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1、(10)申请公布号 CN 104292355 A (43)申请公布日 2015.01.21 C N 1 0 4 2 9 2 3 5 5 A (21)申请号 201410628520.7 (22)申请日 2014.11.11 C08B 37/00(2006.01) (71)申请人济南凯因生物科技有限公司 地址 250100 山东省济南市历城区华信路 389号巨匠大厦401 (72)发明人迟宗磊 藏伟功 丁振洋 (54) 发明名称 一种桔梗多糖的提取方法 (57) 摘要 本发明属于多糖提取技术领域，具体涉及一 种桔梗多糖的提取方法。一种桔梗多糖的提取方 法，包括下述的步骤：选择晒干的桔梗，粉碎后过。
2、 40-80目筛，得桔梗粉，在桔梗粉中加水并搅拌均 匀，桔梗粉与水的重量比例为15-10，在水中 浸泡8-16小时，加入纤维素酶酶解，再加入无花 果蛋白酶和菠萝蛋白酶，在微波条件下酶解，酶解 后浓缩并脱色，离心，取上清液浓缩醇沉，再离心， 采用乙醇清洗沉淀，冷冻干燥后并粉碎，得桔梗多 糖。采用本发明的方法从桔梗中提取多糖，采用酶 作用条件温和，采用各种不同的酶将桔梗中的脂 肪、纤维素酶解，将其中的多糖提取出来，提高了 桔梗的利用率，采用本发明的方法得到多糖得率 高，而且纯度也高。 (51)Int.Cl. 权利要求书2页 说明书5页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权。
3、利要求书2页 说明书5页 (10)申请公布号 CN 104292355 A CN 104292355 A 1/2页 2 1.一种桔梗多糖的提取方法，包括下述的步骤： 选择晒干的桔梗，粉碎后过40-80目筛，得桔梗粉，在桔梗粉中加水并搅拌均匀，桔梗 粉与水的重量比例为1：5-10，在水中浸泡8-16小时，加入纤维素酶，纤维素酶的添加量为 0.5-0.9、酶解温度45、pH值5，将上述的原料置于微波提取设备中提取，微波的功率为 400-600W，频率为800MHZ，酶解0.1-0.5h； 再加入无花果蛋白酶和菠萝蛋白酶，无花果蛋白酶的加入量为0.2-0.6%，菠萝蛋白酶 的加入量为0.2-0.5%。
4、，酶解温度45、pH值5.5-6.5，将上述的原料置于微波提取设备中 提取，微波的功率为400-600W，频率为800MHZ，酶解0.1-0.5h，酶解后在100-105下灭酶 5-10min，得酶解液； 将上述的酶解液置于真空浓缩器中浓缩，减压低温浓缩至酶解液至原体积的1/3，得桔 梗粗多糖浓缩液； 在桔梗粗多糖的浓缩液中加入活性炭，所述的活性炭占桔梗粗多糖浓缩液重量的 2-6%，搅拌0.2-0.5h，过滤滤出活性炭； 离心10-20 min ，离心转速为4500 rpm，将上清液与沉淀分别收集； 取上清液过滤去渣，过滤后得到的滤液在60-70下浓缩，浓缩至其浓度为60-70%，浓 缩液按1。
5、：4比例加入95%乙醇沉淀静置10-20小时、离心10-20 min ，离心转速为4500 rpm，收集沉淀并用乙醇反复清洗2-3次，冷冻干燥至水分含量为4-6%后，再在-1-4下进 行粉碎，得可溶性多糖； 上述的加酶量均为酶占超微粉碎后的桔梗的重量百分比。 2.如权利要求1所述一种桔梗多糖的提取方法，其特征在于，所述的桔梗与水的重量 比例为1：9。 3.如权利要求1所述的一种桔梗多糖的提取方法，其特征在于，所述的无花果蛋白酶 的用量是0.45%。 4.如权利要求1所述的一种桔梗多糖的提取方法，其特征在于，所述的菠萝蛋白酶的 添加量为0.4%。 5.如权利要求1-4中任一项所述的一种桔梗多糖的。
6、提取方法，其特征在于，所述的方 法包括下述的步骤： 选择晒干的桔梗，粉碎后过60目筛，得桔梗粉，在桔梗粉中加水并搅拌均匀，桔梗粉与 水的重量比例为1：7，在水中浸泡10小时，加入纤维素酶，纤维素酶的添加量为0.8、酶解 温度45、pH值5，将上述的原料置于微波提取设备中提取，微波的功率为400-600W，频率 为800MHZ，酶解0.1-0.5h； 再加入无花果蛋白酶和菠萝蛋白酶，无花果蛋白酶的加入量为0.45%，菠萝蛋白酶的加 入量为0.4%，酶解温度45、pH值6.0，将上述的原料置于微波提取设备中提取，微波的功 率为500W，频率为800MHZ，酶解0.3h，酶解后在100下灭酶6min。
7、，得酶解液； 将上述的酶解液置于真空浓缩器中浓缩，减压低温浓缩至酶解液至原体积的1/3，得桔 梗粗多糖浓缩液； 在桔梗粗多糖的浓缩液中加入活性炭，所述的活性炭占桔梗粗多糖浓缩液重量的4%， 搅拌0.3h，过滤滤出活性炭； 离心15 min ，离心转速为4500 rpm，将上清液与沉淀分别收集； 权 利 要 求 书CN 104292355 A 2/2页 3 取上清液过滤去渣，过滤后得到的滤液在65下浓缩，浓缩至其浓度为65%，浓缩液按 1：4比例加入95%乙醇沉淀静置10-20小时、离心15 min ，离心转速为4500 rpm，收集沉 淀并用乙醇反复清洗2-3次，冷冻干燥至水分含量为5%后，再。
8、在-1-4下进行粉碎，得可溶 性多糖； 上述的加酶量均为酶占超微粉碎后的桔梗的重量百分比。 权 利 要 求 书CN 104292355 A 1/5页 4 一种桔梗多糖的提取方法 技术领域 0001 本发明属于多糖提取技术领域，具体涉及一种桔梗多糖的提取方法。 0002 背景技术 多糖是由糖苷键结合的糖链，是由至少10个以上单糖通过缩合、失水而成，结构单位 之间以糖苷键相连接，是一类分子结构庞大而复杂的糖类物质。多糖在自然界分布广泛，多 存在于动物细胞膜、植物细胞壁、微生物细胞壁中，是构成生命活动的四大基本物质之一。 近年来，随着细胞生物学和分子生物学的发展，学者们发现它具有抗肿瘤、增强机体免疫。
9、、 抗炎症、抗凝血、抗病毒、抗衰老、降血糖等作用。自20世纪60年代以来，学者们陆续的发现 多糖具有很多药理活性，迄今为止，人们已经从天然产生中分离出300多种多糖类化合物， 其中以植物中提取出来的多糖最为重要，因为植物多糖具有功能多、毒副作用小、安全性强 的特点，引起了广大学者的关注，使它成为医药和食品保健行业的研究热点。 0003 桔梗多糖是一种菊糖型多聚糖，是评价桔梗食用品质的重要指标。现代药理学研 究发现桔梗多糖具有很多种生物活性，如免疫调节、袪痰、消炎、保肝、抗肿瘤、抗氧化、抗衰 老、增强机体免疫功能及改善胰岛素等作用，因此，对于桔梗多糖的研究，将具有很高的药 用价值。 0004 桔。
10、梗的纯度直接影响着多糖的生理功能，有专利申请披露桔梗多糖的提取方法如 下： CN101830999披露了一种桔梗多糖的提取方法，其步骤如下：一，选取干燥的桔梗根 茎，粉碎后过60目筛，以一定的料液比1g:20mL-1 g:20mL的比例分别加入桔梗粉末和水 溶液，0浸泡1小时后以一定的微波功率下提取后，40-70水浴，得到富含桔梗多糖的萃取 液，用卧式螺式离心机以1500-2000r/min的速度进行固液分离，分离出提取液和残渣；二， 用sevag法（氯仿：正丁醇=4：1）反复脱蛋白，透析袋进行透析，45-55真空旋转仪浓缩提 取液；三，用苯酚-硫酸法测定溶液吸光度值后在提取液中加入倍体积的乙。
11、醇溶液；四，将 醇沉物分离，用真空冻干机在0.4-0.7mbar、温度-40-50条件下真空冷冻干燥得到桔 梗多糖粉末。上述的方法提取桔梗多糖，其提取率可达到20-30%，比普通的水浴提取高出了 15-20%，大大提高了桔梗的多糖的经济价值。 发明内容 0005 为了解决上述的技术问题，本发明提供了一种得率较高的桔梗多糖的提取方法。 0006 本发明桔梗多糖的提取方法是通过下述的技术方案来实现的： 一种桔梗多糖的提取方法，包括下述的步骤： 选择晒干的桔梗，粉碎后过40-80目筛，得桔梗粉，在桔梗粉中加水并搅拌均匀，桔梗 粉与水的重量比例为1：5-10，在水中浸泡8-16小时，加入纤维素酶，纤维。
12、素酶的添加量为 0.5-0.9、酶解温度45、pH值5，将上述的原料置于微波提取设备中提取，微波的功率为 400-600W，频率为800MHZ，酶解0.1-0.5h； 再加入无花果蛋白酶和菠萝蛋白酶，无花果蛋白酶的加入量为0.2-0.6%，菠萝蛋白酶 说 明 书CN 104292355 A 2/5页 5 的加入量为0.2-0.5%，酶解温度45、pH值5.5-6.5，将上述的原料置于微波提取设备中 提取，微波的功率为400-600W，频率为800MHZ，酶解0.1-0.5h，酶解后在100-105下灭酶 5-10min，得酶解液； 将上述的酶解液置于真空浓缩器中浓缩，减压低温浓缩至酶解液至原体。
13、积的1/3，得桔 梗粗多糖浓缩液； 在桔梗粗多糖的浓缩液中加入活性炭，所述的活性炭占桔梗粗多糖浓缩液重量的 2-6%，搅拌0.2-0.5h，过滤滤出活性炭； 离心10-20 min ，离心转速为4500 rpm，将上清液与沉淀分别收集； 取上清液过滤去渣，过滤后得到的滤液在60-70下浓缩，浓缩至其浓度为60-70%，浓 缩液按1：4比例加入95%乙醇沉淀静置10-20小时、离心10-20 min ，离心转速为4500 rpm，收集沉淀并用乙醇反复清洗2-3次，冷冻干燥至水分含量为4-6%后，再在-1-4下进 行粉碎，得可溶性多糖； 上述的加酶量均为酶占超微粉碎后的桔梗的重量百分比。 0007。
14、 优选的，桔梗与水的重量比例为1：9； 优选的，无花果蛋白酶的用量是0.45%； 菠萝蛋白酶的添加量为0.4%。 0008 优选的，一种桔梗多糖的提取方法，该方法包括下述的步骤： 选择晒干的桔梗，粉碎后过60目筛，得桔梗粉，在桔梗粉中加水并搅拌均匀，桔梗粉与 水的重量比例为1：7，在水中浸泡10小时，加入纤维素酶，纤维素酶的添加量为0.8、酶解 温度45、pH值5，将上述的原料置于微波提取设备中提取，微波的功率为400-600W，频率 为800MHZ，酶解0.1-0.5h； 再加入无花果蛋白酶和菠萝蛋白酶，无花果蛋白酶的加入量为0.45%，菠萝蛋白酶的加 入量为0.4%，酶解温度45、pH值6。
15、.0，将上述的原料置于微波提取设备中提取，微波的功 率为500W，频率为800MHZ，酶解0.3h，酶解后在100下灭酶6min，得酶解液； 将上述的酶解液置于真空浓缩器中浓缩，减压低温浓缩至酶解液至原体积的1/3，得桔 梗粗多糖浓缩液； 在桔梗粗多糖的浓缩液中加入活性炭，所述的活性炭占桔梗粗多糖浓缩液重量的4%， 搅拌0.3h，过滤滤出活性炭； 离心15 min ，离心转速为4500 rpm，将上清液与沉淀分别收集； 取上清液过滤去渣，过滤后得到的滤液在65下浓缩，浓缩至其浓度为65%，浓缩液按 1：4比例加入95%乙醇沉淀静置10-20小时、离心15 min ，离心转速为4500 rpm，。
16、收集沉 淀并用乙醇反复清洗2-3次，冷冻干燥至水分含量为5%后，再在-1-4下进行粉碎，得可溶 性多糖； 上述的加酶量均为酶占超微粉碎后的桔梗的重量百分比。 0009 本发明的方法中， 冷冻粉碎原理冷冻粉碎是利用物料在低温状态下的“低温脆 性”，即物料随着温度的降低，其硬度和脆性增加，而塑性及韧性降低，在一定温度下，用一 个很小的力就能将其粉碎。经冷冻粉碎的物料，其粒度可达到“超细微”的程度，因此可以 生产“超细微食品”。 0010 物料的“低温脆性”是与一种称为玻璃化转变的现象密切相关的。所谓玻璃化转 说 明 书CN 104292355 A 3/5页 6 变原本是指非晶态聚合物在温度变化时会。
17、出现力学性质的变化，形成橡胶态和玻璃态两种 物理状态；而且温度变化过程可以产生由橡胶态向玻璃态的转变。在橡胶态时，物料的韧性 大，变形能力强；而在玻璃态时，物料硬度和脆性大，变形能力很小。其实玻璃化转变现象并 非聚合物所特有，食品和农产品同样会出现玻璃化转变过程。不过，因为食品和农产品的组 成结构比较复杂，所以其玻璃化转变要复杂得多，如可能存在多级玻璃化转变过程和反玻 璃化转变现象。一般地，我们称物料由橡胶态向玻璃态转变时所要求的温度为玻璃化转变 温度。根据前面提到的橡胶态和玻璃态的性质，可以认为物料的玻璃化转变温度对应着物 料的“脆化温度” 。 0011 因此，食品和农产品的冷冻粉碎原理就是。
18、：首先使物料低温冷冻到玻璃化转变温 度或脆化温度以下，再用粉碎机将其粉碎。在食品和农产品快速降温过程中，会造成内部各 部位不均匀的收缩而产生内应力，在此应力的作用下，物料内部薄弱部位产生微裂纹并导 致内部组织的结合力降低。在外部较小作用力就使内部裂纹迅速扩大而破碎。 0012 冷冻粉碎机系统在物料粉碎过程中，其冷源形成一个闭路循环系统，使能源得到 充分利用，节省能耗：粉碎用的冷源温度可降至负196度，根据物料的脆化点温度，在粉碎 过程中其温度可调控，选择最佳粉碎温度，降低能耗：粉碎细度可达到10-700目，甚至达 到微米等细度：使用液氮作为研磨介质，实现超低温粉碎，物料的防爆，防氧化等综合效 。
19、果。 0013 冷冻粉碎适用于多糖，因为多糖在常温粉碎时容易产生粘结、堵塞和性质变化等 问题，并且效果和效率差。 0014 因此，本发明中采用冷冻粉碎的方法对提取得到的多糖，保持了多糖的质量不受 影响。 0015 本发明的有益效果在于，采用酶作用条件温和，采用各种不同的酶将桔梗中的脂 肪、纤维素酶解，同时从桔梗中提取多糖，最大限度的利用桔梗，而且采用本发明的方法得 到的多糖，其得率和纯度高。 具体实施方式 0016 下面结合具体实施例对本发明作更进一步的说明，以便本领域的技术人员更了解 本发明，但并不因此限制本发明。 0017 以下的检测方法，如无特殊说明，采用苯酚-硫酸法测多糖的含量。 00。
20、18 实施例1 一种桔梗多糖的提取方法，该方法包括下述的步骤： 选择晒干的桔梗，粉碎后过60目筛，得桔梗粉，在桔梗粉中加水并搅拌均匀，桔梗粉与 水的重量比例为1：7，在水中浸泡10小时，加入纤维素酶，纤维素酶的添加量为0.8、酶解 温度45、pH值5，将上述的原料置于微波提取设备中提取，微波的功率为400-600W，频率 为800MHZ，酶解0.1-0.5h； 再加入无花果蛋白酶和菠萝蛋白酶，无花果蛋白酶的加入量为0.45%，菠萝蛋白酶的加 入量为0.4%，酶解温度45、pH值6.0，将上述的原料置于微波提取设备中提取，微波的功 率为500W，频率为800MHZ，酶解0.3h，酶解后在100下。
21、灭酶6min，得酶解液； 将上述的酶解液置于真空浓缩器中浓缩，减压低温浓缩至酶解液至原体积的1/3，得桔 说 明 书CN 104292355 A 4/5页 7 梗粗多糖浓缩液； 在桔梗粗多糖的浓缩液中加入活性炭，活性炭占桔梗粗多糖浓缩液重量的4%，搅拌 0.3h，过滤滤出活性炭； 离心15 min ，离心转速为4500 rpm，将上清液与沉淀分别收集； 取上清液过滤去渣，过滤后得到的滤液在65下浓缩，浓缩至其浓度为65%，浓缩液按 1：4比例加入95%乙醇沉淀静置10-20小时、离心15 min ，离心转速为4500 rpm，收集沉 淀并用乙醇反复清洗2-3次，冷冻干燥至水分含量为5%后，再在。
22、-1-4下进行粉碎，得可溶 性多糖； 上述的加酶量均为酶占超微粉碎后的桔梗的重量百分比。 0019 多糖的提取率为：36.44%，纯度为94.64%。 0020 实施例2 一种桔梗多糖的提取方法，该方法包括下述的步骤： 选择晒干的桔梗，粉碎后过40目筛，得桔梗粉，在桔梗粉中加水并搅拌均匀，桔梗粉与 水的重量比例为1：5，在水中浸泡8小时，加入纤维素酶，纤维素酶的添加量为0.5、酶解 温度45、pH值5，将上述的原料置于微波提取设备中提取，微波的功率为400-600W，频率 为800MHZ，酶解0.1-0.5h； 再加入无花果蛋白酶和菠萝蛋白酶，无花果蛋白酶的加入量为0.2%，菠萝蛋白酶的加 入。
23、量为0.2%，酶解温度45、pH值5.5，将上述的原料置于微波提取设备中提取，微波的功 率为400W，频率为800MHZ，酶解0.3h，酶解后在100下灭酶5min，得酶解液； 将上述的酶解液置于真空浓缩器中浓缩，减压低温浓缩至酶解液至原体积的1/3，得桔 梗粗多糖浓缩液； 在桔梗粗多糖的浓缩液中加入活性炭，活性炭占桔梗粗多糖浓缩液重量的4%，搅拌 0.3h，过滤滤出活性炭； 离心15 min ，离心转速为4500 rpm，将上清液与沉淀分别收集； 取上清液过滤去渣，过滤后得到的滤液在65下浓缩，浓缩至其浓度为65%，浓缩液按 1：4比例加入95%乙醇沉淀静置10小时、离心15 min ，离心。
24、转速为4500 rpm，收集沉淀并 用乙醇反复清洗2-3次，冷冻干燥至水分含量为5%后，再在-1-4下进行粉碎，得可溶性多 糖； 上述的加酶量均为酶占超微粉碎后的桔梗的重量百分比。 0021 多糖的提取率为：36.11%，纯度为93.15%。 0022 实施例3 一种桔梗多糖的提取方法，该方法包括下述的步骤： 选择晒干的桔梗，粉碎后过80目筛，得桔梗粉，在桔梗粉中加水并搅拌均匀，桔梗粉与 水的重量比例为1： 10，在水中浸泡16小时，加入纤维素酶，纤维素酶的添加量为0.9、 酶解温度45、pH值5，将上述的原料置于微波提取设备中提取，微波的功率为400-600W， 频率为800MHZ，酶解0.。
25、1-0.5h； 再加入无花果蛋白酶和菠萝蛋白酶，无花果蛋白酶的加入量为0.6%，菠萝蛋白酶的加 入量为0.5%，酶解温度45、pH值6.5，将上述的原料置于微波提取设备中提取，微波的功 率为500W，频率为800MHZ，酶解0.3h，酶解后在100下灭酶6min，得酶解液； 说 明 书CN 104292355 A 5/5页 8 将上述的酶解液置于真空浓缩器中浓缩，减压低温浓缩至酶解液至原体积的1/3，得桔 梗粗多糖浓缩液； 在桔梗粗多糖的浓缩液中加入活性炭，活性炭占桔梗粗多糖浓缩液重量的4%，搅拌 0.3h，过滤滤出活性炭； 离心15 min ，离心转速为4500 rpm，将上清液与沉淀分别收集； 取上清液过滤去渣，过滤后得到的滤液在65下浓缩，浓缩至其浓度为65%，浓缩液按 1：4比例加入95%乙醇沉淀静置20小时、离心15 min ，离心转速为4500 rpm，收集沉淀并 用乙醇反复清洗2-3次，冷冻干燥至水分含量为5%左右后，再在-1-4下进行粉碎，得可溶 性多糖； 上述的加酶量均为酶占超微粉碎后的桔梗的重量百分比。 0023 多糖的提取率为：36.28%，纯度为92.94%。 说 明 书CN 104292355 A 。