取得了较好的效果。 发明内容 0003 本 发 明 的 目 的 是 。

7、提 供 从 中 药 鬼 箭 羽 中 提 取 的 化 合 物 （ 化 合 物 I） ， 其 化 学 名 为 (2R,3S) -8- (2“-carbonyl-4“,5“-dihydroxy)-phenyl-7“,7-lactonecatechin， 结 构 式 如下 ： 上述化合物通过以下步骤的制备方法获得 ： （1） 干燥的鬼箭羽药材， 加入 8倍量的体积比为 90%的乙醇加热回流提取 2-3次， 合并 滤液， 减压浓缩得浸膏 ； （2） 将浸膏分散在水中， 依次用石油醚、 二氯甲烷、 乙酸乙酯和正丁醇反复多次萃取， 减 压浓缩得各部分的萃取物 ； （3） 将 乙 酸 乙 酯 萃 取 物 进 。

8、行 硅 胶 柱 分 离， 用 石 油 醚 :乙 酸 乙 酯 :甲 醇 （65:35:0, 50:50:0, 25:75:0, 0:100:0, 0:90:10, 0:70:30, 0:50:50, 0:0:100） 进行梯度洗脱， 减 压浓缩得组分 A， B， C， D， E， F， G， H， I， J， K; （4） 将组分 C反相色谱分离梯度洗脱， 每 500mL收集一流分， 得 20流分， 其中第 6和第 7流分经制备色谱分离得化合物 ； 说 明 书CN 102827179 A 2/4页 4 （5） 3T3-L1细胞实验证明该化合物能显著的抑制甘油三酯在细胞内产生。 0004 本 发 。

9、明 的 再 一 个 目 的 是 提 供 该 鬼 箭 羽 中 化 合 物 I在 制 备 治 疗 与 预 防 肥 胖 的 药 物 中的应用。 0005 本 发 明 的 化 合 物 I可 以 作 为 活 性 成 分， 加 入 药 剂 学 上 接 受 的 药 物 赋 形 剂 或 载 体， 按照药剂学上记载的方法制成制剂。 0006 所述药物的制剂形式包括液体制剂、 固体制剂、 胶囊剂、 胶丸剂。 包括注射液、 滴注 液、 粉 针 剂、 颗 粒 剂、 片 剂、 冲 剂、 散 剂、 口 服 液、 糖 衣 片 剂、 薄 膜 衣 片 剂、 肠 溶 衣 片 剂、 胶 囊 剂、 硬 胶 囊 剂、 软 胶 囊 剂、。

10、 口 含 剂、 颗 粒 剂、 丸 剂、 膏 剂、 丹 剂、 喷 雾 剂、 滴 丸 剂 、 崩 解 剂、 口 崩 片、 微丸等。 0007 本 发 明 的 有 益 效 果 为 ：首 次 公 开 了 中 药 材 鬼 箭 羽 中 一 种 新 化 合 物 的 结 构。 本 发 明 通 过 对 鬼 箭 羽 化 学 成 分 进 行 研 究， 从 中 分 离 得 到 的 一 个 多 酚 类 新 化 合 物， 经 3T3-L1细 胞 验 证 具 有 抑 制 3T3-L1脂 肪 细 胞 分 化 的 功 能， 抑 制 甘 油 三 酯 的 产 生， 可 用 于 肥 胖 相 关 疾 病 的 预 防及治疗。 附图说明 。

11、0008 图 1是化合物氢谱。 0009 图 2是化合物碳谱。 0010 图 3是化合物的 DEPT谱。 0011 图 4是化合物的 HSQC谱。 0012 图 5是化合物的 HSBC谱。 0013 图 6是化合物的 HC远程相关图。 0014 图 7为模型组、 白黎卢组和化合物组所产生的脂肪油滴数量。 具体实施方式 0015 本发明结合附图和实施例作进一步的说明。 0016 实施例 1 本发明化合物的制备 1.鬼 箭 羽 乙 醇 提 取 物 的 制 备 ：称 取 干 燥 的 鬼 箭 羽 药 材 9Kg， 加 入 8倍 量 90%的 乙 醇， 加 热回流提取， 过滤， 合并提取液， 并减压浓缩。

12、干燥备用。 0017 2.鬼 箭 羽 活 性 成 分 液 液 萃 取 的 分 离 纯 化 ： 将 浸 膏 分 散 于 水 中， 并 分 别 用 石 油 醚， 二氯甲烷， 乙酸乙酯， 正丁醇萃取， 得石油醚， 二氯甲烷， 乙酸乙酯正丁醇萃取物。 0018 3.乙 酸 乙 酯 萃 取 物 的 柱 层 析 分 离 纯 化 ：将 乙 酸 乙 酯 萃 取 物 用 正 相 硅 胶 进 行 分 离， 以 石 油 醚 ：乙 酸 乙 酯 ：甲 醇 作 为 洗 脱 剂， 每 1000mL收 集 一 瓶， 经 TLC检 测， 硫 酸 乙 醇 溶 液 显 色， 合并相同组分， 共得 11个组分， 分别命名为 Fr. 。

13、A， Fr. B， Fr. C， Fr. D， Fr. E， Fr. F， Fr. G， Fr. H， Fr. I， Fr. J， Fr. K。 0019 4.将组分 C反相硅胶分离， 已甲醇 ：水 （1:9, 2:8, 3:7, 4:6, 5:5, 6:4, 7:3, 8:2, 10:0） 梯度洗脱， 每个梯度洗脱 2L， 每 500mL收集一瓶， 共 20瓶， 第 6和第 7瓶经制备 液相分离得到化合物。 0020 5.理化与光谱数据 （1） HRESIMS : M/Z 423.0716 M-H (cal for 423.0722)； 说 明 书CN 102827179 A 3/4页 5 。

14、（2） UV (MeOH) max 204， 232， 266， 344nm； （3） IR(KBr压片 )： 3246, 1685, 1613, 1522, 1444, 1211, 1070 cm -1 ； （4） 化 合 物 I的 氢 谱 如 附 图 1所 示。 具 体 数 值 为 ： 1 H NMR(500 MH Z ， DMSO， ppm)： 5.12 (1H, d, J=5.0, H2), 4.14(1H, m, H3), 2.62(1H, dd, J=16.71, 5.20, H4 ), 2.55(1H, dd, J=16.70, 4.75, H4), 6.40(1H, s, H6。

15、), 6.73(1H, d, J=1.7, H 2), 6.72(1H, d, J=8.35, H 5), 6.63(1H, dd, J=8.20, 1.75 H 6), 8.30(1H, s, H3“), 7.56(1H, s, H6)； （5） 化 合 物 I 的 碳 谱 如 附 图 2 所 示。 具 体 数 值 为 ： 13 C NMR(125 MH Z ， DMSO， ppm):81.2(C 2), 65.1(C 3), 26.0(C 4), 156.4(C 5), 95.5(C 6), 150.8(C 7), 99.8(C 8), 152.7(C 9), 105.0(C 10), 1。

16、30.6(C 1), 113.8(C 2), 145.5(C 3), 145.3(C 4), 116.0(C 5), 117.4(C 6), 129.4(C 1“), 111.4(C 2“), 113.1(C 3“), 145.3(C 4“), 152.9(C 5“), 114.8(C6“), 160.9(C7“)； （6） 化合物 I的 DEPT谱如附图 3所示， 化合物 I的 HSQC谱如附图 4所示， 化合物 I的 HSBC谱如附图 5所示， 化合物 I的 HC远程相关图如附图 6所示。 通 过 1 H- NMR， 13 C-NMR 和二维谱 HSQC， HMBC及 CD谱确定化合物的结。

17、构为 ： (2R,3S)- 8- (2“-carbonyl-4“,5“-di hydroxy)-phenyl-7“,7-lactonecatechin 。 0021 实施例 2 化合物的 3T3-L1细胞分化抑制活性测定 1.实验材料 ： （1） 实施例 1分离得到的新化合物， （2） 3T3-L1细胞 ：购自美国菌种保存中心 （ 保存登记号为 CL-173） ， (3)试 剂 ： DMEM培 养 基， 胎 牛 血 清， 96孔 板， 胰 岛 素， DMSO,地 塞 米 松， 3-异 丁 基 -1-甲 基黄嘌呤。 0022 2.方法 : （1） 3T3-L1脂肪细胞的诱导分化 ： 将 3T3-。

18、L1前 脂 肪 细 胞 置 于 含 10%的 胎 牛 血 清 的 DMEM培 养 基 中， 37 ,5%CO 2 的 条 件 下 培 养。 将 细 胞 按 410 4 个 每 孔 种 于 24孔 板 中 培 养 48小 时 ；然 后 加 入 0.5mmol 3-异 丁 基 -1-甲基黄嘌呤、 0.5mol地塞米松、 5g/ml的胰岛素和 10%胎牛血清的 DMEM培养基， 并 说 明 书CN 102827179 A 4/4页 6 加入 25mol化合物培养 48小时 ；然后将胰岛素换为 10g/ml培养液再培养 48小时 ；接 着将培养基换成 10%的胎牛血清和 25mol化合物并不含胰岛素的。

19、 DMEM培养基中继续培 养 4天， 并 每 两 天 更 换 一 次 培 养 基 ；第 10天 时 用 油 红 O染 色 细 胞 内 产 生 的 脂 肪 油 滴。 白 黎 卢醇作为阳性对照组 ；模型组为不加化合物的诱导培养基培养 ； 。 0023 3.实验结果 ： 移去培养基， 并用 PBS洗涤细胞， 3.7%的甲醛固定 1h, 0.5%的油红 O的异丙醇溶液用 水 3:2稀释， 过滤除菌， 加至细胞染色 30分钟， 弃去， 70%乙醇洗一遍， 用异丙醇溶解脂肪细 胞的油红 0染料后， 在 490nm波长下用酶标仪检测吸光度， 结果发现该化合物和白黎卢醇 均 能 显 著 的 抑 制 细 胞 内。

20、 脂 肪 油 滴 的 产 生， 其 中 诱 导 组 所 产 生 的 脂 肪 油 滴 的 数 量 定 位 100%， 而加入白藜芦醇和化合物的培养基中， 脂肪油滴的数量分别降低至 79.7%， 79.9%。 结果参 见图 7。 0024 本发明涉及的参考文献 ： 1.刘 新 迎， 周 联， 梁 瑞 艳， 曹 柳 英， 王 培 训， 柚 皮 苷 对 前 脂 肪 细 胞 3T3-L1增 值 和 诱 导 分 化的影响 中药新药与临床药理， 2007.18(3):p.176-179。 0025 2.王萍， 鬼箭羽抗心肌缺血作用及化学成分研究， 2004， 黑龙江中医药大学。 说 明 书CN 102827179 A 1/4页 7 图 1 图 2 说 明 书 附 图CN 102827179 A 2/4页 8 图 3 图 4 说 明 书 附 图CN 102827179 A 3/4页 9 图 5 图 6 说 明 书 附 图CN 102827179 A 4/4页 10 图 7 说 明 书 附 图CN 102827179 A 10 。