新的法尼基蛋白转移酶抑制剂 背景技术
基于专利合作条约(PCT)的专利申请WO 95/00497(公开日：1995年1月5日)描述了能够抑制酶--抑制法尼基蛋白转移酶(FTase)以及抑制癌基因蛋白质Ras的化合物。癌基因频繁编码信号转导途径的蛋白质成分，导致刺激细胞生长和发生有丝分裂。癌基因在培养细胞中的表达导致细胞转化，其特征在于细胞在软琼脂中的生长能力和细胞密集集灶性生长缺乏非转化细胞表现出的接触抑制作用。一些癌基因的突变和/或过度表达往往与人类癌症有关。
为了获得转化能力，Ras癌蛋白的前体必须经受位于羧基端四肽的半胱氨酸残基的法尼基化作用。因而，能催化这种变化的酶(亦即法尼基蛋白转移酶)的抑制剂已表明为某些肿瘤(即其中Ras对转化起作用的肿瘤)的抗癌剂。Ras的突变、致癌基因形式常见于许多人类癌症中，最引人注意的是见于超过50％的结肠癌和胰腺癌中(Kohl等，Science，Vol.260，1834-1837，1993)。
鉴于法尼基蛋白转移酶抑制剂地现实意义，对此领域所作的有益贡献就在于提供可用于抑制法尼基蛋白转移酶的其它化合物。而本发明则作出了这种贡献。发明概述
本发明化合物对法尼基蛋白转移酶的抑制作用先前尚无报道。因此，本发明提供了使用本发明化合物抑制法尼基蛋白转移酶的方法，所述化合物能够：(i)在体外有效地抑制法尼基蛋白转移酶，但对香叶基香叶基蛋白转移酶I无抑制作用；(ii)阻断由转化Ras形式(法尼基受体)诱导的表型变化，但不阻断改造为香叶基香叶基受体的转化Ras形式所诱导的表型变化；(iii)阻断法尼基受体Ras的胞内加工，但不阻断改造为香叶基香叶基受体的Ras的胞内加工；和(iv)阻断转化Ras诱发的培养细胞异常生长。
本发明提供了通过施用有效量的本发明化合物抑制细胞(包括转化细胞)异常生长的方法。细胞异常生长是指不受正常调节机制支配的细胞生长(如接触抑制丧失)。这包括下列细胞的异常生长：(1)表达激活Ras致癌基因的肿瘤细胞(肿瘤)；(2)由于另一基因的致癌突变导致其中Ras激活的肿瘤细胞；和(3)其中发生异常Ras激活的其它增殖性疾病的良性和恶性细胞。
本发明化合物为式1.0所示的化合物或其可药用盐或溶剂化物：其中Q为：Z代表氢，烷基，芳基，芳烷基，环烷基，环烷基烷基，杂芳基，杂芳基烷基，杂环烷基，杂环烷基烷基，环烯基，环烯基烷基，或-CY3Y4，其中Y3和Y4独立地代表烷基和芳基，或者Y3和Y4与它们所连接的碳原子(-C)一起可以形成环烷基或环烯基环；
其中R1，R2，R3，R20，R22，R30和R32独立地代表氢，烷基，芳基，芳烷基，环烷基，环烷基烷基，杂芳基，杂芳基烷基，杂环烷基或杂环烷基烷基；
R25可以代表氢，烷基，环烷基，环烷基烷基，杂环烷基，杂环烷基烷基或-OR40，其中R40可以代表烷基，芳基，芳烷基，环烷基，环烷基烷基，杂芳基，杂芳基烷基，杂环烷基或杂环烷基烷基；
Y代表芳基，杂芳基，杂环烷基或环烷基，
t为0，1，2或3；
w为0或1；和
A不存在，氢，烷基，芳基，芳烷基，环烷基，环烷基烷基，杂环烷基，杂环烷基烷基，氰基，杂芳基或杂芳基烷基。
在另一实施方案中，本发明涉及用于抑制细胞异常生长的药物组合物，它包括有效量的化合物(1.0)与可药用载体。
在另一实施方案中，本发明涉及抑制细胞(包括转化细胞)异常生长的方法，其包括对需要这种治疗的哺乳动物(如人)施用有效量的化合物(1.0)。细胞异常生长是指不受正常调节机制支配的细胞生长(如接触抑制丧失)。这包括下列细胞的异常生长：(1)表达激活Ras致癌基因的肿瘤细胞(肿瘤)；(2)由于另一基因的致癌突变导致其中Ras激活的肿瘤细胞；(3)其中发生异常Ras激活的其它增殖性疾病的良性和恶性细胞；和(4)由除了Ras蛋白质以外的其它机制激活的良性和恶性细胞。虽不拟囿于理论，但据信这些化合物通过阻断G-蛋白异戊二烯化来抑制G-蛋白例如ras p21的功能而起作用，从而使得它们适于治疗增殖性疾病如肿瘤生长与癌症，或者通过抑制ras法尼基蛋白转移酶，从而使得它们对ras转化细胞表现出抗增殖活性。
要抑制的细胞可以是表达激活Ras致癌基因的肿瘤细胞。例如，可以被抑制的细胞类型包括胰腺肿瘤细胞，肺癌细胞，骨髓性白血病肿瘤细胞，甲状腺囊肿瘤细胞，脊髓发育不良肿瘤细胞，表皮癌肿瘤细胞，膀胱癌肿瘤细胞，前列腺肿瘤细胞，乳腺肿瘤细胞或结肠肿瘤细胞。还有，经用化合物(1.0)治疗，可以通过抑制ras法尼基蛋白转移酶而抑制细胞的异常生长。这种抑制可以发生于其中Ras蛋白由于非Ras基因的基因中致癌突变而被激活的肿瘤细胞。另一方面，化合物(1.0)还可以抑制除Ras蛋白质之外的蛋白质激活的肿瘤细胞。
本发明还提供了通过对需要这种治疗的哺乳动物(例如人)施用有效量的化合物(1.0)而抑制肿瘤生长的方法。特别是，本发明提供了通过施用有效量的上述化合物抑制表达激活Ras致癌基因的肿瘤生长方法。可以被抑制肿瘤的实例包括、但不限于：肺癌(如肺腺癌)，胰腺癌(诸如外分泌性胰腺癌之类胰腺癌)，结肠癌(例如结肠直肠癌，如结肠腺癌和结肠腺瘤)，骨髓性白血病(如急性骨髓性白血病(AML))，甲状腺囊癌，脊髓发育不良综合症(MDS)，膀胱癌，黑素瘤，前列腺癌和乳腺癌以及表皮癌。
据信本发明还提供了抑制良性与恶性增殖性疾病的方法，其中由于其它基因的致癌突变而导致Ras蛋白被异常激活，即Ras基因本身并不因突变而被激活成致癌形式，并且所述抑制通过对需要这种治疗的哺乳动物(例如人)施用有效量本文所述的N-取代脲化合物(1.0)实现。例如，良性增殖性疾病多发性神经纤维瘤，或其中因酪氨酸激活致癌基因(如neu，src，abl，lck和fyn)的突变或过度表达而导致Ras激活的肿瘤可以用N-取代脲化合物(1.0)抑制。
在另一实施方案中，本发明涉及通过对哺乳动物，尤其是人，施用有效量的化合物(1.0)抑制法尼基蛋白转移酶和致癌基因蛋白Ras法尼基化的方法。对患者施用能抑制法尼基蛋白转移酶的本发明化合物可用于治疗上述癌症。发明祥述
除非另有说明，本文所用的下列术语如下定义：
BOC-表示叔丁氧羰基；
BOC-ON-表示[2-(叔丁氧羰氧基亚氨基)-2-苯基乙腈]；
C-表示碳；
CBZ-表示苄氧基羰基；
ClCO2Et-氯甲酸乙酯；
CPh3-表示三苯基甲基；
环烷基-表示含3-20个碳原子、优选3-7个碳原子的有支链或无支链饱和碳环；
DBU-表示1，8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯；
DCC-表示二环己基碳二亚胺；
DCM-表示二氯甲烷；
DIC-表示二异丙基碳二亚胺；
DIPEA-二异丙基乙胺
DMAP-表示4-二甲氨基吡啶；
DMF-表示N，N-二甲基甲酰胺；
EDC(也称为DEC)-表示1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐或1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐；
EtOAc-乙酸乙酯；
EtOH-乙醇；
Et3N-三乙胺；
FMOC-表示9-芴基甲氧基羰基；
FMOC-Cl-表示氯甲酸9-芴基甲酯；
HATU-表示[六氟磷酸O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓]；
HOAc或AcOH-乙酸；
HOBT-羟基苯并三唑；
卢剔啶-2，6-二甲基吡啶；
MCPBA-表示间-氯过苯甲酸；
Me-甲基；
MeOH-甲醇；
NaBH5CN-氰基硼氢化钠
Ph-表示苯基；
TBAF-表示四丁基氟化铵；
TFA-表示三氟乙酸；
TFAA-三氟乙酸酐；
THF-表示四氢呋喃；
M+-表示质谱中分子的分子离子；
MH+-表示质谱中分子的分子离子加氢；
Bu-表示丁基；
Et-表示乙基；
Me-表示甲基；
Ph-表示苯基；
苯并三唑-1-基氧基表示：1-甲基-四唑-5-基硫基表示：
烷基-(包括烷氧基、烷基氨基和二烷基氨基的烷基部分)-表示直链和支链碳链并且含有1-20个碳原子，优选1-10个碳原子，更优选1-6个碳原子；例如甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、己基、异壬基等；其中所述烷基可以任选地被一个、两个、三个或更多个下列基团独立取代：卤素、烷基、芳基、环烷基、氰基(-CN)、-CF3、氧代(＝O)、芳氧基、-OR10、-OCF3、杂环烷基、杂芳基、-NR10R12、-NHSO2R10、-SO2NH2、-SO2NHR10、-SO2R10、-SOR10、-SR10、-NHSO2、-NO2、-CONR10R12、-NR12COR10、-COR10、-OCOR10、-OCO2R10或-COOR10，其中R10和R12可以独立地表示氢，烷基，烷氧基，芳基，芳烷基，杂芳基，杂芳烷基，环烷基，环烷基烷基，杂环烷基或杂环烷基烷基；
链烯基-表示含有2-12个碳原子(优选2-6个碳原子，且最优选3-6个碳原子)并且具有至少一个碳-碳双键的直链和支链碳链；其中所述链烯基可以任选地被一个、两个、三个或更多个下列基团独立取代：卤素、烷基、芳基、烷氧基、氨基、烷基氨基、氰基(-CN)、-CF3、二烷基氨基、羟基、氧代(＝O)、苯氧基、-OCF3、杂环烷基、-SO2NH2、-NHSO2R10、-SO2NHR10、-SO2R10、-SOR10、-SR10、-NHSO2、-NO2、-CONR10、-NCOR10或-COOR10；
烷氧基-通过氧原子与邻近结构单元共价键连的1-20个碳原子的烷基部分，例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、戊氧基、己氧基等；其中所述烷氧基基团可任选地被一个、两个、三个或更多个下列基团独立取代：卤素、烷基、芳基、环烷基、氰基(-CN)、-CF3、氧代(＝O)、芳氧基、-OR10、-OCF3、杂环烷基、杂芳基、-NR10R12、-NHSO2R10、-SO2NH2、-SO2NHR10、-SO2R10、-SOR10、-SR10、-NHSO2、-NO2、-CONR10R12、-NR12COR10、-COR10、-OCOR10、-OCO2R10或-COOR10，其中R10和R12如上定义；
芳基(包括芳烷基的芳基部分)-表示含有一个或两个芳环的6-15个碳原子碳环基(如芳基为苯基)，其中所述芳基可任选地与一个其它芳基、环烷基、杂芳基或杂环烷基环稠合，条件是当化合物(1.0)中的“Z”部分为芳基时，稠合芳基为二环(例如萘)，而不是三环或更大的稠合环系；并且其中所述芳环和/或所述稠合环中的任何可取代碳和氮原子可任选并且独立地被一个、两个、三个或更多个下列基团独立取代：卤素、烷基、芳基、环烷基、氰基(-CN)、-CF3、氧代(＝O)、芳氧基、-OR10、-OCF3、杂环烷基、杂芳基、-NR10R12、-NHSO2R10、-SO2NH2、-SO2NHR10、-SO2R10、-SOR10、-SR10、-NHSO2、-NO2、-CONR10R12、-NR12COR10、-COR10、-OCOR10、-OCO2R10或-COOR10，其中R10和R12如上定义；
芳烷基-表示如上定义的烷基，其中烷基部分的一个或多个氢原子已被一个或多个上述芳基基团取代(例如芳烷基为苄基或苯乙基)；其中所述芳烷基基团可任选地与一个其它芳基、环烷基、杂芳基或杂环烷基环稠合，条件是当化合物(1.0)中的“Z”部分为芳烷基时，稠合芳烷基为二环(例如萘)，而不是三环或更大的稠合环系；其中所述芳烷基基团可任选地被一个、两个、三个或更多个下列基团独立取代：卤素、烷基、芳基、环烷基、氰基(-CN)、-CF3、氧代(＝O)、-OR10、-OCF3、杂环烷基、杂芳基、-NR10R12、-NHSO2R10、-SO2NH2、-SO2NHR10、-SO2R10、-SOR10、-SR10、-NHSO2、-NO2、-CONR10R12、-NR12COR10、-COR10、-OCOR10、-OCO2R10或-COOR10，其中R10和R12如上定义；
环烷基-表示含3-20个碳原子(优选3-7个碳原子)的有支链或无支链饱和碳环(例如环烷基为环丙基、环丁基、环戊基、环己基等)；其中所述环烷基环可任选地与一个其它环烷基、环烯基或杂环烷基环稠合形成二环，而不是三环或更大的稠合环系；其中所述环烷基环和/或所述稠合环中的任何可取代碳和氮原子可任选并且独立地被一个、两个、三个或更多个下列基团取代：卤素、烷基、芳基、环烷基、氰基(-CN)、-CF3、氧代(＝O)、芳氧基、-OR10、-OCF3、杂环烷基、杂芳基、-NR10R12、-NHSO2R10、-SO2NH2、-SO2NHR10、-SO2R10、-SOR10、-SR10、-NHSO2、-NO2、-CONR10R12、-NR12COR10、-COR10、-OCOR10、-OCO2R10或-COOR10，其中R10和R12如上定义；
环烷基烷基-表示如上定义的烷基，其中烷基部分的一个或多个氢原子已被一个或多个上述环烷基环取代；其中所述环烷基烷基基团可任选地被一个、两个、三个或更多个下列基团独立取代：卤素、烷基、芳基、环烷基、氰基(-CN)、-CF3、氧代(＝O)、-OR10、-OCF3、杂环烷基、杂芳基、-NR10R12、-NHSO2R10、-SO2NH2、-SO2NHR10、-SO2R10、-SOR10、-SR10、-NHSO2、-NO2、-CONR10R12、-NR12COR10、-COR10、-OCOR10、-OCO2R10或-COOR10，其中R10和R12如上定义；
环烯基-表示具有一个或两个不饱和键(即碳-碳双键)并且含有3-20个碳原子、优选3-7个碳原子的碳环，其中所述的一个或两个不饱和键不会赋予环烯基环芳香特性；其中所述环烯基环可任选地与一个其它环烷基、环烯基或杂环烷基环稠合形成二环(例如降冰片烯基)，而不是三环或更大的稠合环系；其中所述环烯基环和/或所述稠合环中的任何可取代碳和氮原子可任选并且独立地被一个、两个、三个或更多个下列基团取代：卤素、烷基、芳基、环烷基、氰基(-CN)、-CF3、氧代(＝O)、-OR10、-OCF3、杂环烷基、杂芳基、-NR10R12、-NHSO2R10、-SO2NH2、-SO2NHR10、-SO2R10、-SOR10、-SR10、-NHSO2、-NO2、-CONR10R12、-NR12COR10、-COR10、-OCOR10、-OCO2R10或-COOR10，其中R10和R12如上定义；
环烯基烷基-表示如上定义的烷基，其中烷基部分的一个或多个氢原子被一个或多个上述环烯基环取代；其中所述环烯基烷基基团可任选地与一个其它环烷基、环烯基或杂环烷基环稠合形成二环(例如降冰片烯基甲基)；其中所述环烯基烷基和/或所述稠合环中的任何可取代碳和氮原子可任选并且独立地被一个、两个、三个或更多个下列基团取代：卤素、烷基、芳基、环烷基、氰基(-CN)、-CF3、氧代(＝O)、-OR10、-OCF3、杂环烷基、杂芳基、-NR10R12、-NHSO2R10、-SO2NH2、-SO2NHR10、-SO2R10、-SOR10、-SR10、-NHSO2、-NO2、-CONR10R12、-NR12COR10、-COR10、-OCOR10、-OCO2R10或-COOR10，其中R10和R12如上定义；
卤素-表示氟、氯、溴和碘；
杂烷基-表示被1-3个选自-O-、-S-和-N-的杂原子间隔的、含有1-20个碳原子(优选1-6个碳原子)的直链或支链碳链；其中所述杂烷基中的任何可取代碳和氮原子可任选并且独立地被一个、两个、三个或更多个下列基团取代：卤素、烷基、芳基、环烷基、氰基(-CN)、-CF3、氧代(＝O)、-OR10、-OCF3、杂环烷基、杂芳基、-NR10R12、-NHSO2R10、-SO2NH2、-SO2NHR10、-SO2R10、-SOR10、-SR10、-NHSO2、-NO2、-CONR10R12、-NR12COR10、-COR10、-OCOR10、-OCO2R10或-COOR10，其中R10和R12如上定义；
杂芳基-表示具有至少一个选自O、S或N杂原子的环状基团，所述杂原子插入碳环结构并具有足够数量的离域pi电子以提供芳香特性，这种芳族杂环基含有2-14个碳原子(例如杂芳基为咪唑基)；其中所述杂芳基可任选地与一个芳基、环烷基、杂芳基或杂环烷基环稠合形成二环，而不是三环或更大的稠合环系；并且其中所述杂芳基和/或所述稠合环中的任何可取代碳或氮原子可任选并且独立地被一个、两个、三个或更多个下列基团取代：卤素、烷基、芳基、芳烷基、环烷基、氰基(-CN)、-CF3、氧代(＝O)、-OR10、-OCF3、杂环烷基、杂芳基、-NR10R12、-NHSO2R10、-SO2NH2、-SO2NHR10、-SO2R10、-SOR10、-SR10、-NHSO2、-NO2、-CONR10R12、-NR12COR10、-COR10、-OCOR10、-OCO2R10或-COOR10，其中R10和R12如上定义。代表性的杂芳基可以包括例如呋喃基、咪唑基、嘧啶基、三唑基、2-、3-或4-吡啶基或2-、3-或4-吡啶基N-氧化物，其中的吡啶基N-氧化物可表示为：
杂芳基烷基-表示如上定义的烷基，其中的一个或多个氢原子已由一个或多个杂芳基基团置换；其中所述杂芳基可任选地与一个芳基、环烷基、杂芳基或杂环烷基环稠合形成二环，而不是三环或更大的稠合环系；并且其中所述杂芳基和/或所述稠合环中的任何可取代碳或氮原子可任选并且独立地被一个、两个、三个或更多个下列基团取代：其中所述杂芳基烷基基团可任选被一个、两个、三个或更多个下列基团独立取代：卤素、烷基、芳基、环烷基、氰基(-CN)、-CF3、氧代(＝O)、-OR10、-OCF3、杂环烷基、杂芳基、-NR10R12、-NHSO2R10、-SO2NH2、-SO2NHR10、-SO2R10、-SOR10、-SR10、-NHSO2、-NO2、-CONR10R12、-CH2NR12COR10、-NR12COR10、-COR10、-OCOR10、-OCO2R10或-COOR10，其中R10和R12如上定义；
杂环烷基-表示含有3-15个碳原子、优选4-6个碳原子的饱和、有支链或无支链碳环，其中碳环被1-3个选自-O-、-S-或-N-的杂原子间断，其中所述环可含有一个或两个不会赋予该环具有芳香性质的不饱和键；其中所述杂环烷基可任选地与一个芳基、环烷基、杂芳基或杂环烷基环稠合形成二环，而不是三环或更大的稠合环系；并且其中所述杂环烷基和/或所述稠合环中的任何可取代碳或氮原子可任选并且独立地及在环中任何碳原子如氮原子的取代可以任选并独立地被一个、两个、三个或更多个下列基团取代：卤素、烷基、芳基、环烷基、氰基(-CN)、-CF3、氧代(＝O)、芳氧基、-OR10、-OCF3、杂环烷基、杂芳基、-NR10R12、-NHSO2R10、-SO2NH2、-SO2NHR10、-SO2R10、-SOR10、-SR10、-NHSO2、-NO2、-CONR10R12、-NR12COR10、-COR10、-OCOR10、-OCO2R10或-COOR10，其中R10和R12如上定义。代表性的杂环烷基基团可以包括2-或3-四氢呋喃基、2-或3-四氢噻吩基、1-、2-、3-或4-哌啶基、2-或3-吡咯烷基、1-、2-或3-哌嗪基、2-或4-二噁烷基、吗啉基、其中R10定义如上，并且t为0，1或2。
杂环烷基烷基-表示如上定义的烷基，其中的一个或多个氢原子已由一个或多个杂环烷基基团置换；其中所述环可包含一个或两个不会赋予环芳香特性的不饱和键；并且其中所述杂环烷基烷基可任选地被一个、两个、三个或更多个下列基团独立取代：卤素、烷基、芳基、环烷基、氰基(-CN)、-CF3、氧代(＝O)、芳氧基、-OR10、-OCF3、杂环烷基、杂芳基、-NR10R12、-NHSO2R10、-SO2NH2、-SO2NHR10、-SO2R10、-SOR10、-SR10、-NHSO2、-NO2、-CONR10R12、-NR12COR10、-COR10、-OCOR10、-OCO2R10或-COOR10，其中R10和R12如上定义。
某些本发明化合物可能会以不同的立体异构形式(例如对映体、非对映体和阻转异构体)存在。本发明涉及所有这些以纯净形式和包括外消旋混合物在内的混合物形式存在的立体异构体。
某些化合物的性质呈酸性。例如具有羧基或酚类羟基的化合物。这些化合物可以形成可药用盐。这类盐的实例可以包括钠、钾、钙、铝、金和银盐。同样还包括与可药用胺如例如氨、烷基胺、羟基烷基胺、N-甲基葡糖胺等所成的盐。
某些碱性化合物也可以形成可药用盐，如酸加成盐。例如，吡啶氮原子可以与强酸成盐，而具有碱性取代基如氨基的化合物也可以与弱酸成盐。成盐用的合适酸的实例包括盐酸、硫酸、磷酸、乙酸、柠檬酸、草酸、丙二酸、水杨酸、苹果酸、富马酸、琥珀酸、抗坏血酸、马来酸、甲磺酸以及本领域技术人员公知的其它无机酸或羧酸。这些盐可通过使游离碱形式化合物与足量成盐所需的酸以常规方式接触而制备。通过用合适的稀碱水溶液如氢氧化钠、碳酸钾、氨和碳酸氢钠的稀水溶液处理盐，可以再生为游离碱形式。游离碱形式和它们的各种盐形式在某些物理性质上多少有些不同，如在极性溶剂中的溶解性，但就本发明目的而言，所述酸和碱的盐与它们的相应游离碱形式在其它方面的性质却是等同的。
所有这些酸和碱的盐都为本发明范围内的可药用盐，而且对本发明的目的而言，所有酸和碱的盐与相应化合物的游离形式是等同的。
本发明化合物可以按照下列路线制备。
库(Library)制备：化合物库通过平行合成制备。这些化合物的通式结构见结构式1所示。侧链组胺上的“A”基团和哌嗪N-4上的“Z”基团在化合物库中是可变的。库中的每一化合物都含有位于哌嗪核N-1位上的甲基磺酸酯(methyl sulfonate)(结构式1)。图1
参照路线A，侧链胺2通过用相应的三氟甲磺酸酯处理-Boc组胺1、随后除去Boc基团制得。化合物库的制备在TentaGel(德国Rapp有限公司商标)树脂3上进行，这种树脂被4-(4-甲酰基-3-甲氧基苯氧基)丁酸4(见路线1所示)官能化形成官能化树脂5。TentaGel树脂为低交联聚苯乙烯与聚乙二醇的复合材料，并且末端已被氨基官能化。合成在Merrifield摇动反应器中通过利用官能化树脂5的酸裂解连接基上的醛还原胺化侧链胺2开始，首先生成6。继而偶联N-4-Fmoc N-1-Boc哌嗪羧酸7与6得到8。除去8的Fmoc基团得到9。干燥树脂9，进而填装到Robbins FlexChem装置(block)(96孔)内，并在该装置中进行后续反应。树脂9在DMF中和2％HOAc存在下用各种相应的醛和NaBH3CN还原烷基化，或者在CH2Cl2中用相应的酰氯和卢剔啶或者在CH2Cl2中用磺酰氯酰化，或者在CH2Cl2中用异氰酸酯和DIPEA处理。树脂10依次用10％HCl/MeOH和甲磺酰氯处理，产生树脂11。使用三氟乙酸从树脂1中裂解出产物12。路线1路线2
PS 461400的制备方法(路线2)1.化合物2的制备。-75℃及搅拌下，在Ar氛中向三氟甲磺酸酐(1.9mL，11.3mmol)的二氯甲烷(35mL)溶液内逐滴加入4-氰基苄醇(1)(1.37g，10.3mmol)和二异丙基乙胺(1.97mL，11.3mmol)在二氯甲烷(12mL)中的溶液。-78℃继续搅拌20分钟，然后加入N-Bis-Boc-组胺(3.2g，10.3mmol)的二氯甲烷(35mL)溶液。缓慢温热反应物到室温，搅拌过夜。反应混合物用碳酸钠饱和溶液(30mL)洗涤。干燥(Na2SO4)有机相，然后真空除去溶剂。残留物通过柱色谱纯化(使用5％MeOH/CH2Cl2)，从而得到1.38g产物，产率41％。MS：m/z 327(MH+).将这一化合物在CH2Cl2(20mL)中用25％三氟乙酸处理1小时。然后真空除去溶剂。将残留物溶于5％HCl(15mL)，用CH2Cl2(10mL×2)洗涤。水层用NaOH碱化至pH＝9，进而用乙酸乙酯(30mL×4)提取。干燥(Na2SO4)合并的有机相，真空除去溶剂后得到600mg所需胺2，产率66％。MS：m/z 227(MH+)。2.化合物3的制备。搅拌下，向胺(2)(600mg，2.65mmol)和N-4-Fmoc-N-1-Boc-哌嗪羧酸(1g，2.21mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液内加入DCC(547mg，2.65mmol)和HOBt(358mg，2.65mmol)。搅拌反应物过夜。过滤反应混合物。滤液用水(20mL)洗涤。干燥(硫酸钠)有机相并真空除去溶剂。残留物进而通过快速柱色谱纯化，以5％MeOH/CH2Cl2洗脱，得到酰胺。将此酰胺在CHCl3(10mL)中用20％哌啶处理2小时。真空除去溶剂。残留物通过柱色谱纯化，以5-10％MeOH/CH2Cl2洗脱，得到713mg所需胺，产率74％。MS：m/z439(MH+)。3.化合物4的制备。将胺3(40mg，0.09mmol)溶于MeOH(3mL)，加入环己基乙醛(23μL，0.18mmol)和氰基硼氢化钠(182μL，1.0MTHF溶液，0.18mmol)。搅拌反应过夜。真空除去溶剂，进而将残留物通过快速柱色谱纯化，以3-5％MeOH/CH2Cl2洗脱，从而得到22mg所需产物，产率44％。MS：m/z 549(MH+)。4.PS461400的制备。搅拌下，向化合物4(22mg，0.04mmol)的CH2Cl2(2mL)溶液内加入三氟乙酸(0.5mL)。搅拌混合物1小时，真空除去溶剂。残留物在高真空线上抽吸2小时，进而溶于CH2Cl2(2mL)。向此溶液中加入二异丙基乙胺(35μL，0.2mmol)和异氰酸环己酯(28.5μL，0.2mmol)。搅拌反应物过夜，再溶于水(10mL)，以CH2Cl2(15mL×2)提取。干燥(Na2SO4)有机层，并真空除去溶剂。残留物通过快速柱色谱纯化，以4％MeOH/CH2Cl2洗脱，得11mg所需产物，产率48％.MS：m/z 574(MH+)。
采用与上述实例基本相同的反应路线，使用合适的醇1可制得下列化合物：PS287238 PS812520 PS465781 PS159773 PS372802PS793961 PS478500 PS783003 PS593455 PS320451PS477090 PS516972 PS410892 PS241936 PS409643PS725556 PS769295 PS075114 PS990951 PS192638PS354164 PS395570 PS956973 PS859989 PS467023路线3PS 321542的制备方法(路线3)1.化合物3的制备。搅拌下，向酸酐1(100mg，0.39mmol)的CH2Cl2(4mL)溶液内加入胺1(105mg，0.39mmol)在MeOH/CH2Cl2(0.5mL/2mL)混合液中的溶液。搅拌反应1小时。冷却反应物到0℃，加入异氰酸环己酯(111μL，0.78mmol)。搅拌反应过夜。将反应物分配到CH2C12(40mL)与饱和NaCl溶液(20mL)之间。干燥(Na2SO4)有机层，真空除去溶剂后得到200mg所需产物，产率85％.MS：m/z 607(MH+)。2.化合物PS321542的制备。搅拌下，向化合物3(137mg，0.226mmol)的CH2Cl2(3mL)溶液内加入三氟乙酸(1mL)。搅拌混合物1小时，然后真空除去溶剂。将残留物分配到1N NaOH(20mL)与CH2Cl2(20mL)之中。水层用CH2Cl2和EtOAc提取。干燥(Na2SO4)合并的有机相，并在真空下除去溶剂。将所得胺溶于MeOH(3mL)。向这一溶液内加入环己基乙醛(57mg，0.45mmol)和氰基硼氢化钠(1.0M THF溶液，452μL，0.45mmol)。搅拌反应物过夜。真空除去溶剂，将残留物分配到1N NaOH(20mL)与CH2Cl2(20mL)之间。干燥(Na2SO4)并蒸发有机层。残留物进而通过快速柱色谱纯化，以4％MeOH/CH2Cl2洗脱，得到52mg产物，产率37％。MS：m/z 617(M+)。
采用与上述实例基本相同的反应路线，使用外消旋酸酐2制得下列化合物：PS815156 PS288326 PS130057 PS064691 PS028348PS813558 PS319448 PS420083 PS259236 PS437810PS381385 PS201633路线41-(2-氨基乙基)-5-苄基咪唑(10)和1-(2-氨基乙基)-4-苄基咪唑(12)的制备步骤(路线4)1.化合物2的制备。0℃及搅拌下，向咪唑(5g，73.4mmol)的CH2Cl2(30mL)溶液内逐滴加入三乙胺(15.4mL，110mmol)和二甲氨基磺酰氯(8.3mL，77.1mmol)。缓慢温热反应物至室温，搅拌过夜。加水(30mL)终止反应，用CH2Cl2(30mL×2)提取。干燥(Na2SO4)有机相，真空除去溶剂得到化合物2，产率89％.MS：m/z 176(MH+)。2.化合物5的制备。-78℃及搅拌下，在Ar氛中向化合物2(1.0g，5.72mmol)的THF(20mL)溶液内加入n-BuLi的己烷溶液(2.5M溶液，2.44mL，6.12mmol)。-78℃搅拌反应混合物30分钟，然后加入三乙基氯硅烷(1.92mL，11.44mmol)。室温搅拌反应物5小时，然后在减压下通过温和加热除去溶剂和过量的氯硅烷，得到中间体3。向中间体3中加入THF(20mL)，冷却所得溶液至-78℃。加入仲丁基锂的环己烷溶液(1.3M溶液，8.8mL，11.44mmol)，-78℃搅拌此混合物30分钟，然后再加入苄基溴(2.04mL，17.16mmol)。-78℃下继续搅拌30分钟，继而室温搅拌过夜。真空除去溶剂，得到中间体4。将中间体4与2N HCl(50mL)一同搅拌3小时，然后用乙醚(20mL×2)洗涤所得混合物。水相用NaOH(40％w/w)碱化至pH＝11，尔后用乙醚(50mL×3)提取。干燥(Na2SO4)合并的有机相，并真空除去溶剂。残留物进而通过快速柱色谱纯化，以35％己烷/Et0Ac洗脱，从而得到560mg化合物5，产率37％.MS：m/z 266(MH+)。3.化合物6的制备。在4％NaOH(w/w，100mL)中回流化合物5(560mg，2.11mmol)过夜。真空除去溶剂。残留物用THF研制，过滤并干燥(Na2SO4)。减压除去溶剂后得到240mg 4(5)-苄基咪唑(6)，产率72％。MS：m/z 159(MH+)。4. 1-(2-氨基乙基)-5-苄基咪唑(10)的制备。搅拌下，向化合物6(230mg，1.45mmol)在H2O/二噁烷(1∶1，20mL)中的溶液内加入碳酸钠(31mg，0.29mml)和二碳酸二叔丁酯(400mg，1.74mmol)。搅拌混合物过夜，然后用CH2Cl2(40mL×2)提取。水洗(20mL)合并的有机层，干燥(Na2SO4)，进而真空除去溶剂，从而得到305mg化合物7，产率82％.MS：m/z 259(MH+)。-78℃及搅拌下，在氩气氛中向三氟甲磺酸酐(219μL，1.3mmol)的CH2Cl2(5mL)溶液内加入化合物8(249mg，1.3mmol)与DIEA在CH2Cl2(5mL)中的溶液。-78℃继续搅拌20分钟，逐滴加入化合物7的CH2Cl2(5mL)溶液。逐渐温热反应物至室温反应过夜。向反应物中加入饱和NaHCO3(10mL)。混合物用CH2Cl2(20mL×2)提取。水(10mL)洗有机层，干燥(Na2SO4)并真空除去溶剂。残留物进而通过柱色谱纯化，以1-5％MeOH/CH2Cl2洗脱，得到60mg化合物9。MS：m/z 332(MH+)。随后将化合物9溶于MeOH(2mL)，加入肼(10μL)。搅拌反应过夜，尔后真空除去溶剂。将残留物溶于0.1N HCl(10mL)，用EtOAc(10mL)洗涤。水相用NaOH碱化至pH＝11，接着用EtOAc(20mL×3)提取。干燥(Na2SO4)合并的有机层，真空除去溶剂后得到标题化合物10.MS：m/z 202(MH+)。5. 1-(2-氨基乙基)-4-苄基咪唑(12)的制备。-78℃及搅拌下，在氩气氛中向三氟甲磺酸酐(245μL，1.46mmol)的CH2Cl2(5mL)加入化合物8(278mg，1.46mmol)与DIEA在CH2Cl2(5mL)中的溶液。-78℃继续搅拌20分钟，逐滴加入化合物6的CH2Cl2(5mL)溶液。逐渐温热反应物至室温反应过夜。向反应物中加入饱和NaHCO3(10mL)。混合物用CH2Cl2(20mL×2)提取。用水(10mL)洗有机层，干燥(Na2SO4)并真空除去溶剂。残留物进而通过柱色谱纯化，以1-5％MeOH/CH2Cl2洗脱，得到112mg化合物11.MS：m/z 332(MH+)。随后将化合物11溶于MeOH(2mL)，加入肼(10μL)。搅拌反应过夜，并真空除去溶剂。将残留物溶于0.1N HCl(10mL)，用EtOAc(10mL)洗涤。水相用NaOH碱化至pH＝11，接着用EtOAc(20mL×3)提取。干燥(Na2SO4)合并的有机层，真空除去溶剂后得到标题化合物12.MS：m/z 202(MH+)。
应用路线2中所述方法，使用化合物10制备PS319448。同样应用路线2中所述方法，使用化合物12制备PS204446。
保护与脱保护化合物用的试剂和反应条件是众所周知的，例如见T.W.Greene和P.Wuts在《有机合成中的保护基》，第2版，WileyInterscience，N.Y.1991，p.473中所述。
本发明化合物及其制备用的起始原料用下列实施例举例说明，但它们不得认作是对本发明内容范围的限制。在本发明范围内，其它可供选择的机制途径和相似结构对本领域技术人员而言是显而易见的，例如WO95/10516中所述的方法。
式(1.0)化合物可以采用常规方法自反应混合物中分离出来，例如，用有机溶剂从水中提取反应混合物、蒸发有机溶剂、随后通过硅胶或其它适宜的色谱介质进行层析。或者，可以将化合物(1.0)溶在与水混溶的溶剂如甲醇中，将甲醇溶液加到水中以沉淀化合物，并且通过过滤或离心分离沉淀物。
本发明化合物及其制备用的起始原料用下列实施例举例说明，但它们不得认作是对本发明范围的限制。实施例1
氮气氛下，105℃温和回流由10(50mg，0.108mmol，1.0eq.)、1-氯-1-苯基乙烷(170μl，1.29mmol，12.0eq.)和三乙胺(180μl，1.29mmol，12.0eq.)在无水对-二噁烷(10ml)中形成的溶液12小时。冷却溶液到室温，于30℃真空除去挥发物。残留物吸收到蒸馏水(10ml)中，用二氯甲烷(5×5ml)提取。合并的有机提取物用盐水(5ml)洗涤、硫酸钠干燥、过滤、并于30℃真空浓缩。经制备级硅胶薄层层析(CH3CN∶2N NH3/MeOH＝90∶10 v/v作为洗脱剂)后得到亮黄色半固体物N2-[2-[1-[(4-氰基苯基)甲基]-1H-咪唑-5-基]乙基]-N1-环己基-4-(1-苯基乙基)-1，2(R)-哌嗪二甲酰胺(12mg，0.021mmol，20％)。HR-MS(FAB)：C33H42N7O2([M+H]+)的计算值：568.3400.实测值：568.3407.实施例2
室温及搅拌下，在5分钟内向酸酐8(701mg，2.74mmol，1.2eq.)的无水二氯甲烷(10ml)溶液内逐滴加入14(500mg，2.28mmol，1.0eq.)的无水二氯甲烷(5ml)溶液。向溶液中通入氮气流以驱除析出的二氧化碳，并在通氮气的情形下搅拌所得无色溶液1小时。停止通气，5分钟内逐滴加入异氰酸环己酯(594ml，4.56mmol，2.0eq.)。室温搅拌此亮黄色溶液1小时。在30℃下真空除去挥发物。将所得粘性油状物分配到二氯甲烷(25ml)与1N NaOH水溶液(25ml)之间。水层用二氯甲烷(3×10ml)提取。合并的有机提取物用盐水(5ml)洗涤、硫酸钠干燥、过滤并于30℃真空浓缩。制备级硅胶薄层层析(CH2Cl2∶2N NH3/MeOH＝90∶10 v/v)得到1-[(环己基氨基)羰基]-2(R)-[[[2-[1-(4-氟苯基)甲基]-1H-咪唑-5-基]乙基]氨基]羰基]-4-哌嗪羰酸1，1-二甲基乙酯(190mg，0.34mmol，15％)，为灰白色泡沫物。熔点：72℃(分解)。MS(FAB+)：m/e 557([M+H]+)。HR-MS(FAB)：C29H42FN6O4([M+H]+)的计算值：557.3252.实测值：557.3240.实施例3
将实施例2的标题化合物(190mg，0.34mmol，1.0eq.)溶于无水二氯甲烷(10ml)与三氟乙酸(10ml)的混合液中。在氮气氛中室温搅拌所形成的黄色溶液1小时。于30℃真空蒸发挥发物，剩余的粘性油状物直接通过硅胶快速层析(CH2Cl2∶2N NH3/MeOH＝90∶10 v/v)，从而得到灰白色固体N2-[2-[1-[(4-氟苯基)甲基]-1H-咪唑-5-基]乙基]-N1-环己基-1，2(R)-哌嗪甲酰胺(121mg，0.27mmol，78％)。实施例4
0℃及搅拌下，在氮气氛中向10(50mg，0.108mmol，1.0eq.)和苯甲醛(R＝苯基)(0.336mmol，3.1eq.)在冰乙酸(0.5ml)与无水二氯甲烷(10ml)混合液中的溶液内分批(3×25mg)加入三乙酰氧基硼氢化钠(75mg，0.336mmol，3.1eq.)。缓慢(3小时)温热混合物到室温，另搅拌12小时。于30℃真空除去挥发物。残留物吸收到1N NaOH水溶液(10ml)内，用二氯甲烷(5×5ml)提取。合并的有机提取物用盐水(5ml)洗涤、硫酸钠干燥、过滤并于25℃真空浓缩。经制备级硅胶薄层层析(使用CH2Cl2∶2N NH3/MeOH＝90∶10 v/v或CH3CN∶2NNH3/MeOH＝90∶10 v/v作为洗脱剂)得到产物。
在实施例5-28中，采用与实施例4所述基本相同的方法，只是用相应的醛替换苯甲醛，从而制得标题化合物。实施例5分解点：80℃实施例6计算值：570.3556.精确质量([M+H]+)计算值：570.3556.实测值：570.3570.实施例7分解点：90℃精确质量([M+H]+)计算值：504.4339.实测值：504.4313.实施例8分解点：85℃精确质量([M+H]+)计算值：561.2760.实测值：561.2755.实施例9分解点：65℃精确质量([M+H]+)计算值：548.3713实测值：548.3712.实施例10分解点：155℃精确质量([M+H]+)计算值：579.3196.实测值：579.3200.实施例11分解点：95℃精确质量([M+H]+)计算值：579.3196.实测值：579.3189.实施例12分解点：油状物精确质量([M+H]+)计算值：584.3349.实测值：584.3352.实施例13分解点：半固体精确质量([M+H]+)计算值：560.3713.实测值：560.3712.实施例14分解点：半固体精确质量([M+H]+)计算值：572.3149.实测值：572.3145.实施例15分解点：165℃精确质量([M+H]+)计算值：622.3117.实测值：622.3134.实施例16分解点：180℃精确质量([M+H]+)计算值：588.2854.实测值：588.2850.实施例17分解点：半固体精确质量([M+H]+)计算值：632.2349.实测值：632.2334.实施例18分解点：油状物精确质量([M+H]+)计算值：597.3665.实测值：597.3653.实施例19分解点：205℃精确质量([M+H]+)计算值：612.3298.实测值：612.3308.实施例20分解点：120℃精确质量([M+H]+)计算值：611.3458.实测值：611.3474.实施例21分解点：100℃精确质量([M+H]+)计算值：611.3400.实测值：611.3424.实施例22分解点：185℃精确质量([M+H]+)计算值：568.3400.实测值：568.3410.实施例23分解点：半固体精确质量([M+H]+)计算值：570.3193.实测值：570.3194.实施例24.分解点：185℃精确质量([M+H]+)计算值：622.2464.实测值：622.2452.实施例25分解点：130℃精确质量([M+H]+)计算值：588.2854.实测值：588.2857.实施例26分解点：160℃精确质量([M+H]+)计算值：584.3349.实测值：584.3347.实施例27分解点：130℃精确质量([M+H]+)计算值：584.3349.实测值：584.3356.实施例28分解点：110℃精确质量([M+H]+)计算值：588.2854.实测值：588.2844.
使用实施例3的标题化合物，按照与实施例4所述基本相同的方法可以制得下列化合物。实施例28A分解点：155℃精确质量([M+H]+)计算值：547.3197实测值：547.3192实施例28B分解点：165℃精确质量([M+H]+)计算值：565.3103实测值：565.3106实施例28C：N4-苯甲基-N2-[2-[1-[(4-氯苯基)甲基]-1H-咪唑-5-基]乙基]-N1-环己基-1，2(R)-哌嗪二甲酰胺
0℃下，向溶在冰乙酸(0.5mL)与无水二氯甲烷(10ml)中的制备实施例12标题化合物(75mg，0.16mmol)与苯甲醛(0.05mL，0.5mmol)内加入三乙酰氧基硼氢化钠(102mg，0.5mmol)，温热所得混合物至室温，另搅拌12小时。真空浓缩反应混合物，加二氯甲烷稀释，并用1N NaOH(水溶液)洗涤。有机相用无水硫酸镁干燥、过滤、真空浓缩、并通过硅胶制备板色谱纯化，使用7％MeOH(用氨2M饱和)-CH3CN作为洗脱剂，从而得到白色固体标题化合物(60mg，MH+＝563，mp＝116.2℃)。实施例28D：N4-苯甲基-N2-[2-[1-(苯乙基)-1H-咪唑-5-基]乙基]-N1-环己基-1，2(R)-哌嗪二甲酰胺
0℃下，向溶在冰乙酸(0.5mL)与无水二氯甲烷(10ml)中的制备实施例12A标题化合物(75mg，0.17mmol)和苯甲醛(0.05mL，0.5mmol)内加入三乙酰氧基硼氢化钠(108mg，0.5mmol)，温热所得混合物至室温，另搅拌12小时。真空浓缩反应混合物，加二氯甲烷稀释，并用1N NaOH(水溶液)洗涤。有机相用无水硫酸镁干燥、过滤、真空浓缩、并通过制备板色谱(硅胶)纯化，使用7％MeOH(用氨2M饱和)-CH3CN作为洗脱剂，从而得到白色固体标题化合物(61mg，MH+＝543，mp＝64.4℃)。实施例28E：N-[2-[1-[(4-氰基苯基)甲基]-1H-咪唑-5-基]乙基]-1-(1-氧代丙基)-4-苯基(甲基)-2(R)-哌嗪二甲酰胺
向制备实施例11的标题化合物(50mg，0.12mmol，1.0eq)和三乙胺(33mL，0.24mmol)在无水二氯甲烷(2ml)中的溶液内加入丙酰氯(15.2mL，0.18mmol)。所形成的混合物在氮气氛中室温搅拌48小时，然后用饱和NaHCO3(水)溶液终止反应。混合物用二氯甲烷提取，进而用无水硫酸钠干燥。过滤有机相，真空浓缩，并将残留物通过制备板色谱(硅胶)纯化，使用氢氧化铵饱和的6％甲醇-二氯甲烷洗脱，得到灰白色固体标题化合物(38.1mg，mp＝88.2-168.6℃，MH+＝485)。实施例28F：N-[2-[1-[(4-氰基苯基)甲基]-1H-咪唑-5-基]乙基]-1-(1-氧代丁基)-4-苯基(甲基)-2(R)-哌嗪二甲酰胺
按照实施例28E所述的类似方法，但使用丁酰氯代替丙酰氯，从而制得灰白色固体标题化合物(34.3mg，mp＝82.32-142.5℃，MH+＝499)。实施例28G：1-苯甲酰基-N-[2-[1-[(4-氰基苯基)甲基]-1H-咪唑-5-基]乙基]-4-苯甲基-2(R)-哌嗪二甲酰胺
按照实施例28E所述的类似方法，但使用苯甲酰氯代替丙酰氯，从而制得灰白色固体标题化合物(33.2mg，mp＝115.3-170.3℃，MH+＝533)。实施例28H：1-乙酰基-N-[2-[1-[(4-氰基苯基)甲基]-1H-咪唑-5-基]乙基]-4-(苯甲基)-2(R)-哌嗪二甲酰胺
按照实施例28E所述的类似方法，但使用乙酰氯代替丙酰氯，从而制得灰白色固体标题化合物(44.0mg，mp＝93.0-174.9℃，MH+＝471)。实施例28I：N-[2-[1-[(4-氰基苯基)甲基]-1H-咪唑-5-基]乙基]-1-苯基乙酰基-4-(苯甲基)-2(R)-哌嗪二甲酰胺
按照实施例28E所述的类似方法，但使用苯乙酰氯代替丙酰氯，从而制得灰白色固体标题化合物(57.7mg，45％，mp＝85.6-96.7℃，MH+＝547)。实施例28J：N-[2-[1-[(4-氰基苯基)甲基]-1H-咪唑-5-基]乙基]-1-(甲磺酰基)-4-(苯甲基)-2(R)-哌嗪甲酰胺
按照实施例28E所述的类似方法，但使用甲磺酰氯代替丙酰氯，从而制得灰白色固体标题化合物(52.4mg，mp＝96.5-161.7℃，MH+＝507)。实施例28K：N-[2-[1-[(4-氰基苯基)甲基]-1H-咪唑-5-基]乙基]-1-(乙磺酰基)-4-(苯甲基)-2(R)-哌嗪甲酰胺
按照实施例28E所述的类似方法，但使用乙磺酰氯代替丙酰氯，从而制得灰白色固体标题化合物(40.4mg，mp＝97.3-150.2℃，MH+＝521)。实施例28L：N-[2-[1-[(4-氰基苯基)甲基]-1H-咪唑-5-基]乙基]-1-(苯磺酰基)-4-(苯甲基)-2(R)-哌嗪甲酰胺
按照实施例28E所述的类似方法，但使用苯磺酰氯代替丙酰氯，从而制得灰白色固体标题化合物(50mg，75％，mp＝105.7-166.5℃，MH+＝569)。实施例28M：N-[2-[1-[(4-氰基苯基)甲基]-1H-咪唑-5-基]乙基]-1-[(苯甲基)磺酰基]-4-(苯甲基)-2(R)-哌嗪甲酰胺
按照实施例28E所述的类似方法，但使用苄基磺酰氯代替丙酰氯，从而制得灰白色固体标题化合物(26.8mg，mp＝118.1-180.5℃，MH+＝583)。实施例28N：N2-[2-[1-[(4-氰基苯基)甲基]-1H-咪唑-5-基]乙基]-N1-苯基-4-(苯甲基)-1，2(R)-哌嗪甲酰胺
按照制备例12所述的类似方法，但使用制备例11的标题化合物，并用异氰酸苯酯替代异氰酸环己酯，从而制得灰白色固体标题化合物(28.8mg，mp＝128.0-139.2℃，MH+＝548)。实施例280：N2-[2-[1-[(4-氰基苯基)甲基]-1H-咪唑-5-基]乙基]-N1-(1，1-二甲基乙基)-4-(苯甲基)-1，2(R)-哌嗪二甲酰胺
按照制备例12所述的类似方法，但使用制备例11的标题化合物，并用异氰酸叔丁酯替代异氰酸环己酯，从而制得灰白色固体标题化合物(66.8mg，mp＝97.8℃，MH+＝528)。实施例28P：N-[2-[1-[(4-氰基苯基)甲基]-1H-咪唑-5-基]乙基]-4-(苯甲基)-1-(4-吡啶基乙酰基)-2(R)-哌嗪甲酰胺N1-氧化物
向制备例11的标题化合物(100mg，0.23mmol)中加入HOBt(47mg，0.35mmol)、DEC(67mg，0.35mmol)、吡啶基乙酸N-氧化物(53mg，0.35mmol)、NMM(39mL，0.35mmol)和无水DMF(10mL)。混合物在氮气氛中室温搅拌过夜。真空浓缩混合物，加二氯甲烷稀释，并用碳酸氢钠饱和水溶液洗涤。有机相用无水MgSO4干燥、过滤并真空浓缩。残留物进而通过制备板色谱(硅胶)纯化，使用水合氢氧化铵饱和的6％MeOH-98％CH2Cl2，从而得到灰白色固体标题化合物(54mg，MH-＝564)。实施例28Q.1-[[1-(氨基羰基)-4-哌啶基]乙酰基]-N-[2-[1-[(4-氰基苯基)甲基]-1H-咪唑-5-基]乙基]-4-(苯甲基)-2(R)-哌嗪甲酰胺
按照实施例28P所述的类似方法，但使用制备例11的标题化合物，并用制备例中得到的哌啶基乙酸替代吡啶基乙酸N-氧化物，从而制得灰白色固体标题化合物(76mg，55％，mp＝118.5℃，MH+＝597)。实施例28R：N2-[2-[1-[(4-氰基苯基)甲基]-1H-咪唑-5-基]乙基]-N1-环己基-4-(苯磺酰基)-1，2(R)-哌嗪二甲酰胺
向制备例8与9得到的标题化合物(50mg，0.12mmol，1.0eq)和三乙胺(0.05mL，0.36mmol)在无水二氯甲烷(3ml)中的溶液内加入苯磺酰氯(0.02mL，0.12mmol)。所得混合物在氮气氛中室温搅拌72小时，然后另外加二氯甲烷稀释，用氢氧化钠水溶液(1M)提取并以无水硫酸镁干燥。过滤有机相，真空浓缩，并将残留物通过制备板色谱(硅胶)纯化，使用10％甲醇(被氨饱和)-90％乙腈洗脱，进而使用水合氢氧化铵饱和的5％甲醇-二氯甲烷再次纯化，从而制得橙色固体标题化合物(5mg，mp＝143.6℃，MH+＝604)。实施例28S：N1-环己基-N2-[3-(1H-咪唑-1-基)丙基]-N2，4-双(苯甲基)-1，2(R)-哌嗪二甲酰胺
向实施例28Y标题化合物(0.13g，0.3mmol)的无水二氯甲烷(3ml)溶液中加入异氰酸环己酯(0.054mL，0.43mmol)，室温搅拌所得溶液过夜，然后真空浓缩。残留物通过制备板色谱(硅胶)纯化(使用水合氢氧化铵饱和的5％MeOH-CH2Cl2)，从而制得白色固体标题化合物(164mg，mp＝89.1℃，MH+＝543)。实施例28T：N1-(1，1-二甲基乙基)-N2-[3-(1H-咪唑-1-基)丙基]-N2，4-双(苯甲基)-1，2(R)-哌嗪二甲酰胺
向实施例28Y标题化合物(0.13g，0.3mmol)的无水二氯甲烷(3ml)溶液中加入异氰酸叔丁酯(0.05mL，0.43mmol)，室温搅拌所得溶液过夜，然后真空浓缩。残留物通过制备板色谱(硅胶)纯化(使用水合氢氧化铵饱和的5％MeOH-CH2Cl2)，从而得到白色固体标题化合物(131mg，mp＝57.8℃，MH+＝517)。实施例28U.1-[(环己基氨基)羰基]-2(R)-[[[2-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)乙基]氨基]羰基]-4-哌嗪羧酸1，1-二甲基酯
室温搅拌由制备例14的标题化合物(0.9g，5.14mmol)和制备例中得到的酸酐(1.398g，1.05eq)在无水二氯甲烷(10ml)中形成的溶液过夜。再加入另一份酸酐(0.105g)，1小时后向反应混合物中加入异氰酸环己酯(0.98mL，7.71mmol)，进而另搅拌1.5小时。真空浓缩并且通过快速柱色谱(硅胶)纯化，使用氢氧化铵饱和的1-3％MeOH-CH2Cl2作为洗脱剂，从而得到白色固体标题化合物(1.82g，mp＝126.9-128.9℃，MH+＝513)。实施例28V. 4-(1，1-二甲基乙基)，1-(苯甲基)-2(R)-[[[2-(2，4-二甲基-1H-咪唑-1-基)乙基]氨基]羰基]-1，4-哌嗪二羧酸酯和4-(1，1-二甲基乙基)，1-(苯甲基)-2(R)-[[[2-(2，5-二甲基-1H-咪唑-1-基)乙基]氨基]羰基]-1，4-哌嗪二羧酸酯
室温搅拌由制备例15的标题化合物(2.12g，15.2mmol)、三乙胺(30.4mmol)和制备例中得到的酸酐(3.89g，15.2mmol)在无水二氯甲烷(30ml)中溶解形成的溶液30分钟。加入苄氧基羰基琥珀酰亚胺(4.17g，16.7mmol)，室温搅拌所得混合物过夜。真空浓缩，并且通过快速柱色谱(硅胶)纯化，使用氢氧化铵饱和的2％MeOH-CH2Cl2作为洗脱剂，得到标题化合物(2.57g)。利用5％异丙醇-95％己烷-0.2％二乙胺通过HPLC分离位置异构体，从而得到2，4-二甲基异构体(mp＝64.2℃，MH+＝486)和2，5-二甲基异构体(mp＝71.5℃，MH+＝486)。实施例28W. N1-环己基-N2-[2-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)乙基]-4-(苯甲基)-1，2(R)-哌嗪二羧酸酯
室温搅拌实施例28U(101)的标题化合物(0.49g，0.89mmol)在无水二氯甲烷(10ml)与三氟乙酸(2ml)中的溶液3小时。真空浓缩所得溶液，然后将残留物与无水二氯甲烷(10ml)、苯甲醛(0.28mL，2.68mmol)、冰乙酸(1mL)和三乙酰氧基硼氢化钠(0.76g，3.6mmol)混合，并在室温下搅拌48小时。真空浓缩反应混合物，加二氯甲烷稀释，并且用1N NaOH(水溶液)洗涤。有机相用无水硫酸镁干燥、过滤、真空浓缩、并通过快速柱色谱(硅胶)纯化，使用氢氧化铵饱和的1-3％MeOH-CH2Cl2作为洗脱剂，从而得到白色固体标题化合物(0.40g，mp＝192.9-194.9℃，MH+＝503)。实施例28X. 2(R)-[[[2-(苯基甲氧基)乙基]氨基]羰基]-1，4-哌嗪二羧酸双(1，]-二甲基乙基酯)
室温搅拌2-氨基乙酸苄酯盐酸盐(1.3g，7.8mmol)、三乙胺(3.26mL，23.4mmol)和制备例中得到的酸酐(2g，7.8mmol)在无水二氯甲烷(40ml)中形成的溶液过夜。加二氯甲烷稀释反应混合物，并用1N NaOH(水溶液)和盐水洗涤。有机相以无水硫酸镁干燥、过滤并真空浓缩，从而得到白色固体标题化合物(1.03g，MH+＝478(35％)，322(100％))。实施例28Y. N2-[3-(1H-咪唑-1-基)丙基]N2，4-双(苯甲基)-1，2(R)-哌嗪甲酰胺和N2-[3-(1H-咪唑-1-基)丙基]N1，2，4-三(苯甲基)-1，2(R)-哌嗪甲酰胺
0℃下，向制备例17的标题化合物(381mg，1.16mmol)与苯甲醛(0.12mL，1.16mmol)在冰乙酸(1mL)和无水二氯甲烷(15ml)中的溶液内加入三乙酰氧基硼氢化钠(740mg，3.5mmol)，温热所得混合物至室温，另搅拌12小时。反应混合物用1N NaOH(水溶液)洗涤，以无水硫酸镁干燥有机相，过滤并真空浓缩。残留物通过制备板色谱(硅胶)纯化，使用水合氢氧化铵饱和的2-5％MeOH-CH2Cl2，从而得到标题二苄基化合物(256mg，MH+＝418)和标题三苄基化合物(78.4mg，MH+＝508)。实施例28Y1. N1-环己基-N2-[3-(1H-咪唑-1-基)丙基]N2，4-双(苯甲基)-1，2(R)-哌嗪二甲酰胺
向实施例28Y的标题化合物(0.13g，0.3mmol)的无水二氯甲烷(3ml)溶液中加入异氰酸环己酯(0.054mL，0.43mmol)，室温搅拌所得溶液过夜，然后真空浓缩。残留物通过制备板色谱(硅胶)纯化(使用水合氢氧化铵饱和的5％MeOH-CH2Cl2)，从而得到白色固体标题化合物(164mg，99％，mp＝89.1℃，MH+＝543)。实施例28Y2. N1-(1，1-二甲基乙基)-N2-[3-(1H-咪唑-1-基)丙基]-N2，4-双(苯甲基)-1，2(R)-哌嗪二甲酰胺
向实施例28Y的标题化合物(0.13g，0.3mmol)的无水二氯甲烷(3ml)溶液中加入异氰酸叔丁酯(0.05mL，0.43mmol)，室温搅拌所得溶液过夜，然后真空浓缩。残留物通过制备板色谱(硅胶)纯化(使用水合氢氧化铵饱和的5％MeOH-CH2Cl2)，从而得到白色固体标题化合物(131mg，83％，mp＝57.8℃，MH+＝517)。实施例28Z
室温搅拌制备例23步骤B的标题化合物(0.23g，0.86mmol)在4M HCl/二噁烷(4ml)中的溶液过夜。浓缩此溶液，并与二氯甲烷(10mL)、DMF(10mL)和TEA(0.47mL，5eq.)一同搅拌，然后分批加入哌嗪酸酐(0.26g，1.2eq.)。室温搅拌所形成的溶液1.5小时，再加入另一份酸酐(0.043g，0.2eq.)。搅拌反应混合物0.5小时，然后加入CBZ-OSuc(0.28g，1.2eq.)。搅拌所得溶液3小时，然后加入NaHCO3(10mL)终止反应，接着加入水(20mL)稀释，用二氯甲烷(3×50mL)提取。合并的有机物用硫酸钠干燥、过滤并真空浓缩。粗产物通过快速色谱纯化，使用5％MeOH的二氯甲烷溶液作为洗脱剂，从而得到白色固体物(0.32g)：mp＝71-75℃；LCMS：MH+＝515。实施例28Z1
按照与实施例28Z所述基本相同的方法，只是使用制备例24步骤B的标题化合物，从而制得标题化合物(1.66g)：mp＝77-79℃；LCMS：MH+＝461。实施例28Z2
按照与实施例28Z所述基本相同的方法，只是使用制备例25步骤C的标题化合物(0.17g，0.950mmol)，从而制得标题化合物(0.37g)：mp＝58-60℃；LCMS：MH+＝489。实施例29.PS 287238-1-0实施例30.PS 812520-1-0 精确质量([M+H]+) 精确质量([M+H]+) 计算值：568 计算值：521 实测值：568 实测值：521实施例31.PS 465781-1-0实施例32.PS 461400-1-0精确质量([M+H]+) 精确质量([M+H]+)计算值：527 计算值：574实测值：527 实测值：574实施例33.PS 815156--1-0实施例34.PS 159773-1-0精确质量([M+H]+) 精确质量([M+H]+)计算值：588 计算值：487实测值：588 实测值：487实施例35.PS 372802-1-0实施例36.PS 793961-1-0精确质量([M+H]+) 精确质量([M+H]+)计算值：564 计算值：617实测值：564 实测值：617实施例37.PS 321542-1-0实施例38.PS 288326-1-0精确质量([M+H]+) 精确质量([M+H]+)计算值：617 计算值：617实测值：617 实测值：617实施例39.PS 478500-1-0实施例40.PS 783003-1-0精确质量([M+H]+) 精确质量([M+H]+)计算值：592 计算值：591
实测值：592 实测值：591实施例41.PS 241936-1-0实施例42.PS 409643-1-0精确质量([M+H]+) 精确质量([M+H]+)计算值：554 计算值：569实测值：554 实测值：569实施例43.PS 725556-1-0实施例44.PS 769295-1-0 精确质量([M+H]+) 精确质量([M+H]+) 计算值：569 计算值：544实测值：569 实测值：544实施例45.PS 075114-1-0实施例46.PS 990951-1-0 精确质量([M+H]+) 精确质量([M+H]+) 计算值：551 计算值：516实测值：551 实测值：516实施例47.PS 192638-1-0实施例48.PS 354164-1-0精确质量([M+H]+) 精确质量([M+H]+) 计算值：563 计算值：537实测值：563 实测值：537实施例49.PS 395570-1-0实施例50.PS 956973-1-0 精确质量([M+H]+) 精确质量([M+H]+) 计算值：554 计算值：603实测值：554 实测值：603实施例51.PS 859989-1-0实施例52.PS 467023-1-0 精确质量([M+H]+) 精确质量([M+H]+) 计算值：582 计算值：625实测值：582 实测值：625实施例53.PS 437810-1-0实施例54.PS 381385-1-0 精确质量([M+H]+) 精确质量([M+H]+) 计算值：645 计算值：602实测值：645 实测值：602实施例55.PS 201633-1-0实施例56.PS 593455-1-0 精确质量([M+H]+) 精确质量([M+H]+) 计算值：596 计算值：591
实测值：596 实测值：591实施例57.PS 320451-1-0实施例57A.PS 477090-1-0
精确质量([M+H]+) 精确质量([M+H]+)
计算值：566 计算值：565.实测值566 实测值：565实施例58.PS 130057-1-0实施例59.PS 516972-1-0 精确质量([M+H]+) 精确质量([M+H]+)
计算值：628 计算值：601实测值：628 实测值：601实施例60.PS 064691-1-0实施例61.PS 028348-1-0 精确质量([M+H]+) 精确质量([M+H]+)
计算值556 计算值：556实测值：556 实测值：556实施例62.PS 410892-1-0 精确质量([M+H]+)
计算值：计算值：607实测值：607实施例64.PS 813558-1-0实施例65.PS 319448-1-0 精确质量：([M+H]+) 精确质量([M+H]+)
计算值：549 计算值：549实测值：549 实测值：549实施例66.PS 4200838-1-0实施例67.PS 259236-1-0实施例68.实施例69.实施例70.实施例71实施例72实施例73.实施例74实施例75实施例76实施例77实施例78实施例79实施例80实施例81实施例82实施例83实施例84实施例85实施例86实施例87实施例88实施例89实施例90实施例91实施例92实施例93实施例94实施例95实施例96实施例97实施例98实施例99实施例100实施例101实施例102实施例103实施例104实施例105实施例106实施例107实施例108实施例109实施例110实施例111实施例112实施例113实施例114实施例115实施例116实施例117实施例118实施例119实施例120实施例121实施例122实施例123实施例124实施例125实施例126实施例127实施例128实施例129实施例130-165.实施例165-193：实施例193-235：实施例236-237起始原料的制备
用于制备本发明化合物的起始原料用下列制备例举例说明，但它们不得认为是对本发明内容范围的限制。制备不同起始原料用的方法还可见于各种文献，例如Emmett，J.C.，Holloway，F.H.，Turner，J.L.J.Chem.Soc.Perkin Trans.11979，1341-1344和Abdel-Magid，A.F.，Maryanoff，C.A.，Carson，K.G.TetrahedronLett.1990，31，5595。制备例1
室温及搅拌下，30分钟内向组胺二盐酸盐2(46.7g，0.250mol，1.0eq.)和碳酸钠(54.3g，0.513mol，2.05eq.)在蒸馏水(1250ml)中的溶液内分批加入N-乙氧基羰基邻苯二甲酰亚胺1(62.8g，0.275mol，1.1eq.)。在室温下剧烈搅拌所形成的雪白色悬浮液90分钟。滤出固体，用冰冷蒸馏水(4×50ml)充分洗涤。收集固体物，使用P2O5在60℃真空干燥12小时，得到高纯度(＞95％，根据1H NMR)Nα-邻苯二甲酰组胺3(59.2g，0.245mol，98％)。此雪白色固体无需进一步纯化而直接使用。制备例2
90℃及搅拌下，在氮气氛中向3(25.0g，0.104mol，1.0eq.)和碳酸钾(17.2g，0.125mol，1.2eq.)在无水DMF(500ml)中的混合物内分批加入新戊酸氯甲酯(18.5m，0.125mol，1.2eq.)的无水N，N-二甲基甲酰胺(DMF，100ml)溶液，历时1小时。90℃搅拌混合物12小时。然后于50℃真空除去挥发物。残留物吸收到盐水(100ml)内，用乙酸乙酯(4×25ml)提取。合并的有机提取物以硫酸钠干燥、过滤，并在30℃下真空浓缩。残留的灰白色固体通过硅胶快速层析(己烷∶丙酮＝6∶4 v/v)，得到N-新戊酰氧基甲基-Nα-邻苯二甲酰组胺4(20g，0.056mol)，为一高纯度白色结晶固体。制备例3
氮气氛下，50℃搅拌4(10.2g，28.7mmol，1.0eq.)和α-溴-对-甲苯基氰(11.4g，57.4mmol，2.0eq.)在无水乙腈(150ml)中的溶液12小时。冷却产生的雪白色悬浮液到室温，在-20℃冰箱中冷冻1小时。滤出沉淀物，用冰冷乙酸乙酯(4×50ml)充分洗涤。收集固体物，在P2O5存在下50℃真空干燥12小时，得到溴化1-新戊酰氧基甲基-3-(4-氰基苄基)-4-(2-邻苯二甲酰亚氨基乙基)咪唑鎓5(14.4g，26.2mmol)。制备例3A.氯化1-新戊酰氧基甲基-3-(4-氯苄基)-4-(2-邻苯二甲酰亚氨基乙基)咪唑鎓
在氮气氛中搅拌回流制备例2的标题化合物(5g，14.1mmol)与4-氯苄基氯(2.5g，15.5mmol)在无水乙腈(60ml)中的溶液48小时。真空浓缩混合物，并用乙酸乙酯-己烷重结晶，从而得到标题化合物固体(3.2g，MH+＝480)，浓缩滤液另外得到3.6g产物。制备例3B.溴化1-新戊酰氧基甲基-3-(4-苯基乙基)-4-(2-邻苯二甲酰亚氨基乙基)咪唑鎓
在氮气氛中搅拌回流制备例2的标题化合物(5g，14.1mmol)与2-溴乙基苯(15.5mmol，1.1eq.)在无水乙腈(50ml)中的溶液72小时。真空浓缩混合物，得到粘稠油状标题化合物(100％，NH+＝460)。制备例3C
氮气氛下，50℃搅拌4(3.0g，8.4mmol，1.0eq.)和4-氟苄基溴(2.2ml，16.9mmol，2.0eq.)在无水乙腈(50ml)中的溶液12小时。冷却所产生的雪白色悬浮液到室温，并在-20℃冰箱中冷冻1小时。滤出沉淀物，用冰冷乙酸乙酯(4×25ml)充分洗涤。收集固体物，在P2O5存在下50℃真空干燥12小时，得到溴化1-新戊酰氧基甲基-3-(4-氟苄基)-4-(2-邻苯二甲酰亚氨基乙基)咪唑鎓12(4.32g，7.93mmol)，产率94％。制备例4
0℃及搅拌下，在氮气氛中向5(40g，0.073mol，1.00eq.)的无水甲醇(1000ml)溶液内逐滴加入7N氨甲醇溶液(75ml，0.525mol，7.25eq.)，历时75分钟。然后缓慢(3h)温热混合物到室温，另搅拌12小时。于30℃真空蒸发挥发物，残留的白色固体通过硅胶快速层析(CH2Cl2∶2N NH3/MeOH＝90∶10 v/v)，得到N-(4-氰基苄基)-Nα-邻苯二甲酰组胺6(21g，0.059mol)。制备例4A.N-[(4-氯苯基)甲基]-N-邻苯二甲酰组胺
-20℃及搅拌下，向制备例3A的标题化合物(3.2g，6.6mmol)的MeOH(10mL)溶液内缓慢加入7N氨甲醇溶液(10ml，0.07mol)。温热所得混合物至室温，另搅拌12小时，然后真空浓缩，并通过快速柱色谱(硅胶)纯化，使用氢氧化铵饱和的3％MeOH-CH2Cl2作为洗脱剂，从而得到粘着固体标题化合物(1.2g，51％，MH+＝366)。制备例4B.N-(4-苯基乙基)-N-邻苯二甲酰组胺
-20℃及搅拌下，向制备例3B的标题化合物(15.8mmol)的MeOH(60mL)溶液内缓慢加入7N氨甲醇溶液(23ml，0.16mol)。温热所得混合物至室温，再搅拌96小时，然后真空浓缩，并通过快速柱色谱(硅胶)纯化，使用氢氧化铵饱和的3％MeOH-CH2Cl2作为洗脱剂，从而得到标题化合物(1.6g，MH+＝346)。制备例4C
0℃及搅拌下，在氮气氛中向12(4.0g，7.35mmol，1.00eq.)的无水甲醇(50ml)溶液内逐滴加入7N氨甲醇溶液(8.0ml，55.10mmol，7.25eq.)，历时10分钟。然后缓慢(3小时)温热混合物至室温，另搅拌12小时。于30℃真空蒸除挥发物，残留的白色固体通过硅胶快速层析(CH2Cl2∶2N NH3/MeOH＝97∶3 v/v)，从而得到N-(4-氟苄基)-Nα-邻苯二甲酰组胺13(1.62g，4.63mmol，63％)，为雪白色固体。制备例5
氮气氛中，50℃搅拌6(21g，0.059mol，1.0eq.)和一水合肼(15ml，0.884mol，15.0eq.)在无水乙醇(250ml)中的溶液12小时。冷却形成的雪白色悬浮液至室温，进而在冰箱中-20℃冷冻1小时。滤出沉淀物(邻苯二甲酰肼)，用冰冷乙醇(190标准，500ml)充分洗涤。合并滤液，于30℃真空浓缩。残留物通过快速硅胶柱层析(CH2Cl2∶2N NH3/MeOH＝90∶10 v/v)，从而得到N-(4-氰基苄基)组胺7(11.4g，0.050mol，85％)，为一亮棕色粘稠油状物。制备例5A.N-[(4-氯苯基)甲基]-组胺
氮气氛中50℃搅拌制备例4A的标题化合物(1.21g，3.3mmol)和一水合肼(1.7ml，0.033mol，10eq.)在无水乙醇(20ml)中的溶液20分钟。用乙醇和二氯甲烷稀释所得悬浮液，然后过滤。真空浓缩滤液得到黄色油状固体标题化合物(0.7g，MH+＝236)。制备例5B.N-(苯乙基)组胺
氮气氛中50℃搅拌制备例4B的标题化合物(1.54g，4.4mmol)和一水合肼(2.2ml，0.044mol，10eq.)在无水乙醇(25ml)中的溶液20分钟，然后室温搅拌过夜。用乙醇和二氯甲烷稀释所得悬浮液，并且过滤。真空浓缩滤液得到油状固体标题化合物(0.88g，MH+＝216)。制备例5C.
氮气氛中50℃搅拌13(1.6g，4.6mmol，1.0eq.)和一水合肼(1.1ml，22.9mmol，5.0eq.)在无水乙醇(25ml)中的溶液12小时。冷却形成的雪白色悬浮液至室温，进而在冰箱中-20℃冷冻1小时。滤出沉淀物(邻苯二甲酰肼)，用冰冷乙醇(190标准，50ml)充分洗涤。合并滤液，于30℃真空浓缩。残留物通过硅胶快速柱层析(CH2Cl2∶2N NH3/MeOH＝90∶10 v/v)，从而得到N-(4-氟苄基)组胺14(870mg，3.97mmol，87％)，为棕色油状物。制备例8和9
室温、搅拌下，向酸酐8(2.04g，7.95mmol，1.2eq.)的无水二氯甲烷(30ml)溶液内逐滴加入7(1.50g，6.63mmol，1.0eq.)的无水二氯甲烷(30ml)溶液，历时30分钟。向溶液中通入氮气流以驱除析出的二氧化碳。在通氮气的情况下搅拌所形成的无色溶液1小时。停止通气，5分钟内逐滴加入异氰酸环己酯(1.75ml，13.26mmol，2.0eq.)。室温搅拌此棕色溶液1小时得到9(由1H NMR证实)。在30℃下真空除去挥发物。残留物吸收到三氟乙酸(TFA，30ml)与无水二氯甲烷(30ml)的混合液内，在氮气氛中室温搅拌24小时。30℃真空浓缩此混合物，将残留的亮棕色油状物吸收到1N NaOH水溶液(100ml)中，以二氯甲烷(4×25ml)提取。合并的有机提取物用盐水(25ml)洗涤、硫酸钠干燥、过滤并于30℃真空浓缩。残留油状物通过硅胶快速层析(CH2Cl2∶2N NH3/MeOH＝90∶10 v/v)，得到N2-[2-[1-[(4-氰基苯基)甲基]-1H-咪唑-5-基]乙基]-N1-环己基-1，2(R)-哌嗪二甲酰胺10(1.34g，2.95mmol)，系亮黄色泡沫物。制备例10A.N4-(1，1-二甲基乙氧基羰基)-N2-[2-[1-[(4-氯苯基)甲基]-1H-咪唑-5-基]乙基]-1，2(R)-哌嗪甲酰胺
室温搅拌制备例5A的标题化合物(0.695g，2.94mmol)与制备例中制得的酸酐(0.75g，2.94mmol)在无水二氯甲烷(10ml)中的溶液过夜。再加入另一份酸酐(0.1g)，1小时后加二氯甲烷稀释反应混合物，用1MHCl(水溶液)提取。水相用1N NaOH(水溶液)碱化，然后用二氯甲烷提取，并将有机相用无水硫酸镁干燥。过滤后，真空浓缩有机相，得到白色泡沫物(0.744g，MH+＝448)。制备例10B.N4-(1，1-二甲基乙氧基羰基)-N2-[2-[1-(苯乙基)-1H-咪唑-5-基]乙基]-1，2(R)-哌嗪甲酰胺
室温搅拌制备例5B的标题化合物(0.874g，4.04mmol)与制备例中制得的酸酐(1.04g，4.04mmol)在无水二氯甲烷(10ml)中的溶液过夜。再加入另一份酸酐(0.23g)，1小时后加二氯甲烷稀释反应混合物，并用1M盐酸提取。水相用1N NaOH(水溶液)碱化，然后用二氯甲烷提取，并将有机相用无水硫酸镁干燥。过滤后，真空浓缩有机相，得到白色泡沫物(1.22g，71％，MH+＝428)。制备例10.N4-(1，1-二甲基乙氧基羰基)-N2-[2-[1-[(4-氰基苯基)甲基]-1H-咪唑-5-基]乙基]-1，2(R)-哌嗪甲酰胺
室温搅拌制备例5的标题化合物(7.8g，34.5mmol)、三乙胺(10mL)以及制备例中制得的酸酐(10g，39.0mmol)在无水二氯甲烷(300ml)中的溶液过夜。真空浓缩反应混合物，加二氯甲烷稀释并用1M盐酸提取。水相用1N NaOH(水溶液)碱化，然后用二氯甲烷提取，并将有机相用无水硫酸镁干燥。过滤后，真空浓缩有机相，得到标题化合物(10.0g，MH+＝448)。制备例11. N2-[2-[1-[(4-氰基苯基)甲基]-1H-咪唑-5-基]乙基]-N4-苯基-1，2(R)-哌嗪甲酰胺
室温搅拌制备例10的标题化合物(5g，1.1.4mmol)溶在无水二氯甲烷(50ml)与三氟乙酸(10ml)中的溶液1小时，然后真空浓缩。残留物与苯甲醛(1.4mmol)混合，加冰乙酸(25mL)和无水二氯甲烷(100ml)稀释，然后冷却到0℃。加入三乙酰氧基硼氢化钠(4.83g，22.8mmol)，0℃搅拌所得混合物2小时，尔后室温搅拌过夜。真空浓缩反应混合物，加二氯甲烷稀释并用1N HCl(水溶液)提取。水相用1N NaOH(水溶液)碱化，并用二氯甲烷提取，然后无水硫酸钠干燥、过滤和真空浓缩。快速柱层析(硅胶)，使用氢氧化铵饱和的10％MeOH-CH2Cl2作为洗脱剂，从而得到标题化合物(1.5g，MH+＝428)。制备例12. N2-[2-[1-[(4-氯苯基)甲基]-1H-咪唑-5-基]乙基]-N1-环己基-1，2(R)-哌嗪甲酰胺
向制备例10A的标题化合物(0.30g，0.67mmol)溶在无水二氯甲烷(3ml)中的溶液内加入异氰酸环己酯(0.09mL，0.7mmol)，室温搅拌所形成的溶液30分钟，然后真空浓缩。残留物用二氯甲烷(3ml)和三氟乙酸(3ml)稀释。室温搅拌所得溶液过夜，然后真空浓缩，加二氯甲烷稀释，并用1N NaOH(水溶液)洗涤。有机相以无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，从而得到黄色泡沫物(0.319g，MH+＝473)。制备例12A. N2-[2-[1-(苯乙基)-1H-咪唑-5-基]乙基]-N1-环己基-1，2(R)-哌嗪二甲酰胺
向制备例10B的标题化合物(0.33g，0.77mmol)溶在无水二氯甲烷(3ml)中的溶液内加入异氰酸环己酯(0.11mL，0.9mmol)，室温搅拌所形成的溶液30分钟，然后真空浓缩。残留物用二氯甲烷(3ml)和三氟乙酸(3ml)稀释。室温搅拌所得溶液过夜，然后真空浓缩，加二氯甲烷稀释，并用1N NaOH(水溶液)洗涤。有机相以无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，从而得到黄色泡沫物(0.338g，MH+＝453)。制备例13.步骤a. 2-R-羧基-哌嗪-二-(R)-樟脑磺酸
60℃、搅拌下，向2.5kg(R)-(-)-樟脑磺酸在1250ml蒸馏水中的溶液内加入2-羧基-哌嗪的钾盐(565mg，3.35mol)溶液。混合物在95℃下搅拌至完全溶解。室温放置所形成的溶液48小时。过滤产生的沉淀物，得到1444gm潮湿固体。然后将此固体溶于1200ml蒸馏水中，在蒸汽浴上加热到所有固体都溶解为止。然后将此热溶液搁置一旁缓慢冷却72小时。过滤结晶固体，得到362gm纯净产物，为白色结晶固体。[α]＝-14.9°步骤b. N，N-二-叔丁氧羰基-2-R-羧基-哌嗪
将步骤a得到的2-R-羧基-哌嗪-二-(R)-(-)-樟脑磺酸(362gm，O.608mol)溶于1.4L蒸馏水与1.4L甲醇中。搅拌下向该反应混合物滴加75ml 50％NaOH，形成大约pH＝9.5的溶液。向此溶液内加入二碳酸二叔丁酯固体(336gm，1.54mol)。pH降到大约7.0。用50％NaOH(总计175ml)维持反应混合物的pH为9.5，搅拌反应混合物2.5小时得到白色沉淀物。加9L冰/水稀释反应混合物，接着用2L乙醚洗涤。弃去乙醚物，通过分批加入固体柠檬酸调节水层的pH至pH3.0。酸化水层然后二氯甲烷(3×2L)提取。合并有机层，硫酸钠干燥、过滤并蒸发，从而得到201.6gm白色玻璃状固体标题化合物。FABMS(M+1)＝331。步骤c.“N-Boc-哌嗪-2-酰氨酐”
氮气氛下，在5L圆底烧瓶中向N，N-二甲基甲酰胺(49.6ml)的冰冷溶液内逐滴加入亚硫酰氯(46.7ml)，历时5分钟。然后搅拌反应混合物5分钟，移去冰浴，室温搅拌反应混合物30分钟。尔后在冰浴中再冷却反应混合物，并通过套管向反应混合物中加入步骤b的N，N-二-叔丁氧羰基-2-R-羧基-哌嗪(201.6gm，0.61mmol)在51.7ml吡啶与1.9L乙腈中的溶液。温热反应混合物到室温，得到淡黄色混浊溶液。室温搅拌18小时后，过滤反应混合物，将滤液倒入冰水(7L)内，然后用4×2L乙酸乙酯提取，硫酸钠干燥，过滤并真空蒸发至干，得到115.6gm白色固体标题化合物。FABMS(M+1)＝257。制备例14.[2-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)乙基]胺
搅拌回流由2-甲基苯并咪唑(4.93g，37.3mmol)、2-氯乙胺盐酸盐(4.67g，40.3mmol)、硫酸四丁铵(0.51g，1.5mmol)、氢氧化钠(5.37g，134.2mmol)和乙腈(80mL)形成的混合物48小时。冷却所得混合物至室温，过滤并真空浓缩。残留物通过快速柱色谱(硅胶)纯化，使用氢氧化铵饱和的1-3％MeOH-CH2Cl2作为洗脱剂，得到标题化合物(3.56g，MH+＝176)。制备例15.[2-(2，4-二甲基咪唑-1-基)乙基]胺和[2-(2，5-二甲基咪唑-1-基)乙基]胺
按照制备例14所用的类似方法，但使用2，4-二甲基咪唑代替2-甲基苯并咪唑，从而制得位置异构体混合物形式的标题化合物(10.7g，MH+＝)。制备例16. 3-(1H-咪唑-1-基)丙基-苯甲基胺
室温下，在氮气氛中搅拌由1-(3-氨基丙基)咪唑(Aldrich，37.1g，297mmol)、苯甲醛(30g，283mmol)、3分子筛(50g)、乙酸钠(24.1g，283mmol)和无水甲醇(700mL)构成的混合物过夜。冷却混合物到0℃，1小时内分批加入硼氢化钠(10.9g，288mmol)。室温搅拌混合物3小时。混合物通过硅藻土过滤，以甲醇洗涤，并且真空浓缩。加二氯甲烷稀释所得残留物，并用10％氢氧化钠水溶液洗涤。有机相用盐水洗涤、无水硫酸镁干燥、过滤并真空浓缩，从而得到浅黄色油状标题化合物(56.3g，MH+＝216)。制备例17. 2(R)-[[[3-(1H-咪唑-1-基)丙基](苯甲基)氨基]羰基]哌嗪
室温搅拌由制备例16的标题化合物(1.34g，6.2mmol)、制备例13的标题化合物(1.6g，6.2mmol)、三乙胺(1.3mL，9.3mmol)和无水二氯甲烷(10mL)形成的混合物48小时。加入三氟乙酸(10mL)，再搅拌所得混合物1.5小时。滴加氢氧化钠水溶液(1N)中和反应混合物，并用二氯甲烷提取所得混合物。有机相用无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，所得残留物进而通过快速柱色谱(硅胶)纯化，使用水合氢氧化铵饱和的1％MeOH-99％CH2Cl2洗脱，从而得到油状标题化合物(520mg，MH+＝328)。制备例18. 4-哌啶基乙酸乙酯
在500mL Parr瓶内放入4-吡啶基乙酸乙酯(4.5g，27.24mmol)，进而溶于无水EtOH(70mL)。向该瓶内加入10％钯-碳(1.0g)。将上述瓶置于氢化器上，在55psi氢气压下25℃振摇内容物94小时。混合物通过Celite过滤，并用4x40mL无水EtOH洗涤。旋转蒸发滤液，残留物通过硅胶层析，采用3％(10％浓NH4OH/甲醇)二氯甲烷作为洗脱剂，从而得到2.944g标题化合物。制备例19. 1-氨基羰基-4-哌啶基乙酸乙酯
将4-哌啶基乙酸乙酯(500mg；2.92mmol)溶于无水二氯甲烷(25mL)。搅拌下向此溶液内加入异氰酸三甲基甲硅烷基酯(5.9mL；43.8mmol)，25℃搅拌所得溶液17小时。然后在CH2Cl2-饱和NaHCO3中对上述溶液进行后处理，产物通过硅胶层析，使用2→3％(浓NH4OH/甲醇)二氯甲烷作为洗脱剂，从而得到622mg标题化合物。制备例20. 1-氨基羰基-4-哌啶基乙酸
将1-氨基羰基-4-哌啶基乙酸乙酯(153.6mg，0.717mmol)溶于无水CH2Cl2(3.58mL)与EtOH(3.58mL)中。向此溶液内加入1.0MLiOH(1.73mL，1.73mmol)，50℃搅拌所形成的混合物5.5小时。迅速冷却混合物到25℃，加入1.0N HCl(2.02mL，2.02mmol)，进而搅拌混合物5分钟，然后旋转蒸发至干，得到标题化合物，该产物无需进一步纯化而直接使用。制备例21步骤A：
90℃搅拌2，2-二甲基丙烯酸乙酯(50.0g，2.0eq.)与咪唑(13.28g，200mmol)48小时。冷却所得溶液，用水(150mL)和二氯甲烷(150mL)稀释，然后分离。水层用二氯甲烷(2×75mL)洗涤，硫酸钠干燥合并的有机物，进而真空浓缩。混合物粗品通过硅胶快速色谱纯化，使用10％MeOH的二氯甲烷溶液作为洗脱剂，从而得到清亮透明油状纯净产物(11.27g)。步骤B：
用LiAlH4(51mL，1M乙醚溶液，1.0eq.)处理步骤A标题化合物(10.0g，50.96mmol)的溶液。室温搅拌反应混合物1小时，然后滴加饱和硫酸钠(～3.0mL)终止反应。用硫酸钠(固体)干燥所得浆状物，然后加EtOAc(100mL)稀释，并通过Celite塞过滤。浓缩滤液得到一黄色油状物(6.87g，87％产率)，该产物无需进一步纯化而直接使用。步骤C：
0℃下，10分钟内向步骤B的标题化合物(6.85g，44.42mmol)、邻苯二甲酰亚胺(7.19g，1.1eq.)和三苯膦(Ph3P)(12.82g，1.1eq.)在THF(200mL)中的溶液内加入DEAD(7.69mL，1.1eq.)。温热所得溶液到室温，搅拌48小时。然后减压浓缩反应混合物，产物通过用CH2Cl2/Et2O结晶加以分离，从而得到白色固体物(10.03g)。步骤D：
加热回流步骤C标题化合物(9.50g，33.53mmol)和(N2H4)(1.25mL，1.2eq.)在EtOH(100mL)中的溶液4小时。冷却所形成的浆状物，过滤，进而减压浓缩滤液。粗产物通过快速色谱纯化，使用15％(10％NH4OH/MeOH)的二氯甲烷溶液作为洗脱剂，从而得到浅黄色油状物(2.80g)。制备例22
向制备例21步骤D的标题化合物(0.17g，1.2mmol)在CH2Cl2(5.0mL)中的溶液内分批加入哌嗪酐(0.28g，1.0eq.)，室温搅拌所形成的溶液10分钟，然后加入异氰酸环己酯(0.21mL，1.5eq.)。室温搅拌15分钟后，加MeOH(1mL)骤冷反应混合物，然后真空浓缩，并且通过快速色谱纯化，使用10％MeOH的二氯甲烷溶液作为洗脱剂，从而得到白色固体物(0.46g).mp＝71-74℃。制备例23步骤A：
-78℃下，逐滴向N-BOC氨基丙基咪唑(0.50g，2.22mmol)的THF(15mL)溶液内加入n-BuLi(2.79mL；1.75M己烷溶液；2.2eq.)。温热所得溶液至-20℃，搅拌2小时，尔后加入TMSCl(0.65mL，2.3eq.)。温热反应混合物到室温，搅拌1小时，再冷却至-78℃，用ClCO2Et(0.25g，1.2eq.)处理。温热所得溶液至室温，搅拌60小时。加水(10mL)终止反应，用CH2Cl2(3×20mL)提取。合并的有机物以硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。粗产物通过快速色谱纯化，使用5％MeOH的CH2Cl2溶液作为洗脱剂(0.35g，53％产率)。步骤B：
搅拌步骤A标题化合物(0.35g，1.18mmol)在EtOH(10mL)和30％NH4OH(2mL)中的溶液24小时。减压浓缩反应混合物，进而通过快速色谱纯化，使用EtOAc作为洗脱剂(0.23g)。制备例24步骤A：
采用与制备例21步骤C所述基本相同的方法，只是使用S-(+)-5-羟甲基-2-吡咯烷酮(1.0g，8.69mmol)，从而制得标题化合物(1.50g)。步骤B：
采用与制备例21步骤D所述基本相同的方法，只是使用制备例24步骤A的标题化合物(1.50g，6.14mmol)，从而制得标题化合物(0.59g)。制备例25步骤A：
按照与制备例21步骤C所述基本相同的方法，只是其中使用N-BOC-S-脯氨醇(0.50g，2.48mmol)，从而制得标题化合物(0.59g)。步骤B：
按照与制备例21步骤D所述基本相同的方法，只是其中使用制备例25步骤A的标题化合物(0.59g，1.79mmol)，从而制得标题化合物(0.36g)。步骤C：
向制备例25步骤B的标题化合物(0.36g，1.80mmol)和TEA(0.30mL，1.2eq.)在CH2Cl2(8.0mL)中的溶液内加入Ac2O(0.20mL，1.2eq.)。搅拌所得溶液2小时，然后加饱和NaHCO3(10mL)骤冷。所得溶液用CH2Cl2(2×20mL)提取，硫酸钠干燥后真空浓缩。将粗产物通过快速色谱纯化，顺序使用EtOAc和5％MeOH/EtOAc洗脱(0.23g)。测定
1.体外酶测定：按照WO/10515或WO 95/10516所述方法测定FPT IC50(体外酶测定中对法尼基蛋白转移酶的抑制)。所得数据表明本发明化合物为部分纯化的大鼠脑法尼基蛋白转移酶(FPT)所致的Ras-CVLS法尼基化的抑制剂。这些数据还说明，本发明化合物可以认作是部分纯化大鼠脑FPT所致的Ras-CVLS法尼基化的强有效抑制剂(IC50＜10μM)。
实施例1-3、5-28、28A-28X、28Y1、28Y2、28Z、28Z1、28Z2、29-57、57A、58-62、和64-67的化合物具有0.18-4000nM的FPT IC50(其中的nM表示纳摩尔)。
实施例1、5、6、8-17、20-28、28C、28E、28F、28G、28I、28M、280、28P、28Q、28R、28S、28T、28V、28Y1、28Y2、29、31、32、34、36-38、42、43、47、53-56、58、61和64具有0.18-21 nM的FPT IC50。
化合物20、25、26、27、28、280、54和55具有0.18-1.5nM的FPT IC50。
按照与上文所述基本相同的方法还可以进行其它测定，但用选择指示肿瘤细胞系替代T24-BAG细胞。这些测定可以使用表达活化K-ras基因的DLD-1-BAG人结肠癌细胞或表达活化K-ras基因的SW620-BAG人结肠癌细胞来进行。使用本领域已知的其它肿瘤细胞系，可以测定本发明化合物对其它类型癌细胞的活性。
软琼脂测定：
不依赖于贴壁的生长是致瘤细胞系的一种特征。将人肿瘤细胞悬浮于含有0.3％琼脂和指定浓度法尼基转移酶抑制剂的生长培养基内。将溶液覆盖在用含相同浓度法尼基转移酶抑制剂的0.6％琼脂固化的生长培养基上作为顶层。待顶层固化后，于5％CO2下37℃培养测定板10-16天，使集落自然生长。培养后，通过用MTT(溴化3-[4，5-二甲基-噻唑-2-基]-2，5-二苯基四唑鎓，噻唑蓝)(1mg/mL PBS)覆盖琼脂染色集落。计数集落并测定IC50。
使用本发明化合物制备药物组合物时，惰性可药用载体可以为固体或液体。固体形式的制剂包括粉剂、片剂、可分散性颗粒剂、胶囊剂、扁囊剂和栓剂。粉剂和片剂可以包含约5-约95％的活性成分。合适的固体载体是本领域已知的，例如碳酸镁，硬脂酸镁，滑石，蔗糖或乳糖。片剂、粉剂、扁胶囊剂和胶囊剂可用作适合口服给药的固体剂型。可药用载体以及制备各种不同组合物方法的实例可见于A.Gennaro编辑的Remington’s Pharmaceutical Sciences，第18版，(1990)，Mack Publishing Co.，Easton，Pennsylvania。
液体形式制剂包括溶液、悬浮液和乳液。可提及的实例有适合非肠道注射用的水或水-丙二醇溶液，或者对于口服溶液、悬浮液和乳液来讲要加入甜味剂和不透明剂。液体形式制剂还包括鼻内给药用的溶液。
适合吸入给药的气雾剂可以包含溶液和粉末形式的固体，它们可与可药用载体如惰性压缩气体(例如氮气)混合。
同样还包括临用前转化为供口服或非肠道给药用液体形式制剂的固体制剂。这种液体形式包括溶液，悬浮液和乳液。
本发明化合物也可以透皮给药。透皮组合物可以为霜剂，洗剂，气雾剂和/或乳剂，并且它们可以包括在本领域常用于此目的的基质型或储库型透皮贴剂中。
优选所述化合物通过口服施用。
优选所述药物制剂为单位剂型。在此类剂型中，所述制剂可细分为含有适当量(如达到所需目的的有效量)活性成分的单位剂量。
根据具体应用，单位剂量制剂中的活性成分量可以在大约0.01mg-1000mg之间变化和调整，优选大约0.01mg-大约750mg，更优选大约0.01mg-大约500mg，且最优选大约0.01mg-大约250mg。
实际使用剂量可能会随患者的需要和受治疾病的严重程度而变化。本领域技术人员可以确定特定情况下的合适剂量。为了方便起见，可以将总日剂量细分，并根据需要全天分数次给药。
本发明化合物和/或其可药用盐的给药量和给药频率由主治医师根据下列因素加以判断调整：患者的年龄、身体状况和身高体重以及所治疗疾病的严重程度。口服给药的典型推荐日剂量为大约0.04mg/天-大约4000mg/天，分成2-4个分剂量施用。
尽管结合上述具体实施例对本发明进行了说明，但对本领域技术人员来讲，对其进行的各种改进、修饰和改变都将是显而易见的。并且所有这些替换、修饰和改进都落在本发明的宗旨与范围之内。