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1、(10)申请公布号 CN 102532217 A (43)申请公布日 2012.07.04 C N 1 0 2 5 3 2 2 1 7 A *CN102532217A* (21)申请号 201110439186.7 (22)申请日 2011.12.23 C07H 17/04(2006.01) C07H 1/08(2006.01) (71)申请人王刻铭 地址 410000 湖南省长沙市芙蓉区农大路1 号30栋 (72)发明人王刻铭 黄勇 (54) 发明名称 从油橄榄叶中提取分离高含量橄榄苦甙的方 法 (57) 摘要 本发明公开了从油橄榄叶中提取分离高含量 橄榄苦甙的方法，包括以下步骤：将橄榄叶切。
2、碎、 低温提取、过滤、浓缩或直接层析、低温浓缩、干 燥，最后得到含量大于80的橄榄苦甙产品。本 发明以一定浓度的乙醇或水为提取溶剂低温提 取，利用树脂串联或二次吸附层析技术，提取分离 纯化得到橄榄苦甙大于80的产品。本发明具有 节约能耗、生产周期短、经济环保、操作简单等优 点，非常适合于大规模化工业生产。 (51)Int.Cl. 权利要求书1页 说明书3页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 3 页 1/1页 2 1.从油橄榄叶中提取分离高含量橄榄苦甙的方法，其特征在于，具体步骤如下： (1)将油橄榄叶切碎； (2)将切碎的油橄榄叶加入纯化水。
3、或乙醇水溶液，低温提取； (3)将提取后的溶液浓缩后或直接通过由两种大孔吸附树脂串联的层析柱；或将提取 后的溶液浓缩后或直接进行一次吸附，再将解析液浓缩后进行二次吸附； (4)用纯化水将树脂清洗； (5)用580脂肪醇洗脱树脂，当流出液脂肪醇浓度达5时，开始收集流出液； (6)低温浓缩洗脱液； (7)浓缩液冷冻或喷雾干燥。 2.根据权利要求1所述的从油橄榄叶中提取分离高含量橄榄苦甙的方法，其特征在 于：所述步骤(1)中将油橄榄叶切碎，为切至12cm。 3.根据权利要求1所述的从油橄榄叶中提取分离高含量橄榄苦甙的方法，其特征在 于：所述步骤(2)中中低温提取温度为2070；所述提取溶剂为纯化水，。
4、体积为1216 倍；所述提取溶剂或为4080乙醇，体积为1012倍。 4.根据权利要求1所述的从油橄榄叶中提取分离高含量橄榄苦甙的方法，其特征在 于：所述步骤(4)中用纯化水将树脂清洗，体积为树脂柱体积的820倍。 5.根据权利要求1所述的从油橄榄叶中提取分离高含量橄榄苦甙的方法，其特征在 于：所述步骤(5)中脂肪醇为C1-C3伯醇和仲醇，优选乙醇，所述脂肪醇洗脱体积为1-5倍 柱体积。 6.根据权利要求1所述的从油橄榄叶中提取分离高含量橄榄苦甙的方法，其特征在 于：所述步骤(6)中低温为30-60，所述浓缩液浓度为1825。 权 利 要 求 书CN 102532217 A 1/3页 3 从油。
5、橄榄叶中提取分离高含量橄榄苦甙的方法 技术领域 0001 本发明涉及本发明涉及从油橄榄叶中提取分离高含量橄榄苦甙的方法。 背景技术 0002 油橄榄属木犀科木犀榄属常绿乔木，是世界著名的木本油料兼果用树种，栽培品 种有较高食用价值，含丰富优质食用植物油油橄榄油，为著名亚热带果树和重要经济 林木。主要分布在欧洲地中海沿岸国家和美国加州地区，希腊、意大利、突尼斯、西班牙为集 中产地。我国西部和西北地区甘肃、陕西、四川、重庆、福建、广西、广东、湖南等省市有引种 栽培。全国现有油橄榄超过1600万株。甘肃省陇南市武都区是目前全国最大油橄榄基地。 0003 橄榄叶中主要含有裂环烯醚萜及其苷、黄酮及其苷、。
6、双黄酮及其苷、低分子单宁等 成分，裂环烯醚萜类为主要活性成分。橄榄叶提取物中主要成分为环烯醚萜类苦涩物质，其 活性最高的为橄榄苦甙。 0004 橄榄苦甙是一种双分子结构酚类和黄酮类物质，具有天然的抗氧化、抗肿瘤、延缓 衰老、增强心血管功能、治疗慢性前列腺炎、增强免疫力、调解内分泌系统、护肝、抗炎等重 要的保健功能，同时还有降血脂、降血糠的药理作用，广泛用于食品、化妆和生物制药等领 域。 0005 高含量的橄榄苦甙主要用于护肤品，可以保护皮肤细胞不受紫外线的伤害，有效 维持肌肤柔嫩与弹性，达到扶肤、嫩肤的功效。Microherb高含量橄榄苦甙80专门为护肤 品设计，其有效成分高，颜色浅，非常适合。
7、化妆品配方设计。 0006 橄榄叶提取技术主要包括有机溶剂提取技术、超临界CO2萃取技术、超声波萃取 技术及微波萃取技术等。有机溶剂提取具有杂质含量高、溶剂消耗大、成本高、污染大等缺 点。超临界CO2萃取具有提取含量高、无污染等优点，但投入大、成本高。超声波及微波萃 取虽然具有节能、高效等优点，但在生产上难以实现大规模化应用。 0007 目前文献报道或专利公开的橄榄苦甙提取分离技术较多，但橄榄苦甙含量达到 80以上的分离纯化技术少有报道。杨寅珂申请的专利一种橄榄叶提取物提取方法(CN 1583052A)和孙浩渊申请的专利橄榄叶提取物的提取方法及工艺(CN 1827127A)，两种专 利所分离的。
8、产品橄榄苦甙低，且都添加了外源性物质；王成章、高彩霞申请的专利富含高 纯度橄榄苦甙的油橄榄叶提取的制备方法(CN 101003557A)，该专利制备的产品，含量高 于50，但远低于80；姚自奇等申请的专利油橄榄叶提取物生产工艺(CN101049328A)， 该专利分离的产品，含量为26；姚自奇等申请的专利油橄榄叶提取物及制备方法 (CN 101084945A)，虽然含量最高的达95，但产品收率低、生产周期长，需静置2436小 时；另外，王成章等引种阿斯油橄榄叶中橄榄苦苷提取分离及结构鉴定中采用多次有机 溶剂萃取、硅胶柱层析以及HPLC制备色谱，分离出了含量为95的橄榄苦甙，但该法尽限 于少量样。
9、品制备。美国专利US5714150及US98101563所分离的样品中橄榄苦甙含量都比 较低，不超过40。 说 明 书CN 102532217 A 2/3页 4 发明内容 0008 本发明的目的在于克服现有技术中的不足，提供一条收率高，绿色环保的一种从 油橄榄叶中提取分离高含量橄榄苦甙的方法。 0009 从油橄榄叶中提取分离高含量橄榄苦甙的方法，具体步骤如下： 0010 (1)将油橄榄叶切碎，为切至12cm； 0011 (2)将切碎的油橄榄叶加入纯化水或乙醇水溶液，低温提取；所述中低温提取温 度为2070；所述提取溶剂为纯化水，体积为1216倍；所述提取溶剂或为4080 乙醇，体积为1012倍。
10、； 0012 (3)将提取后的溶液浓缩后或直接通过由两种大孔吸附树脂串联的层析柱；或将 提取后的溶液浓缩后或直接进行一次吸附，再将解析液浓缩后进行二次吸附； 0013 (4)用纯化水将树脂清洗；所述用纯化水将树脂清洗，体积为树脂柱体积的820 倍； 0014 (5)用580脂肪醇洗脱树脂，当流出液脂肪醇浓度达5时，开始收集流出 液；所述脂肪醇为C 1 -C 3 伯醇和仲醇，优选乙醇，所述脂肪醇洗脱体积为1-5倍柱体积； 0015 (6)低温浓缩洗脱液；所述低温为30-60，所述浓缩液浓度为1825； 0016 (7)浓缩液冷冻或喷雾干燥；即可得到橄榄苦甙。 0017 有益效果： 0018 本发。
11、明中化合物收率比现有技术高，本发明与现有技术相比，其优势在于： 0019 1.采用低温提取技术，大大降低了提取所需的能耗，减少了橄榄苦甙的氧化，提高 了收率，同时也确保了产品的质量； 0020 2.采用串联的柱层析或二次层析的分离方式，无需使用有毒溶剂(如乙酸乙酯、 氯仿、石油醚等)，确保了产品的质量安全，大大简化了工艺流程，操作简单方便，同时生产 成本低，利于工业化生产； 0021 3.按照本发明提供的生产工艺生产出来的橄榄苦甙含量经HPLC检测可达到 80-90，可以满足现代功能食品、保健品等领域的市场需求，具有很好的市场优势。 具体实施方式 0022 为了使本发明的技术手段、创作特征、工。
12、作流程、使用方法达成目的与功效易于明 白了解，下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。 0023 实施例1 0024 将油橄榄叶原料切成12cm；置于14倍于其重量的纯化水中，60提取，过滤， 滤液以0.8倍柱体积/小时的流速通过型号为HP-20的大孔树脂，吸附完毕，纯净水赶 5mins，关闭15mins。然后用10倍于柱体积的纯化水清洗树脂；再将树脂LSA-8或LSA-10 串联，用2倍于柱体积的30乙醇以1倍柱体积/小时的流速解析，待流出液乙醇浓度为 5时开始收集解析液，低于60浓缩至浓度为20，浓缩液采用冷冻干燥的方法进行干 燥，得到油橄榄叶提取物。经HPLC检测橄榄苦甙含量达85.26。。
13、 0025 实施例2 0026 将油橄榄叶原料切成12cm；置于12倍于其重量的40乙醇中，50提取，过 滤，低于60浓缩至无醇味，浓缩液以0.8倍柱体积/小时的流速通过型号为HP-20的大孔 说 明 书CN 102532217 A 3/3页 5 树脂，吸附完毕，纯净水赶5mins，关闭15mins。然后用12倍于柱体积的纯化水清洗树脂； 再将树脂LSA-8或LSA-10串联，用3倍于柱体积的40乙醇以1倍柱体积/小时的流速解 析，待流出液乙醇浓度为5时开始收集解析液，低于60浓缩至浓度为18，浓缩液采用 喷雾干燥的方法进行干燥，得到油橄榄叶提取物。经HPLC检测橄榄苦甙含量达82.19。 0。
14、027 实施例3 0028 将油橄榄叶原料切成12cm；置于10倍于其重量的60乙醇中，45提取，过 滤，低于60浓缩至无醇味，浓缩液以0.8倍柱体积/小时的流速通过型号为HP-20的大孔 树脂，吸附完毕，纯净水赶5mins，关闭15mins。然后用10倍于柱体积的纯化水清洗树脂； 再用2.5倍于柱体积的25乙醇以1倍柱体积/小时的流速解析，待流出液乙醇浓度为5 时开始收集解析液，低于60浓缩至无醇味；然后再以0.8倍柱体积/小时的流速通过型 号为XAD-16的大孔树脂，吸附完毕，纯净水赶5mins，关闭15mins。然后用10倍于柱体积 的纯化水清洗树脂；再用2倍于柱体积的60乙醇以1倍柱体。
15、积/小时的流速解析，待流 出液乙醇浓度为5时开始收集解析液，解析液低于60浓缩至浓度为22，浓缩液采用 冷冻干燥的方法进行干燥，得到油橄榄叶提取物。经HPLC检测橄榄苦甙含量达88.72。 0029 实施例4 0030 将油橄榄叶原料切成12cm；置于15倍于其重量的纯化水中，55提取，过滤， 滤液以0.8倍柱体积/小时的流速通过型号为XAD-16的大孔树脂，吸附完毕，纯净水赶 5mins，关闭15mins。然后用12倍于柱体积的纯化水清洗树脂；再用3倍于柱体积的80乙 醇以1倍柱体积/小时的流速解析，待流出液乙醇浓度为5时开始收集解析液，低于60 浓缩至无醇味；然后再以0.8倍柱体积/小时的。
16、流速通过型号为HP-20的大孔树脂，吸附完 毕，纯净水赶5mins，关闭15mins。然后用10倍于柱体积的纯化水清洗树脂；再用2倍于柱 体积的60乙醇以1倍柱体积/小时的流速解析，待流出液乙醇浓度为5时开始收集解 析液，低于60浓缩至浓度为20，浓缩液采用喷雾干燥的方法进行干燥，得到油橄榄叶 提取物。经HPLC检测橄榄苦甙含量达84.60。 0031 以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术 人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本 发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变 化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其 等效物界定。 说 明 书CN 102532217 A 。