抑制JAK途径的组合物和方法相关申请的交叉引用
本申请要求2009年7月28日提交的美国临时申请序列号61/229,191的权益和优先
权，该申请的内容出于所有目的通过引用全文纳入本文。
领域
本发明涉及化合物、其前药、盐和含有它们的药物组合物以及利用这些化合物、其
前药和组合物治疗眼睛疾病和/或病症的方法。
背景
JAK激酶(JAnus激酶)是胞质蛋白质酪氨酸激酶的一个家族，包括JAK1、JAK2、JAK3
和TYK2。各JAK激酶对某些细胞因子的受体具有选择性，但多种JAK激酶可能受特定细胞因
子或信号传导途径的影响。研究显示，JAK3与各种细胞因子受体的共有γ(γc)链相关。
JAK3尤其选择性结合IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21的受体并且是这些细胞因子信
号传导途径的一部分。JAK1与细胞因子IL-2、IL-4、IL-7、IL-9和IL-21的受体相互作用，而
JAK2与IL-9和TNF-α的受体相互作用。某些细胞因子与它们的受体结合之后(例如，IL-2、
IL-4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21)，受体发生寡聚化，导致相关JAK激酶的胞质尾相互靠近从
而有助于JAK激酶上的酪氨酸残基发生反式磷酸化。这种反式磷酸化导致JAK激酶被激活。
磷酸化的JAK激酶结合各种STAT(信号转导及转录激活因子)蛋白。STAT蛋白是一
种由酪氨酸残基磷酸化激活的DNA结合蛋白，其功能为信号传导分子和转录因子，并最终结
合存在于细胞因子效应基因启动子内的特定DNA序列。JAK/STAT信号传导参与介导许多异
常免疫应答，如过敏反应，哮喘，自身免疫性疾病如移植物(同种异体移植物(allograft))
排斥、类风湿性关节炎、肌萎缩侧索硬化和多发性硬化，眼科病症和疾病，以及实体恶性肿
瘤和血液恶性肿瘤如白血病和淋巴瘤。
干眼综合征(干燥性角膜炎)代表了特别广泛的临床问题。干眼疾病通常由蒸发机
能障碍或泪液缺乏所致。蒸发机能障碍可在正常泪腺功能存在下发生，但可由睑板腺功能
障碍(meibomian gland dysfunction)、正常的眼睑功能丧失或眼睛表面原因(例如，使用
隐形眼镜或眼睛过敏)所致。泪水缺乏通常由舍格伦综合征或非舍格伦疾病所致。虽然干眼
的诱因各有不同，但最终的病理学机理是眼前泪膜(pre-ocular tear film)破坏伴有暴露
的角膜表面脱水，后者导致角膜的不适和刺激。临床检查后，干眼的迹象可包括球结膜血管
扩张(bulbar conjunctival vascular dilation)、结膜松弛、泪半月板减少(decreased
tear meniscus)、角膜表面不规则和泪膜中碎片增加。用孟加拉玫瑰红(bengal rose)或荧
光素染色剂常观察到弥散性角膜染色，在更严重的病例中可见到细丝或粘斑。
现已采用了各种临床检验来诊断干眼。这些检验包括观察泪半月板的深度、泪崩
解时间减少和席氏检验(Schirmer test)。
干眼的共有原因是舍格伦综合征，其是免疫细胞攻击和损伤产生泪液和唾液的腺
体的自身免疫疾病。该疾病的标志症状是口干和眼干。在美国，舍格伦综合征影响1-4百万
人，其中妇女产生该疾病的可能性高9倍。舍格伦综合征可作为原发性疾病或与其它自身免
疫疾病，例如全身性红斑狼疮(“狼疮”)或类风湿性关节炎相关而作为继发性疾病产生。常
见到干眼与其它常见疾病，例如红斑痤疮相关。干眼还是许多药物，例如异维甲酸、利尿剂、
三环类抗抑郁药、镇静剂、抗高血压药物、口服避孕药、抗组胺、鼻部解充血剂和许多其它药
物的共有副作用。
虽然干眼情况很普遍，但主要治疗仍是利用人工泪液(例如，羧甲基纤维素、羟甲
基纤维素或羟丙基纤维素)以润湿角膜和提供临时的症状缓解。另一常见治疗是定时阻塞
(punctual occlusion)，通过封闭通常用于排出泪水的管道来部分中断泪水自眼睛流出。
通过，例如利用合适的抗生素治疗红斑痤疮，对潜在疾病的治疗也能改善干眼的症状。然
而，提供缓解各种干眼疾病，例如(但不限于)免疫介导的干燥性角膜炎的治疗方法是理想
的。
概述
对于可通过包括调节JAK途径的治疗获益的许多病症，目前认为能调节JAK途径的
化合物和利用这些化合物的方法应能为广大患者提供充分的治疗益处。
本发明公开了化合物、前药、相应的盐形式和利用这些化合物、前药和盐形式来治
疗眼睛疾病和/或病症的方法。
一个实施方式提供化合物I及其溶剂化物、前药和药学上可接受的盐：
一个实施方式提供化合物I的特定前药及其药学上可接受的盐形式，为化合物II：
一方面，利用有效量的化合物I和/或II及其盐形式和包含一种或多种所述化合物
的药物组合物治疗眼睛疾病。一个实施方式提供治疗眼睛疾病和/或病症的方法，包括给予
对象治疗所述眼睛疾病和/或病症有效量的化合物I和/或化合物II。利用本文公开的化合
物治疗的眼睛疾病和病症包括但不限于：干眼综合征、糖尿病性视网膜病、黄斑变性(例如，
衰老相关的黄斑变性)、葡萄膜炎、过敏性结膜炎、青光眼和红斑痤疮。在具体的例子中，所
述疾病是干眼疾病，例如角膜炎或干燥性角膜结膜炎，例如泪水产生不足或泪水组成异常
所致疾病，如泪腺疾病。在特定的非限制性实施例中，所述疾病是自身免疫疾病或免疫介导
疾病，如舍格伦综合征。在其它实施例中，所述疾病是干燥性特发性角膜炎或红斑痤疮。
在治疗眼睛疾病的所述方法的一方面，与未治疗的泪水产生体积相比，给予一种
或多种本文公开的2,4-嘧啶二胺化合物能有效增加泪水产生体积，从而缓解干眼综合征的
症状。在一方面，泪水产生体积在5天内增加，例如不到4天，在一些实施例中，不到2天。在一
个实施方式中，在用本文公开的2,4-嘧啶二胺化合物开始治疗的两天内，泪水产生体积相
比于初始泪水产生增加至少约25％。在其它实施方式中，在不到两天，泪水产生相比于初始
泪水产生增加至少约30％，例如至少约50％。在一些情况中，给予本发明化合物后，泪水产
生的增加导致泪水产生体积与正常泪水产生相当。
在另一方面，将式I和/或II所示化合物或其药学上可接受的盐形式与抗炎药、抗
组胺、抗生素、抗病毒和青光眼药物组合或附加给予。在特定的例子中，抗炎剂可以是全身
性(例如，口服或胃肠外)或局部(眼滴剂)给予的非甾体抗炎剂(NSAID)或皮质类固醇(例
如，泼尼松龙)或免疫抑制剂(例如，环孢菌素A)。还可利用单克隆抗体(例如，细胞因子阻断
剂)或抑制miR基因产物的试剂。在其它实施例中，治疗与非药物治疗联用，例如泪小点
(punctal)阻塞或给对象佩戴在角膜上产生液体填充层的巩膜或半巩膜隐形眼镜。还有其
它组合治疗可包括相伴或附加治疗干眼相关的潜在疾病，例如用抗红斑痤疮药物或方案，
如四环素类抗生素(例如，米诺环素或多西环素)或激光外科手术治疗红斑痤疮以减轻面部
红斑或肥大性酒糟鼻。
用于局部治疗眼睛疾病时，公开的式I和/或II所示化合物通常至少每日给予一
次，例如每日两次。
在另一实施方式中，本发明提供包含母体或盐形式的化合物I和/或II和至少一种
药学上可接受的赋形剂、稀释剂、防腐剂或稳定剂或它们的混合物的药物制剂。在另一实施
例中，药物制剂是还包含非甾体或甾体抗炎剂或干眼的其它疗剂的组合制剂，包括用于治
疗促进干燥性角膜炎的潜在病症(例如,舍格伦疾病或红斑痤疮)的组合制剂。在另外的其
它实施例中，将化合物I和/或II在润滑剂组合物，特别是粘性组合物中给予，所述组合物为
药物的局部眼睛给药以及缓解干眼症状提供载体。
下文更详细描述了这些和其它实施方式。
详述
定义
除非另有表述，本文所用的以下定义应适用。
“皮质类固醇”是肾上腺皮质产生的类固醇激素。皮质类固醇参与多种生理学系
统，例如应激反应、免疫应答和炎症调节、碳水化合物代谢、蛋白质分解代谢、血液电解质水
平和行为。皮质类固醇的例子包括皮质醇、泼尼松和泼尼松龙。可通过口服、胃肠外(例如，
注射)或用滴眼剂直接滴注入眼睛而给予皮质类固醇，它们可与式I和/或II所示化合物组
合在组合制剂中。
“干燥性角膜炎”或“干燥性角膜结膜炎”或“干眼综合征”指与泪水产生减少或蒸
发增加相关的干眼病症，其具有各种病因学特征，例如炎性、非炎性、创伤性、医源性、药物
诱导、红斑痤疮相关或特发性起源。干眼的一个特定原因是泪腺产生的泪水减少，例如由于
损害泪腺或睑板腺的正常功能的自身免疫相关病症。病症治疗可用药物或非药物干预，如
泪小点阻塞(例如在泪小点中引入塞子或利用电烙术切除或部分切除泪小点开口或泪管)。
“非甾体抗炎药(NSAID)”是通过抑制前列腺素产生起作用的一类抗炎药。NSAID施
加抗炎、镇痛和退热作用。NSAID的例子包括布洛芬、酮洛芬、吡罗昔康、萘普生、舒林酸、阿
司匹林、次水杨酸胆碱、二氟尼柳、非诺洛芬、依托度酸、甲氯灭酸、双水杨酯、托美汀和水杨
酸镁。这些试剂可通过口服、胃肠外(例如，注射)或用滴眼剂直接滴注入眼睛而给予，它们
可与式I和/或II所示化合物组合在组合制剂中。
“对象”指人和非人对象。
“药学上可接受的盐”指化合物的药学上可接受的盐，该盐衍生自本领域熟知的各
种有机和无机抗衡离子。
“药学有效量”或“治疗有效量”指足以治疗特定病症或疾病或其一种或多种症状
和/或阻止该疾病或病症发生的化合物用量。
短语“恢复正常泪水产生”指终止标准眼科实践描述的干眼症状，例如McMonnies
和Ho干眼问卷调查的反应评分低于14.5、检验结果(例如，眼科实践技术人员已知的酚红、
荧光素等)或适应症的组合。
本文所用的短语“显著增加泪水产生”表示标准眼科实践检测到的泪水产生有统
计学显著性(例如p<0.05)增加。例如，可通过席氏检验、酚红丝检验(phenol red thread
test)、泪水崩解时间(例如，荧光素染色)、孟加拉玫瑰红染色等检测泪水产生。
化合物
本发明公开了化合物、前药、相应的盐形式和利用这些化合物、前药和盐形式来治
疗眼睛疾病和/或病症的方法。
以下更详细地描述了化合物I和II以及它们的盐形式和含有它们的药物组合物。
化合物I也称为N2-(3-氨基磺酰基-4-甲基苯基)-5-氟-N4-[4-(丙-2-炔基氧基)苯基]-2,
4-嘧啶二胺。化合物II也称为5-氟-N2-(4-甲基-3-丙酰基氨基磺酰基苯基)-N4-[4-(丙-2-
炔基氧基)苯基]-2,4-嘧啶二胺。
出于简洁描述的目的，对于专门指明化合物I和化合物II的任何实施方式，有利用
盐形式和/或含有化合物I和/或化合物II的药物组合物的相应实施方式。
本领域普通技术人员应该了解化合物II是化合物I的前药，化合物II无需转化成
化合物I才有药理学活性。丙酰基前基团的代谢机理不重要，可通过，例如在胃部的酸性条
件下和/或通过消化道和/或身体组织或器官中存在的酶，例如酯酶、酰胺酶、脂酶
(lipolases)、磷酸酶(包括ATP酶和激酶)、肝脏的细胞色素P450等水解导致。在本文所述的
具体实施方式中，利用化合物I和/或II治疗眼科疾病，因此可直接给予眼睛。在一些实施方
式中，给药不仅包括局部给药，还包括注射等。这些给药方式不排除，例如化合物I和/或II
通过全身性循环对眼睛的治疗益处。
本领域普通技术人员应了解，化合物I和II可表现出互变异构、构象异构和/或几
何异构现象。应该理解，本发明包括所述化合物的任何互变异构、构象异构和/或几何异构
形式以及这些不同异构体形式的混合物。阻转异构体是由于围绕单键的旋转受到阻碍而产
生的立体异构体，其中旋转的阻碍足够高从而能够分离构象异构体(Eliel，E.L.；Wilen，
S.H。《有机化合物的立体化学》(Stereochemistry of Organic Compounds)；韦利父子公司
(Wiley&Sons)：纽约，1994；第14章)。阻转异构是有意义的，因为它能在不存在立体原性原
子(stereogenic atom)时引入手性元素。例如当围绕2,4-嘧啶二胺核心结构和其所连基团
之间的键，或者例如围绕磺酰胺和其所连苯环之间的键的旋转受到限制时，本发明也包括
阻转异构体。化合物I和II可以是盐形式。此类盐包括适合药用的盐(“药学上可接受的盐”)
和适于兽医使用的盐等等。如本领域所熟知，此类盐可衍生自酸或碱。本文所述的示例性盐
是钠盐、钾盐、精氨酸盐、胆碱盐和钙盐，但通常任何药学上可接受的盐均可用于本文所述
方法。由于化合物I和化合物II同时具有碱性基团，例如嘧啶氮，以及酸性基团，例如磺酰胺
上的酸性质子和/或嘧啶二胺体系的N2和N4的氮，这些化合物可形成药学上可接受的酸或
碱加成盐。
在一个实施方式中，所述盐是药学上可接受的盐。通常，药学上可接受的盐是充分
保留母体化合物的一个或多个所需药理学活性并且适合给予人体的那些盐。药学上可接受
的盐包括由无机酸或有机酸形成的酸加成盐。适合形成药学上可接受的酸加成盐的无机酸
包括，例如但不限于：氢卤酸(例如，盐酸、氢溴酸、氢碘酸等)、硫酸、硝酸、磷酸等。适合形成
药学上可接受的酸加成盐的有机酸包括，例如但不限于：乙酸、三氟乙酸、丙酸、己酸、环戊
烷丙酸、羟基乙酸、草酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、马来酸、延胡索酸、酒石酸、
柠檬酸、棕榈酸、苯甲酸、3-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、烷基磺酸(例如，甲
磺酸、乙磺酸、1,2-乙烷-二磺酸、2-羟基乙磺酸等)、芳基磺酸(例如，苯磺酸、4-氯苯磺酸、
2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟脑磺酸等)、4-甲基二环[2.2.2]-辛-2-烯-1-羧酸、葡庚糖酸、3-
苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、月桂基硫酸、葡萄糖酸、谷氨酸、羟基萘酸、水杨酸、硬
脂酸和粘康酸等。
药学上可接受的盐还包括存在于母体化合物中的酸质子被金属离子(如碱金属离
子、碱土金属离子或铝离子)取代、或者与有机碱(如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、N-甲基葡
糖胺、吗啉、哌啶、二甲胺、二乙胺、三乙胺、氨水等)配位形成的盐。
如本领域所熟知的，所述化合物I和II及其盐还可以是溶剂化物，例如水合物和N-
氧化物的形式。
方法
本发明提供2,4-取代的嘧啶二胺化合物I和II、其前药、盐和药物组合物以便用于
治疗眼睛的疾病和/或病症。具体地说，化合物I和II可单用或与其它试剂联用。如本文所
述，可将化合物I和/或化合物II作为母体和/或其盐形式和药物制剂给予。
如本文所用和本领域已知的，“治疗”是一种获得有益或所需结果，包括临床结果
的方法。出于本发明的目的，有益或所需结果包括但不限于以下一种或多种：缓解或改善一
种或多种症状、减轻状况(包括疾病)的程度、稳定(即不使其恶化)状况(包括疾病)的状态、
防止疾病扩散、延迟或减缓状况(包括疾病、进展)、改善或减轻状况(包括疾病、状态)、以及
缓解(部分或全部)，无论可检测或不可检测的。化合物I和II(至少作为化合物I的来源)是
强效性的，从而可以非常低的剂量局部给予，因而最大程度降低全身性不良作用。
化合物I和II是JAK激酶的强效和选择性抑制剂，尤其对包含JAK3的细胞因子信号
传导途径有选择性。因为该活性，该化合物可用于各种体外、体内和离体环境以调节或抑制
JAK激酶活性、JAK激酶起作用的信号传导级联以及受这种信号传导级联影响的生物应答。
例如，在一个实施方式中，该化合物可用在体外或体内，实际上可在任何表达JAK激酶的细
胞类型里抑制JAK激酶。例如，在JAK3表达占优势的造血细胞中。它们还可用于调节JAK激
酶，尤其是JAK3起作用的信号转导级联。此类JAK-依赖性信号转导级联包括但不限于：涉及
共有γ链的细胞因子受体如IL-4、IL-7、IL-5、IL-9、IL-15和IL-21的信号传导级联，或者
IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21受体信号传导级联。该化合物还可用于在体外或体内
调节，尤其是抑制，受此类JAK-依赖性信号转导级联影响的细胞或生物应答。此类细胞或生
物应答包括但不限于：IL-4/ramos CD23上调、IL-2介导的T细胞增殖等。重要的是，该化合
物可用于体内抑制JAK激酶，作为治疗或预防完全或部分由JAK激酶活性介导的疾病的治疗
方法。此类疾病称为“JAK激酶介导的疾病”。
虽然不想受理论的束缚，但据信，本文所述的化合物至少部分因其JAK抑制活性而
成为这些眼睛疾病的有效治疗方法。至少部分受JAK激酶介导并可按照本发明方法治疗或
预防的疾病的例子包括眼睛的疾病和病症，包括但不限于：干眼综合征、葡萄膜炎、过敏性
结膜炎、青光眼、交感神经性眼炎和红斑痤疮(眼睛的)。然而，虽然本文所述方法用于治疗
眼科疾病，但由于上述活性，给予所述化合物和/或制剂可具有其它治疗益处，即，在身体的
其它组织或器官中的益处。一个实施方式是治疗眼科疾病或病症的方法，其中还认识到第
二益处。如本文所述，一个实施方式提供治疗眼睛的疾病和/或病症的方法，包括给予对象
治疗所述眼睛疾病和/或病症有效量的化合物，其中所述化合物选自化合物I和化合物II。
眼睛的疾病和病症包括但不限于：干眼综合征、葡萄膜炎、过敏性结膜炎、青光眼和红斑痤
疮(眼睛的)。干眼综合征(DES)也称为干燥性角膜结膜炎(KCS)、干燥性角膜炎、干燥综合征
或干眼病，其是在人和一些动物中常见的泪水产生减少或泪膜蒸发增加导致的眼睛疾病。
葡萄膜炎或虹膜睫状体炎指眼睛中层(葡萄膜)的炎症，通常用于指涉及眼睛内部的任何炎
性过程。过敏性结膜炎是过敏反应导致的结膜(覆盖眼白部分的膜)炎症。青光眼指影响视
神经和涉及特征模式的视网膜神经节细胞丧失的一组疾病，即，一类视神经病。眼内压升高
是产生青光眼的显著风险因子(高于22mmHg或2.9kPa)，炎性过程，例如葡萄膜炎可导致眼
内压的这种升高。
红斑痤疮是特征在于面部红斑的慢性炎性病症，但其能影响眼睛和鼻子(肥大性
酒糟鼻)。本发明方法包括治疗局部面部红斑、肥大性酒糟鼻和眼睛红斑痤疮。在一个实施
方式中，所述眼睛的疾病和/或病症选自干眼综合征、糖尿病性视网膜病、黄斑变性、葡萄膜
炎、过敏性结膜炎、青光眼、红斑痤疮和它们的组合。在一个实施方式中，所述眼睛的疾病
和/或病症是干眼综合征。在另一实施方式中，所述眼睛的疾病和/或病症是葡萄膜炎。在一
个实施方式中，所述眼睛的疾病和/或病症是过敏性结膜炎。在一个实施方式中，所述眼睛
的疾病和/或病症是青光眼。在一个实施方式中，所述眼睛的疾病和/或病症是红斑痤疮。
在一个实施方式中，利用化合物I和/或化合物II治疗任何上述眼科疾病和/或病
症。在一个实施方式中，利用盐形式的化合物I和/或II。在具体的实施方式中，利用盐形式
的化合物II。在一个实施方式中，化合物II的盐选自：钠盐、钾盐、钙盐、精氨酸盐和胆碱盐。
共同给药
用于治疗眼睛疾病时，可单独给予化合物I和II，或与用于治疗眼睛的疾病和/或
病症的其它药剂作为混合物和/或组合给予。可将化合物I和II与可用于治疗其它病症或疾
病的药剂作为混合物或组合给予，所述药剂有，例如类固醇、膜稳定剂、5-脂肪氧合酶(5LO)
抑制剂、白三烯合成和受体抑制剂、IgE同种型转换或IgE合成的抑制剂、IgG同种型转换或
IgG合成的抑制剂、β-激动剂、胰蛋白酶抑制剂、阿司匹林、环加氧酶(COX)抑制剂、氨甲蝶
呤、抗-TNF药物、利妥昔、PD4抑制剂、p38抑制剂、PDE4抑制剂和抗组胺等等。化合物I和II可
以其本身、前药的形式或作为包含活性化合物和/或前药的药物组合物给予。
可与化合物I和II联用的具体免疫抑制疗剂包括，例如巯基嘌呤，皮质类固醇类，
如强的松、甲泼尼松龙和泼尼松龙，烷化剂，如环磷酰胺，神经钙蛋白抑制剂，如环孢菌素、
西罗莫司和他克莫司，肌苷一磷酸脱氢酶(IMPDH)抑制剂，如麦考酚酯、霉酚酸酯和硝基咪
唑硫嘌呤，以及设计用于抑制细胞免疫而保留完整的受体体液免疫反应的药剂，包括各种
抗体(例如，抗淋巴细胞球蛋白(ALG)、抗胸腺细胞球蛋白(ATG)、单克隆抗-T细胞抗体
(OKT3))和辐射。这些各种药剂可按照药物市售形式附带的处方信息中指明的标准或常规
剂量使用(也可参见《医师案头参考》(The Physician’s Desk Reference)2006年版中的处
方信息)，其内容通过引用纳入本文。硫唑嘌呤目前以商品名AZASAN从赛利克斯制药有限公
司(Salix Pharmaceuticals，Inc.)获得；巯基嘌呤目前以商品名PURINETHOL从给特制药有
限公司(Gate Pharmaceuticals，Inc.)获得；强的松和泼尼松龙目前从罗克森实验室
(Roxane Laboratories，Inc.)获得；甲泼尼松龙目前从辉瑞公司(Pfizer)获得；西罗莫司
(雷帕霉素)目前以商品名RAPAMUNE从惠氏-阿耶斯特公司(Wyeth-Ayerst)获得；他克莫司
目前以商品名PROGRAF从藤泽公司(Fujisawa)获得；环孢霉素目前以商品名SANDIMMUNE从
诺华公司(Novartis)获得，并以GENGRAF从雅培公司(Abbott)获得；IMPDH抑制剂如霉酚酸
酯和麦考酚酸目前以商品名CELLCEPT从罗氏(Roche)获得，并以商品名MYFORTIC从诺华公
司获得；硫唑嘌呤目前以商品名IMURAN从葛兰素-史克公司(Glaxo Smith Kline)获得；抗
体目前可以商品名ORTHOCLONE从奥多生物技术公司(Ortho Biotech)获得，以商品名
SIMULECT(巴利昔单抗)从诺华公司获得，以及以商品名ZENAPAX(达珠单抗)从罗氏获得。
在一个实施方式中，将式I和/或II所示化合物或其药学上可接受的盐形式与抗组
胺、抗生素、抗炎药、抗病毒药和青光眼药物组合或附加给予。用于眼睛的常规抗生素的例
子是乙酰磺胺、红霉素、庆大霉素、妥布霉素、环丙沙星和氧氟沙星。皮质类固醇(有时称为
“类固醇”)类似于肾上腺产生的天然物质，它们是各种眼睛问题的极有效抗炎药。皮质类固
醇可安全地用于眼睛，没有口服类固醇，例如泼尼松相关的大多数风险。用于治疗眼睛的皮
质类固醇包括但不限于：泼尼松龙、氟甲龙和地塞米松。用于眼睛的非甾体抗炎药包括但不
限于：布洛芬、双氯芬酸、酮咯酸和氟比洛芬。常规抗组胺包括立复汀(livostin)、帕坦醇
(patanol)、色甘酸、阿乐迈(alomide)。有用于眼睛的非处方抗组胺，它们效力不强，在但温
和病例中非常有用，例如非尼拉敏(pheniramine)。常规抗病毒眼药包括但不限于：三氟胸
苷、腺嘌呤、阿拉伯糖苷和碘苷。青光眼药物通常试图降低眼内压，即眼睛内部的液体压力
以防止视神经破坏，从而导致视觉丧失。这些药物可通过减少眼睛中液体的产量，增加通过
眼睛的天然排流流出的液体，或提供液体离开眼睛的其它途径来降低压力。常同时利用多
于一种的青光眼药物，因为能组合这些作用从而相比于单用一种药物进一步降低压力。常
规青光眼药物包括但不限于：β阻断剂，例如噻吗洛尔(timolol)、美替洛尔
(metipranolol)、卡替洛尔(carteolol)、倍他洛尔(betaxolol)和左布诺洛尔
(levobunolol)；前列腺素类似物，例如拉坦前列素(latanoprost)；胆碱能激动剂，例如匹
鲁卡品和卡巴胆碱；α激动剂，例如溴莫尼定(bromonidine)和爱必定(iopidine)；碳酸酐酶
抑制剂，例如多佐胺(dorzolamide)；和肾上腺能激动剂，例如肾上腺素和肾上腺素异戊酯。
药物组合物
含有本文所述化合物I和II的药物组合物可以通过常规的混合、溶解、造粒、制糖
衣丸、研磨、乳化、包封、包埋或冻干等方式进行制备。可采用常规方式，利用一种或多种生
理上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或有助于将活性化合物加工成可药学使用的制剂的辅
助剂配制这些组合物。
可将化合物I和II配制成药物组合物本身，或者水合物、溶剂化物或药学上可接受
的盐形式，如本文所述。此类盐通常比相应的游离酸和碱更易溶于水溶液，但也可制成溶解
度低于相应的游离酸和碱的盐。
在一个实施方式中，本发明提供的药物制剂包含化合物I和/或化合物II，和至少
一种药学上可接受的赋形剂、稀释剂、防腐剂或稳定剂或者它们的混合物。
在一个实施方式中，所述化合物以药学上可接受的无毒盐提供，如上所述。合适的
本发明化合物的药学上可接受的盐包括由盐酸、延胡索酸、对甲苯磺酸、马来酸、琥珀酸、乙
酸、柠檬酸、酒石酸、碳酸或磷酸形成的酸加成盐。胺基的盐还包括季铵盐，其中氨基氮原子
携带有合适的有机基团，如烷基、烯基、炔基或芳烷基部分。此外，如果本文所述化合物携带
酸性部分，其合适的药学上可接受的盐可包括金属盐，如碱金属盐，例如钠盐或钾盐；以及
碱土金属盐，例如钙盐和镁盐。
可由常规方法形成本文所述药学上可接受的盐，例如在所述盐不溶的溶剂或介质
中或在诸如水等溶剂中使产物的游离碱形式与一个或多个当量的合适酸反应，然后在真空
下或通过冷冻干燥或在合适的离子交换树脂上使现有的盐的阴离子与另一种阴离子交换
以除去溶剂。
化合I和II物可通过口服、胃肠外(例如，肌肉内、腹膜内、静脉内、ICV、脑池内注射
或输注、皮下注射、或移植)、通过吸入喷雾、鼻、阴道、直肠、舌下、尿道(例如尿道栓剂)或局
部给药途径(例如，凝胶、软膏、乳膏、气溶胶等)给予，并可单独或一起制成含有适合各给药
途径的药学上可接受的常规无毒运载体、佐剂、赋形剂和载体的合适的剂量单位制剂。除了
治疗温血动物，如小鼠、大鼠、马、牛、绵羊、狗、猫、猴等，本文所述化合物在人中有效。
用于给予化合物I和II的药物组合物可方便地以剂量单位形式提供，可通过药学
领域熟知的任何方法来制造。例如，可将活性成分与液体载体或细分的固体载体或这两者
均匀并紧密混合，然后如果需要的话使产品成形成为所需制剂，从而制造药物组合物。药物
组合物中活性目标化合物的含量足以产生所需疗效。例如，本文所述药物组合物可采用实
质上适合任何给药方式的形式，包括，如局部、眼、口服、含服、全身性、鼻、注射、透皮、直肠、
阴道给药方式等等，或者是适合吸入或吹入给药的形式。
对于局部给药，可将一种或多种JAK-选择性化合物或前药配制成本领域熟知的溶
液、凝胶、软膏、乳膏、混悬液等等。具体地说，溶液、凝胶、软膏、乳膏和混悬液特别适合直接
给予眼睛。一个实施方式是包含化合物I和/或化合物II的药物制剂，其中所述制剂选自溶
液、凝胶、软膏、乳膏和混悬液。在一个实施方式中，所述制剂是溶液。在另一实施方式中，所
述制剂是凝胶。在另一实施方式中，所述制剂是混悬液。在还有另一实施方式中，所述制剂
是乳膏或软膏。一个实施方式是用于给予眼睛的试剂盒中的任何上述制剂，可通过局部或
经注射给予眼内。在一个实施方式中，所述制剂是液体，例如均匀液体或混悬液，成瓶出售，
将制剂作为滴眼液分配。在一个实施方式中，所述制剂是乳膏或软膏，成管出售，将制剂分
配至眼睛，例如在眼睑下。在另一实施方式中，所述化合物在粘稠液体(例如，羧甲基纤维
素、羟丙基甲基纤维素、聚乙二醇、甘油、聚乙烯醇或含油滴剂)中提供以便滴入眼睛。所述
制剂可含防腐剂或不含防腐剂(例如，在一次使用的容器中)。利用不含防腐剂的制品对于
治疗干眼尤其有益，眼睛常对防腐剂敏感，而在眼中引入防腐剂更使情况恶化。
全身性制剂包括那些为注射给药(如皮下、静脉内、肌肉内、鞘内或腹膜内注射)设
计的制剂，以及那些为透皮、透粘膜口服或肺部给药设计的制剂。
有用的可注射制品包括水性或油性载体配制的活性化合物的无菌混悬液、溶液或
乳液。所述组合物也可含有配制剂，如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。用于注射的制剂可以是
单位剂型，如安瓿或多剂量容器的形式，并可以包含添加的防腐剂。
或者，可注射制剂可采用粉末形式提供，以便在使用前用适当的载体重建，所述载
体包括但不限于：无菌的无热原水、缓冲液、葡萄糖溶液等等。为此目的，所述活性化合物可
采用任何本领域已知的技术(如冻干)干燥，并在使用前重建。
对于透粘膜给药，在该制剂中使用适合被透过屏障的渗透剂。此类渗透剂是本领
域已知的。
对于口服给药，药物组合物可采取如锭剂、片剂或胶囊的形式，这些是通过常规方
式，用药学上可接受的赋形剂如粘合剂(如预糊化玉米淀粉，聚乙烯吡咯烷酮或者羟丙基甲
基纤维素)；填充剂(如乳糖，微晶纤维素或磷酸氢钙)；润滑剂(如硬脂酸镁、滑石粉或二氧
化硅)；崩解剂(如马铃薯淀粉或羟基乙酸淀粉钠)；或润湿剂(如十二烷基硫酸钠)制备。所
述片剂可以通过本领域熟知的方法，用例如糖、薄膜或肠衣包被。此外，适合口服形式的含
2,4-取代的嘧啶二胺作为活性成分或其前药的药物组合物还可包括，例如，含片、锭剂、水
性或油性混悬液、可分散的粉末或颗粒、乳剂、硬或软胶囊、或者糖浆剂或酏剂。可按照本领
域已知的任何制备药物组合物的方法来制备口服使用的组合物，此类组合物可含有一种或
多种选自下组的试剂以提供药学上美观且可口的药物制品：甜味剂、调味剂、着色剂和防腐
剂。片剂中含有活性成分(包括前药)和适合制备片剂的药学上可接受的无毒赋形剂的混合
物。这些赋形剂可以是，例如，惰性稀释剂如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；颗粒剂
和分散剂(例如，玉米淀粉或海藻酸)；粘合剂(例如，淀粉、明胶或阿拉伯胶)；以及润滑剂
(例如，硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉)。所述片剂可以是未包衣的或者可用已知方法包衣以延
迟在胃肠道内的崩解和吸收从而在较长时间内提供持久作用。例如，可利用延时材料如甘
油单硬脂酸酯或甘油二硬脂酸酯。也可采用美国专利号4,256,108；4,166,452；和4,265,
874中描述的技术对它们进行包衣以形成控释渗透治疗片剂。本文所述的药物组合物也可
以是水包油乳液的形式。
用于口服给药的液体制剂可采取如酏剂、溶液、糖浆或混悬液等形式，或者可以以
干燥产物的形式提供以便在使用前用水或其他合适的载体重建。此类液体制剂可以通过常
规方法，用药学上可接受的添加剂，如悬浮剂(如山梨糖醇糖浆、纤维素衍生物或氢化食用
脂肪)；乳化剂(如卵磷脂或阿拉伯树胶)；非水载体(如杏仁油、油脂、普通酒精、
cremophoreTM或者分馏的植物油)；防腐剂(如甲基或丙基-对羟基苯甲酸或山梨酸)来制备。
该制剂也可按需含有缓冲盐、防腐剂、调味剂、着色剂和甜味剂。
众所周知，可适当配制口服给药的制剂以控释活性化合物或前药。
用于含服给药的组合物可采取常规方式配置的片剂或锭剂形式。
对于直肠和阴道给药途径，可将所述活性化合物配制成含有常规栓剂基料，如可
可脂或其他甘油酯的溶液(用于灌肠剂)、栓剂或软膏。
对于鼻给药或通过吸入或吹入给药，所述活性化合物或前药可以使用适当压缩气
体(如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、氟碳化合物、二氧化碳或其他合适气体)
从加压袋或喷雾器中以气溶胶喷雾的方式方便递送。在加压气溶胶的情况下，剂量单位可
以通过提供递送计量量的阀来确定。可将吸入器或吹药器中使用的胶囊和药筒(如由凝胶
组成的胶囊和药筒)配制成含有所述化合物和适当的粉基(如乳糖或淀粉)的粉末混合物。
所述药物组合物可以是水性或油性的无菌可注射混悬液形式。可利用上述那些合
适的分散剂或润湿剂和悬浮剂，按照已知的方法制备这种混悬液。无菌可注射制品还可以
是用胃肠外可接受的无毒稀释剂或溶剂配制的无菌可注射溶液或混悬液。可利用的可接受
载体和溶剂有水、林格溶液和等渗氯化钠溶液。化合物I和II也可采用栓剂形式给予以便经
直肠或尿道给予药物。在具体的实施方式中，可将所述化合物制成尿道栓剂，例如用于治疗
尤其是男性的生育疾病，如治疗睾丸机能障碍。
根据本发明，2,4-取代嘧啶二胺化合物可用于制备组合物或药物，包括适合直肠
或尿道给药的药物。本发明还涉及制备适合尿道或直肠给药形式的含2,4-取代嘧啶二胺化
合物的组合物，包括栓剂的方法。
对于局部使用，可利用含有化合物I和II的乳膏、软膏、胶冻剂、凝胶剂、溶液或混
悬液等。可利用化合物I和II制备组合物或药物，包括适合局部给予的药物。在某些实施方
式中，可将化合物I和II与聚乙二醇(PEG)一起制成适合局部给药的形式。这些制剂可任选
含有其它药学上可接受的成份，如稀释剂、稳定剂和/或佐剂。在具体的实施方式中，配制局
部制剂以便治疗眼科疾病和/或病症。
可用于递送化合物I和II的特定例子的装置是本领域熟知的，例如计量吸入器、液
体喷雾器、干粉吸入器、喷雾器、热蒸发器等。给予特定2,4-取代嘧啶二胺化合物的其它合
适技术包括电动烟雾发生器。可利用喷雾和气溶胶将化合物本身或在制剂中直接给予入眼
睛。
本领域已知适合将化合物I和II给予入眼睛的各种载体。具体的非限制性例子描
述于美国专利号6,261,547；美国专利号6,197,934；美国专利号6,056,950；美国专利号5,
800,807；美国专利号5,776,445；美国专利号5,698,219；美国专利号5,521,222；美国专利
号5,403,841；美国专利号5,077,033；美国专利号4,882,150；和美国专利号4,738,851。眼
科给药的制剂通常含有药学有效量的本文所述2,4-取代嘧啶二胺化合物，例如约0.0001重
量％到约1.0重量％(w/w)。在某些实施方式中，药学有效量的化合物是0.0003％到约0.1％
(w/w)，例如约0.003％到约0.5％(w/w)或约0.01％到约0.03％(w/w)。
在某些实施例中，含有本文公开的2,4-嘧啶二胺化合物以供眼睛给药的眼科组合
物包含张度剂(tonicity agent)、缓冲液或二者。在眼科组合物的某些实施例中，张度剂是
简单的碳水化合物或糖醇。本领域技术人员已知，可在本发明组合物中利用张度剂以调节
组合物的张度，优选调节至普通泪水的张度。合适张度剂的例子包括但不限于：氯化钠、氯
化钾、氯化镁、氯化钙、碳水化合物，例如葡萄糖、果糖、半乳糖、多元醇，如糖醇，包括例如甘
露醇、山梨醇、木糖醇、乳糖醇、异麦芽糖(isomalt)、麦芽糖醇和它们的组合。在一些实施例
中，含缓冲液的组合物含有磷酸(盐)、柠檬酸(盐)或二者。
在一方面，本发明的2,4-嘧啶二胺化合物的眼科给药组合物任选含有表面活性
剂、稳定聚合物或二者。某些组合物中利用表面活性剂促进递送较高浓度的所给予的2,4-
嘧啶二胺化合物。此类表面活性剂能起到溶解化合物的作用。示例性表面活性剂包括聚山
梨醇酯、泊洛沙姆、多元醇40硬脂酸酯、聚烃氧基(polyoxyl)蓖麻油、泰洛沙泊、曲通和失水
山梨糖醇单月桂酸酯。在某些实施方式中，表面活性剂选自曲通X114、泰洛沙泊和它们的组
合。在眼科给药组合物的另一实施方式中，稳定聚合物是卡波姆974p。
本文所述的2,4-取代嘧啶二胺化合物或其前药或组合物通常以实现所需结果的
有效量使用，例如治疗或预防所治疗具体病症的有效量。可治疗性给予所述化合物以实现
治疗益处或预防性给予以实现预防益处。治疗益处表示根除或缓解所治疗的潜在疾病和/
或根除或缓解潜在疾病相关的一种或多种症状，从而患者报道感觉或情况有改善，但是患
者可能仍受潜在疾病的影响。例如，将化合物给予因过敏性反应而罹患眼科疾病的患者不
仅提供潜在过敏性应答根除或缓解时，还提供患者报道接触过敏原后过敏反应相关症状的
严重程度或持续时间降低时的治疗益处。治疗益处还包括延迟或减缓疾病进展，而无论症
状是否有改进。
对于预防给药，可将化合物给予有产生上述病症之一风险的患者。例如，如果不知
患者是否会对特定药物起过敏反应，可在给予该药物之前给予所述化合物以避免或缓解对
该药物的过敏反应。或者，可采用预防给药以避免症状在诊断具有潜在疾病的患者中的发
作。例如，可在过敏反应患者预期接触过敏原之前先将化合物给予患者。还可将化合物预防
性给予反复接触已知是上述疾病之一的致病因子的健康个体以防止疾病发作。例如，可将
化合物给予反复接触已知在眼中诱导过敏反应的过敏原，例如花粉的健康个体，以图防止
该个体产生过敏反应。
化合物的给予量取决于各种因素，包括，例如所治疗的具体病症、给药模式、所治
疗病症的严重程度、患者的年龄和体重、特定活性化合物的生物利用度等等。本领域技术人
员熟知有效剂量的测定。技术人员能确定特定个体的最佳剂量。有效剂量最初可从体外试
验估算。例如，用于动物的初始剂量可以是使活性化合物的循环血液或血清浓度达到或超
过体外试验中测得的特定化合物的IC50。计算达到这种循环血液或血清浓度的剂量要考虑
到特定化合物的生物利用度，这是技术人员熟知的。读者可参考Fingl和Woodbury，“总则
(General Principles)”，刊于Goodman和Gilman《治疗的药物基础》(The Pharmaceutical
Basis of Therapeutics)，第1章，第1-46页，最新版本，帕加蒙出版社(Pergamon Press)，
及其中引用的参考文献以供指导。
初始剂量也可从体内数据如动物模型估算。用于测试化合物治疗或预防上述各种
疾病的功效的动物模型是本领域熟知的。剂量范围通常为约0.0001或0.001或0.01mg/kg/
天到约100mg/kg/天，但可以更高或更低，取决于化合物的活性、其生物利用度、给药模式以
及上述各种因素，等等。可根据个人调节剂量和间隔以提供足以维持治疗或预防效果的化
合物的血浆水平。例如，化合物可每周给予一次、每周给予若干次(例如每两天一次)、每天
一次或每天多次，取决于给药模式、所治疗的具体适应症和开处方医生的判断，等等。当局
部给药或选择性摄入时，如局部给药时，活性化合物的有效局部浓度可能与血浆浓度无关。
技术人员不需要过度实验就能够优化有效的局部剂量。
上面与2,4-取代的嘧啶二胺化合物剂量需求有关的描述与前药的所需剂量有关，
意识到这一点之后，技术人员不难了解，前药的给予量还取决于各种因素，包括例如特定前
药的生物利用度、所选给药途径下转化成活性药物化合物的转化率和效率等。本领域的技
术人员熟知特定应用和给药模式下前药的有效剂量的确定。
最初可从体外活性和代谢试验估算有效剂量。例如，用于动物的前药的初始剂量
可以是使代谢物活性化合物的循环血液或血清浓度达到或超过体外试验中测得的特定化
合物的IC50，所述体外试验如体外CHMC或BMMC以及以下文献中描述的其它体外试验：2003年
1月31日提交的美国申请序列号10/355,543(US2004/0029902A1)，2003年1月31日提交的国
际申请序列号PCT/US03/03022(WO 03/063794)，2003年7月29日提交的美国申请序列号10/
631,029，国际申请序列号PCT/US03/24087(WO2004/014382)，2004年7月30日提交的美国申
请序列号10/903,263，和国际申请序列号PCT/US2004/24716(WO005/016893)。计算达到这
种循环血液或血清浓度的剂量要考虑到特定前药通过所需给药途径的生物利用度，这是技
术人员熟知的。读者可参考Fingl和Woodbury，“总则”，刊于Goodman和Gilman《治疗的药物
基础》，第1章，第1-46页，最新版本，帕加蒙出版社及其中引用的参考文献以供指导。对于眼
科给药，有效剂量可以是向眼睛给药未导致所述化合物明显的全身性循环的剂量，例如在
将滴眼剂加入眼睛以治疗眼科疾病和在明显的全身性循环之前利用非常局部的剂量的情
况下。
本文专门考虑了可替代本发明方法中化合物I和II的其它化合物，它们描述于
Argade等.,2009年2月17日授权的美国专利号7,491,732和2007年8月30日公开的美国专利
申请公开号2007/0203161，二者通过引用纳入本文。
化合物的合成
如下文所述或通过下述合成的类似方法合成化合物I和II以及盐III-VII。本领域
普通技术人员知晓其它合成方法。
实施例1
I：N2-(3-氨基磺酰基-4-甲基苯基)-5-氟-N4-[4-(丙-2-炔基氧基)苯基]-2,4-嘧
啶二胺
60℃，将4-硝基苯酚(1.00g,7.19mmol)、炔丙基溴(80重量％，甲苯配制；0.788mL,
7.09mmol)和K2CO3(1.08g,7.84mmol)在丙酮(16.0mL)中混合并搅拌18小时。将反应混合物
冷却至室温，用水(200mL)稀释。抽滤分离白色固体状的4-(丙-2-炔基氧基)硝基苯
(1.12g)。1H NMR(CDCl3):δ8.22(d,J＝9.0Hz,2H),7.05(d,J＝9.0Hz,2H),4.80(d,J＝
2.4Hz,2H),2.59(t,J＝2.4Hz,1H)。
70℃，将4-(丙-2-炔基氧基)硝基苯(0.910g,5.13mmol)、铁(1.42g,25.3mmol)和
NH4Cl(0.719g,12.8mmol)在EtOH/水(1:1,55mL)中剧烈搅拌15分钟。经硅藻土趁热过滤反
应混合物，真空浓缩。将残留物悬浮在二氯甲烷配制的10％2N氨性甲醇(ammoniacal
methanol)，超声处理并经硅藻土过滤。浓缩得到油状的4-(丙-2-炔基氧基)苯胺，其不作进
一步纯化即可使用。1H NMR(CDCl3):δ6.82(d,J＝8.7Hz,2H),6.64(d,J＝8.7Hz,2H),4.61
(d,J＝2.4Hz,2H),2.50(t,J＝2.4Hz,1H)。
室温下，将4-(丙-2-炔基氧基)苯胺(0.750g,5.10mmol)和2,4-二氯-5-氟嘧啶
(1.27g,0.760mmol,可购自美国威斯康星州密尔沃基的西格玛-阿尔德里奇公司(Sigma-
Aldrich))在MeOH/水(4:1,35mL)中搅拌18小时。用EtOAc(200mL)稀释反应混合物，用1N
HCl(50mL)和盐水(50mL)洗涤。干燥有机层(MgSO4)，过滤并真空浓缩。柱层析(硅胶,己烷到
EtOAc:己烷(1:10))纯化残留物得到淡棕色固体状的2-氯-5-氟-N4-[4-(丙-2-炔基氧基)
苯基]-4-嘧啶胺(0.514g)。1H NMR(CDCl3):δ8.03(d,J＝2.7Hz,1H),7.53(d,J＝8.7Hz,2H),
7.02(d,J＝8.7Hz,2H),6.86(s,1H),4.71(d,J＝2.4Hz,2H),2.55(t,J＝2.4Hz,1H)；LCMS:
纯度:99％；MS(m/e):279(MH+)。
将2-氯-5-氟-N4-[4-(丙-2-炔基氧基)苯基]-4-嘧啶胺(0.514g,1.85mmol)、3-
(氨基磺酰基)-4-甲基苯胺(0.689g,3.70mmol,通过还原可商品化购得的2-甲基-5-硝基苯
磺酰胺制备或如下所述合成)和三氟乙酸(0.186mL,2.41mmol)与iPrOH(6.0mL)在密封管中
混合，在100℃加热3小时。将反应混合物冷却至室温，用1N HCl(80mL)稀释。抽滤分离白色
固体状的N2-(3-氨基磺酰基-4-甲基苯基)-5-氟-N4-[4-(丙-2-炔基氧基)苯基]-2,4-嘧啶
二胺(I)(0.703g)。1H NMR(DMSO-d6):δ10.08(bs,2H),8.19(d,J＝4.5Hz,1H),7.89(s,1H),
7.74(dd,J＝2.4和8.4Hz,1H),7.58(d,J＝8.7Hz,2H),7.32(bs,2H),7.23(d,J＝8.4Hz,
1H),6.97(d,J＝8.4Hz,2H),4.79(d,J＝2.1Hz,2H),3.59-3.55(m,1H),2.53(s,3H)；LCMS:
纯度:97％；MS(m/e):428(MH+)。
II:5-氟-N2-(4-甲基-3-丙酰基氨基磺酰基苯基)-N4-[4-(丙-2-炔基氧基)苯
基]-2,4-嘧啶二胺
在THF(6.0mL)中搅拌N2-(3-氨基磺酰基-4-甲基苯基)-5-氟-N4-[4-(丙-2-炔基
氧基)苯基]-2,4-嘧啶二胺,I、(0.200g,0.467mmol)、DMAP(40mg,0.33mmol))和三乙胺
(0.118mL,0.847mmol)。将丙酸酐(0.180mL,1.40mmol)滴加入溶液。室温下搅拌反应混合物
过夜。用乙酸乙酯(50mL)稀释溶液，用水(5x25mL)和盐水(10mL)洗涤。干燥有机层(MgSO4)，
过滤并蒸发。将残留物悬浮在乙酸乙酯(25mL)中，超声处理，过滤收集固体得到5-氟-N2-
(4-甲基-3-丙酰基氨基磺酰基苯基)-N4-[4-(丙-2-炔基氧基)苯基]-2,4-嘧啶二胺,II,
(0.20g)。1H NMR(DMSO-d6):δ12.01(s,1H),9.44(s,1H),9.26(s,1H),8.16(d,J＝2.4Hz,
1H),8.06(dd,J＝0.3和3.3Hz,1H),8.00(dd,J＝2.1和7.8Hz,1H),7.69(d,J＝8.7Hz,2H),
7.19(d,J＝8.4Hz,1H),6.95(d,J＝8.7Hz,2H),4.77(d,J＝2.1Hz,2H),3.56(t,J＝2.1Hz,
1H),2.49(s,3H),2.24(q,J＝7.2Hz,2H),0.89(t,J＝7.2Hz,3H)；LCMS:纯度:98％；MS(m/
e):484(MH+)。
III:5-氟-N2-(4-甲基-3-丙酰基氨基磺酰基苯基)-N4-[4-(丙-2-炔基氧基)苯
基]-2,4-嘧啶二胺单钠盐
将5-氟-N2-(4-甲基-3-丙酰基氨基磺酰基苯基)-N4-[4-(丙-2-炔基氧基)苯基]-
2,4-嘧啶二胺,II,(0.125g,0.258mmol)悬浮在乙腈(1.5mL)和水(1.5mL)中，冰浴中冷却。
滴加1N NaOH水溶液(0.260mL)。搅拌反应混合物直至其变清澈，经玻璃棉(glass wool)过
滤，冻干得到II的钠盐。1H NMR(DMSO-d6):δ9.17(bs,2H),8.01(d,J＝3.6Hz,1H),7.89(s,
1H),7.78-7.69(m,3H),6.99-6.92(m,3H),4.76(d,J＝2.1Hz,1H),2.43(s,3H),1.95(q,J＝
7.2Hz,2H),0.86(t,J＝7.2Hz,3H)；LCMS:纯度:98％；MS(m/e):484(MH+)。
采用与上述相似的方式制备以下化合物。
IV:5-氟-N2-[4-甲基-3-(N-丙酰基氨基磺酰基)苯基]-N4-[4-(2-丙炔基氧基)苯
基]-2,4-嘧啶二胺钾盐
1H NMR(DMSO-d6):δ9.16(s,1H),9.14(s,1H),8.01(d,J＝3.6Hz,1H),7.85(d,J＝
2.1Hz,1H),7.75-7.70(m,3H),6.97-6.92(m,3H),4.76(d,J＝1.8Hz,2H),3.55(t,J＝
2.4Hz,1H),2.42(s,3H),1.91(q,J＝7.5Hz,2H),0.85(t,J＝7.5Hz,3H)；LCMS:纯度:97％；
MS(m/z):484(母体,MH+)。
V:5-氟-N2-[4-甲基-3-(N-丙酰基氨基磺酰基)苯基]-N4-[4-(2-丙炔基氧基)苯
基]-2,4-嘧啶二胺钙盐
1H NMR(DMSO-d6):δ9.16(s,2H),8.00(d,J＝3.6Hz,1H),7.88(d,J＝1.8Hz,1H),
7.75-7.69(m,3H),6.97-6.92(m,3H),4.76(d,J＝1.8Hz,2H),3.55(t,J＝2.1Hz,1H),2.43
(s,3H),1.94(q,J＝7.5Hz,2H),0.87(t,J＝7.5Hz,3H)；LCMS:纯度:98％；MS(m/z):484(母
体,MH+)。
VI:5-氟-N2-[4-甲基-3-(N-丙酰基氨基磺酰基)苯基]-N4-[4-(2-丙炔基氧基)苯
基]-2,4-嘧啶二胺精氨酸盐
1H NMR(D2O):δ7.61(d,J＝3.9Hz,1H),7.57-7.55(m,1H),7.36-7.31(m,1H),7.12
(d,J＝8.7Hz,2H),6.88(d,J＝8.7Hz,1H),6.72(d,J＝9.0Hz,2H),4.77-4.75(m,2H),3.60
(t,J＝6.0Hz,1H),3.09(t,J＝6.9Hz,2H),2.84-2.81(m,1H),2.35(s,3H),2.03(q,J＝
5.7Hz,2H),1.80-1.72(m,2H),1.61-1.48(m,2H),0.855(t,J＝7.5Hz,3H)；LCMS:纯度:
98％；MS(m/z):484(母体,MH+)。
VII:5-氟-N2-[4-甲基-3-(N-丙酰基氨基磺酰基)苯基]-N4-[4-(2-丙炔基氧基)
苯基]-2,4-嘧啶二胺胆碱盐
1H NMR(DMSO-d6):δ9.16(s,2H),8.00(d,J＝3.6Hz,1H),7.85(d,J＝1.8Hz,1H),
7.75-7.69(m,3H),6.97-6.90(m,3H),5.27(t,J＝4.8Hz,1H),4.76(d,J＝1.8Hz,2H),3.86-
3.77(m,2H),3.56-3.54(m,1H),3.40-3.54(m,2H),3.08(s,9H),2.42(s,3H)；LCMS:纯度:
99％；MS(m/z):484(母体,MH+)。
实施例2
5-氨基-2-甲基苯磺酰胺
0℃，用氯磺酸(5.29mL,80mmol)处理4-甲基硝基苯(20mmol)，然后在将均质溶液
升温至室温后，将其在110℃搅拌24小时。然后将得到的浆液倒在冰水(100gm)上，用二乙醚
(3x75mL)萃取，用水(75mL)洗涤有机相，然后用无水硫酸钠干燥。然后减压除去溶剂得到粗
制的磺酰氯，用乙酸乙酯吸收该磺酰氯，室温下与氨水搅拌过夜。分离乙酸乙酯层，然后用
乙酸乙酯萃取水层。合并有机层，无水硫酸钠干燥，减压除去溶剂。柱层析(硅胶,己烷，然后
用10％、20％最高50％的乙酸乙酯-己烷)纯化所得油得到3-氨基磺酰基-4-甲基硝基苯,
LCMS:纯度:95％；MS(m/e):217(MH+)。
向3-氨基磺酰基-4-甲基硝基苯的二氯甲烷和甲醇溶液中加入10％Pd/C，50psi的
氢气气氛下振荡该混合物15分钟。硅藻土过滤混合物，用甲醇洗涤滤饼。减压浓缩合并的有
机溶剂得到粗产物，经快速柱层析(乙酸乙酯:己烷1:1)进一步纯化得到3-氨基磺酰基-4-
甲基苯胺,LCMS:纯度:87％；MS(m/e):187(MH+)。
实施例3
用IL-4刺激Ramos B-细胞系的试验
检验JAK抑制的一种方法是检测化合物I和II对上调下游基因产物的作用。在
Ramos/IL4试验中，用细胞因子白介素-4(IL-4)刺激B-细胞，从而通过磷酸化JAK家族激酶
JAK1和JAK3，进而磷酸化和活化转录因子Stat-6来活化JAK/Stat途径。活化的Stat-6上调
的基因之一是低亲和力IgE受体，CD23。为研究抑制剂(例如，本文所述的2,4-取代嘧啶二胺
化合物)对JAK1和JAK3激酶的作用，用人IL-4刺激人Ramos B细胞。刺激后20-24小时，染色
细胞以检测CD23的上调，采用流式细胞术(FACS)分析。与对照条件相比，CD23存在量减少表
明测试化合物活跃地抑制JAK激酶途径。下文详细描述了示例性的该类试验。
用细胞因子白介素-4(IL-4)刺激的B-细胞通过磷酸化JAK家族激酶JAK-1和JAK-
3，进而磷酸化和活化转录因子Stat-6来活化JAK/Stat途径。活化的Stat-6上调的基因之一
是低亲和力IgE受体，CD23。为研究抑制剂对JAK家族激酶的作用，用人IL-4刺激人Ramos B
细胞。
Ramos B-细胞系获自ATCC(ATCC目录号CRL-1596)。按照ATCC增殖方案，在含热灭
活的10％胎牛血清(FBS)(堪萨斯州列涅萨的JRH生物科学公司(JRH Biosciences,Inc),目
录号12106-500M)的RPMI 1640(弗吉尼亚州赫恩登CMT公司(Cellgro,MediaTech,Inc.),目
录号10-040-CM)中培养细胞。将细胞维持在密度为3.5x105。实验前一天，将Ramos B-细胞
稀释至3.5x105个细胞/mL，以确保它们处于对数生长期。
离心细胞，将其悬浮在含5％血清的RPMI中。96-孔组织培养板中，每点使用5x104
个细胞。在37℃孵育箱中，用化合物或DMSO(密苏里州圣路易斯的西格玛-阿尔德里奇公司,
目录号D2650)载体对照预培养细胞1小时。然后用终浓度为50单位/毫升的IL-4(新泽西州
落基山市的派普罗技术公司(Peprotech Inc.,Rocky Hill,NJ),目录号200-04)刺激细胞
20-24小时。然后离心细胞，用抗-CD23-PE(加利福尼亚州圣迭戈的BDP公司(BD
Pharmingen),目录号555711)染色，通过FACS分析。利用购自加利福尼亚州圣何塞BD生物科
学公司(Becton Dickinson Biosciences)的BD LSR I系统流式细胞仪进行检测。根据该试
验结果计算的IC50见表1。
实施例4
用IL-2刺激的原代人T-细胞增殖试验
可通过检验本文所述化合物I和II对原代人T-细胞增殖反应的作用来进一步表征
本文所述化合物的JAK活性。在该试验中，源自外周血并通过刺激T-细胞受体和CD28预活化
的原代人T-细胞对细胞因子白介素-2(IL-2)起反应而增殖。该增殖反应依赖于JAK1和JAK3
酪氨酸激酶的活化，所述激酶磷酸化和活化转录因子Stat-5。在有IL-2存在下，用化合物I
和II温育原代人T-细胞72小时，在试验终末点检测胞内ATP浓度以评估细胞活力。与对照条
件相比，细胞增殖降低表明JAK激酶途径的抑制作用。下文更详细描述了该类示例性试验。
源自外周血并通过刺激T-细胞受体和CD28预活化的原代人T-细胞对细胞因子白
介素-2(IL-2)起反应而增殖。该增殖反应依赖于JAK1和JAK3酪氨酸激酶的活化，所述激酶
磷酸化和活化转录因子Stat-5。
如下所示制备人原代T细胞。从健康志愿者获得全血，与PBS作1:1混合，以2:1血
液/PBS:ficoll的比例叠加在Ficoll Hypaque(新泽西州皮斯卡塔韦APB公司(Amersham
Pharmacia Biotech),目录号17-1440-03)上，4℃，以1750rpm离心30分钟。回收血清:
ficoll界面的淋巴细胞，用5体积的PBS洗涤两次。将细胞重悬在含40U/mL重组IL2(明尼苏
达州明尼阿波利斯的研发系统公司(R and D Systems),目录号202-IL(20μg))的Yssel培
养基(加利福尼亚州伍德兰德的双子生物产品公司(Gemini Bio-products)，目录号400-
103)中，接种入用1μg/mL抗-CD3(加利福尼亚州圣迭戈BDP公司,目录号555336)和5μg/mL
抗-CD28(加利福尼亚州贝瑞阿的贝克曼库尔特免疫技术公司(Immunotech,Beckman
Coulter),目录号IM1376)预涂布的烧瓶。刺激原代T-细胞3-4天，然后转移入新鲜烧瓶并在
含10％FBS和40U/mL IL-2的RPMI中维持。
用PBS洗涤原代T-细胞两次以除去IL-2，以2x106个细胞/毫升重悬在Yssel培养基
中。将含有80U/mL IL-2的50μL细胞悬液加入平底96孔黑色平板的各孔。对于未刺激的对
照，从平板上的最后柱中省去IL-2。利用二甲基亚砜(DMSO,99.7％纯,测试细胞培养物,密
苏里州圣路易斯的西格玛-阿尔德里奇公司,目录号D2650)，从5mM开始3-倍连续稀释化合
物，然后用Yssel培养基作1:250稀释。将50μL 2X化合物一式两份加入每孔，使细胞在37℃
下增殖72小时。
采用CellTiter-发光细胞活力试验(普洛迈格公司(Promega))检验增殖，该
试验根据ATP的存在量测定培养物中的活细胞数，作为代谢活性细胞的指标。解冻底物，升
温至室温。将细胞滴度-Glo试剂与稀释剂混合在一起，然后向各孔加入100μL。用轨道摇床
混合各板2分钟以诱导裂解，室温下再温育10分钟以使信号均衡。利用购自康涅狄格州舍尔
顿帕金埃尔默公司(Perkin Elmer)的Wallac Victor2 1420多标记计数器进行检测。根据
该试验结果计算的IC50见表1。
实施例5
用IFNγ刺激的A549上皮细胞系
还可通过检验本文所述化合物I和II对A549肺上皮细胞和U937细胞的作用来表征
本文所述化合物的JAK活性。A549肺上皮细胞和U937细胞对各种不同刺激起反应而上调
ICAM-1(CD54)表面表达。因此，利用ICAM-1表达作为读出值，可评估同一细胞类型中测试化
合物对不同信号传导途径的作用。通过IL-1β受体用IL-1β刺激活化TRAF6/NFκB途径，从而
导致ICAM-1上调。IFNγ通过活化JAK1/JAK2途径诱导ICAM-1上调。可通过流式细胞术，穿过
化合物剂量曲线定量测定ICAM-1的上调并计算EC50值。下文和实施例6中更详细描述了示例
性的该类试验。
A549肺上皮细胞对各种不同刺激起反应而上调ICAM-1(CD54)表面表达。因此，利
用ICAM-1表达作为读出值，可评估同一细胞类型中化合物对不同信号传导途径的作用。IFN
γ通过活化JAK/Stat途径上调ICAM-1。在该实施例中，评估IFNγ对ICAM-1的上调作用。
A549肺上皮癌细胞系源自美国模式培养物保藏所。常规培养利用含10％胎牛血
清、100I.U.青霉素和100ng/mL链霉素的F12K培养基(堪萨斯州列涅萨的迈迪技术公司
(Mediatech Inc.),目录号10-025-CV)(完全F12K培养基)。在37℃，5％CO2的加湿气氛下温
育细胞。用于该试验之前，先用PBS洗涤A549细胞并作胰蛋白酶处理(迈迪技术公司,目录号
25-052-CI)以提升细胞。用完全的F12K培养基中和胰蛋白酶细胞悬液，离心沉淀细胞。细胞
沉淀物以2.0x105/mL的浓度重悬在完全的F12K培养基中。将细胞以每孔20,000个、100μL总
体积接种在平底组织培养板中，附着过夜。
在第二天，用2,4-取代的嘧啶二胺测试化合物或DMSO(对照)(密苏里州圣路易斯
的西格玛-阿尔德里奇公司,目录号D2650)预温育A549细胞1小时。然后用IFNγ(75ng/mL)
(新泽西州落基山市的派普罗技术公司,目录号300-02)刺激细胞并温育24小时。在200μL含
5％FBS,0.3％DMSO的F12K培养基中，最终测试化合物浓度范围是30μM到14nM。
在第三天，除去细胞培养基，用200μL PBS(磷酸缓冲盐水)洗涤细胞。胰蛋白酶处
理各孔以解离细胞，然后加入200μL完全F12K培养基进行中和。离心细胞，4℃下用APC偶联
的小鼠抗-人ICAM-1(CD54)(加利福尼亚州圣迭戈的BDP公司,目录号559771)抗体染色20分
钟。用冰冷的FACS缓冲液(PBS+2％FBS)洗涤细胞，通过流式细胞术分析表面ICAM-1表达。用
购自加利福尼亚州圣何塞BD生物科学公司的BD LSR I系统流式细胞仪进行检测。门控事件
的有效散射(live scatter)并计算几何平均值(新泽西州富兰克林湖Becton-Dickinson细
胞获取软件3.3版)。将几何平均值对化合物浓度作图，产生剂量应答曲线。根据该试验结果
计算的IC50见表1。
实施例6
U937 IFNγICAM1 FACS试验
U937人单核细胞对各种不同刺激起反应而上调ICAM-1(CD54)表面表达。因此，利
用ICAM-1表达作为读出值，可评估同一细胞类型中化合物对不同信号传导途径的作用。IFN
γ通过活化JAK/Stat途径上调ICAM-1。在该实施例中，评估IFNγ对ICAM-1的上调作用。
U937人单核细胞系得自马里兰州罗克维尔的ATCC(目录号CRL-1593.2)，在含有
10％(体积/体积(v/v))FCS的RPMI-1640培养基中培养。在10％RPMI中培养U937细胞。然后
将细胞以100,000个细胞/160μL接种在96孔平底板中。然后如下所示稀释测试化合物：用
DMSO对10mM测试化合物作1:5稀释(3μL 10mM测试化合物稀释于12μL DMSO)，再用DMSO对测
试化合物作1:3连续稀释(用12μL DMSO连续稀释6μL测试化合物得到3-倍稀释液)。然后将4
μL测试化合物转移至76μL 10％RPMI得到10X溶液(100μM测试化合物,5％DMSO)。对于对照
孔，用76μL 10％RPMI稀释4μL DMSO。
一式两份进行试验，使用8个数据点(8个3-倍稀释浓度，10μl)，其中4孔仅有刺激
条件下的DMSO(对照孔)，4孔仅有未刺激条件下的DMSO。
利用多功能器具(multimek)(加利福尼亚州贝瑞阿BC公司(Beckman Coulter of
Brea,California))混合稀释的化合物平板2次，然后将20μL稀释化合物转移至含有160μL
细胞的96孔板，然后以低速再混合两次。然后在37℃、5％CO2下预温育细胞和化合物30分
钟。
用10％RPMI制备人IFNγ的100ng/mL溶液来制得10X刺激混合物。然后用20μL IFN
γ刺激混合物刺激细胞和化合物得到终浓度为10ng/mL IFNγ、10μM测试化合物和0.5％
DMSO。将细胞维持在37℃、5％CO2的刺激条件下18-24小时。
将细胞转移至96孔圆底平板以便染色，然后在染色期间维持在冰上。4℃，1000rpm
离心细胞5分钟，然后除去上清液。除去上清液后，每100μL FACS缓冲液加入1μL APC偶联的
小鼠抗-人ICAM-1抗体。然后在冰上避光温育细胞30分钟。温育后，加入150μL FACS缓冲液，
在4℃以1000rpm离心细胞5分钟，然后除去上清液。除去上清液后，加入200μL FACS缓冲液，
重悬细胞。悬浮后，在4℃以1000rpm离心细胞5分钟。然后除去上清液，再将细胞重悬在150μ
L FACS缓冲液中。
用购自加利福尼亚州圣何塞BD生物科学公司的BD LSR I系统流式细胞仪进行检
测。门控活细胞的有效散射并计算ICAM-APC的几何平均值(新泽西州富兰克林湖Becton-
Dickinson细胞获取软件3.3版)。分析活细胞％和ICAM-1表达。测试化合物的试验与已知活
性的对照化合物平行进行。对照化合物的EC50通常为40-100nM。根据该试验结果计算的IC50
见表1。
实施例7
药物制剂
本实施例描述了含有化合物I或II(应理解为还包含其盐)的药物制剂。如本领域
技术人员已知的制备此类制剂，鉴于本实施例和本文的其它内容，本领域技术人员不难知
晓其它制剂。
用化合物I或II制备三种剂量浓度的以上制剂1-7中的每一种：0.001％、0.003％
和0.01％(w/w)。将指定量的张度剂(甘露醇)加入烧瓶，在约一半最终体积的指定缓冲液
(磷酸或柠檬酸)中加热至约50℃来制备各制剂。加热后，将合适量的化合物I或II与所示的
其它赋形剂(甘油和/或PEG400)一起加入。加入足够量的纯水。将混合物搅拌均匀(约5分
钟)，然后经无菌滤膜过滤入无菌容器中。如果需要，加入1.0N NaOH来调节pH。
具有较高浓度化合物I或II(例如，0.03％w/w)的制剂可任选包含表面活性剂和任
选的稳定聚合物。对于制剂6和7，优选的表面活性剂包括曲通X114和泰洛沙泊，二者可分别
购自西格玛-阿尔德里奇公司(密苏里州圣路易斯)和压力化学品公司(Pressure Chemical
Company)(宾夕法尼亚州匹兹堡)。优选的稳定聚合物包括卡波姆Carbopol 974p(可购自俄
亥俄州威克利夫市的留勃里佐尔公司(Lubrizol))。
首先将卡波姆以终浓度的10X分散在含表面活性剂的缓冲液中来制备制剂6和7，
(例如，50mM pH 6.5的磷酸缓冲液配制的3％泰洛沙泊，含2.5％甘露醇和5％卡波姆974p)。
然后化合物I或化合物II也以其终浓度的10X分散在该预浓缩液中。均匀化该混合物，用匹
配的缓冲液10X稀释过滤的预浓缩液获得最终制剂。
实施例8
诱导型干眼小鼠模型
本实施例描述了在干眼的小鼠模型中治疗症状。用可注射盐水制备包含2.5mg/mL
东莨菪碱(西格玛-阿尔德里奇公司)的注射剂(每只动物1-1.5毫升)。交替在普通C57小鼠
的臀及后腿中注射200-250μL东莨菪碱溶液，每2.5小时4次。将小鼠置于特定的笼中(前后
有孔)，并置于罩中。在各笼前安置风扇，运行16小时过夜，连续5天。每日检测泪水产生，5天
结束时，所有小鼠视作干燥诱导的。用1μL药物或载体(上述制剂1-7中的一种)处理小鼠，每
日1次，进行2周。检测泪水产生，通过正常泪水产生值的部分或全部恢复来检测处理结果。
可通过定量方式检测泪水产生，或可定性评估动物的角膜，例如通过生物显微镜
检测所处理眼睛的荧光素或孟加拉玫瑰红染色模式。此类染色降低表明成功治疗了干眼病
症。
实施例9
其它动物模型
可利用干眼的其它动物模型证明所公开试剂在治疗该病症中的活性。例如，现已
开发了几种舍格伦综合征模型，该模型模拟该病症中所见的自身反应性淋巴细胞的早期活
化和浸润。非肥胖糖尿病(NOD)小鼠模型显示在泪腺以及其它器官中主要是CD4+Th1细胞的
淋巴细胞浸润，所述其它器官包括胰腺、下颌下腺和甲状腺。雄性NOD小鼠从8周龄开始显示
泪腺的明显炎性病损，而雌性NOD小鼠直至30周龄才显示出变化。Takahashi等.,雄性非肥
胖糖尿病(NOD)小鼠中自身免疫泪腺炎的高发病率依赖于性类固醇(High incidence of
autoimmune dacryoadenitis in male non-obese diabetic(NOD)mice depending on
sex steroid).Clin Exp Immunol.1997；109:555–561。舍格伦综合征的MRL/MpJ-fas+/fas+
(MRL/+)和MRL/MpJ-faslpr/faslpr(MRL/lpr)小鼠模型显示特征在于CD4+T细胞占优势的泪
腺浸润。Van Blokland和Versnel,舍格伦综合征的发病机制：自身免疫外分泌腺病的不同
小鼠模型的特征(Pathogenesis of syndrome:characteristics of
different mouse models for autoimmune exocrinopathy).Clin Immunol.2002；103:
111–124。
由于相比于小鼠，家兔暴露的眼睛面积更大，用家兔进行标准干眼临床检验，例如
泪水崩解时间和眼睛表面的荧光素或孟加拉玫瑰红染色更加容易。可将培养增殖的自体外
周血淋巴细胞与从对侧切除的腺体中获得的上皮细胞注射入泪腺来激发家兔中类似于舍
格伦综合征的自身免疫疾病。
利用这些和其它动物模型检验要求保护的化合物以及组合制剂，例如本文所述那
些。将所述制剂给予动物，检查眼睛中泪水产生增加或干眼减轻的证据。
实施例10
治疗方法和组合制剂
根据提示干眼是否存在的临床表现或眼科检查选择要用本发明制剂治疗的对象。
例如，对象可抱怨眼睛有不适或烧灼感。严重病例中甚至可存在畏光或视力模糊。患者的医
疗史也可能提示干眼，例如预先诊断到红斑痤疮、经历放疗、类风湿性关节炎、全身性红斑
狼疮或硬皮病或其它自身免疫疾病的患者。通常用狭缝灯进行生物显微镜检查以检测与干
燥性角膜结膜炎一致的睑板腺炎、结膜扩张、泪半月板减少、泪碎片增加、粘液链或染色模
式。还可评估低于10秒的泪水崩解时间，常进行席氏检验来更客观地鉴定会从本发明试剂
治疗中获益的对象。
可选择特定患者组进行治疗，例如泪腺产生泪水减少的那些患者(例如，席氏检验
提示因免疫介导的或其它疾病导致泪腺机能减退的那些患者)。采用滴眼剂或软膏将本发
明组合物滴入眼睛，一天2-4次。治疗可持续至少一周、一月或一年，在一些对象中，治疗可
延续多年。
在特定病例中，选择对象作其它药物或非药物干预的相伴治疗。例如，进行泪小点
阻塞以减少泪水自眼睛流出，同时本发明组合物增加泪腺的泪水产生。
还提供组合疗法，该疗法联用式I和/或II所示化合物(包括其盐)与治疗另一病
症，例如干眼相关病症的另一试剂。在一些实施例中，对象诊断有干眼相关的潜在疾病，则
给予该对象组合疗法。在一个实施例中，发现对象具有对局部应用皮质类固醇，例如醋酸泼
尼松龙眼科混悬液1％有反应的睑板腺炎。将式I和/或式II所示化合物(包括其盐)悬浮在
泼尼松龙制剂中，滴入眼中，每天2-4次。在其它实施例中，干眼与季节性过敏反应或其它炎
性病症有关，将滴眼液与包含以下药物的制剂一起给予或在该制剂中给予：抗组胺(例如非
尼拉敏、依美斯汀(emedastine)、或氮卓斯汀(azelastine))、解充血剂(例如盐酸四氢唑啉
或萘甲唑啉)或非甾体抗炎剂(例如奈帕芬胺(nepafenac)或酮咯酸)、皮质类固醇(例如，氟
米龙(fluorometholone)或氯替泼诺(loteprednol))、肥大细胞稳定剂(例如氮卓斯汀
(azelastie)、克罗莫(cromal)、依美斯汀(emedastine)、酮替芬、洛度沙胺(lodoxamine)、
奈多罗米、奥洛他定(olopatadine)或吡嘧司特(pemirolast))。如果干眼与感染性细菌病
症(例如，泪腺感染或角膜感染)相关，将滴眼液与含合适抗生素(例如，环丙沙星、红霉素、
庆大霉素、氧氟沙星、乙酰磺胺、妥布霉素或单氧氟沙星(monofloxacin))的组合制剂一起
给予或在该组合制剂中给予。如果干眼与病毒感染相关，将滴眼液与含抗病毒药物，例如三
氟尿苷或碘苷的组合制剂一起给予或在该组合制剂中给予。
组合治疗的另一例子是表现出不适的眼睛和面部红斑以及毛细管扩张后，诊断患
有眼睛红斑痤疮的对象。用含有式I和/或II所示化合物的滴眼液治疗该对象，还用口服抗
生素，例如四环素类抗生素，如米诺环素治疗该对象。
在另一实施例中，对象表现出干眼和另一已有的自身免疫疾病，用含有式I和/或
II所示化合物的滴眼液治疗该对象。还用全身性(例如)口服皮质类固醇疗剂，例如剂量逐
渐降低的泼尼松龙治疗该对象。