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1、(10)申请公布号 CN 104178522 A (43)申请公布日 2014.12.03 C N 1 0 4 1 7 8 5 2 2 A (21)申请号 201410409129.8 (22)申请日 2014.08.19 CGMCC No.6645 2012.10.08 C12P 1/02(2006.01) A24B 3/12(2006.01) C12R 1/645(2006.01) (71)申请人云南中烟工业有限责任公司 地址 650231 云南省昆明市五华区红锦路 367号云烟科技园C区 (72)发明人陈微 王明锋 段焰青 何雪峰 吴俊 刘娟 曾熠程 张翼鹏 (74)专利代理机构昆明协立。
2、知识产权代理事务 所(普通合伙) 53108 代理人谢嘉 旃习涵 (54) 发明名称 一种树苔发酵提取物及其制备方法和应用 (57) 摘要 本发明公开了一种树苔发酵提取物及其制备 方法和应用。以树苔为原料，用长孢洛德酵母进行 发酵，再由发酵液中提取致香成分后制成。所述的 长孢洛德酵母(Lodderomyces elongisporus)保 存在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物 中心；保藏号为CGMCC No.6645；保藏日期：2012 年10月08日。产品中含有多种致香物质，如苯乙 醇、苔黑酚单甲醚、阿兰酚、-苔黑酚酸甲酯、赤 星衣酸甲酯、赤星衣酸乙酯、扁枝衣酸乙酯、柔扁 枝衣酸甲酯等。
3、。加香评吸试验结果表明，其能与烟 香谐调，可明显提调烟香、细腻醇和烟气、降低刺 激性、掩盖杂气、改善卷烟吸味，并产生一种清新 的特殊香韵。 (83)生物保藏信息 (51)Int.Cl. 权利要求书1页 说明书4页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书4页 (10)申请公布号 CN 104178522 A CN 104178522 A 1/1页 2 1.一种树苔发酵提取物，其特征在于：以树苔为原料，用长孢洛德酵母进行发酵，再由 发酵液中提取致香成分即得产品；所述的长孢洛德酵母Lodderomyces elongisporus保存 在中国微生物菌种保藏。
4、管理委员会普通微生物中心；保藏号为CGMCC No.6645；保藏日期： 2012年10月08日。 2.制备权利要求1所述树苔发酵提取物的方法，包括以下步骤： (1)取长孢洛德酵母CGMCC 6645活化培养，得到长孢洛德酵母活化菌液；菌种活化培 养条件为2830、160180r/min振荡培养，培养时间为1224小时； (2)将干燥树苔茎叶粉碎，过40目筛，加入1522倍蒸馏水，灭菌； (3)将活化菌液接种于树苔物料中，接种量为1.52.5；接种后的发酵培养条件 同活化培养条件；培养时间为1224小时； (4)发酵液过滤后8000r/min离心10分钟，取上清液，减压浓缩成浸膏，即为所需的树。
5、 苔发酵提取物。 3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤(4)中所述的减压浓缩的温度 优选为4565。 4.权利要求1所述的树苔发酵提取物在卷烟生产中的应用，具体为：将树苔发酵提取 物均匀地喷洒在烟丝上，添加量为812g/箱烟丝。 权 利 要 求 书CN 104178522 A 1/4页 3 一种树苔发酵提取物及其制备方法和应用 技术领域 0001 本发明属于烟用添加剂技术领域，具体是涉及一种由树苔发酵物中提取致香成分 得到的烟用香料。同时，本发明还涉及所述烟用香料的制备方法和在烟草加工中的具体应 用。 背景技术 0002 卷烟香气是卷烟品质的核心内容。不论是国际还是国内，降低焦油。
6、量已成为卷烟 生产的一个重要课题，而伴随着焦油量的降低，烟味变淡，香气减弱，又难以被消费者接受。 在降低卷烟焦油的同时，通过添加香料添加剂增进和提高烟气浓度和香味，是一种有效的 弥补方式。 0003 天然香精香料是高价值的精细化工产品，而原来从天然动、植物提取的天然香料， 由于原料有限，提取成本高，远远满足不了卷烟香料市场的需求。利用微生物发酵技术可以 制备香料或进行香料的转化，制备得到的香料为天然级产品，在提高香料产品质量的同时， 节约能源、降低成本，实现了天然香料加工技术的革命。因此，人们对香料的生物合成越来 越感兴趣，生物技术将在天然香精香料研究和制备中发挥越来越大的作用。植物细胞中的 。
7、某些多糖可以在产香酵母作用下转化成苯乙醇等致香物质，因此，可筛选产苯乙醇等致香 物质的酵母种类，以适当的天然植物材料为底物，利用现代微生物发酵技术，制备天然香料 添加剂，用于卷烟加香。 0004 树苔(Evernia furfuracea(L.)Mann.)为松萝科扁枝衣属地衣植物，主要分布于 云南、贵州等地，是一种重要的香料植物，其香气特征为苔类的自然清香和浓郁的树脂气 息，已作为橡苔的代用品，可调配素心兰、熏衣草、百花、苔香等香精，有较好的定香作用。 0005 在现有技术中，树苔浸膏及净油已被多家烟草公司用于赋予卷烟产品独特的香气 风格，但以树苔为底物，以产香酵母进行发酵，制备烟用香料添加。
8、剂的研究尚未见报道。 发明内容 0006 本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种对改善卷烟吸味有益的树苔发 酵提取物。 0007 本发明的另一目的是提供一种制备所述树苔发酵提取物的方法。 0008 本发明的目的还在于提供所述的树苔发酵提取物在卷烟生产中的应用。 0009 本发明的目的通过下述技术方案予以实现 0010 *除非另有说明，本发明所采用的百分数均为质量百分数。 0011 一种树苔发酵提取物，其特征在于：以树苔为原料，用长孢洛德酵母进行发酵，再 由发酵液中提取致香成分即得产品；所述的长孢洛德酵母(Lodderomyces elongisporus) 保存在中国微生物菌种保藏管理委。
9、员会普通微生物中心；保藏号为CGMCC No.6645；保藏 日期：2012年10月08日。 0012 制备所述树苔发酵提取物的方法，包括以下步骤： 说 明 书CN 104178522 A 2/4页 4 0013 (1)取长孢洛德酵母CGMCC 6645活化培养，得到长孢洛德酵母活化菌液；菌种活 化培养条件为2830、160180r/min振荡培养，培养时间为1224小时； 0014 (2)将干燥树苔粉碎，过40目筛，加入1522倍蒸馏水，灭菌； 0015 (3)将活化菌液接种于树苔物料中，接种量为1.52.5；接种后的发酵培养 条件同活化培养条件；培养时间为1224小时； 0016 (4)发。
10、酵液过滤后8000r/min离心10分钟，取上清液，减压浓缩成浸膏，即为所需 的树苔发酵提取物。 0017 步骤(4)中所述的减压浓缩的温度优选为4565。 0018 所述的树苔发酵提取物在卷烟生产中的应用，具体为：将树苔发酵提取物均匀地 喷洒在烟丝上，添加量为812g/箱烟丝。 0019 本发明获得的树苔发酵提取物中含有多种挥发性成分，含量较高的致香物质主要 有苯乙醇、苔黑酚单甲醚、阿兰酚、-苔黑酚酸甲酯、赤星衣酸甲酯、赤星衣酸乙酯、扁枝衣 酸乙酯、柔扁枝衣酸甲酯等。加香评吸试验结果表明，该树苔发酵提取物能与烟香谐调，可 明显提调烟香、细腻醇和烟气、降低刺激性、掩盖杂气、改善卷烟吸味，并产生。
11、一种清新的特 殊香韵。 0020 与现有技术相比，本发明具有以下有益效果： 0021 (1)采用现代微生物发酵技术，制备纯天然香料添加剂；所用菌株易于保存，易于 活化和发酵； 0022 (2)所用原料价格低廉，来源丰富； 0023 (3)生产工艺简单、操作性、规范性及可控性强，便于实现大规模工业化生产，具有 良好的开发应用前景。 0024 保藏生物材料的说明 0025 本发明的菌株是从烤烟叶面上分离得到，鉴定结果表明该酵母菌属于长孢洛德酵 母，该菌株命名为Lodderomyces elongisporus。该菌株已经保存在中国微生物菌种保藏管 理委员会普通微生物中心；地址：中国.北京市朝阳区大。
12、屯路，中国科学院微生物研究所； 保藏日期：2012年10月08日；保藏号为CGMCC No.6645。长孢洛德酵母能转化细胞中的多 糖生成苯乙醇等致香成分。 具体实施方式 0026 为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下通过实施例对本发明 作进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定 本发明的保护范围。 0027 实施例1 0028 1.培养基和培养条件 0029 将实验所用的长孢洛德酵母CGMCC 6645接种于50mL的YPD液体培养基中，28、 160r/min培养24小时，获得活化的液体菌种。 0030 2.树苔样品的制备 0031 树。
13、苔充分干燥后，粉碎，过40目筛。称取树苔粉末20g，加入400mL蒸馏水(20体 积倍)，灭菌，备用。 说 明 书CN 104178522 A 3/4页 5 0032 3.树苔的产香酵母菌发酵处理 0033 将1中制备的长孢洛德酵母活化菌液8mL接种于2中准备好的树苔样品中(接种 量为2)，28、160r/min振荡培养24小时，用于下一步实验。 0034 4.香料添加剂的提取 0035 将上述发酵液过滤后8000r/min离心10分钟，取上清液，50减压浓缩至浸膏状， 即得所需的树苔发酵提取物，保存待用。 0036 5.产品特征及理化性质 0037 本产品为红棕色膏体，不澄清。产品的理化性质。
14、见表1. 0038 表1.香料添加剂的理化性质 0039 0040 6.卷烟加香试验 0041 将制备得到的香料添加剂均匀地喷洒到烟丝上，添加量为10g/箱(40kg烟丝/ 箱)，并以不加添加剂的烟叶作为对照。 0042 7.评吸试验 0043 将处理组和对照组的烟丝放入恒温恒湿箱内平衡24h后，制成卷烟，样品和对照 均随机编号，由评吸专家组成的评吸小组进行感官评吸。 0044 8.香料添加剂致香成分检测和应用效果评价 0045 致香成分检测结果表明：香料添加剂含有近48种挥发性成分，其中含量较高的致 香成分主要有苯乙醇、苔黑酚单甲醚、阿兰酚、-苔黑酚酸甲酯、赤星衣酸甲酯、赤星衣酸 乙酯、扁枝。
15、衣酸乙酯、柔扁枝衣酸甲酯等。 0046 加香评吸试验结果表明，该香料添加剂与烟香较为谐调，可明显提高烟香、细腻醇 和烟气、降低刺激性、掩盖杂气、改善卷烟吸味，并产生一种清新的特殊香韵。 0047 实施例2 0048 重复实施例1，有以下不同点： 0049 菌种长孢洛德酵母CGMCC 6645的活化培养条件为28、160r/min振荡培养，培 养时间为24小时；树苔粉碎后加22倍蒸馏水，灭菌；活化菌液接种于树苔材料的接种量为 说 明 书CN 104178522 A 4/4页 6 2.5；接种后发酵培养时间为24小时；发酵液上清减压浓缩温度为55；将制备得到的香 料添加剂均匀地喷洒到烟丝上，添加量。
16、为12g/箱。 0050 加香评吸试验结果表明，该香料添加剂能与烟香谐调，提高香气质，增加香气量， 改善余味，掩盖杂气，并具有一种清新的特殊香韵。 0051 实施例3 0052 重复实施例1，有以下不同点： 0053 菌种长孢洛德酵母CGMCC 6645的活化培养条件为30、180r/min振荡培养，培 养时间为12小时；树苔粉碎后加15倍蒸馏水，灭菌；活化菌液接种于树苔材料的接种量为 1.5；接种后发酵培养时间为12小时；发酵液上清减压浓缩温度为45；将制备得到的香 料添加剂均匀地喷洒到烟丝上，添加量为8g/箱。 0054 加香评吸试验结果表明，该香料添加剂能与烟香谐调，提高香气质，增加香气。
17、量， 改善余味，掩盖杂气，并具有一种清新的特殊香韵。 0055 实施例4 0056 重复实施例1，有以下不同点： 0057 菌种长孢洛德酵母CGMCC 6645的活化培养条件为30、180r/min振荡培养，培 养时间为12小时；树苔粉碎后加22倍蒸馏水，灭菌；活化菌液接种于树苔材料的接种量为 2.5；接种后发酵培养时间为12小时；发酵液上清减压浓缩温度为65；将制备得到的香 料添加剂均匀地喷洒到烟丝上，添加量为8g/箱。 0058 加香评吸试验结果表明，该香料添加剂能与烟香谐调，提高香气质，增加香气量， 改善余味，掩盖杂气，并具有一种清新的特殊香韵。 说 明 书CN 104178522 A 。